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ChineseJournalofBioprocessEngineering
Vol.11No.1
Jan.2013
doi:10.3969/j.issn.1672-3678.2013.01.008
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Heterologousexpressionandcharacterizationofenoate
reductasefromAspergilusoryzaeRIB40
ZHANGHailing1,2,GAOXiuzhen2,CHENXi2,RenJie2,FENGJinhui2,
ZHANGTongcun1,WUQiaqing2,ZHUDunming2
(1.ColegeofBiotechnology,TianjinUniversityofScience&Technology,Tianjin300457,China;2.NationalEngineeringLaboratory
forIndustrialEnzymes,TianjinInstituteofIndustrialBiotechnology,ChineseAcademyofSciences,Tianjin300308,China)
Abstract:ThegeneencodingenoatereductaseofAspergilusoryzaeRIB40,asper,wasamplifiedfromthe
genomeDNAandclonedonpET32a(+).EncodedproteinwasexpressedasasolubleforminE.coliBL21
(DE3).RecombinantnativeproteinwaspurifiedbyNiNTAafinitychromatography.Thenativeenzyme
wasNADPHdependentandexistedasadimerdeterminedbygelfiltration.Theenzymeexibitedmaximam
activityatpH7.0topH8.0at40℃.Thepurifiedenzymewasactivetomaleimideanditsderivatives.The
conversionandtheenantiomericexcesstoward2methylmaleimidewerebothhigherthan99%.
Keywords:asymmetricreduction;enoatereductase;oldyelowenzyme
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