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Extraction, Purification and Synchronous Determination of Endogenous Hormones in Angelica Dahurica with HPLC

川白芷内源激素的提取纯化和高效液相色谱法同步测定



全 文 :摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊缘冤院园远缘猿 耀 园远缘苑允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员圆鄄员园鄄园怨摇 接受日期院圆园员猿鄄园员鄄员远
基金项目院四川省育种攻关项目 渊圆园员员晕在园园怨愿鄄员圆鄄园怨冤
作者简介院侯凯袁男袁河南开封人袁硕士研究生袁特用植物品质与育种方向遥 耘鄄皂葬蚤造院噪蚤灶早泽蚤灶早蚤灶早岳 早皂葬蚤造援 糟燥皂
通讯作者院吴卫袁女袁四川雅安人袁博士生导师袁教授袁主要从事特用植物研究遥 耘鄄皂葬蚤造院藻憎怎憎藻蚤岳 早皂葬蚤造援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园缘鄄园远缘猿鄄园缘
川白芷内源激素的提取纯化和高效液相色谱法同步测定
侯摇 凯摇 陈郡雯摇 申摇 浩摇 翟娟园摇 陈摇 黎摇 吴摇 卫
渊四川农业大学农学院袁四川 成都摇 远员员员猿园冤
摘摇 要院为探讨川白芷不同器官内源激素的提取纯化和分析测定袁在前人研究的基础上袁建立了一种从川
白芷不同器官组织中快速提取纯化并同步测定 源 种植物内源激素渊玉米素尧赤霉素尧猿 原吲哚乙酸和脱
落酸冤的高效液相色谱分析方法遥 样品经 愿园豫甲醇提取后低温浓缩袁最后用甲醇定容遥 采用 栽蚤早藻则噪蚤灶
悦员愿 柱渊员缘园皂皂 伊源郾 远皂皂袁 缘滋皂冤以甲醇要园郾 远豫乙酸渊缘园院缘园冤为流动相进行高效液相色谱分离袁孕阅粤 光
电二极管阵列检测器检测袁采用峰面积外标法渊耘杂栽阅冤进行定量遥 结果表明袁该方法具有简单快捷袁准确
灵敏等优点袁适合对川白芷内源激素进行快速同步测定遥
关键词院川白芷曰高效液相色谱曰植物内源激素
摇 摇 植物内源激素渊孕造葬灶贼 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻冤对植物
的生长发育起着重要的调节作用咱员暂 袁与植物生长代谢
过程的调控密切相关遥 在植物感受内外环境变化尧调
节生长和分化发育尧保持适当生存状态以适应和抵御
不良环境胁迫的复杂过程中起着关键作用咱圆暂 曰通过调
控植物根尧茎尧叶尧花尧果实尧种子等重要器官的形态建
成袁进而影响作物的产量和品质等重要农艺性状遥 植
物内源激素的精确测定和分析对植物生命活动规律和
作物育种尧栽培管理等领域的研究具有重要意义袁也是
开花生理研究的主要内容之一咱猿暂 遥 研究植物内源激
素含量变化不仅可以加深对植物器官建成的认识袁还
可以利用植物生长调节剂来调控植物生长发育袁达到
高产优质的目的遥
植物内源激素种类多袁含量甚微袁且易被破坏遥 灵
敏尧专一而又简单易行的测定方法是研究植物内源激
素的重要条件遥 自 圆园 世纪 苑园 年代初应用于植物激素
的分离以来咱源暂 袁高效液相色谱 渊匀蚤早澡 孕则藻泽泽怎则藻 蕴蚤择怎蚤凿
悦澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠袁 匀孕蕴悦冤已发展成为比较理想的植物
内源激素分析方法袁被广泛应用于植物内源激素的测
定咱猿暂 遥 相对植物内源激素的其他检测方法而言袁匀孕蕴悦
法具有灵敏度高尧专一性强和重复性好等特点遥 但
匀孕蕴悦定量分析要求上样的样品有相当高的纯度袁这
就要求必须有合适的植物材料前处理方法袁否则会直
接影响 匀孕蕴悦法的测定结果遥 不同植物材料包括同一
植物不同器官的组分差异甚大袁因而尚无一种通用的
植物材料前处理方法袁目前国内利用高效液相色谱定
量分析植物激素的报道多见于主要农作物和园艺植
物咱源暂 遥 川白芷咱 粤灶早藻造蚤糟葬 凿葬澡怎则蚤糟葬 渊 云蚤泽糟澡援 藻曾 匀燥枣枣皂援 冤
月藻灶贼澡援 藻贼 匀燥燥噪援 枣援 增葬则援 枣燥则皂燥泽葬灶葬 渊 月燥蚤泽泽援 冤 杂澡葬灶 藻贼
再怎葬灶援 暂内源激素的 匀孕蕴悦 研究还很少报道遥 川白芷
材料含挥发油类成分尧香豆素类渊糟燥怎皂葬则蚤灶泽冤化合物尧
苷类成分袁同时富含多酚类及色素类等干扰测定的杂
质袁因此在进行 匀孕蕴悦 测定时选择合适的内源激素提
取纯化方法和色谱条件极为重要袁特别是在同步测定
多种激素时就更应选择好纯化方法和色谱条件遥 如果
提取纯化方法不当袁样品的杂质含量过高袁匀孕蕴悦 将难
以对目的组分进行有效分离袁同时杂质也会影响检测
器对目的组分的响应袁干扰目的组分的检测曰如果没有
合适的色谱条件袁测定时会出现分离度差尧峰型不良及
严重拖尾等现象袁以致无法进行样品检测遥
本研究在总结前人的提取尧纯化尧以及植物内源激
素测定方法的基础上袁结合川白芷不同器官材料干扰
成分多的特点袁对其提取纯化方法和色谱条件进行了
摸索遥 旨在建立快速有效的川白芷植物内源激素提取
方法袁 并利用 匀孕蕴悦同步检测川白芷早期抽薹植株不
同器官中 源 种植物内源激素玉米素 渊 在栽冤尧赤霉素
猿缘远
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
渊郧粤猿冤尧猿 原吲哚乙酸渊 陨粤粤冤和脱落酸渊粤月粤冤的含量袁
为测定川白芷植物内源激素含量提供方法袁有利于深
入研究植物激素对川白芷生长发育的调控作用遥
员摇 材料和方法
员郾 员摇 材料
在川白芷 咱 粤灶早藻造蚤糟葬 凿葬澡怎则蚤糟葬 渊 云蚤泽糟澡援 藻曾 匀燥枣枣皂援 冤
月藻灶贼澡援 藻贼 匀燥燥噪援 枣援 增葬则援 枣燥则皂燥泽葬灶葬 渊 月燥蚤泽泽援 冤 杂澡葬灶 藻贼
再怎葬灶援 暂早期抽薹期选取抽薹植株不同器官渊茎尖尧根
和叶片的幼嫩部分冤分别切碎后取样袁每份材料取 缘
株长势一致的进行混合取材遥 准确称取约 圆郾 园早渊精确
到 园郾 园员皂早冤袁液氮速冻 圆园皂蚤灶 后放在 原 愿远益超低温冰
箱中备用遥
员郾 圆摇 主要仪器与试剂
高效液相色谱仪为美国 粤早蚤造藻灶贼 公司产品袁型号为
员员园园泽藻则蚤藻泽渊包括自动脱气机尧四元泵尧自动进样器尧柱
温箱尧孕粤阅 光电二极管阵列检测器等冤曰冷冻离心机
渊栽澡藻则皂燥襃冤曰振荡仪 渊 匝蚤造蚤灶遭藻蚤藻则襃 冤曰园郾 圆滋皂 微孔滤膜
渊上海新亚净化器件厂冤遥
交联聚乙烯吡咯烷酮渊孕灾孕孕冤尧植物内源激素标准
品赤霉素渊郧粤猿冤尧玉米素渊在栽冤尧生长素渊陨粤粤冤和脱落酸渊粤月粤冤均为 杂蚤早皂葬 公司产品袁甲醇和乙腈为色谱纯
渊云蚤泽澡 杂糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟袁 云蚤泽澡藻则 悦澡藻皂粤造藻则贼襃 匀孕蕴悦 郧怎蚤凿藻冤袁实验
用水为 酝蚤造造蚤鄄匝襃超纯水遥
图 员摇 源 种内源激素标准品的色谱图
云蚤早援 员摇 悦澡则燥皂葬贼燥早则葬皂 燥枣 源 责造葬灶贼 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻泽 泽贼葬灶凿葬则凿泽
员郾 猿摇 川白芷内源激素的提取与纯化
内源激素的提取纯化参考陈远平等咱苑 原 愿暂的方法袁
对川白芷抽薹植株不同器官渊茎尖尧根和叶片幼嫩部
分冤的 源 种内源激素提取尧分离尧纯化方法加以改进遥
将冷冻材料 圆 早 放到预冷的研钵中袁人工剪碎袁加入
员缘皂蕴 源益 预冷的 愿园豫 甲醇袁并添加初始样品用量
园郾 圆 倍的不溶性交联聚乙烯吡咯烷酮渊孕灾孕孕冤袁冰浴条
件下研磨成浆袁源益 下浸提 员圆澡 后袁于 源益 缘园园园则窑
皂蚤灶 原员离心 员缘皂蚤灶袁取上清液保存于 源益 冰箱中袁残渣
分 猿 次渊每次间隔 员圆澡冤加入预冷的 愿园豫 甲醇浸提液
员园皂蕴 左右浸提后同上离心袁收集合并全部浸提液曰将
提取液倒入 员园糟皂 培养皿中袁放到 源益 培养箱内自然
吹干遥 甲醇溶解后过 园郾 圆滋皂 微孔滤膜袁定容至 员园皂蕴袁
作为供试液遥 整个过程在低温弱光下完成遥
员郾 源摇 色谱条件
色谱柱院思谱公司 栽蚤早藻则噪蚤灶襃 悦员愿 柱渊员缘园 皂皂 伊源郾 远
皂皂袁缘滋皂冤曰流动相院甲醇 原 园郾 远豫乙酸渊缘园颐 缘园冤袁柱温院
猿缘益曰进样量 员园滋蕴曰流速院员皂蕴窑皂蚤灶 原员曰紫外检测波长院
圆缘源 灶皂曰采用峰面积外标法渊耘杂栽阅冤定量测定遥
员郾 缘摇 标准溶液的配制
称取 郧粤猿尧在栽尧陨粤粤尧粤月粤 标准品各 员园皂早袁分别用
甲醇溶解并定容至 造园皂蕴袁摇匀袁配成 员 早窑蕴 原员的储备
液袁置于 原圆园益 冰箱中避光保存遥 用流动相稀释后制
得标准溶液遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 标样在 韵阅杂 悦造愿 柱上的分离图谱
在以上色谱条件下袁陨粤粤尧郧粤猿尧在栽 和 粤月粤 能与其
他成分得到很好地分离袁结果见图 员遥
从图中可以看出袁标样中 郧粤猿尧在栽尧陨粤粤和 粤月粤 的
保留时间分别为 圆郾 猿愿怨皂蚤灶尧圆郾 远猿远皂蚤灶尧猿郾 远苑猿皂蚤灶 和
源郾 愿圆圆皂蚤灶遥 各峰基线分离状况良好袁且峰形尖锐袁出峰
时间较合适袁测试全部 源 种内源激素所用时间较短袁适
用分析材料较多时采用遥
圆郾 圆摇 线性关系和检出限考察
将不同质量浓度含量的 源 种内源激素标样的系列
源缘远
摇 缘 期 川白芷内源激素的提取纯化和高效液相色谱法同步测定
溶液进行 匀孕蕴悦测定遥 获得它们的标准曲线遥 从而建
立起已知激素浓度与 匀孕蕴悦峰面积大小之间的函数关
系袁通过计算确定各激素标准样品的曲线方程袁以供后
面实际材料的峰面积外标法测试所用遥 不断降低混合
样中各组分的含量袁连续进样测定袁放大图谱观察袁按
信噪比逸猿 确定检测限袁测定各组分检测限遥 各激素
标准样品曲线方程尧相关系数尧线性范围尧检出限见
表 员遥
表 员摇 源 种内源激素 匀孕蕴悦分析的若干参数
栽葬遭造藻 员摇 杂燥皂藻 匀孕蕴悦 责葬则葬皂藻贼藻则泽 燥枣 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻泽 葬灶葬造赠扎蚤灶早
内源激素
耘灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻
回归方程
砸藻早则藻泽泽蚤燥灶 藻择怎葬贼蚤燥灶
相关系数
悦燥则则藻造葬贼蚤燥灶 糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼
线性范围
蕴蚤灶藻葬则则葬灶早藻
渊滋早窑皂蕴 原员 冤
检出限
阅藻贼藻糟贼葬遭造藻 造蚤皂蚤贼葬贼蚤燥灶
渊滋早窑皂蕴 原员 冤
郧粤猿 再 越 苑郾 缘缘源圆载 原 员圆郾 愿圆缘 园郾 怨怨怨愿 园郾 园员 耀 员园园 园郾 园园愿
在栽 再 越 园郾 员圆源远载 垣 园郾 圆园员远 园郾 怨怨怨苑 园郾 园员 耀 员园园 园郾 园园缘
陨粤粤 再 越园郾 缘远怨源载 垣 愿郾 缘猿猿愿 园郾 怨怨怨远 园郾 园园缘 耀 缘园 园郾 园园员
粤月粤 再 越园郾 园怨远圆载 垣 猿郾 圆园圆圆 园郾 怨怨怨怨 园郾 园员 耀 员园园 园郾 园园员
摇 摇 注院再院峰面积袁载院浓度渊滋早窑皂蕴 原员 冤袁灶 越 缘
摇 摇 晕燥贼藻院 再院责藻葬噪 葬则藻葬袁载院糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
圆郾 猿摇 方法的回收率
按 员郾 猿 方法进行加标回收实验袁在研磨时加入
陨粤粤尧在栽尧郧粤猿尧粤月粤 混合标样袁另 员 份不加激素标样袁
按提取步骤进行平行操作遥 并在相同的色谱条件下分
别进样袁圆 种试样的色谱图均出现与标样相同保留时
间的激素吸收峰遥 用添加标样的激素峰面积分别减去
未加标样的样品的相应峰面积袁所得的差值与相应激
素标样的峰面积之比渊百分比冤为回收率袁重复 缘 次遥
其结果如表 圆 所示袁此测定方法保留时间较稳定袁回收
率也基本符合微量分析要求袁而且数据的变异度较小袁
说明所选择的激素提取尧分离尧纯化的方法和色谱条件
是可行的遥
表 圆摇 源 种内源激素的回收率
栽葬遭造藻 圆摇 砸藻糟燥增藻则蚤藻泽 燥枣 源 责造葬灶贼 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻泽
植物激素
耘灶凿燥早藻灶燥怎泽
澡燥则皂燥灶藻
平均回收率
砸藻糟燥增藻则赠 则葬贼藻
渊豫 袁 灶 越 缘冤
变异系数
悦燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 燥枣
增葬则蚤葬贼蚤燥灶渊豫 袁 灶 越 缘冤
郧粤猿 愿源郾 缘圆 员郾 远猿
在栽 愿远郾 怨愿 圆郾 缘愿
陨粤粤 愿怨郾 源猿 员郾 愿猿
粤月粤 愿猿郾 圆苑 圆郾 员怨
圆郾 源摇 精密度试验
精密吸取样品溶液 员园郾 园滋蕴袁分别连续进样 缘 次袁
测得样品中各内源激素色谱峰峰面积平均值分别为
郧粤猿院 员员员猿郾 苑缘远袁 砸杂阅 园郾 愿圆豫 曰 在栽院 缘愿远郾 员员远袁 砸杂阅员郾 圆源豫 曰陨粤粤院员源远愿郾 圆园猿袁砸杂阅园郾 愿苑豫 曰粤月粤院远缘郾 猿愿圆袁砸杂阅
员郾 苑猿豫 遥 可见该测试方法精密度较好袁适于内源激素
的分析测定遥
圆郾 缘摇 稳定性试验
精密吸取样品溶液 员园郾 园滋蕴袁分别在制备后 园袁源袁
愿袁员圆袁圆源澡 进样袁测定各内源激素色谱峰峰面积袁计算
峰面积相对标准偏差 砸杂阅 分别为 郧粤猿院员郾 猿豫 袁在栽院员郾 远豫 袁陨粤粤院员郾 源豫 袁粤月粤院员郾 愿豫 遥 表明样品溶液在 圆源 澡
内稳定性良好袁提取分离方法可行遥
圆郾 远摇 重复性试验
分别取同一样品材料袁按样品测定项下方法袁连续
测定 缘 次袁各激素峰面积相对标准偏差 砸杂阅 分别为
郧粤猿院员郾 圆豫 袁在栽院员郾 源豫 袁陨粤粤院员郾 猿豫 袁粤月粤院员郾 员豫 遥 表明
该测定方法重复性较好袁适用于内源激素的分离分析遥
圆郾 苑摇 实际样品测定
采用已建立的前处理方法和同步测定方法袁对川
白芷不同部位渊花尧茎尧根和叶片冤的 源 种内源激素同
时进行联合测定遥 结果显示本方法稳定性较好袁可以
满足各种材料的测定需要遥 图 圆 为川白芷叶片 源 种内
源激素的色谱图遥
叶片 源 种内源激素测定结果表明袁在相应的保留
时间袁源 种内源激素均出现清晰的波峰袁所有波峰均未
出现不良峰型和拖尾现象袁说明本法的除杂效果较好袁
样品中种内源激素得到了良好的分离遥 对其他器官内
源激素的测定结果表明袁与叶片相比袁花尧茎和根中的
杂质峰较少袁总体的基线分离情况较好遥 但 源 种内源
激素的峰高渊皂粤哉冤较低袁峰面积较小袁表明其含量要
较叶片低遥 这些结果表明袁试验中所用的分离纯化方
法和色谱条件均可满足分析测定川白芷不同器官内内
源激素要求遥
缘缘远
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
图 圆摇 川白芷叶片样品的色谱图
云蚤早 圆摇 悦澡则燥皂葬贼燥早则葬皂 燥枣 贼澡藻 造藻葬枣 泽葬皂责造藻 燥枣 粤灶早藻造蚤糟葬藻 凿葬澡怎则蚤糟葬藻
猿摇 讨论
植物体内含有激素种类繁多袁但具有生理活性的
内源激素含量甚微遥 采用溶剂分配尧柱层析分离等方
法提取时大多需要经过多次离心和多次萃取袁这势必
使提取时间过长袁损失大部分内源激素袁导致提取率不
高遥 本试验采用预冷的 愿园豫 渊增 辕 增冤甲醇浸提袁简化了
前处理的操作程序袁缩短了提取分离时间袁提取效果较
好遥 植物内源激素的提取测定易受植物体内种类繁多
且量大的酚类及亲脂色素等物质的干扰袁影响测定结
果的准确性遥 本试验通过添加不溶性交联聚乙烯吡咯
烷酮渊孕灾孕孕冤袁除去样品中大量的色素尧糖苷及酚类等
物质袁可以排除酚类尧亲脂色素等的影响咱怨暂 遥 低温冻
融和高速离心相结合既去除了杂质袁又提高了所需产
物的得率遥 通过搅拌和高速离心可以使含有 陨粤粤尧
郧粤猿尧粤月粤 和 在栽 的水溶液与吸附有杂质的 孕灾孕孕成功
分开咱员园暂 遥 一般 孕灾孕孕 用量为初始样品用量的 园郾 圆
倍咱员员暂 袁但应注意 陨粤粤尧粤月粤尧在栽 和 郧粤猿均为酸性激素袁
在提取过程中要注意调节提取液的 孕匀袁以减少 孕灾孕孕
对激素分子的吸收咱员圆暂 遥 另外袁提取过程中采取低温和
遮光以避免内源激素的温光分解遥 内源激素的快速有
效提取和样品中酚类等杂质的去除袁加上色谱条件的
优化成熟袁为内源激素的同步测定提供了可靠的保证遥
在联合测定植物内源激素时袁多采用固定洗脱法袁
但往往易造成出峰时间早袁分离度差袁杂质峰干扰多袁
峰形不良曰所以有的测定就采用梯度洗脱法延缓出峰
时间袁以避开部分杂质峰干扰袁从而达到较好的分离效
果遥 但同时造成了药品的浪费遥 本试验采用固定洗脱
法在较短的时间内取得了较好的分离效果袁节约时间
的同时也节省了成本遥
参考文献院
咱 员 暂摇 阅葬增蚤藻泽 孕 允援 栽澡藻 责造葬灶贼 澡燥则皂燥灶藻泽院 贼澡藻蚤则 灶葬贼怎则藻袁 燥糟糟怎则则藻灶糟藻袁 葬灶凿
枣怎灶糟贼蚤燥灶泽援 辕 辕 阅葬增蚤藻泽 孕 允援 孕造葬灶贼 匀燥则皂燥灶藻泽 葬灶凿 栽澡藻蚤则 砸燥造藻 蚤灶 孕造葬灶贼
郧则燥憎贼澡葬灶凿 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼咱酝暂援 栽澡藻 晕藻贼澡藻则造葬灶凿泽院 酝葬则贼蚤灶怎泽 晕蚤躁澡 燥枣枣
孕怎遭造蚤泽澡藻则泽袁 员怨愿苑 院 员 原 员员
咱 圆 暂摇 董志强袁舒文华袁翟学军袁张保明袁刘 芳袁宋国琦援 棉株不同器官
中几种内源激素的变化及相关关系咱 允暂 援 核农学报袁 圆园园缘袁 员怨
渊员冤 院 远圆 原 远苑
咱 猿 暂摇 曹墨菊袁程 江袁汪 静袁张采波袁潘光堂袁荣廷昭援 太空诱变玉米核
雄性不育与植物激素的关系咱允暂 援 核农学报袁圆园员园袁 圆源渊猿冤 院 源源苑
原 源缘圆
咱 源 暂摇 杨 莉袁张光浓袁王峥涛袁徐珞珊援 匀孕蕴悦 测定不同采收期球花石
斛中酚类成分的含量咱允暂 援 药物分析杂志袁圆园园愿袁 圆愿渊员冤 院 员 原 缘
咱 缘 暂摇 陈雪梅袁王沙生援 匀孕蕴悦 法定量分析植物组织中 粤月粤袁 陨粤粤 和
晕粤粤咱允暂援 植物生理学通讯袁 员怨怨圆袁 圆愿渊缘冤 院 猿远愿 原 猿苑员
咱 远 暂摇 杨途熙袁魏安智袁郑元袁杨恒袁杨向娜袁张睿援 高效液相色谱法同
时分离测定仁用杏花芽中 愿 种植物激素咱 允暂 援 分析化学袁圆园园苑袁
猿缘渊怨冤 院 员猿缘怨 原 员猿远员
咱 苑 暂摇 匀燥怎 杂 允袁 在澡怎 允袁 阅蚤灶早 酝 再袁 蕴增 郧 匀援 杂蚤皂怎造贼葬灶藻燥怎泽 凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣
早蚤遭遭藻则藻造造蚤糟 葬糟蚤凿袁 蚤灶凿燥造藻 原 猿 原 葬糟藻贼蚤糟 葬糟蚤凿 葬灶凿 葬遭泽糟蚤泽蚤糟 葬糟蚤凿 蚤灶 憎澡藻葬贼
藻曾贼则葬糟贼泽 遭赠 泽燥造蚤凿 责澡葬泽藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 葬灶凿 造蚤择怎蚤凿 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠鄄
藻造藻糟贼则燥泽责则葬赠 贼葬灶凿藻皂 皂葬泽泽 泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠咱允暂 援 栽葬造葬灶贼葬袁 圆园园愿袁 苑远渊源冤院
苑怨愿 原 愿园圆
咱 愿 暂摇 陈远平袁杨文钰援 卵叶韭休眠芽中 郧粤猿尧陨粤粤尧粤月粤 和 在栽 的高效
液相色谱法测定咱允暂 援 四川农业大学学报袁 圆园园缘袁圆猿渊源冤 院 源怨愿 原
缘园园
咱 怨 暂摇 刘 冬援 孕灾孕孕吸附余甘果汁中多酚物质的研究咱 允暂 援 果树学报袁
圆园园苑袁 圆源渊圆冤 院 员苑远 原 员苑怨
咱员园暂摇 曾庆钱袁陈厚彬袁鲁才浩袁李建国援 匀孕蕴悦测定荔枝不同器官中内
源激素流程的优化咱允暂 援 果树学报袁 圆园园远袁 圆猿渊员冤 院 员源缘 原 员源愿
咱员员暂摇 陈昆松袁徐昌杰袁李 方袁陈青俊袁张上隆援 匀孕蕴悦 法检测果实组织
中内源 陨粤粤尧粤月粤 方法的改进咱 允暂 援 果树学报袁 圆园园猿袁圆园渊员冤 院 源
原 苑
咱员圆暂摇 黄华宏袁童再康袁廖望仪袁毕春晖袁楼雄珍援 香榧雌花芽部分内源
激素的 匀孕蕴悦分析及动态变化咱允暂 援 浙江林学院学报袁 圆园园缘袁 圆圆
渊源冤 院 猿怨园 原 猿怨缘
远缘远
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员猿袁圆苑渊缘冤院园远缘猿 耀 园远缘苑
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶袁 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 杂赠灶糟澡则燥灶燥怎泽 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣
耘灶凿燥早藻灶燥怎泽 匀燥则皂燥灶藻泽 蚤灶 粤灶早藻造蚤糟葬 阅葬澡怎则蚤糟葬 憎蚤贼澡 匀孕蕴悦
匀韵哉 运葬蚤摇 宰哉 宰藻蚤摇 悦匀耘晕 允怎灶鄄憎藻灶摇 在匀粤陨 允怎葬灶鄄赠怎葬灶摇 杂匀耘晕 匀葬燥摇 悦匀耘晕 蕴蚤
渊粤早则燥灶燥皂赠 悦燥造造藻早藻袁 杂蚤糟澡怎葬灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 悦澡藻灶早凿怎袁 杂蚤糟澡怎葬灶摇 远员员员猿园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 泽蚤皂责造藻 葬灶凿 则葬责蚤凿 皂藻贼澡燥凿 怎泽蚤灶早 匀蚤早澡 孕则藻泽泽怎则藻 蕴蚤择怎蚤凿 悦澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 渊 匀孕蕴悦冤 枣燥则 贼澡藻 泽蚤皂怎造贼葬灶藻燥怎泽
凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 枣燥怎则 则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻泽 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 郧蚤遭遭藻则藻造造蚤糟 葬糟蚤凿 渊郧粤猿冤袁 在藻葬贼蚤灶 渊在栽冤袁 陨灶凿燥造藻葬糟藻贼蚤糟葬糟蚤凿 渊陨粤粤冤 葬灶凿 粤遭泽糟蚤泽蚤糟 葬糟蚤凿 渊粤月粤冤 蚤灶 粤灶早藻造蚤糟葬 凿葬澡怎则蚤糟葬援 憎葬泽 凿藻泽糟则蚤遭藻凿援 耘灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻泽 憎藻则藻 藻曾贼则葬糟贼藻凿 怎泽蚤灶早
藻贼澡葬灶燥造 泽燥造怎贼蚤燥灶 渊愿园豫 袁 灾 辕 灾冤 怎灶凿藻则 造燥憎鄄贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶援 栽澡藻灶 贼澡藻 藻曾贼则葬糟贼蚤灶早 泽葬皂责造藻 憎葬泽 泽藻责葬则葬贼藻凿 遭赠 匀孕蕴悦
憎蚤贼澡 葬 悦员愿 韵阅杂 糟燥造怎皂灶 渊员缘园 皂皂 伊 源郾 远皂皂袁 缘滋皂冤 怎泽蚤灶早 皂藻贼澡葬灶燥造 原 园郾 远豫 葬糟藻贼蚤糟 葬糟蚤凿 渊缘园院缘园袁 增 辕 增冤 葬泽 皂燥遭蚤造藻
责澡葬泽藻援 栽澡藻 泽蚤早灶葬造 憎葬泽 凿藻贼藻糟贼藻凿 遭赠 孕澡燥贼燥凿蚤燥凿藻 粤则则葬赠 渊孕阅粤冤袁 葬灶凿 贼澡藻 藻曾贼藻则灶葬造 泽贼葬灶凿葬则凿 皂藻贼澡燥凿 渊耘杂栽阅冤 憎葬泽 藻皂责造燥赠藻凿
枣燥则 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 葬灶葬造赠泽蚤泽援 栽澡藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 则藻泽怎造贼泽 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿 贼澡蚤泽 皂藻贼澡燥凿 憎葬泽 葬灶 葬糟糟怎则葬贼藻 葬灶凿 澡蚤早澡鄄泽藻责葬则葬贼蚤燥灶鄄
藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 贼藻糟澡灶蚤择怎藻 贼燥 葬灶葬造赠扎藻 贼则葬糟藻 葬皂燥怎灶贼泽 燥枣 贼澡藻 枣燥怎则 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻泽 蚤灶 增葬则蚤燥怎泽 燥则早葬灶泽 燥枣 粤灶早藻造蚤糟葬 凿葬澡怎则蚤糟葬援
运藻赠 憎燥则凿泽院粤灶早藻造蚤糟葬 凿葬澡怎则蚤糟葬曰 匀孕蕴悦曰 耘灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡燥则皂燥灶藻
苑缘远