全 文 ：　 核 农 学 报　 ２０１４，２８（６）：０９６１ ～ ０９６６
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
收稿日期：２０１３⁃１１⁃２８　 接受日期：２０１４⁃０３⁃３１
基金项目：四川省科技基础条件平台 －四川省植物资源共享平台建设项目（２０６０５０３），中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金
作者简介：余道平，女，助理研究员，主要从事植物繁育研究。 Ｅ⁃ｍａｉｌ：５５０２６５８５６＠ ｑｑ． ｃｏｍ
通讯作者：同第一作者。
文章编号：１０００⁃８５５１（２０１４）０６⁃０９６１⁃０６
迎阳报春四倍体诱导及鉴定
余道平１，２，３ 　 李策宏３
（ １ 四川省自然资源科学研究院， 四川 成都　 ６１００４１；２ 四川省生物资源保护与可持续利用重点实验室，
四川 成都　 ６１００４１；３ 峨眉山生物资源实验站，四川 峨眉山　 ６１４２０１）
摘　 要：在离体培养条件下，研究了秋水仙素溶液处理对迎阳报春愈伤组织分化和多倍体诱导的效应。
结果表明，秋水仙素处理明显抑制愈伤组织的分化，使死亡率增加；在试验浓度和时间范围内，以 ３０ｍｇ·
Ｌ － １秋水仙素溶液处理愈伤组织 １０ｄ，四倍体诱导率最高，为 ２３􀆰 ０８％ ；四倍体植株与二倍体植株相比，其
气孔变大，且叶片变厚、变大，叶色浓绿、株型紧凑；二倍体植株染色体 ２ｎ ＝ ２ｘ ＝ ２４，四倍体植株染色体
２ｎ ＝ ４ｘ ＝ ４８。
关键词：迎阳报春；愈伤组织；秋水仙素；四倍体
ＤＯＩ：１０􀆰 １１８６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００⁃８５５１􀆰 ２０１４􀆰 ０６． ０９６１
　 　 报春花属是报春花科种类最多的属，被誉为三大
高山花卉之一。 全世界拥有报春花属植物 ５００ 多种，
主要分布于北半球温带和高山地区，我国有 ２９４ 种，２１
个亚种，１８ 个变种［１］，主产于川滇藏，陕西、贵州次
之［２］。 迎阳报春（Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘａ Ｆｒａｎｃｈ）是报春花
属，鄂报春组的多年生常绿草本植物，分布于四川西北
部（马边、峨眉、天全、宝兴、都江堰） 等地，为四川特有
种。 生长在海拔 １２００ ～ ２５００ ｍ的林下及溪边，自然条
件下 ４ ～ ５ 月份开花，伞形花序有 ３ － １０ 朵小花，花朵
从上而下陆续开放，紫红色［３］，十分艳丽，具有较高的
观赏价值，可作盆栽、地被、花坛用花。 但由于其花冠
直径小于 ２ｃｍ，且为单瓣花，影响了其观赏价值和推广
应用。 因此培育大花、重瓣品种的报春花是报春花属
植物育种的一个重要目标。
报春花属植物的染色体基数变化较大，如有 ｘ ＝
８、ｘ ＝ ９、ｘ ＝ １０、ｘ ＝ １１、ｘ ＝ １２，存在一系列不同倍性的
物种，有二倍体、三倍体、四倍体，六倍体植株，但以二
倍体居多，二倍体与多倍体之比为 ５：１［４ － １０］。 因此培
育报春花多倍体资源，对推动报春花的倍性育种工作
具有重要作用。 多倍体育种是应用较广泛的花卉育种
方法，而在离体条件下利用秋水仙素溶液诱导多倍体
是一种快速而有效的诱导方法，运用该方法已经在红
掌（Ａｎｔｈｕｒｉｕｍ ａｎｄｒａｅａｎｕｍ） ［１１］、大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ
ｈｙｂｒｉｄｉｕｍ） ［１２］、沉香虎头兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｉｒｉｄｉｏｉｄｅｓ） ［１３］、
石 斛 （ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄ ） ［１４］、 三 色 堇 （ Ｖｉｏｌａ
ｔｒｉｃｏｌｏｒ） ［１５］、Ｒｏｓａｒｕｇｏｓａ［１６］等花卉种类取得了成功。 在
报春花属植物的多倍体诱导上，仅有少数种类有报道。
张晓曼等［１７］对小报春（Ｐｒｉｍｕｌａ ｆｏｒｂｅｓｉｉ）进行了秋水仙
素处理，获得了四倍体植株。 张超等［１８］以滇北球花报
春（Ｐｒｉｍｕｌａ ｄｅｎｔｉｃｕｌａｔａ ｓｓｐ． Ｓｉｎｏｄｅｎｔｉｃｕｌａｔａ）的从生芽
为处理材料，通过秋水仙素溶液的处理，也获得了多倍
体植株。 但有关离体条件下进行迎阳报春多倍体选育
的工作尚未见报道。 本研究在建立迎阳报春无菌快繁
体系的基础上，以其愈伤组织为材料，研究秋水仙素处
理对愈伤组织生长、分化和多倍体诱导效率的影响，旨
在建立高效的多倍体诱导和鉴定技术体系，以期获得
观赏性状优良的多倍体资源，为进一步开展迎阳报春
多倍体优良种质的选育提供丰富的育种材料。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 试验材料
以迎阳报春组织培养得到的愈伤组织作为多倍体
诱导的试验材料。
１６９
核　 农　 学　 报 ２８ 卷
１􀆰 ２　 试验方法
１􀆰 ２􀆰 １　 多倍体诱导与培养　 选择生长健壮紧密的愈
伤组织切成小块，转入含有秋水仙素浓度分别为 １０、
３０、５０ｍｇ·Ｌ － １的 ＭＳ ＋６ － ＢＡ ２􀆰 ０ｍｇ·Ｌ － １ ＋ ＮＡＡ０􀆰 ２ｍｇ·
Ｌ － １的分化培养基中，处理时间分别为 ５、１０、１５ｄ，共 ９
个组合。 每处理 ３０ 个愈伤组织块，以未加秋水仙素为
对照（ＣＫ），处理完后，转入不含秋水仙素的相同分化
培养基中继续培养，待愈伤组织分化出芽后转接到 ３ ／
２ＭＳ进行壮苗培养 ４ 周后，再接到 １ ／ ２ＭＳ 培养基上进
行生根培养 ４ 周。 在光照强度 ３０μｍｏｌ·ｍ － ２·ｓ － １，光
周期 １４ ｈ·ｄ － １，温度（２２ ± ２）℃的条件下培养。 培养
过程中观察愈伤组织的分化情况，并统计死亡愈伤组
织块数、分化出的芽苗数。
表 １　 秋水仙素处理愈伤组织的诱变效果
Ｔａｂｌｅ １　 Ｍｕｔａｇｅｎｉｃ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｃａｌｌｕｓ ｏｆ Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘａ
秋水仙素
Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ ／
（ｍｇ·Ｌ － １）
时间
Ｔｉｍｅ ／ ｄ
处理数
Ｎｏ． ｏｆ
Ｓａｍｐｌｅｓ
芽分化率
Ｒａｔｅ ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｉｅｎｔｉａｔｉｏｎ ／ ％
成苗数
Ｎｏ． ｏｆ
ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ／株
愈伤组织
死亡率
Ｄｅａｔｈ ｒａｔｅ ／ ％
变异株数
Ｎｏ． ｏｆ
ｍｕｔａｔｉｏｎ
变异率
Ｍｕｔａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ ／ ％
０（ＣＫ） １５ ３０ １００ １０４ ０ ０ ０　 　
１０ ５ ３０ ８０． ０ ７２ ６． ６７ ２ ２． ７８
１０ ３０ ７０． ０ ６２ １０． ００ ２ ３． ２３
１５ ３０ ６６． ７ ６３ １３． ３４ ３ ４． ７７
３０ ５ ３０ ７３． ３ ５５ １３． ３４ ７ １２． ７３
１０ ３０ ６６． ７ ５２ １６． ６７ １２ ２３． ０８
１５ ３０ ５３． ３ ４８ ２３． ３４ ８ １６． ６７
５０ ５ ３０ ５３． ３ ３５ ２３． ３４ ６ １７． １５
１０ ３０ ４６． ７ ３０ ２６． ６７ ４ １３． ３３
１５ ３０ ４０． ０ ２８ ３３． ３４ ３ １０． ７１
　 　 注：变异率 ＝变异株数 ／成苗数 × １００％ 。
Ｎｏｔｅ：Ｍｕｔａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ＝ Ｎｏ． ｏｆ ｍｕｔａｔｉｏｎ ／ Ｎｏ． ｏｆ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ × １００％ ．
１􀆰 ２􀆰 ２　 变异植株的稳定与扩繁
切取形态明显变异植株的叶片， 在 ＭＳ ＋ ６ －
ＢＡ３􀆰 ０ｍｇ·Ｌ － １ ＋ ＮＡＡ０􀆰 ５ｍｇ·Ｌ － １培养基进行培养，重
新诱导长出不定芽。 长出的不定芽在 ＭＳ 培养基上进
行生根培养，再从中选择变异明显的植株进行鉴定，
获得纯合的多倍体植株。
１􀆰 ２􀆰 ３　 多倍体的鉴定　 形态学鉴定：从叶色、叶片外
形、植株大小和根系状况等相关的外部特征初步筛选
变异植株。
气孔鉴定：参考张超等［１８］ 的气孔鉴定法，在
Ｏｌｙｍｐｕｓ（ＣＸ３１ＲＴＳＦ Ｔｏｋｙｏ Ｊａｐａｎ）下镜检拍照，观察气
孔大小和密度。
染色体鉴定： 以幼嫩根尖为材料， 用 ０􀆰 ００２
ｍｏｌ·Ｌ － １８ －羟基哇琳（纯度≥９９％ ）预处理 ５ ～ ６ｈ，４℃
冰箱（ＨａｉｅｒＢＣＤ －２５２ＫＳＦ）中卡诺固定液固定 ２４ｈ，在
ｌｍｏｌ·Ｌ － １盐酸中（水浴 ６０℃）溶液解离 ７ ～ ８ｍｉｎ，取出
用水漂洗，切取根尖置于载玻片上，滴 ４ 滴改良品红染
液，过一下酒精灯（充分着色）放置约 １０ｍｉｎ，压盖玻
片，敲片，于 １００ 倍油镜 （ ＯｌｙｍｐｕｓＣＸ３１ＲＴＳＦ Ｔｏｋｙｏ
Ｊａｐａｎ）下观察拍照并统计染色体数目。
２　 结果与分析
２􀆰 １　 秋水仙素处理对愈伤组织生长、变异率的影响
愈伤组织经秋水仙素处理后其芽分化率显著低于
对照（表 １），表明秋水仙素处理对愈伤组织的分化有
显著的抑制作用。 在同一处理浓度下，愈伤组织芽分
化率随着处理时间的延长呈降低趋势。 而在同一处理
时间下，高浓度（５０ｍｇ·Ｌ － １）秋水仙素处理下愈伤组织
的芽分化率低于低浓度秋水仙素的处理。 表明在试验
浓度和处理时间范围内，秋水仙素浓度越高，处理时间
越长，对愈伤组织分化的抑制作用越明显。
　 　 试验中还发现，随着秋水仙素浓度的升高，处理时
间的延长，褐化死亡的愈伤组织逐渐增多，表明秋水仙
素对愈伤组织有明显的毒害作用。
从表 １ 可见，在处理时间相同的条件下，随着浓度
的升高（１０ ～ ３０ｍｇ·Ｌ － １），变异率有所提高，但到一定
浓度后（５０ｍｇ·Ｌ － １）又会有所下降。 除了秋水仙素的
浓度之外，处理时间的长短也直接影响着多倍体的诱
变率。 处理时间长，诱变率有所提高，但同时对于植物
的毒害作用也较大。 本试验所设的三个处理时间里，
２６９
　 ６ 期 迎阳报春四倍体诱导及鉴定
以处理 １０ｄ效果最好。 因此，在本试验的 ９ 个处理组
合中，以 ３０ ｍｇ·Ｌ － １秋水仙素处理愈伤组织 １０ 天，诱
导效果最好，变异率最高（２３􀆰 ０８％ ），为最佳处理组
合。
２􀆰 ２　 倍性鉴定结果
２􀆰 ２􀆰 １　 外部形态比较和气孔鉴定　 二倍体与四倍体
植株的形态特征比较从表 ２ 和图 １ － Ａ、图 １ － Ｂ 可以
看出，四倍体迎阳报春与对照二倍体植株相比，株型
矮，叶片明显变宽、变厚、颜色深绿，叶片背面的绒毛变
多变长，叶柄变短变粗。 从表 ３ 和图 １ － Ｃ、图 １ － Ｄ可
以看出， 四倍体植株气孔的长度和宽度均明显大于二
倍体，而同等面积的气孔数显著小于二倍体植株。
２􀆰 ２􀆰 ２　 染色体鉴定　 未经秋水仙素处理的迎阳报春
体细胞染色体数 ２ｎ ＝ ２ｘ ＝ ２４（图 ２ － Ａ），经加倍后的
体细胞染色体数目为 ２ｎ ＝ ４ｘ ＝ ４８，是原二倍体的二
倍，为同源四倍体（图 ２ － Ｂ）。
表 ２　 迎阳报春二倍体植株与四倍体植株外部形态比较
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｄｉｐｌｏｉｄ ａｎｄ ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ ｏｆ Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘａ
倍性
Ｐｌｏｉｄｙ ｌｅｖｅｌ
株高
Ｈｉｇｈｔ ／ ｃｍ
植株冠径
Ｐｌａｎｔ ｃｒｏｗｎ ｄｉａｍｅｔｅｒ ／
ｃｍ
叶柄长
Ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｐｅｔｉｏｌｅ ／ ｃｍ
叶片宽
Ｗｉｄｔｈ ｏｆ ｌｅａｆ ／ ｃｍ
叶片颜色
Ｃｏｌｏｕｒ ｏｆ ｌｅａｆ
二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ １５􀆰 ３３ １２􀆰 ５４ ７􀆰 ６２ １􀆰 ６５ 绿色 Ａｕｔｏｔｅｒａｐｌｏｉｄ
四倍体 １０􀆰 ５６ １０􀆰 ６８ ５􀆰 ８８ ２􀆰 ２０ 深绿
表 ３　 迎阳报春二倍体与同源四倍体的气孔特征
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｓｔｏｍａｔａ ｓｉｚｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｉｐｌｏｉｄ ａｎｄ ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ ｏｆ Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘａ
倍性
Ｐｌｏｉｄｙ ｌｅｖｅｌ
气孔大小 Ｓｔｏｍａｔａ ｓｉｚｅ
长 Ｌｅｎｇｔｈ ／
μｍ
短 Ｗｉｄｔｈ ／
μｍ
气孔面积
Ｓｔｏｍａｔａ ａｒｅａ ／ μｍ２
气孔长直径 ／短直径
Ｌｅｎｇｔｈ ／ Ｗｉｄｔｈ
同等面积气孔数
Ｔｈｅ ｓｔｏｍａ
ｎｕｍｂｅｒ ／ １０５μｍ２
二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ １４􀆰 ２１ ± ２􀆰 ０６ｂ ８􀆰 ２０ ± ０􀆰 ８９ｂ １０４􀆰 ４５ｂ １􀆰 ７３ １６􀆰 ５６ ± １􀆰 ７４ａ
四倍体 Ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ ３０􀆰 ０８ ± ０􀆰 ３５ａ １６􀆰 ３１ ± ０􀆰 ３８ａ ３５４􀆰 ８３ａ １􀆰 ８４ ８􀆰 ７５ ± ０􀆰 ６９ｂ
　 　 注：小写字母表示在 ０􀆰 ０５ 水平上差异显著。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ ｄａｔａ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ０ ０５ ｌｅｖｅｌ．
注：Ａ：二倍体组培苗； Ｂ：四倍体组培苗； Ｃ． 二倍体叶片气孔（１０ｘ４０）； Ｄ．四倍体叶片气孔（１０ × ４０）。
Ｎｏｔｅ：Ａ： Ｔｈｅ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｏｆ ｄｉｐｌｏｉｄ ｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； Ｂ： Ｔｈｅ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｏｆ ａｕｔｏｔｅｔｒａｌｐｌｏｉｄ ｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ；
Ｃ： Ｔｈｅ ｓｔｏｍａ ｓｉｚｅ ｏｆ ｄｉｐｌｏｄ ｐｌａｎｔ； Ｄ： Ｔｈｅ ｓｔｏｍａ ｓｉｚｅ ｏｆ ａｕｔｏｔｅｔｒａｌｐｌｏｉｄ．
图 １　 迎阳报春二倍体植株与四倍体植株表型与气孔大小
Ｆｉｇ． １　 Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｓｉｚｅ ｏｆ ｓｔｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｐｌｏｉｄ ａｎｄ ｔｈｅ ａｕｔｏｔｅｔｒａｌｐｌｏｉｄ ｏｆ Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘ
３６９
核　 农　 学　 报 ２８ 卷
注：Ａ： 二倍体根尖染色体， ２ｎ ＝ ２ｘ ＝ ２４（２０ｘ１００）； Ｂ： 四倍体根尖染色体， ２ｎ ＝ ４ｘ ＝ ４８（２０ × １００）。
Ｎｏｔｅ：Ａ： Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｒｏｏｔ ｔｉｐ ｏｆ ｄｉｐｌｏｉｄ ｐｌａｎｔ， ２ｎ ＝ ２ｘ ＝ ２４；
Ｂ： Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｒｏｏｔ ｔｉｐ ｏｆ ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ ｐｌａｎｔ， ２ｎ ＝ ４ｘ ＝ ４８．
图 ２　 迎阳报春二倍体植株与四倍体植株的染色体
Ｆｉｇ． ２　 Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｐｌｏｉｄ ａｎｄ ｔｈｅ ａｕｔｏｔｅｔｒａｌｐｌｏｉｄ ｏｆ Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘ
３　 讨论
秋水仙素作为常用的诱变剂，其浓度和处理时间
直接影响多倍体的诱导效果。 本试验中，秋水仙素浓
度在 １０ ～ ５０ｍｇ·Ｌ － １均能诱导产生变异，其中以 ３０ｍｇ·
Ｌ － １秋水仙素处理愈伤组织 １０ｄ，诱导效果最好，变异
率最高（２３􀆰 ０８％ ）。 随着秋水仙素浓度的增加和处理
时间的延长，愈伤组织死亡率也随之增加，且愈伤组织
的分化率和成苗数也随之减低，这与张晓蔓［１７］用秋水
仙素处理小报春叶片（将秋水仙素加到分化培养基里
进行处理）的研究结果一致。 在本试验还发现，在低
浓度（１０ｍｇ·Ｌ － １）长时间（１５ｄ）处理下和高浓度（５０ｍｇ
·Ｌ － １）短时间（５ｄ）处理下诱导变异率较高。 这与张超
等［１８］用秋水仙素处理滇北球花报春的研究结论相同。
另外，秋水仙素对材料的处理方式主要有浸泡法和共
培养法，本试验采用的是共培养法（将秋水仙素加到
培养基里），秋水仙素可以慢慢渗透到植株中，对材料
伤害较小。 在本试验的实施过程中也尝试采用了浸泡
法对愈伤组织进行处理，用同浓度的秋水仙素对愈伤
组织进行浸泡 ２４ｈ 后，处理了 ３０ 个愈伤组织块，经两
周培养后，发现愈伤组织颜色变褐甚至培养基也变成
褐色，造成了较大的毒害，仅存活了 ５ 个愈伤组织块，
造成愈伤组织死亡率很高，这可能是由于浸泡法，试材
与药剂直接接触，产生的毒害较大，加上多次的转接，
提高了污染率。 这与邓平平［１９］用秋水仙素处理桔红
灯台报春愈伤组织的研究结论一致。
多倍体植株与二倍体相比，具有株型紧凑、叶片加
厚、叶色加深、适应性增强等特点。 本研究也发现四倍
体迎阳报春较二倍体株型紧凑、叶片明显变宽、变厚、
颜色深绿，叶片背面的绒毛变多边长。 这与张俊芳
等［２０］在青岛百合（Ｌｉｌｉｕｍ ｔｓｉｎｇｔａｕｅｎｓｅ）、尹翠翠等［２１］在
杂交兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｙｂｒｉｄｓ）的多倍体诱导
研究中，发现多倍体植株具有叶片异常肥厚、叶色浓
绿、茎 粗 壮 等 特 点 的 结 论 相 似。 在 诱 导 杜 鹃
（ ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｈｙｂｒｉｄｓ）多倍体也发现，多倍体较二倍
体的叶片增厚，叶色加深等特点［２２］。 因此，在试验中
可以利用表型变异对诱导处理后的材料进行初步筛
选，然后再对其进行进一步的鉴定。
不同倍性植株叶片的气孔大小、气孔数目等常是
不同的，可以作为植物倍性鉴定的依据［２３］，而且简单
易行，对植株损伤小。 本试验发现四倍体植株气孔的
长度和宽度均明显大于二倍体，而同等面积的气孔数
显著小于二倍体植株，这与张超等［１８］、金晓霞［２４］、张
晓曼等［２５］的研究结果类似。 根尖染色体计数法是多
倍体鉴定最为可靠的方法，因此我们对变异植株进行
了根尖染色体计数的分析，筛选得到了稳定的四倍体
迎阳报春组培苗。 经细胞学鉴定迎阳报春的体细胞染
色体数目为 ２ｎ ＝ ２ｘ ＝ ２４，经加倍后的体细胞染色体数
目为 ２ｎ ＝ ４ｘ ＝ ４８， 是原二倍体的二倍。 在检测中还发
现了少量的八倍体细胞，可能是某些分生组织的染色
体加倍后再加倍形成的。 现已有部分四倍体植株进行
了移栽， 需对其性状进行观察， 通过对比测试，期望
筛选出花大而花型奇特、抗性强的优良品系，为下一步
４６９
　 ６ 期 迎阳报春四倍体诱导及鉴定
的报春花杂交选育提供优质的育种材料。
４　 结论
只有在一定范围内诱导效果与秋水仙素浓度及其
处理时间长短呈正相关，而超过一定范围会对植物材
料造成毒害作用，使植物不能正常生长或死亡。 以
３０ｍｇ·Ｌ － １秋水仙素处理愈伤组织 １０ｄ，诱导效果最好，
变异率最高（２３􀆰 ０８％ ），为最佳处理组合。 四倍体迎
阳报春较二倍体株型紧凑、叶片明显变宽、变厚、颜色
深绿，且气孔的长度和宽度均明显大于二倍体。 经细
胞学鉴定迎阳报春的体细胞染色体数目为 ２ｎ ＝ ２ｘ ＝
２４，经加倍后的体细胞染色体数目为 ２ｎ ＝ ４ｘ ＝ ４８， 是
原二倍体的二倍。
参考文献：
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ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｎｏｄｅ ｌｅｎｇｔｈ，ｏｒｙｚａｌｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｉｍｅ
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５６９
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
２０１４，２８（６）：０９６１ ～ ０９６６
Ｔｈｅ Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘａ Ｆｒａｎｃｈ
ＹＵ Ｄａｏ⁃Ｐｉｎｇ１，２，３ 　 ＬＩ Ｃｅ⁃Ｈｏｎｇ３
（ １ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｃｈｅｎｇｄｕ，Ｓｉｃｈｕａｎ　 ６１００１５；２ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｉｎｃｉａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ
Ｂｉｏｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ， Ｃｈｅｎｇｄｕ，Ｓｉｃｈｕａｎ　 ６１００１５；３ Ｅ ｍｅｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎ
Ｂｉｏｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｅ ｍｅｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ　 ６１４２０１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｏｆ Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘａ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ，ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｄｅａｔｈ ｒａｔｅ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ；Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ，２３􀆰 ０８％ ，ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ
ｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｌｌｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ ａｔ ３０ｍｇ·Ｌ － １ ｆｏｒ １０ ｄａｙｓ． Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｄｉｐｌｏｉｄ ｐｌａｎｔｓ， ｔｈｅ ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ
ｐｌａｎｔｓ ｈａｄ ｌａｒｇｅｒ，ｔｈｉｃｋｅｒ ａｎｄ ｄｅｅｐｅｒ ｇｒｅｅｎ ｌｅａｖｅｓ， ａｎｄ ｗｅｒｅ ｌａｒｇｅｒ ｉｎ ｓｔｏｍａｔａｌ ｓｉｚｅ ａｎｄ ｃｏｍｐａｃｔｅｄ ｉｎ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ． Ｔｈｅ
ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｄｉｐｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ２ｎ ＝ ２ｘ ＝ ２４． Ｔｈｅ ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ２ｎ ＝ ４ｘ ＝ ４８．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐｒｉｍｕｌａ ｏｒｅｏｄｏｘａ；Ｃａｌｌｕｓ；Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ；Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ
６６９