全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第2期
近几年来学者们发现，在癌症治疗过程中导致
治疗失败的主要原因是药物耐药和转移，因此对这
2 个表型之间的关联展开了广泛的研究［1］。自 20 世
纪 80 年代初 Tsurno 等报道钙离子拮抗剂维拉帕米
（Verapamil，异博定）能增强化疗药物对耐药细胞
的毒性以来，科学家对逆转药开展了广泛深入的研
究，其中对 30 多种不同的 P-gp 抑制剂做了 150 多
个临床试验，没有一种 P-gp 抑制剂被美国 FDA 批准，
收稿日期 ：2012-10-11
作者简介 ：张玉霞，女，硕士，讲师，研究方向 ：生物化学 ；E-mail ：shanxizyx@163.com
一种新型海洋生物活性物质逆转 K562/A02
细胞多药耐药的研究
张玉霞1  梁琼2  雍国新1
（1. 海南工商职业学院应用技术系，海口 570203 ；2. 海口经济学院工程技术学院，海口 570203）
摘 要 ： 旨在研究福安泰（FAT）对人类白血病 K562/A02 细胞多药耐药的逆转作用。用噻唑蓝（MTT）法检测药物敏感性
及 FAT 对细胞耐药性的影响 ；用流式细胞仪检测细胞内罗丹明 123（Rhodamine 123）的含量 ；采用生物化学 DTNB 法测定细胞内
GSH 含量。结果显示，低浓度 FAT 对 K562/A02 细胞和 K562 细胞均无直接细胞毒作用。FAT 可以降低阿霉素对 K562/A02 细胞的
IC50 值，对 K562 细胞没有明显影响。FAT 可增加 K562/A02 细胞内罗丹明 123（Rhodamine 123）的含量。K562/A02 细胞内 GSH 含
量高于 K562 细胞内 GSH 含量，FAT 可降低 K562/A02 细胞内 GSH 的含量。表明 FAT 降低 K562/A02 细胞内 GSH 的含量是 FAT 逆
转 MDR 的机制之一。
关键词 ： 多药耐药 FAT 谷胱甘肽
Research of Reversal Effect on K562/A02 Cell Line with a Novel
Marine Bioactive Substances
Zhang Yuxia1 Liang Qiong2 Yong Guoxin1
（1. Department of Technology Application，Hainan Technology and Business College，Haikou 570203 ；2. Department of Engineering
Technology，Haikou College of Economics，Haikou 570203）
Abstract:  This test was designed to study the effects of FAT on multidrug resistance（MDR）in human leukemia K562/A02 cells.
MTT method was used to observe the drug sensitivity and the effect of FAT on the drug resistance ；Flow cytometer was used to measure the
intracellular drug accumulation ；Cellular GSH concentration was examined by biochemical analyses with DTNB. Results showed that FAT did
not exhibit an inhibitory activity to proliferation in K562 cell line and K562/A02 cell line. FAT decreased IC50 of ADM in K562/A02 cell line.
And it had no remarkable effect on K562 cell line. FAT increased the intracellular Rho-123 concentration. Cellular GSH concentration in K562/
A02 cell line was higher than thatin K562 cell line. FAT decreased cellular GSH concentration in K562/A02 cell line. One of the mechanisms of
multidrug resistance reversal by FAT was decrease of cellular GSH concentration in K562/A02 cell line.
Key words:  Multidrug resistance FAT Glutathione
这些 P-gp 抑制剂主要缺点是毒副作用大，溶解度差、
并且改变化疗药物的药代动力学特征［2］，难以推广
应用。因而筛选毒副作用小、逆转作用强的逆转药
物就成为该领域的热点研究之一。
海洋生物活性物质是抗肿瘤药物研究中一个重
要的研究领域。近十多年来，已从不同的海洋生物
中分离到许多新型的抗肿瘤天然药物，发现其可通
过抑制细胞的增殖分裂或诱导细胞凋亡的机制发挥
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第2期178
抗肿瘤的作用。目前已有十几种抗肿瘤疗效高、毒
性低的海洋生物天然药物或其结构改造化合物进入
临床试验，显现出诱人的前景［3］。FAT 是本实验室
首次从我国南海海域生长的一种生物组织中分离出
来的抗癌活性成分，具有较强的生物活性。本试验
中选取典型多药耐药细胞株 K562/A02 作为研究对
象。通过探讨 FAT 对 K562/A02 细胞的多药耐药逆
转作用及其逆转机制，为其进一步研究和临床应用
提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞系 K562 细胞由中国科学院上海细胞生
物学研究所提供，K562/A02 细胞由中国医学科学院
天津血液研究所提供。
1.1.2 试 剂 和 药 物 RPMI-1640 粉（ 美 国 HyClone
公司）；小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公
司产品）；ADM（阿霉素）、VRP（美国 Alexis 产品）；
MTT、DMSO、SDS（美国 Sigma 公司）；牛血清白蛋
白（BSA）（BM 公司，北京鼎国生物技术有限公司
分装）；Folin-酚试剂（北京鼎国生物技术有限公司）；
其它试剂（国产分析纯）。
1.1.3 主要仪器 TC2323CO2 培养箱（美国 Shellab
公司）；CH2-TKC-3 倒置光学显微镜、CH3ORF200
生物显微镜（日本 Olympus Optical 公司）；CJT-12 超
净工作台（北京昌平长城空气净化公司）；DG-5031
型酶联免疫检测仪（国营华东电子管厂）；UV-1601
紫外分光光度仪（日本 Shimadzu 公司）；BP211D 电
子天平（德国 Sartorius 公司）；420A 型 pH 计（美国
ORION 公司）；ZW-A 型微量振荡器（常州国华电器
有限公司）。
1.2 方法
1.2.1 四唑盐（MTT）法药物敏感性试验
1.2.1.1 测定 K562/A02 细胞对 ADM 的耐药倍数
参照周建军等［4］的改良 MTT 法，取细胞形态良好、
对数生长期的 K562 细胞和 K562/A02 细胞分别经
600 r/min 离心 ；5 min，吸去上清，用含 10% 小牛血
清的 RPMI 1640 培养基调整细胞数为 1.1×108 个/L，
接 种 于 96 孔 培 养 板， 每 孔 90 μL（1×104 cells），
同时每孔加入不同浓度的阿霉素 10 μL，使其在
K562 细胞终浓度为 ：0、0.25、0.5、1.0、2.0 和 4.0
μmol/L，在 K562/A02 细胞的终浓度为：0、2.5、5.0、
10.0、20.0 和 40.0 μmol/L， 每 孔 终 体 积 为 100 μL，
每个浓度 4 个平行孔，其中阿霉素终浓度为 0 μmol/L
的组为对照组，另外设调零孔（只加 RPMI 1640 培
养液 100 μL，不加细胞和药物），混匀后置 37℃、5%
CO2 培养箱中培养 48 h ；在每孔中加入 5 mg/mL 的
MTT 磷酸盐缓冲液 20 μL 终止反应，在同样条件下
继续培养 4-6 h ；每孔加入 100 μL 三联液过夜，使
形成的甲瓒颗粒充分溶解 ；取出 96 孔培养板振荡 5
min，然后在 DG-5031 型酶联免疫测定仪上测定 570
nm 光吸收值（A570 值），分别计算各浓度阿霉素对
两种细胞生长的抑制率，细胞生长抑制率 =（1- 试
验组平均 OD 值 / 对照组平均 OD 值）×100%。根
据 Bliss 方法，利用 SPSS15.0 软件计算半数抑制浓
度 IC50 值
［5］，再根据 IC50 值计算耐药倍数，耐药倍
数 = 耐药细胞 IC50 值 / 敏感细胞 IC50 值。
1.2.1.2 测定 FAT 对 K562 细胞和 K562/A02 细胞的
毒性作用 方法同 1.2.1.1，FAT 的终浓度为 0、0.01、
0.02、0.04 和 0.08 mg/mL。
1.2.1.3 测定 FAT 对 K562/A02 细胞耐药性逆转的
影响 参照李大成等［6］的分组方法，略作修改。用
FAT ≤ IC10（抑制率≤ 10% 时的浓度）的剂量进
行耐药逆转试验。收集对数生长期的 K562 细胞和
K562/A02 细胞，调细胞浓度为 1.25×108 cells/L，接
种于 96 孔培养板中，每孔 80 μL（含 1.0×104 cells）。
两种细胞均分 6 组，试验组Ⅰ加不同浓度的 FAT 10
μL 和 RPMI-1640 培养液 10 μL ；试验组Ⅱ同时加入
不同浓度的 FAT 10 μL 和不同浓度的阿霉素 10 μL，
每一剂量复孔数为 4。对照组Ⅰ不加细胞，只加
RPMI-1640 培养液 100 μL，用于调零 ；对照组Ⅱ为
只加细胞不加任何药物的阴性对照，加 RPMI-1640
培养液 20 μL ；对照组Ⅲ为抗癌药对照，加不同浓
度的阿霉素 10 μL 与 RPMI-1640 培养液 10 μL ；对照
组Ⅳ为逆转剂阳性对照，加入终浓度为 10 μmol/L 的
VRP 10 μL 和不同浓度的阿霉素 10 μL，每孔终体积
均为 100 μL。方法同 1.2.1.1。
逆转倍数（fold reversal，FR）= 逆转前 IC50 值 / 逆
转后 IC50 值
1.2.2 DTNB 法 测 定 FAT 对 K562/A02 细 胞 内 GSH
2013年第2期 179张玉霞等 ：一种新型海洋生物活性物质逆转 K562/A02 细胞多药耐药的研究
表 达 的 影 响［7］ 取 对 数 生 长 期 的 K562 细 胞 和
K562/A02 细胞，调细胞浓度均为 5.6×108 cells/L，
再将细胞悬液接种于 24 孔培养板，900 μL（5×105
cells）/ 孔，试验分组 ：① FAT 0.02 mg/mL，② FAT
0.04 mg/mL，③ FAT 0.08 mg/mL，④ VRP 10 μmol/L，
按试验分组分别加入相应浓度的药物工作液 100
μL/ 孔， 混 匀 后 在 37℃、5% CO2、 饱 和 湿 度 的 条
件下培养，同时取对数生长期的 K562/A02 细胞和
K562 细胞，不加逆转剂，作为对照，48 h 后收集细
胞到离心管中，1 500 r/min 离心 2 min，弃上清液，
用 冷 PBS 洗 3 次， 再 加 PBS 调 整 细 胞 数 为 1×109
cells/L，用以测定 K562 细胞细胞悬液，经细胞破碎
仪破碎细胞，1 000 g 离心和 K562/A02 细胞内 GSH
含量。取上述各组细胞数为 1×109 cells/L 的细胞
悬液，经细胞破碎仪破碎细胞，1 000 g 离心 5 min，
取上清液 200 μL 加 100 μL 10% 磺基水杨酸混匀，
1 000 g 离心 5 min，去蛋白，用上清液 200 μL 测定
OD 值。方法同标准曲线的制作。
1.2.3 流 式 细 胞 仪 测 定 K562 细 胞 和 K562/A02 细
胞内罗丹明 123 含量 取对数生长期的 K562 细胞
和 K562/A02 细 胞， 调 整 细 胞 数 浓 度 为 6.25×108
cells/L， 将 细 胞 悬 液 接 种 于 24 孔 培 养 板，800 μL
（5×105 cells）/ 孔，两种细胞各分 5 组 ：K562 细胞，
K+VRP 10 μmol/L（K 即 K562 细 胞 ），K+FAT 0.02
mg/mL，K+FAT 0.04 mg/mL，K+FAT 0.08 mg/mL ；
K562/A02 细 胞，K/A+VRP 10 μmol/L（K/A 即 K562/
A02 细 胞 ），K/A+FAT 0.02 mg/mL，K/A+FAT 0.04
mg/mL，K/A+FAT 0.08 mg/mL，每组 3 个平行孔，按
试验分组分别加入相应浓度的药物工作液 100 μL，
同时加入罗丹明 123 100 μL，终浓度为 5 μg/mL，终
体积为 1 mL，混匀后置 37℃，5% CO2 饱和湿度条
件下培养 1 h，加入冷 PBS 2 mL 终止细胞代谢，收
集细胞到离心管中，1 500 r/min 离心 2 min，弃上
清，冷 PBS 洗两次，再加 1 mL PBS 制成细胞悬液，
采用美国 Coulter 公司生产的 EPICS XL 型流式细胞
仪，以氩离子激光器为激发光源，激发波长为 488
nm，最大发射波长 575 nm，测定数据输入计算机，
用 Multicycle 软件分析细胞罗丹明 123 含量。
1.2.4 统计学方法 试验数据用 x
-
±s 表示。并用组
间 t 检验分析差异的显著性，多组间比较采用 One-
way ANOVA 分析 ；SPSS 15.0 软件进行数据处理及分
析，P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 K562/A02细胞对ADM的耐药倍数
K562/A02 细胞在阿霉素 10.0、20.0、40.0、80.0
和 160.0 μmol/L 各个浓度范围的抑制率见表 1，K562
细 胞 在 阿 霉 素 0.25、0.5、1.0、2.0 和 4.0 μmol/L 各
个浓度范围的抑制率见表 2。根据 Bliss 方法计算
半数抑制浓度 IC50。结果显示，阿霉素对 K562 细
胞 的 IC50 为 2.6 μmol/L ；K562/A02 细 胞 的 IC50 为
80.0 μmol/L。K562/A02 细 胞 的 耐 药 倍 数 是 30.7
（表 3）。
表 1 ADM 对 K562/A02 细胞增殖的抑制作用（x-±s，n = 4）
ADM（μmol/L） 抑制率（%）
10.0 9.6±0.8
20.0 15.1±0.9
40.0 26.7±0.9
80.0 50.6±0.4
160.0 68.7±0.9
表 2 FAT 与阿霉素联合作用对 K562 细胞增殖的抑制率（%，x- ±s，n = 4）
组别
ADM（µmol/L）
0 0.25 0.5 1.0 2.0 4.0
阴性对照 0 1.1±0.4 3.8±0.8 11.7±0.9 39.5±1.6 79.3±5.9
VRP（10 µmol/L） 0 3.2±0.6 9.4±0.9 24.9±1.1 46.8±5.3 83.4±7.6
FAT（0.01 mg/mL） 1.5±0.3 1.0±0.5 3.5±0.6 10.4±1.4 37.6±4.6 78.7±6.6
FAT（0.02 mg/mL） 2.3±0.4 1.0±0.6 3.6±0.7 10.6±2.6 39.4±5.1 78.9±8.1
FAT（0.04 mg/mL） 3.8±0.6 5.6±1.1 5.9±0.6 8.3±0.6 39.9±4.6 72.6±7.9
FAT（0.08 mg/mL） 5.3±0.5 5.2±0.9 8.6±0.6 21.6±2.6 50.6±5.6 78.1±8.6
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第2期180
2.2 FAT对K562细胞和K562/A02细胞增殖的影响
K562 细胞和 K562/A02 细胞在 FAT 浓度为 0.01、
0.02、0.04 和 0.08 mg/mL 浓度范围的抑制率见表 4。
逆转剂的剂量。
2.3 FAT对K562/A02细胞耐药性的逆转作用
在 VRP（10 μmol/L）、FAT（0.01、0.02、0.04 和
0.08 mg/mL）浓度时，ADM 对 K562/A02 细胞的逆转
倍数分别为 7.8、2.2、4.0、21.3 和 42.1。结果显示，
FAT 与逆转剂 VRP 一样，可逆转 K562/A02 细胞对
ADM 的耐药性，其浓度为 0.04 和 0.08 mg/mL 时逆
转倍数高于 VRP ；FAT 可增强 ADM 对 K562/A02 细
胞的生长抑制作用，且与剂量相关，而对 K562 细
胞无显著影响，详见表 2、表 3 和表 5。
表 4 FAT 对 K562 细胞与 K562/A02 细胞增殖的
抑制作用（x- ±s，n = 4）
FAT 浓度（mg/mL）
抑制率（%）
K562 细胞 K562/A02 细胞
0.01 1.5±0.4 0.8±0.3
0.02 2.3±0.5 2.3±0.6
0.04 3.8±0.5 2.3±0.4
0.08 5.3±0.8 3.1±0.4
结果显示，K562 细胞和 K562/A02 细胞在 0.01-0.08
mg/mL 范围内对细胞生长的抑制率均≤ 5%，可以认
为在此浓度下对细胞无直接毒性作用，因此可作为
表 3 FAT 与阿霉素联合作用对 K562/A02 细胞的抑制率（%，x- ±s，n= 4）
组别
ADM（µmol/L）
0 2.5 5.0 10.0 20.0 40.0
阴性对照 0 3.4±0.6 6.2±0.7 9.6±0.8 15.1±0.9 26.7±0.9
VRP（10 µmol/L） 0 29.9±1.3 40.2±2.6 49.6±3.6 61.5±3.6 70.3±3.9
FAT（0.01 mg/mL） 0.8±0.2 1.0±0.3 7.6±0.6 11.6±0.7 27.9±1.6 62.2±2.6
FAT（0.02 mg/mL） 2.3±0.4 7.3±0.6 17.1±0.8 28.0±1.6 50.0±3.6 73.2±4.6
FAT（0.04 mg/mL） 2.3±0.5 41.2±3.8 57.0±4.6 66.1±5.1 70.3±5.4 73.2±6.1
FAT（0.08 mg/mL） 3.1±0.6 53.2±4.2 57.4±4.3 64.5±5.8 70.9±6.2 74.5±7.3
表 5 FAT 对 K562 细胞与 K562/A02 细胞耐药性的逆转作用
组别
K562 细胞 K562/A02 细胞
IC50 of ADM（μmol/L） 逆转倍数 IC50 of ADM（μmol/L） 逆转倍数
阴性对照 2.6 80.00
VRP（10 μmol/L） 2.2 1.2 10.20 7.8
FAT（0.01 mg/mL） 2.5 1.0 36.50 2.2
FAT（0.02 mg/mL） 2.4 1.1 20.00 4.0
FAT（0.04 mg/mL） 2.5 1.0 3.75 21.3
FAT（0.08 mg/mL） 1.9 1.4 1.90 42.1
2.4 FAT对K562/A02内GSH含量的影响
DTNB 法检测结果（表 6）显示，K562/A02 细
胞 内 GSH 含 量（231.54 μmol/106 cells） 远 远 高 于
K562 细 胞 内 GSH 含 量（58.03 μmol/106 cells）， 为
K562 细 胞 的 3.99 倍 ；FAT 可 减 少 K562/A02 细 胞
内 GSH 含量，VRP（10 μmol/L）、FAT（0.01、0.02、
0.04 和 0.08 mg/mL）作用 48 h 后，K562/A02 细胞内
GSH 含量从 231.54 μmol/106 cells 分别减少到 96.95、
212.89、161 和 122.35 μmol/106 cells，但仍高于 K562
细胞内 GSH 含量，说明 FAT 可减少 K562/A02 细胞
内 GSH 的表达，并且与剂量相关，但是效果没有
VRP 显著。
2.5 FAT对K562和K562/A02细胞内罗丹明123积聚
浓度的影响
阿霉素、柔红霉素是治疗急性白血病的常用化
疗药物，它们是通过抑制细胞内 DNA 的合成而发挥
作用，监测白血病细胞内的阿霉素或柔红霉素浓度
对临床疗效的预测有很大意义。同时阿霉素、柔红
2013年第2期 181张玉霞等 ：一种新型海洋生物活性物质逆转 K562/A02 细胞多药耐药的研究
霉素化疗常导致白血病细胞的获得性耐药 - 多药耐
药，耐药的白血病细胞常使细胞内药物的排出增加，
使细胞内药物浓度降低，导致化疗失败，所以抗癌
药物的浓度测定是多药耐药研究的重要课题［8］。用
罗丹明 123（Rhodamine 123）荧光染料作为被测抗
癌药物的代表在细胞中的积累。因为罗丹明 123 的
结构与阿霉素、柔红霉素等众多蒽环类抗癌药物的
结构有许多相同之处（如有芳香杂环、有疏水性、
有氮残基等），并且有强荧光性，容易测定，而且即
使浓度很高也不致杀死细胞［9］。
流式细胞术检测结果（图 1）显示，罗丹明 123
作用 1 h 后，K562 细胞内含量（92.4%）明显高于
K562/A02 细 胞（0.02%）；VRP（10 μmol/L）、FAT
（0.02、0.04 和 0.08 mg/mL） 作 用 1 h 后，K562/A02
细胞内罗丹明 123 含量从 0.02% 分别增加到 10.7%、
18.3%、38.3% 和 50.4%， 可 见，FAT 可 增 加 K562/
A02 细 胞 内 的 罗 丹 明 123 含 量， 与 剂 量 相 关 ；但
表 6 FAT 处理 K562/A02 细胞后的 GSH 含量分析
组别 OD 值 GSH 含量（μmol/106 cells）
K562 0.182±0.002 58.03
K562/A02 0.824±0.002 231.54
K/A+VRP 10 μmol/L 0.326±0.004*** 96.95
K/A+FAT 0.02 mg/mL 0.755±0.002** 212.89
K/A+FAT 0.04 mg/mL 0.563±0.006*** 161.00
K/A+FAT 0.08 mg/mL 0.420±0.005*** 122.35
Compared with control，**P<0.01，***P<0.001
Compared with control，***P<0.001
图 1 FAT 对 K562 和 K562/A02 细胞内罗丹明 123
含量的影响
control
10 μmol/L VRP
0.02 mg/mL FAT
0.04 mg/mL FAT
0.08 mg/mL FAT
K562/A02 K562
C
on
ce
nt
ra
tio
n%

120
100
80
60
40
20
0
*** ***
***
***
92.4%
0
C
ou
nt
104
1 1000
K562
B B
95.3%
0
C
ou
nt
132
1 1000
K562+VRP 10 μmol/L
D C
95.1%
0
C
ou
nt
112
1 1000
K562+FAT 0.04 mg/mL
J I
99.8%
0
C
ou
nt
96
1 1000
K562+FAT 0.08 mg/mL
F E
94.2%
0
C
ou
nt
124
1 1000
K562+FAT 0.02 mg/mL
H G
图 2 流式细胞术分析 FAT 处理 K562 细胞后罗丹明 123 含量图
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第2期182
FAT 对 K562 细胞内罗丹明 123 含量没有显著影响
（图 2 和图 3）。
3 讨论
多药耐药（MDR）是指肿瘤细胞长期接触某一
化疗药物，不仅对此种化疗药物产生耐药性，而且
对其他结构和功能不同的抗肿瘤药物也产生交叉耐
药性的现象［10］，是造成化疗失败的主要原因。由于
肿瘤 MDR 已涉及临床常用的多种抗癌药物，因此，
尽快找到可以逆转肿瘤 MDR 的方法，以提高临床
疗效，改善患者生存质量，延长患者生存期十分紧
迫［11］。
Tsurno 等［12］发现钙离子拮抗剂如维拉帕米通
过与抗癌药物竞争 P-gp 的相关结合位点增加抗癌药
物在细胞内的潴留，Muller 等［13］发现维拉帕米使
mdrl 基因转录下调逆转 MDR。邓琦等［14］通过研究
结果证实了通过 CIK 与 ADR 细胞对 K562/ADR 细
胞的先后作用，降低了其胞内 P-gp 的表达，提高了
K562/ADR 细胞内 ADR 浓度，增强了 ADR 对耐药
细胞的杀伤活性，但是对于多药耐药的非 P-gp 机制
却鲜有报道。
GSH 由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的小分
子三肽化合物，是细胞内主要的含巯基肽，谷胱甘
肽转移酶系统是存在于动植物体内的重要解毒系统。
在人体内，GSH 可与多种化疗药物等氧化性物质结
合，加速化疗药物的分解代谢，清除药物细胞毒性
代谢产物，增强对损伤 DNA 的修复，从而降低化疗
药物的细胞毒性作用。细胞内 GSH 水平增加与癌细
胞对烷化剂、阿霉素及铂类化疗药物耐药性密切相
关［15］，Fojo［16］也发现肿瘤 MDR 细胞内 GSH 含量
明显升高。本试验也证实 K562/A02 细胞内 GSH 含
量远远高于 K562 细胞内 GSH 含量。经无毒剂量的
FAT 作用后，K562/A02 细胞内 GSH 含量减少，推
测 FAT 可能通过减少 GSH 的表达或与 GSH 结合来
降低细胞内 GSH 含量，进而增加了罗丹明 123 在
K562/A02 细胞内的积聚浓度从而逆转 MDR，并且
与剂量相关。徐玉乔等［17］发现环孢霉素 A 可以使
耐药细胞 GSH 含量降低与自由基有关，刘明华等［18］
发现川芎嗪通过影响 GST 降低耐药细胞内 GSH 含
量， 而 FAT 降 低 K562/A02 细 胞 内 GSH 含 量 的 机
制和能否在体内试验中逆转多药耐药有待进一步
图 3 流式细胞术分析 FAT 处理 K562/A02 细胞后罗丹明 123 含量图
0.02%
0
C
ou
nt
100
1 1000
K562/A02
B
A
10.7%
0
C
ou
nt
28
1 1000
K562/A02+VRP 10 μmol/L
A
38.3%
0
C
ou
nt
44
1 1000
K562/A02+FAT 0.04 mg/mL
B
50.4%
0
C
ou
nt
64
1 1000
K562/A02+FAT 0.08 mg/mL
E
18.3%
0
C
ou
nt
92
1 1000
K562/A02+FAT 0.02 mg/mL
E
2013年第2期 183张玉霞等 ：一种新型海洋生物活性物质逆转 K562/A02 细胞多药耐药的研究
研究。
本研究提示 FAT 与化疗药物联合应用可能会增
加白血病及其他肿瘤的化疗疗效。
4 结论
本试验显示了 FAT 作为有效多药耐药逆转剂的
一些药理学特征 ：无毒剂量的 FAT 与化疗药物 ADR
联合运用可以降低 K562/A02 细胞的 IC50 值，FAT 还
可以增加罗丹明 123 在 K562/A02 细胞内的积聚浓度，
降低 K562/A02 细胞内 GSH 的含量，且呈剂量相关。
推测 FAT 降低 K562/A02 细胞内 GSH 的含量是 FAT
逆转 MDR 的机制之一。
参 考 文 献
［1］ 张海嫦 , 张飞 , 武冰 , 等 . Anxa2 和 P-gp 蛋白相互作用对多药
耐药乳腺癌细胞迁移与侵袭影响的研究［J］. 中华肿瘤防治杂
志 , 2012, 19（3）：166-171.
［2］ 秦 小 清 , 梁 宇 光 , 高 洪 志 , 等 . 五 味 子 甲 素 对 K562/ADR、
HL60/ADR、MCF-7/ADR 多药耐药逆转机制的研究［J］. 中国
药理学通报 , 2011, 27（3）：329-334.
［3］ 齐相薇 , 张湘宁 , 黄培春 . 抗肿瘤海洋生物活性物质的研究进
展［J］. 海南医学 , 2012, 23（2）：118-121.
［4］ 周建军 , 乐秀芳 , 韩家娴 , 等 . 评价抗癌物质活性的改良 MTT
方法［J］. 中国医药工业杂志 , 1993, 24（10）：455-456.
［5］ 周 一 平 . 用 SPSS 软 件 计 算 新 药 的 LD_50［J］. 药 学 进 展 ,
2003, 27（5）：314-316.
［6］ 李大成 , 屈艺 , 刘柏林 , 等 . 三种中药制剂 Ams-11、Fw-13、T
ul-17 逆转肿瘤细胞多药耐药性的研究［J］. 华西医科大学学
报 , 1998, 29（1）：16-20.
［7］ Mckee T, Mckee JR. Biochemistry an introduction. 2ed.［M］. Mc
Graw-Hi11 Companies Inc, 1999 ：132-134.
［8］ 马建国 , 杨纯正 , 李 中 , 等 . 白血病细胞内柔红霉素的测定［J］.
药物分析杂志 , 1992, 12（1）：9-11.
［9］ 鄂征 , 主编 . 组织培养和分子细胞学技术［M］. 北京 ：北京出
版社 , 1994 ：3-134.
［10］ 李艳红 , 王永华 , 李 燕 , 等 . MDR1 基因多态性及其临床相关
性研究进展［J］. 遗传学报 , 2006, 33（2）：93-104.
［11］ 齐元富 , 聂奔 , 李慧杰 . 中药逆转肿瘤多药耐药的前景探
讨［J］. 中医杂志 , 2012, （6）：476-478.
［12］ Tsurno T, Lida H, Tsukagoshi S. Overcoming of vincristine resista-
nce in p388 leukemia in vivo and in vitro through enhanced cytoto-
xicity of vincristine and vinblas-tine by verapami［J］. Cancer Res,
1981, 41（5）：1967.
［13］ Muller C, Goubin F, Ferrandis E, et al. Evidence for transcriptional
control of human mdr l gene expression by verapamil in multidrug-
resistant leukemic cells［J］. Mol Pharmacol, 1995, 47（1）：51-
56.
［14］ 邓琦 , 白雪 , 肖霞 , 等 . CIK 逆转 K562 /ADR 细胞多药耐药作
用及其机制探讨［J］. 中华血液学杂志 , 2011, 32（1）：52-
56.
［15］ 季旭明 , 江涛 , 欧阳兵 , 等 . 温下方含药血清对肺腺癌耐药细
胞内 GSH、GST-的影响［J］. 山东中医药大学学报 , 2010, 34
（1）：67-69.
［16］ Fojo T, Bates S. Strategies for reversing drug resistance［J］.
Oncogene, 2003, 22 ：7512-7523.
［17］ 徐玉乔 , 惠延平 , 马世荣 , 等 . 环孢霉素 A 逆转人白血病耐药
细胞系 HL-60/ADM 后氧自由基水平的变化［J］. 中华实验血
液学杂志 , 2008, 16（5）：1050-1054.
［18］ 刘明华 , 任美萍 , 李蓉 , 等 . 川穹嗪对人卵巢癌耐药细胞株
COC1/DDP 的逆转作用研究［J］. 重庆医学 , 2011, 40（20）：
1982-1987.