全 文 ：技术与方法
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2010年第 12期
分子标记技术在大黄属植物种质资源研究中的应用
胡延萍 王莉 李毅
(中国科学院西北高原生物研究所 高原生物适应与进化重点实验室,西宁 810001 )
收稿日期: 20100617
基金项目:国家科技支撑计划项目 ( 2007BAD64B04 ), 2009年中国科学院 西部之光 !人才培养计划项目
作者简介:胡延萍,女,博士,研究方向:植物生物技术; Em a i:l huyanp ingqfnu@ 163 com
通讯作者:李毅,研究员, Em ai:l l iy@i nw ipb ac cn
摘 要: 介绍了几种常用分子标记 RAPD、AFLP、SSR、ISSR和 SRAP的原理和特点, 着重论述了分子标记在大黄属植物
遗传多样性、亲缘关系和种质鉴定等方面的应用, 分析了大黄种质资源研究中存在的问题和提出了今后研究工作的重点。
关键词: 分子标记 大黄 种质资源
Application ofM olecular Techniques in the Research
ofGermplasm Resources ofRheum
Hu Yanping W ang L i L iY i
(K ey Laboratory of Adaptation and Evolution of P lateau Biota,N orthwest Institute of Plateau B iology, ChineseA cademy of Sciences, X ining 810001)
Abstrac:t The pr inc iple and character istic o f mo lecu la rm arkers, includ ing RAPD, AFLP, SSR, ISSR and SRAP, we re introduced
in th is pape r. Applications o fm o lecularm arkers we re rev iewed in the field o f genetic diversity, re lationship and identification of rhubarb
ge rmp lasm resources. The current prob lem s and prospects of the app lication in Rheum w ere a lso d iscussed.
Key words: M olecu lar ma rker Rhubarb Germ plasm resources
随着分子生物学的快速发展、分子克隆及 DNA
重组技术的不断完善, 分子标记技术已成为现代植
物学研究的一项新的技术手段。它反映的是生物个
体或种群间基因组中某种差异特征的 DNA片段,能
够直接反映基因组 DNA间的差异。与传统的形态
标记、细胞学标记和生化标记相比,分子标记有许多
明显的优越性,具体表现在以下方面: 直接以 DNA
的形式表现,在生物体各个发育时期的个体、组织、
器官和细胞中均可检测到, 不受季节、环境限制,不
存在表达与否等问题; 数量丰富, 遍布整个基因组;
遗传稳定,多态性高;表现为中性, 不影响目标性状
的表达;许多标记表现为共显性,能区别纯合体和杂
合体。分子标记已被广泛应用于植物分类、进化和
遗传多样性分析、种质鉴定、遗传图谱的构建及基因
定位等领域的研究 [ 1- 4]。
大黄属 (Rheum )隶属于蓼科 ( Po lygonaceae) ,其
植物为多年生高大草本。全世界约 60种,分布在亚
洲温带及亚热带的高寒地区。以我国为分布中心,
有 39种 2变种, 约占全部种数的 2 /3, 主要分布于
西北、西南及华北地区, 东北较少。该属植物具有重
要的经济价值,中药大黄是我国特产的重要药材之
一, 早在 2 000多年前就有记载 [ 5 ]。大黄具有泄热
通肠、凉血解毒、逐瘀通经之功效; 其正品来源于掌
叶大黄、鸡爪大黄及药用大黄,药用部位为根及根状
茎 [ 6]。此外,还有一些用作食用的大黄属品种, 以
叶柄为食用器官,营养价值高,是理想的芳香保健蔬
菜 [ 7]。由于大黄属植物的重要经济价值,国内外市
场对其需求的与日俱增, 过度开采和生境的破坏已
导致野生大黄资源的锐减 [ 8]。种质资源研究是资
源保护和开发利用的基础。目前, 多种分子标记技
术如 RAPD、AFLP、SSR和 ISSR等已在大黄属植物
的种质资源研究中得到应用。关于大黄的综述多集
中于化学成分、药理作用、临床应用及资源的开发利
用等 [ 9- 13] ,而其分子生物学方面的综述未见报道。
2010年第 12期 胡延萍等 :分子标记技术在大黄属植物种质资源研究中的应用
本文就分子标记在大黄属植物中的研究进展进行综
述,以便于今后的研究工作。
1 分子标记在大黄属植物种质资源研究中
的应用
1. 1 大黄属 RAPD标记的应用
RAPD即随机扩增多态性 DNA ( random amp li
fied po lymorph icDNA ),是 1990年由美国杜邦公司
的科学家 W illiams[ 14]和加利福尼亚生物研究所
W elsh
[ 15]两个小组几乎同时发展起来的建立在
PCR基础上的一种 DNA分子标记技术。它采用
一个 10碱基任意序列的寡核苷酸片段为引物, 以
生物的基因组 DNA为模板进行 PCR扩增, 当模板
上有引物的结合位点, 并且一定范围内有与引物
互补的反向重复序列时, 此范围内的 DNA片段就
可以被扩增出来。RAPD标记具有快速、简便, 无需
预知受试基因组 DNA序列等优点,可用于不同基因
组的分析 [ 16, 17]。
RAPD标记已广泛应用于大黄属植物的鉴定研
究中。最早,裴德清 [ 18]对掌叶大黄和阿尔泰大黄进
行 RAPD扩增,扩增结果显示二者差异明显。因此,
这一研究结果为大黄属生药鉴定提供了一种可行而
崭新的 DNA指纹鉴定方法, 弥补了传统鉴别方法的
不足, 促进生药鉴定技术的发展。随后, 刘叔倩 [ 19]
用 RAPD分子标记对大黄属 5种植物的鉴定进行了
初步研究。杨美华 [ 20]用 RAPD方法对正品和伪品
大黄进行指纹图谱研究, 得到了两个具有正品大黄
特征性条带的引物, 为正品和伪品大黄的鉴定提供
分子生物学证据。基于形态学和 RAPD标记的 12
种食用大黄栽培品种的亲缘关系研究结果表明,不
同品种间存在一定程度的遗传变异, 形态学标记和
分子标记的聚类结果具有较强的相关性 [ 21 ]。
1. 2 大黄属 AFLP标记的应用
扩增片段长度多态性 AFLP ( amp lified fragment
leng th po lymorph ism ) 是 1993 年由荷兰科学家
Zabeau和 Vos发展起来的一种检测 DNA多态性的
方法 [ 22, 23]。其基本原理是对基因组 DNA进行双酶
切,使用特定的双链接头与酶切 DNA片段连接作为
扩增反应的模板,用含有选择性碱基的引物对模板
DNA进行特异性扩增。它结合了 RFLP和 RAPD的
优点, 具有多态性丰富、DNA用量少、引物通用性
强、稳定性好等优点,但其试验过程复杂,流程长,成
本高 [ 24]。Kuhl等 [ 25]首次用 AFLP标记对 37个食
用栽培大黄品种和 4个大黄属其它物种的遗传多样
性进行研究, AFLP标记可以用来区分所有栽培品
种以及大黄属其它物种, 推测食用大黄可能起源于
当初由我国引入欧洲种植的药用大黄物种的杂交
后代。
索风梅等 [ 26]应用 AFLP方法分析了药典中记
载的 3种正品大黄 44份样品的亲缘关系, 8对选择
性扩增引物中, 共扩增得到 1 255条稳定清晰的条
带, 其中 1 209条多态性条带,多态性带占总带数的
962%。∀中国药典#规定的 3种正品大黄中, 药用
大黄和掌叶大黄的亲缘关系较唐古特大黄近, 表明
AFLP技术可用于分析 3种正品大黄的亲缘关系。
1. 3 大黄属 SSR标记的应用
简单重复序列 SSR ( simp le sequence repeat) ,
是指由 1- 6个碱基组成的基本序列串联重复的
短片段, 这些片段广泛存在于真核细胞的基因组,
由于串联重复的数目是可变的而表现出高度多态
性。SSR位点两翼的 DNA序列多是相对保守的单
拷贝序列, 因而可根据其两翼区域的序列设计位
点专一的引物, 通过扩增、电泳来构建 DNA指纹。
SSR标记具有共显性、高度重复性和丰富的多态性
等优点 [ 27]。Zhang等 [ 28]筛选了 10对 SSR引物用
于唐古特大黄不同个体的 SSR分析, 同时,也可用
于另外两种正品大黄 (掌叶大黄和药用大黄 )的研
究,表明 SSR分子标记是大黄属植物遗传学研究
的有效工具。 Chen[ 29 ]进一步用 SSR分子标记研
究了唐古特大黄 10个居群共 114个个体的遗传多
样性, 居群多态位点百分率为 78. 81% , 期望杂合
度为 0. 423- 0. 591(平均值 0. 515), Shannon多样
性指数为 0. 251 - 0. 447(平均值 0. 323) , 表明野
生唐古特大黄居群具有较高的遗传多样性。探讨
了导致唐古特大黄濒危的原因可能是野生居群的
过度采挖和人类活动的干扰, 而不是遗传多样性
的降低。
1. 4 大黄属 ISSR标记的应用
ISSR( intersimple sequence repeats)标记是由加
拿大蒙特利尔大学的 Zietk iew icz等 [ 30]于 1994年发
展起来的一种基于微卫星序列的分子标记技术, 这
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生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2010年第 12期
一技术是依据真核生物基因组具有丰富的高度串联
重复序列而提出的。其基本原理是利用基因组中存
在的简单重复序列 ( simple sequence repeats, SSR )本
身设计引物, 在 SSR的 3∃或 5∃端加锚 1- 4个随机
碱基, 然后以此为 3∃或 5∃引物, 对两侧具有反向排
列的 SSR之间的基因组片段进行扩增。 ISSR结合
了 RAPD和 SSR的优点,具有较好的稳定性和多态
性,但 ISSR标记产物多态性远比 RFLP、SSR、RAPD
更加丰富,可以提供更多关于基因组的信息 [ 31- 35 ]。
因此, ISSR标记被认为是居群遗传多样性研究的一
种有效的分子标记手段 [ 36, 37]。Hu等 [ 38]利用 ISSR
分子标记方法研究了唐古特大黄野生居群的遗传结
构和遗传变异,结果显示,在物种水平上, 唐古特大
黄多态位点百分率为 92. 94%, Ne i基因多样性指数
为 0. 2689;居群水平上多态位点百分率为 46. 51% ,
N ei基因多样性指数为 0. 1724,无论是居群水平还
是物种水平,唐古特大黄均具有较高的遗传多样性。
遗传距离与地理距离的 Mantel检验表明, 二者呈显
著的正相关。同时, 还探讨了唐古特大黄的遗传多
样性与生态因子的关系, 其遗传多样性与海拔呈显
著的正相关,与纬度和年平均气温呈显著的负相关,
因此, 海拔和温度可能是影响唐古特大黄遗传多样
性的重要外部因子。
1. 5 大黄属 SRAP标记的应用
相关序列扩增多态性 SRAP ( sequence related
amplif ied po lymorphism )是由美国加州大学蔬菜作物
系 L i与 Qu iros[ 39]博士于 2001年提出的一种新的
DNA分子标记,它利用独特的引物设计对开放阅读
框 ( ORFs)进行扩增, 因个体不同以及物种的内含
子、启动子与间隔长度不等而产生多态性。 SRAP
标记具有多态性高、产率中等、操作简单、重复性好
和选择条带序列容易获得等优点, 近年来在植物遗
传多样性分析 [ 40- 42]、基因定位 [ 43, 44]、遗传图谱的构
建 [ 45]以及种质资源鉴定 [ 46]等方面得到广泛应用。
在大黄属植物的研究中,仅见陈大霞 [ 47]用 SRAP标
记分析了正品大黄的遗传关系,通过对 12个不同来
源大黄材料的研究表明, 24对引物组合共得到 272
条扩增条带,其中 199条呈现多态性, 占 73. 2% ,从
DNA分子水平显示不同材料间存在着丰富的遗传
多样性, SRAP标记能有效分辨 3种正品大黄, 聚类
分析结果表明正品大黄的分类结果与传统形态分类
结果相同。总之, SRAP标记为正品大黄鉴定和亲
缘关系研究提供了新的 DNA分子标记技术手段。
1. 6 DNA序列分析在大黄属中的应用
DNA序列分析是在 DNA一级结构水平上检测
遗传多样性的分子标记技术, 即采用某种策略通过
测定核苷酸在基因组 DNA特定区域的排列顺序来
研究 DNA多样性, 它是最能充分揭示多样性的方
法。序列分析是区分个体间遗传差异最彻底准确的
方法,可提供高度重复的、信息丰富的数据, 适合于
中等和高等层次分类群的系统学研究 [ 1 ]。目前应
用最多的是利用 通用!引物扩增 mtDNA、cpDNA或
核 DNA某些基因、DNA片段, 然后用这些通用引物
直接测序,最后通过相关的软件进行序列比对和分
析, 构建系统进化树 [ 48, 49]。
杨美华等 [ 50]利用叶绿体 trnL / trnF基因序列测
定进行正品和伪品大黄的鉴定。姬可平和张西
玲 [ 51, 52]对甘肃省掌叶大黄种子 rRNA基因内转录间
隔区进行序列测定, 并建立了大黄种子 rRNA基因
图谱。王爱兰等 [ 53]用叶绿体 DNA trnLtrnF基因序
列对大黄属植物的系统进化与适应辐射进行研究发
现, 尽管其形态上的分化较大,但分子水平的遗传变
异相对较低,这表明青藏高原的隆升所形成的地理
和生态多样性以及第四纪的震荡气候可能促使物种
在小的隔离居群中形成和大黄属一些特殊形态特征
的固定。Yang[ 54]用叶绿体 matK基因和核糖体 18S
rRNA基因对大黄属 9种植物进行鉴定。K omat
su
[ 55]结合叶绿体 matK基因序列和反相 HPLC法研
究不同来源大黄药材的化学成分和遗传变异的关
系, 得出以下结论: 基因型相同、采集地不同的大黄
药材,化学成分组成相同; 而基因型不同、采集地相
同的大黄药材,其化学成分组成不同。表明遗传因
素是决定大黄化学成分组成的关键因子。
2 问题与展望
国内外市场对大黄需求量的不断增加和掠夺式
的滥采滥挖,已导致大黄野生资源锐减,如驰名中外
的唐古特大黄和掌叶大黄等名贵药材,已被列入青
海省重点保护野生植物名录 (第一批 ) [ 56]。因此,
保护大黄野生资源、实行大黄规范化种植和选育优
良品种已是当务之急。
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2010年第 12期 胡延萍等 :分子标记技术在大黄属植物种质资源研究中的应用
针对大黄资源研究中存在的问题,今后工作的
重点主要有以下几点。首先,制定合理的野生大黄
资源保护策略和措施。综合运用多种分子标记技术
对大黄属植物的遗传多样性和遗传背景进行研究,
探讨其遗传结构和基因交流,为大黄野生资源保护
策略的制定提供科学的理论依据。
其次,实现大黄规范化种植。通过人工栽培满
足市场对大黄用药的需求, 从根本上缓解野生大黄
资源的压力。由于栽培大黄种质来源混乱、良莠不
齐,给临床应用带来极大不便, 尤其是青海省道地药
材唐古特大黄与掌叶大黄在形态上极为相似, 仅叶
片深裂程度不同, 难以辨别。对大黄药材进行分子
鉴定, 来弥补形态学上的不足, 解决大黄规范化种植
的种源问题。在种源明确的情况下, 于大黄适应生
长的高海拔山区和生境破碎化地区建立种植基地,
增加基因交流, 减少遗传多样性的降低, 实现大黄
GAP药材规范化生产。
最后,培育大黄优良新品种。在传统育种的基
础上,结合 RAPD、AFLP、ISSR、SSR等分子标记在大
黄属植物遗传多样性研究中的应用, 加强遗传图谱
构建和基因定位研究, 从野生类群中筛选优良目的
基因, 并对其进行改良,缩短新品种培育的时间。
总之,加强交流合作, 开展多种分子标记研究,
筛选多态性高的引物和探针,加快大黄属植物种质
资源研究进程,为更好地开发、利用和保护大黄资源
奠定生物学基础。
参 考 文 献
[ 1] 邹喻苹,葛颂,王晓东.系统与进化植物学中的分子标记 [M ] .北
京:科学出版社, 2001.
[ 2] 周延清, DNA分子标记技术在植物研究中的应用 [M ]. 北京:化
学工业出版社, 2005.
[ 3] 黄海,李劲松,曹兵.分子标记技术在石斛属植物种质资源研究
中的应用.生物技术通报, 2010( 4 ) : 7580, 87.
[ 4] S em agn K, B jorns tad A, Nd jiond jop MN. An overview ofm olecu lar
m ark er m ethod s for plan ts. A frican Journa l of B iotechnology, 2006, 5
( 25 ): 25402568.
[ 5] 李安仁,中国植物志 (第 25卷,第 1分册 ) [M ] .北京:科学出版
社, 1998: 166171.
[ 6] 国家药典委员会,中华人民共和国药典 [M ] .北京:化学工业出
版社, 2005: 1718.
[ 7] 卢莉,赵一鹏.菜用大黄的研究进展. 广东农业科学, 2008, ( 2) :
1921.
[ 8] 李锦萍,陈桂琛,卢学峰.青海唐古特大黄种质资源现状与保护
对策.青海草业, 2007, 16 ( 2) : 3842.
[ 9] 李敏,李丽霞,刘渝,刘勇.大黄研究进展.世界科学技术中医药
现代化, 2006, 8( 4 ): 3439.
[ 10 ] 丁玉玲. 大黄蒽醌类的研究概况. 时珍国医国药, 2005, 16
( 11 ): 11601162.
[ 11] 邹英杰.大黄的现代药理研究. 中国医药卫生, 2007, 8 ( 5 ):
8181.
[ 12] 叶彩云.大黄炮制品及其临床应用.基层医学论坛, 2006, 10
( 1 ) : 5858.
[ 13] 李福安,李建民.青藏高原大黄资源应用与开发研究进展.青海
医学院学报, 2001, 22( 3 ) : 3941.
[ 14] W ill iam s J, Kubelik A, L ivak K, et a.l DNA polym orph ism s am p li
f ied by arb itrary p rim ers are usefu l as gen et ic m arkers. Nu cleic
AcidsR esearch, 1990, 18( 22) : 65316535.
[ 15] Welsh J, M cC lellandM. Fingerp rint ing genom es us ing PCR w ith arb i
trary p rim ers. Nucleic Acids Research, 1990, 18( 24) : 72137218.
[ 16] 莫可元. RAPD技术在中药鉴定及相关领域应用的研究进展.
中国药师, 2007, 10( 9 ) : 908910.
[ 17] 邹锋,谭晓风,袁德义,袁军. RAPD分子标记及其在油茶遗传
育种研究中的应用 (综述 ). 亚热带植物科学, 2009, 38 ( 1 ):
7073.
[ 18] 裴德清,果德安,郑俊华,等.大黄属植物 DNA的提取及 RAPD
扩增.北京医科大学学报, 1996, 28( 5 ): 330.
[ 19] 刘叔倩,卢萍,郑谦,郑俊华. 用 RAPD鉴定大黄属 5种植物间
的差异.北京医科大学学报 (大黄专辑, 增刊 ) , 1998, 30 ( 6 ):
60, 63.
[ 20] 杨美华,张大明,刘健全, 等.正品和伪品大黄的 RAPD指纹图
谱鉴定研究.中草药, 2003, 34( 6 ): 557560.
[ 21] PerssonHA, Rumpunen K, M ollersted tLK. Ident ification of cu linar
y rhubarb(R heum spp. ) cu ltivars us ingm orphological characteriza
t ion and RAPD m arkers. Journal of H orticultural S cien ce & B io
technology, 2000, 75 ( 6) : 684689.
[ 22 ] Zabeau M, Vos P. S elect ive restriction fragm en t amp lificat ion: a
generalm ethod for DNA f ingerp rint ing. Eu ropean paten t app lica
t ion, 92402629 [ P] . 1993.
[ 23 ] Vos P, H ogers R, B leekerM, et a.l AFLP: a n ew techn iqu e for DNA
fingerprin ting. NucleicA cids Research, 1995, 23( 21) : 44074414.
[ 24] N ybo K. DNA and gen eral PCR m ethods: am pl if ied fragm en t length
polymorph ism (AFLP) . B iotechn iqu es, 2010, 48( 5 ) : 367369.
[ 25] K uh l JC, DeBoerVL. Gen et ic d iversity of rhubarb cu ltivars. Journ al
of th e Am erican Society forH orticu ltural Science, 2008, 133( 4 ):
587592.
[ 26] 索风梅,宋经元,陈士林,等. AFLP分析唐古特大黄、掌叶大黄
和药用大黄的亲缘关系研究.中草药, 2010, 41 ( 2) : 292296.
[ 27] 李明芳,郑学勤.开发 SSR引物方法之研究动态.遗传, 2004, 26
67
生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2010年第 12期
( 5) : 769776.
[ 28 ] Zhang DY, C hen N, Yang YZ, et a.l Developm en t of 10m icrosatel
lite loci for Rheum tanguticum ( Po lygonaceae) . Con servat ion Ge
net ics, 2008, 9( 2 ): 475477.
[ 29 ] C hen F, Wang A, Chen K, et a.l G enetic d iversity and popu lat ion
structu re of th e endangered and m edically importantRh eum tangu
ticum ( Po lygonaceae) revealed by SSR m ark ers. B iochem ical Sys
tem at ics and Eco logy, 2009, 37 ( 5) : 613621.
[ 30] Z ietk iew iczE, Rafalsk iA, LabudaD. Genom e f ingerprint ing by s im
p le sequ ence repeat ( SSR ) anchored polym erase chainreact ion
amp lif icat ion. G enom ics, 1994, 20 ( 2) : 176183.
[ 31 ] 王建波. ISSR分子标记及其在植物遗传学研究中的应用. 遗
传, 2002, 24 ( 5) : 613616.
[ 32 ] 张玉星,马艳芝,赵国芳.简单重复序列间扩增分子标记技术及
其应用.生物技术通报, 2009 ( 9) : 5456.
[ 33 ] 王康,董宽虎,杨青川, 等. ISSR分子标记在牧草研究中的应
用.生物技术通报, 2008 ( 6) : 6568, 77.
[ 34 ] Ye YM, Zhang JW, N ing GG, B ao M Z. A comparat ive an alysis of
th e gen et ic d iversity betw een inb red lin es of Z innia e legans us ing
m orphological traits and RAPD and ISSR m arkers. Scient ia H orti
culturae, 2008, 118 ( 1) : 17.
[ 35 ] Jhang T, Kau rM, K alia P, Sh arm a TR. E fficien cy of d ifferentm ark
er system s form olecu lar characterization of subtropical carrot germ
p lasm. Journal of Agricu ltu ral Science, 2010, 148: 171181.
[ 36 ] Cao PJ, Yao QF, D ing BY, et a.l Gen et ic d iversity of S inojackia
d olichoca rpa ( S tyracaceae) , a species endangered and endem ic to
Ch ina, detected by in tersim ple sequence repeat( ISSR) . B iochem i
cal Systemat ics and E cology, 2006, 34 ( 3) : 231239.
[ 37 ] M a X, Zhang XQ, Zhou YH, Bai SQ, L iu W. Assessing gen et ic di
versity of E lymu s sibiricu s ( Poaceae: T riticeae) popu lat ion s from
Q inghaiT ib et Plateau by ISSR m arkers. B ioch em ical System at ics
and E cology, 2008, 36( 7 ): 514522.
[ 38 ] Hu Y, Wang L, X ie X, et a.l Gen et ic d iversity ofw ild popu lations of
Rh eum tangu ticum endem ic to Ch ina as revealed by ISSR analysis.
B iochem ical Sys tem at ics and E cology, 2010, 38( 3) : 264274.
[ 39] LiG, Qu iros CF. S equen cerelated amp lif ied polymorph ism ( SRAP) ,
a new m arker system based on a sim p le PCR reaction: its appl ica
tion to m app ing and gene tagging inB ra ssica. Th eoretical and Ap
p lied Genetics, 2001, 103( 23 ): 455461.
[ 40 ] 程远辉,周昌华,马爱芬,石小刚,张兴翠.重庆何首乌遗传多样
性的 SRAP研究.中国中药杂志, 2007, 32( 8 ): 661663.
[ 41 ] Song Z, L i X, W ang H, W ang J. Gen et ic d iversity and popu lat ion
structu re ofSalviam iltiorrhiza Bge in C h ina revealed by ISSR and
SRAP. Gen et ica, 2010, 138: 241249.
[ 42] Ding G, Zhang DZ, D ing XY, et a.l G enetic variation and conserva
t ion of the endangered Ch inese endem ic herbDend robium off icina le
based on SRAP an alysis. Plant System atics and Evolu tion, 2008,
276 ( 34 ) : 149156.
[ 43] 姜树坤,张喜娟,张丽.水稻品种 %沈农 606&抗稻瘟病基因定位
和连锁的 SRAP片段分析. 植物生理学通讯, 2007, 43 ( 5 ):
852856.
[ 44] 张慧,张淑江,武剑,等.大白菜细胞核隐性雄性不育系恢复基
因 B rM f2的标记及定位.中国农业科学, 2010, 43( 5 ) : 993999.
[ 45] Sun Z, W ang Z, Tu J, Zhang J, Yu F, M cV et ty P, L i G. An u ltra
dense genetic recom b ination m ap for Brassica napus, consist ing of
13551 SRAP m arkers. Theoret ica land Appl ied Genetics, 2007, 114
( 8 ) : 13051317.
[ 46] Feng N, Xue Q, Guo Q, Zhao R, Guo M. Genetic divers ity and pop
u lation stru cture of celosia argen tea and related species revealed by
SRAP. B iochem icalGen et ics, 2009, 47( 7 ): 521532.
[ 47] 陈大霞,李隆云, 钟国跃,等. 用 SRAP标记分析正品大黄的遗
传关系.中国中药杂志, 2008, 33( 20) : 23092312.
[ 48] 曹晖,邵鹏柱. DNA分子指纹图谱与测序技术在中药品质研究
中的现状及展望.中国中药杂志, 1998, 23 ( 11) : 643645.
[ 49] 李力,徐永莉,张月云,赵成坚. DNA分子标记在中药鉴定中的应
用及发展趋势分析.时珍国医国药, 2009, 20( 11) : 28452847.
[ 50] Y angMH, Zhang DM, L iu JQ, Zheng JH. A m olecu lar m ark er th at
is specif ic to m ed icin al rhubarb based on ch lorop last trnL / trnF se
quences. P lan taM ed ica, 2001, 67 ( 8) : 784786.
[ 51] 张西玲,姬可平,李应东,等. DNA测序建立甘肃当归、大黄种
子 rRNA基因图谱的研究.中药材, 2003, 26( 7 ): 481484.
[ 52] 姬可平,李啸红, 李应东,张西玲.应用 rRNA基因间隔区碱基
测序对中药 (大黄 )进行鉴定. 世界科学技术 中药现代化,
2002, 4( 4) : 4447.
[ 53] Wang AL, Y angMH, L iu JQ. M olecu lar phylogeny, recent rad iation
and evolu tion of grossm orphology of the rhubarb genu sR heum ( Po
lygonaceae) in ferred from ch lorop last DNA trnLF sequ ences. An
nals of Botany, 2005, 96( 3 ): 489498.
[ 54] Yang DY, Fush im i H, C ai SQ, Kom atsu K. M olecular analys is of
Rheum species u sed as Rh ei Rh izom a based on the ch lorop last
m atK gen e sequen ce and its appl icat ion for id ent if icat ion. B iologi
cal& Pharm aceut ica lBu llet in, 2004, 27 ( 3) : 375383.
[ 55] Kom atsu K, Nagayam a Y, Tan aka K, et a.l Com parative study of
chem ical const ituen ts of rhubarb from differen t origin s. Chem ical&
Pharm aceut ica lBu llet in, 2006, 54 ( 11) : 14911499.
[ 56] 青海省人民政府.青海省人民政府关于公布青海省重点保护野
生植物名录 (第一批 )的通告.青海草业, 2009, 18( 1 ) : 5051.
68