全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊缘冤院园苑苑苑 耀 园苑愿猿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄园远鄄圆员摇 接受日期院圆园员猿鄄园苑鄄园猿
基金项目院野十二五冶愿远猿 计划课题野杨树分子育种与品种创制冶渊圆园员员粤粤员园园圆园员冤遥
作者简介院张进袁男袁主要从事树木性状的分子基础研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 扎澡葬灶早鄄园园苑躁蚤灶岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院卢孟柱袁男袁研究员袁主要从事分子生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 蕴怎皂扎岳 糟葬枣援 葬糟援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤园缘鄄园苑苑苑鄄园苑
杨树中 陨类 悦造责基因家族的表达分析
张摇 进摇 刘伯斌摇 李建波摇 陈摇 军摇 卢孟柱
渊中国林业科学研究院林业研究所 辕林木遗传育种国家重点实验室袁北京摇 员园园园怨员冤
摘摇 要院悦造责 蛋白属于 粤粤粤 垣类 粤栽孕 酶超级家族袁广泛参与各种生物学过程遥 本研究在基因组水平上对
杨树 陨类 悦造责基因家族的成员袁从系统进化尧基因结构及表达特性方面进行分析遥 杨树中共有 怨 个 陨 类
悦造责基因袁各成员在不同组织尧发育阶段及各种胁迫条件下的表达特性不同袁说明它们参与不同的生物
学过程遥 研究结果为进一步研究杨树 陨类 悦造责基因功能奠定了基础遥
关键词院杨树曰悦造责曰基因家族曰基因表达
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 园缘援 园苑苑苑
摇 摇 生物体在代谢过程中不可避免的会产生各种不可
逆损伤蛋白袁而蛋白水解作用渊责则燥贼藻燥造赠泽蚤泽冤在蛋白代谢
过程的调节及清除这些损伤蛋白过程中起关键作用遥
多数细胞内的蛋白水解作用通过依赖于能量的蛋白酶
来完成的袁目前研究最为清楚的是大肠杆菌 粤栽孕 依赖
的丝 氨 酸 蛋 白 酶袁 即 悦造责 蛋 白 酶 渊 糟葬泽藻蚤灶燥造赠贼蚤糟
责则燥贼藻葬泽藻冤 咱员暂 遥
悦造责 蛋白广泛存在于各种生物体中袁在原核生物
和真核生物中都发现了各种不同类型的 悦造责 蛋白遥 它
的家族成员包括 悦造责粤尧月尧悦尧阅尧酝尧晕尧载 和 再 等袁是一
个庞大的蛋白家族遥 最早发现 悦造责系统是一个可被热
激诱导的尧依赖于 粤栽孕 活性尧可以水解酪蛋白的蛋白
酶复合体咱圆 原 猿暂 遥 随后的研究发现袁悦造责 系统还可以水
解大量聚合态或非聚合态的其它蛋白及多肽咱源暂 遥 悦造责
粤栽孕酶属于 粤粤粤 垣类 粤栽孕 酶超级家族袁在细胞内承担
多种功能咱缘 原 远暂 遥 其中 悦造葬泽泽 陨 类 悦造责 蛋白包含 悦造责粤尧
悦造责月尧悦造责悦 及 悦造责阅袁它们含有两个 粤栽孕 结合域袁而
悦造葬泽泽 陨陨类 悦造责 蛋白包含 悦造责酝尧悦造责晕尧悦造责载 及 悦造责再袁它
们仅含有一个 粤栽孕 结合域咱苑暂 遥 植物中 悦造责 蛋白定位
在各种不同的细胞器中咱愿暂 遥 但 悦造责月 的功能不同与其
它 悦造责 蛋白袁悦造责月 不含蛋白酶结构域袁不能水解蛋白
质袁它仅有 粤栽孕 酶活性及分子伴侣活性袁能够使蛋白
聚合体解聚袁并与其它一些分子伴侣一起修复变性蛋
白咱怨暂 遥 悦造责月能够被高温诱导袁属于热激蛋白 员园园渊澡藻葬贼
泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶 员园园袁匀泽责员园园冤基因家族成员袁因此也被称
为 匀泽责员园园 辕 悦造责月咱员园 原 员员暂 遥
拟南芥中 悦造责月 蛋白可根据其亚细胞定位分为三
类袁分别是胞质类尧叶绿体类及线粒体类咱员员暂 遥 目前大
多数研究是对胞质类 悦造责月 蛋白进行的功能研
究咱员圆 原 员缘暂 遥 研究发现袁在拟南芥及玉米的胞质 匀泽责员园园 辕
悦造责月基因突变体中补偿表达其 匀泽责员园园 辕 悦造责月 基因袁能
够使其耐热性恢复咱员圆 原 员源暂 遥 超表达拟南芥胞质
匀泽责员园园 辕 悦造责月基因后袁拟南芥表现出快速生长的表型袁
而且能够耐 源缘 益的高温胁迫咱员缘暂 遥 运藻藻则造藻则 等咱员远暂在菜
豆中克隆得到叶绿体类 匀泽责员园园 辕 悦造责月 基因袁发现其定
位于叶绿体袁而且其功能与热适应有密切关系遥 反义
抑制番茄的叶绿体类 蕴藻匀泽责员园园 辕 悦造责月 基因使得植株对
高温更为敏感袁这表明叶绿体类 匀泽责员园园 辕 悦造责月 可能是
植物获得性耐热性过程中重要的蛋白咱员苑暂 遥 蕴藻藻 等咱员员暂
通过试验证实了拟南芥 悦造责月鄄皂渊粤贼圆早圆缘员源园冤蛋白定位
在线粒体袁在热激条件下袁线粒体类 匀泽责员园园 辕 悦造责月 基因
的表达上调袁但其诱导表达的水平相对于胞质类及叶
绿体类 匀泽责员园园 辕 悦造责月基因较低遥
植物中 悦造责悦 蛋白与大肠杆菌中的 悦造责粤 同源袁已
有研究指出 悦造责悦蛋白存在于一些植物的叶绿体基质
中咱员愿 原 员怨暂 遥 悦造责悦蛋白在不同的物种之间高度保守咱圆园暂 遥
枯草芽孢杆菌中的 悦造责悦 不仅能够清除一些错误折叠
及装配的蛋白袁也能通过调节蛋白水解过程来调控发
苑苑苑
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
育过程中的一些关键步骤咱圆员暂 遥 拟南芥中存在两个
悦造责悦基因袁它们之间相似度极高袁悦造责悦 以依赖于 粤栽孕
的方式与基质中的 悦造责孕相联系咱圆圆 原 圆猿暂 遥 研究发现袁拟
南芥 糟造责悦员 突变体生长发育受阻滞袁且叶片表现出萎
黄表型袁其光系统 陨和光系统 陨陨复合体减少咱圆源暂 遥 表明
悦造责悦在体内起着相对保守的分子伴侣的功能袁防止蛋
白错误折叠及解聚遥 悦造责阅 蛋白由于其特有的特征序
列及表达模式而不同与 悦造责悦袁拟南芥中 悦造责阅 蛋白在
之前的一些研究中被称为 耘砸阅员咱圆缘暂或 杂粤郧员缘咱圆远暂 遥
综上所述袁植物中 悦造责泽蛋白参与多种胁迫及发育
进程袁但目前对其功能的研究主要集中在模式植物拟
南芥中袁木本植物中 悦造责 蛋白的研究并不系统深入遥
杨树是最早测序完成的木本模式植物袁本研究利用拟
南芥 悦造责月尧悦造责悦及 悦造责阅的蛋白序列袁在杨树基因组数
据库中同源比对后找到 缘 个 悦造责月尧圆 个 悦造责悦 及 圆 个
悦造责阅基因袁并对杨树中 陨类 悦造责泽 基因结构及不同组织
和不同胁迫条件下的表达情况进行了分析遥 研究结果
为今后解析杨树 悦造责基因的功能提供了研究基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
实验所用杨树次生维管再生材料取自毛白杨
渊孕燥责怎造怎泽 贼燥皂藻灶贼燥泽葬 悦葬则则援 冤形成层区域袁由中国林业科
学研究院林木遗传育种国家重点实验室保存遥 杨树次
生维管再生材料取材方法详见 阅怎 等咱圆苑暂的方法袁所用
组织部位为包含未成熟木质部的形成层区域袁毛白杨
剥皮后第 远尧员园尧员圆尧员源尧员远尧员愿 和 圆圆 天的样本用于基因
表达分析遥
员郾 圆摇 数据来源
拟南芥 悦造责 基因及其编码的蛋白质序列来源于
栽粤陨砸渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 葬则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽援 燥则早 辕 冤数据库遥 利用得
到的拟南芥蛋白质序列为搜索对象袁通过 遭造葬泽贼责 程序
在杨树基因组数据库 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 责澡赠贼燥扎燥皂藻援 灶藻贼 辕
责燥责造葬则援 责澡责冤中搜索相似的蛋白序列遥
员郾 猿摇 系统进化树分析
为评估杨树和拟南芥 悦造责 基因的进化关系袁我们
利用 悦造怎泽贼葬造 载咱圆愿暂对其氨基酸序列进行多序列比对袁使
用 酝耘郧粤缘郾 园咱圆怨暂中的 晕藻蚤早澡遭燥则鄄允燥蚤灶蚤灶早渊晕允冤法构建系统
进化树遥
员郾 源摇 基因结构分析
杨树及拟南芥 悦造责基因的外显子及内含子结构使
用 郧杂阅杂咱猿园暂程序渊澡贼贼责院 辕 辕 早泽凿泽援 糟遭蚤援 责噪怎援 藻凿怎援 糟灶 辕 冤完成袁
其基因组 阅晕粤 序列及 悦阅杂 序列下载自 孕澡赠贼燥扎燥皂藻 数
据库渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 责澡赠贼燥扎燥皂藻援 灶藻贼冤遥
员郾 缘摇 基因表达分析
分析杨树 悦造责基因表达所用的基因芯片数据下载
自 晕悦月陨 郧藻灶藻 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 韵皂灶蚤遭怎泽渊郧耘韵冤 咱猿员暂数据库遥
本研究中用到的芯片数据序列号分别为 郧杂耘员猿园源猿尧
郧杂耘圆员源愿员尧郧杂耘圆远员怨怨尧郧杂耘员远苑愿远 及 郧杂耘员苑圆猿园遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 杨树中 陨类 悦造责基因的鉴定及系统进化分析
陨类 悦造责蛋白是一类具有 粤栽孕 酶活性的蛋白水解
酶袁广泛存在于各种生物体内袁由 悦造责月尧悦造责悦 及 悦造责阅
三类基因组成遥 利用拟南芥 陨 类 悦造责 氨基酸序列袁在
杨树全基因组数据库中搜索相似的蛋白质序列袁选取
耘臆员园 原员园的序列为候选序列袁筛选得到 怨 个 陨类 悦造责基
因袁其中包含 缘 个 悦造责月尧圆 个 悦造责悦 及 圆 个 悦造责阅 基因袁
表 员 所示为杨树中 陨类 悦造责 基因的相关信息遥 对杨树
基因组染色体上的 陨类 悦造责 遗传分布进行分析发现袁怨
个 陨类 悦造责 基因分布在 缘 条染色体上袁源 号尧远 号及 员苑
号染色体上各 员 个 陨类 悦造责基因袁员圆 号染色体上 圆 个袁
员缘 号染色体上 源 个渊图 员 原 粤冤遥
对拟南芥和杨树中 陨类 悦造责 基因的进化关系进行
分析袁发现杨树中 陨类 悦造责 基因同拟南芥类似袁也可以
分为 悦造责月尧悦造责悦及 悦造责阅 猿 个组袁其中 悦造责月中的胞质类
含有 圆 个 渊孕贼鄄悦造责月员尧孕贼鄄悦造责月圆冤袁叶绿体类包含 圆 个
渊孕贼鄄悦造责月猿尧孕贼鄄悦造责月源冤袁线粒体类包含 员 个渊孕贼鄄悦造责月缘冤
渊图 圆冤遥
圆郾 圆摇 杨树中 陨类 悦造责基因外显子 辕内含子结构
通过对杨树 怨 个 陨类 悦造责基因结构渊外显子 辕内含
子冤及其与拟南芥中 陨 类 悦造责 家族成员的基因结构比
较袁发现每组内 悦造责基因的结构表现出一致性遥 从图 猿
中可以看出袁悦造责阅 中基因含有的内含子数量最多袁而
胞质类 悦造责月中基因含有的内含子数量较少遥 此外袁同
源关系较近的基因之间袁基因结构也较为一致渊图 圆袁
图 猿冤遥 通过分析基因结构及进化关系袁我们在该家族
中鉴定得到 源 个基因对袁孕贼鄄悦造责月员 辕 孕贼鄄悦造责月圆尧孕贼鄄悦造责月猿 辕
孕贼鄄悦造责月源尧孕贼鄄悦造责悦员 辕 孕贼鄄悦造责悦圆 及 孕贼鄄悦造责阅员 辕 孕贼鄄悦造责阅圆袁这
些基因对之间不仅在蛋白水平上有很高的相似度袁在
内含子的插入大小及插入位点也非常保守渊图 圆袁图
猿冤遥 对这些基因所在染色体区域的同源基因进行分
析袁发现 孕贼鄄悦造责悦员 辕 孕贼鄄悦造责悦圆 和 孕贼鄄悦造责阅员 辕 孕贼鄄悦造责阅圆 所
在的染色体片段区域大部分基因都是同源的袁这两个
基因对可能是由于染色体复制产生的渊图 员 原 月袁员 原
悦冤遥
愿苑苑
摇 缘 期 杨树中 陨类 悦造责基因家族的表达分析
表 员摇 杨树中 陨类 悦造责基因家族成员
栽葬遭造藻 员摇 悦造葬泽泽 陨 悦造责 早藻灶藻泽 蚤灶 孕燥责怎造怎泽
杨树基因
郧藻灶藻 蚤灶 责燥责造葬则
基因号
郧藻灶藻 陨阅
基因在染色体上位置
孕燥泽蚤贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 早藻灶藻 蚤灶 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻
亚细胞定位预测
孕则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥枣 泽怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶
孕贼鄄悦造责月员 孕燥贼则蚤援 园员缘郧园缘远怨园园 悦澡则员缘 渊 原 冤 苑愿园缘愿远猿 原 苑愿园怨愿源怨 悦赠贼燥泽燥造
孕贼鄄悦造责月圆 孕燥贼则蚤援 园员缘郧园缘苑园园园 悦澡则员缘 渊 原 冤 苑愿员远远怨猿 原 苑愿圆园源愿远 悦赠贼燥泽燥造
孕贼鄄悦造责月猿 孕燥贼则蚤援 园园源郧员圆源愿园园 悦澡则园源 渊 垣 冤 员圆园苑猿园苑缘 原 员圆园苑怨源源圆 悦澡造燥则燥责造葬泽贼
孕贼鄄悦造责月源 孕燥贼则蚤援 园员苑郧园怨园远园园 悦澡则员苑 渊 原 冤 员园苑愿苑猿愿园 原 员园苑怨源园圆远 悦澡造燥则燥责造葬泽贼
孕贼鄄悦造责月缘 孕燥贼则蚤援 园园远郧圆远圆苑园园 悦澡则园远 渊 垣 冤 圆远缘苑员猿缘圆 原 圆远缘苑愿远苑圆 酝蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤燥灶
孕贼鄄悦造责悦员 孕燥贼则蚤援 园员缘郧员园缘员园园 悦澡则员缘 渊 原 冤 员圆猿园员愿园缘 原 员圆猿园愿猿远猿 悦澡造燥则燥责造葬泽贼
孕贼鄄悦造责悦圆 孕燥贼则蚤援 园员圆郧员园缘怨园园 悦澡则员圆 渊 原 冤 员圆怨远怨苑园远 原 员圆怨苑远源愿愿 悦澡造燥则燥责造葬泽贼
孕贼鄄悦造责阅员 孕燥贼则蚤援 园员缘郧员员园园园园 悦澡则员缘 渊 垣 冤 员圆远远圆远猿圆 原 员圆远远愿圆圆怨 悦澡造燥则燥责造葬泽贼
孕贼鄄悦造责阅圆 孕燥贼则蚤援 园员圆郧员员圆园园园 悦澡则员圆 渊 垣 冤 员猿猿源缘远园圆 原 员猿猿缘员怨远圆 悦赠贼燥泽燥造
圆郾 猿摇 杨树中 陨类 悦造责基因的表达特性
为了探究杨树中 陨 类 悦造责 基因的功能袁我们利用
目前已经公布的杨树基因芯片数据袁分析了杨树 陨 类
悦造责基因在不同组织及不同发育阶段的表达模式遥
图 源 原 粤所示为检测到的 陨类 悦造责基因在不同组织中的
表达情况遥 通过分析发现袁杨树 孕贼鄄悦造责月源 及 孕贼鄄悦造责悦员
在成熟叶片中表达较高袁孕贼鄄悦造责月员尧孕贼鄄悦造责月猿尧孕贼鄄悦造责悦员
及 孕贼鄄悦造责悦圆 在杨树幼苗中表达比较高袁孕贼鄄悦造责月员 在根
中表达较高袁而 孕贼鄄悦造责阅员 和 孕贼鄄悦造责月猿 分别在成熟的花
序及种子中表达较高袁表明这些基因可能参与响应组
织器官的发育过程遥 图 源 原 月所示为检测到的 陨类 悦造责
基因在杨树茎第 圆尧猿尧源尧缘尧怨 节间中的表达情况袁第 圆
节间中 孕贼鄄悦造责月缘尧孕贼鄄悦造责悦圆 及 孕贼鄄悦造责阅圆 表达较高袁说明
他们可能在初生茎发育过程中起主要作用曰而 孕贼鄄
悦造责月员尧孕贼鄄悦造责月猿尧孕贼鄄悦造责月源 及 孕贼鄄悦造责悦员 在第 缘 节间中
表达较高袁表明其可能参与从初生茎到次生茎的发育
过程曰孕贼鄄悦造责月员 和 孕贼鄄悦造责月猿 在第 怨 节间表达较高袁表明
其参与茎的次生生长过程遥
本课题组前期研究发现研究发现袁一些 悦造责 基因
在毛白杨剥皮后次生维管再生系统不同时期表达量有
变化遥 本文对其表达情况进行了分析袁发现 孕贼鄄悦造责月源
和 孕贼鄄悦造责月缘 在次生维管再生过程的第 苑 天表达降低袁
但 孕贼鄄悦造责月猿尧孕贼鄄悦造责悦员尧孕贼鄄悦造责悦圆 及 孕贼鄄悦造责阅员 在次生维
管再生过程的整个过程中表达都上调渊图 源 原 悦冤袁表明
其参与了杨树次生维管系统重建过程遥
圆郾 源摇 杨树中 陨类 悦造责基因表达对环境胁迫的响应
由于 悦造责泽蛋白能够参与多种胁迫及发育进程袁我
们对杨树 陨 类 悦造责 基因的各种非生物胁迫渊高温尧干
旱尧低氮尧机械损伤及茉莉酸甲酯处理冤响应进行了分
析遥 从图 缘 原 粤 中可以看出袁孕贼鄄悦造责月员尧孕贼鄄悦造责月源 和 孕贼鄄
悦造责月缘 在光合抑制 圆园 豫 渊猿愿郾 源益冤及光合抑制 猿园 豫
渊源园郾 缘益冤条件下表达显著提高遥 悦造责月 类属于 匀泽责员园园
基因家族袁明显受到高温诱导遥 不同的 悦造责 成员对于
干旱胁迫的响应不同袁 孕贼鄄悦造责阅员 在水分亏缺早期
渊猿远澡冤就迅速响应袁而 孕贼鄄悦造责月员 和 孕贼鄄悦造责月圆 在长期干
旱处理渊土壤含水量 员园 原 圆园 豫 袁员园凿冤时表达上调渊图 缘
原 月冤遥 在杂交杨渊孕援 枣则藻皂燥灶贼蚤蚤 伊 孕援 葬灶早怎泽贼蚤枣燥造蚤葬冤员怨苑怨
中袁孕贼鄄悦造责悦圆 和 孕贼鄄悦造责阅员 在低氮处理 源 周后的幼叶中
表达上调袁而 孕贼鄄悦造责悦员 和 孕贼鄄悦造责阅员 在低氮处理 愿 周后
的全展叶中表达上调袁说明它们分别参与了叶片不同
发育过程中对短期及长期低氮胁迫的响应遥 在机械损
伤过程中袁孕贼鄄悦造责阅员 在损伤 员 周的幼叶及损伤 怨园澡 的
根尖中表达上调袁而 孕贼鄄悦造责悦圆 在损伤 怨园 澡的全展叶中
表达上调遥 此外袁我们还分析了 悦造责 基因对茉莉酸甲
酯处理的响应情况袁发现茉莉酸甲酯处理悬浮细胞之
后袁孕贼鄄悦造责月源 和 孕贼鄄悦造责悦员 表达显著下调渊图 缘 原 悦冤遥
猿摇 讨论
悦造责蛋白是一类重要的 粤粤粤 垣类 粤栽孕 酶袁有多种
生物学功能袁其中 悦造葬泽泽 陨类 悦造责蛋白包含两个 粤栽孕结
合域咱缘 原 远暂 遥 目前已知的拟南芥中 陨 类 悦造责 蛋白中 悦造责月
有 猿 个尧悦造责悦有 圆 个尧悦造责阅有 员 个袁水稻中 陨 类 悦造责 蛋
白中 悦造责月 有 猿 个尧悦造责悦 有 源 个尧悦造责阅 有 圆 个咱猿圆暂 遥 其
中 悦造责月分为胞质类尧叶绿体类及线粒体类遥 本研究利
用已知的拟南芥 陨类 悦造责蛋白序列在杨树数据库中进
行搜素袁共找到 怨 个杨树 陨 类 悦造责 基因袁其中包含 缘 个
悦造责月尧圆 个 悦造责悦 及 圆 个 悦造责阅 基因遥 缘 个 悦造责月 基因属
于 匀泽责员园园 基因家族袁预测其亚细胞定位后发现袁杨树
中 悦造责月与拟南芥和杨树类似袁都可以分为胞质类尧叶
怨苑苑
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
图 员摇 杨树 陨类 悦造责基因家族成员的染色体定位
云蚤早援 员摇 悦澡则燥皂燥泽燥皂葬造 造燥糟葬贼蚤燥灶泽 燥枣 贼澡藻 糟造葬泽泽 陨 悦造责 蚤灶 孕燥责怎造怎泽
绿体类及线粒体类袁其中胞质类 圆 个尧叶绿体类 圆 个尧
线粒体类 员 个渊表 员冤遥 根据进化关系及基因结构分
析袁发现该家族中包含 源 个基因对袁其中 圆 对位于染色
体复制的保守区渊图 员冤遥 杨树基因组染色体上的保守
区是由于在进化过程中染色体复制并重组造成的袁这
圆 对 陨类 悦造责基因的染色体定位袁表明其可能是由于染
色体复制导致的基因加倍遥 植物体内的 陨 类 悦造责 基因
以多成员基因家族的形式存在袁它们各自行使不同的
生物学功能遥 目前在拟南芥等模式植物中 陨 类 悦造责 基
因的功能已经有了较为深入的研究袁但木本植物 陨 类
悦造责基因家族的研究并不系统深入遥 因此袁杨树 陨 类
悦造责基因家族的建立对于科学研究有着重要的意义遥
对杨树 陨类 悦造责 基因家族成员在不同组织尧生长
发育阶段及不同胁迫条件下的表达情况进行分析遥 杨
园愿苑
摇 缘 期 杨树中 陨类 悦造责基因家族的表达分析
图 圆摇 杨树和拟南芥的 陨类 悦造责基因进化关系
云蚤早援 圆摇 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 燥枣 糟造葬泽泽 陨
悦造责 早藻灶藻泽 蚤灶 孕燥责怎造怎泽 葬灶凿 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
图 猿摇 杨树及拟南芥 陨类 悦造责基因的内含子结构
云蚤早援 猿摇 郧藻灶藻 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 糟造葬泽泽 陨 悦造责 早藻灶藻泽
蚤灶 孕燥责怎造怎泽 葬灶凿 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
树 陨类 悦造责家族中一些基因参与成熟叶片尧幼苗尧根以
及花序的特定发育过程曰孕贼鄄悦造责月员尧孕贼鄄悦造责月猿尧孕贼鄄悦造责月源
及 孕贼鄄悦造责悦员 参与初生茎到次生茎的发育过程袁而 孕贼鄄
悦造责月员 和 孕贼鄄悦造责月猿 参与茎的次生生长过程曰几乎所有 陨
类 孕贼悦造责基因在次生维管再生过程中表达上调袁表明
注院粤援 杨树 陨 类 悦造责 基因在杨树不同组织中的表达特性
渊郧耘韵院郧杂耘圆员源愿员冤袁粤责月渊茎尖冤袁粤曾月渊腋芽冤袁粤责蕴渊茎尖幼
叶冤袁灾再蕴渊幼叶冤袁酝蕴渊成熟叶冤袁郧源猿澡渊幼苗冤袁载孕蚤渊木质部及
髓冤袁孕悦渊韧皮部及皮层冤袁砸栽悦渊组培条件下根冤袁砸云云渊野生条
件下根冤袁再酝月渊雄花芽冤袁再云月渊雌花芽冤袁云渊授粉后雌花冤袁酝
渊雄花序冤袁云酝渊种子释放前成熟花絮冤袁杂耘渊种子冤曰月援 杨树 陨
类 悦造责 基因在杨树不同节间的表达特性渊郧耘韵院郧杂耘员猿园源猿冤袁
陨晕圆 原第 圆 节间袁陨晕猿 原第 猿 节间袁陨晕源 原第 源 节间袁陨晕缘 原第 缘
节间袁陨晕怨 原第 怨 节间曰悦援 杨树 陨 类 悦造责 基因在树次生维管再
生第 园尧苑尧员园尧员圆尧员源尧员远尧员愿尧圆员 天的基因表达遥
晕燥贼藻院 粤援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶 燥枣 孕燥责怎造怎泽 糟造葬泽泽 陨 悦造责 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
贼蚤泽泽怎藻泽 渊郧耘韵院 郧杂耘圆员源愿员冤袁 粤责月 渊杂澡燥燥贼 葬责藻曾冤袁 粤曾月 渊粤曾蚤造造葬则赠
遭怎凿泽冤袁 粤责蕴 渊再燥怎灶早 造藻葬增藻泽 葬贼 葬责藻曾冤袁 灾再蕴 渊再燥怎灶早 造藻葬枣冤袁 酝蕴
渊酝葬贼怎则藻 造藻葬增藻泽冤袁 郧源猿澡 渊 杂藻藻凿造蚤灶早 源猿 澡则 责燥泽贼鄄蚤皂遭蚤遭蚤贼蚤燥灶冤袁 载孕蚤
渊阅藻增藻造燥责蚤灶早 曾赠造藻皂 葬灶凿 责蚤贼澡冤袁 孕悦 渊孕澡造燥藻皂 葬灶凿 悦燥则贼藻曾冤袁 砸栽悦
渊砸燥燥贼泽 枣则燥皂 贼蚤泽泽怎藻 糟怎造贼怎则藻冤袁 砸云云 渊砸燥燥贼泽 枣则燥皂 枣蚤藻造凿 贼则藻藻泽冤袁 再酝月
渊酝葬造藻 枣造燥则葬造 遭怎凿 蚤灶蚤贼蚤葬造泽冤袁 再云月 渊云藻皂葬造藻 枣造燥则葬造 遭怎凿 蚤灶蚤贼蚤葬造泽冤袁 云
渊云藻皂葬造藻 鄄责燥泽贼 责燥造造蚤灶葬贼蚤燥灶冤袁 酝 渊酝葬造藻 糟葬贼噪蚤灶 原 猿 泽贼葬早藻泽 责燥燥造藻凿冤袁
云酝 渊 酝葬贼怎则藻 糟葬贼噪蚤灶 遭藻枣燥则藻 泽藻藻凿 则藻造藻葬泽藻 冤袁 杂耘 渊 杂藻藻凿 冤曰 月援
耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻泽 燥枣 孕燥责怎造怎泽 糟造葬泽泽 陨 悦造责 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 蚤灶贼藻则灶燥凿藻泽
渊郧耘韵院 郧杂耘员猿园源猿冤袁 陨晕圆 原 陨灶贼藻则灶燥凿藻 圆袁 陨晕猿 原 陨灶贼藻则灶燥凿藻 猿袁 陨晕源
原 陨灶贼藻则灶燥凿藻 源袁 陨晕缘 原 陨灶贼藻则灶燥凿藻 缘袁 陨晕怨 原 陨灶贼藻则灶燥凿藻 怨曰 悦援 栽澡藻
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 孕燥责怎造怎泽 糟造葬泽泽 陨 悦造责 蚤灶 园袁 苑袁 员园袁 员圆袁 员源袁 员远袁 员愿
葬灶凿 圆员 凿葬赠 凿怎则蚤灶早 泽藻糟燥灶凿葬则赠 增葬泽糟怎造葬则 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶援
图 源摇 杨树 陨类 悦造责基因表达特性
云蚤早援 源摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 孕燥责怎造怎泽 糟造葬泽泽 陨 悦造责 早藻灶藻泽
杨树 陨类 悦造责基因参与次生维管系统重建过程渊图 源冤遥
这说明杨树 陨类 悦造责基因家族成员在不同组织及不同
生长发育阶段中起着关键作用遥 对杨树 陨 类 悦造责 基因
胁迫响应分析袁由于 悦造责月 类属于 匀泽责员园园 基因家族袁其
员愿苑
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
注院粤援 杨树 陨类 悦造责 基因在高温胁迫下的表达分析渊郧耘韵院郧杂耘圆远员怨怨冤袁在光合最适温度 渊猿员郾 苑缘益冤尧光合抑制 圆园豫渊猿愿郾 源益冤及光合抑制 猿园豫 渊源园郾 缘益冤条件下相对于正常温
度渊圆圆益冤下基因的表达情况曰月援 杨树 陨 类 悦造责 基因在干旱
胁迫下的表达分析渊郧耘韵院郧杂耘员苑圆猿园冤袁耘粤砸渊水分亏缺早期
响应袁猿远澡冤尧蕴酝陨渊土壤含水量 圆园豫 耀 猿缘豫 袁长期干旱处理员园凿冤尧蕴酝韵渊土壤含水量 员园豫 耀 圆园豫 袁长期干旱处理 员园凿冤曰悦援 杨树 陨类 悦造责基因对低氮尧机械损伤及茉莉酸甲酯渊酝藻允冤
的响应渊郧耘韵院郧杂耘员远苑愿远冤袁组织部位分别为幼叶渊再蕴冤尧全展
叶渊耘蕴冤尧成熟叶片渊蕴冤尧根尖渊砸栽冤以及悬浮细胞渊悦冤袁胁迫
处理分别为低氮处理渊 造燥憎 晕冤尧机械损伤渊憎燥怎灶凿蚤灶早冤以及茉
莉酸甲酯处理渊酝藻允冤处理袁分析所用的杨树基因型分别为
孕援 枣则藻皂燥灶贼蚤蚤 伊 孕援 葬灶早怎泽贼蚤枣燥造蚤葬 克隆 员怨苑怨尧猿圆园园 和 砸酝缘尧孕援
贼则藻皂怎造燥蚤凿藻泽克隆 蕴源 以及 孕援 凿藻造贼燥蚤凿泽克隆 杂燥造蚤早燥和 悦葬则责葬糟糟蚤燥遥晕燥贼藻院 粤援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 孕燥责怎造怎泽 糟造葬泽泽 陨 悦造责 蚤灶 责澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻贼蚤糟燥责贼蚤皂怎皂 渊猿员郾 苑缘益袁 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 责则燥凿怎糟蚤灶早 贼澡藻 皂葬曾蚤皂怎皂 灶藻贼悦韵圆 葬泽泽蚤皂蚤造葬贼蚤燥灶 则葬贼藻冤袁 圆园豫 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 燥枣 燥责贼蚤皂怎皂 渊猿愿郾 源益冤葬灶凿 猿园豫 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 燥枣 燥责贼蚤皂怎皂 渊源园郾 缘益冤 则藻造葬贼蚤增藻 贼燥 遭葬泽藻造蚤灶藻渊圆圆益袁 贼澡藻 早则燥憎贼澡 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 冤 渊 郧耘韵院 郧杂耘圆远员怨怨 冤曰 月援耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 孕燥责怎造怎泽 糟造葬泽泽 陨 悦造责 怎灶凿藻则 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 燥枣 泽澡燥则贼鄄 葬灶凿造燥灶早鄄贼藻则皂 憎葬贼藻则 凿藻枣蚤糟蚤贼 渊 郧耘韵院 郧杂耘员苑圆猿园 冤援 耘粤砸袁 藻葬则造赠则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 憎葬贼藻则 凿藻枣蚤糟蚤贼 渊 遭赠 猿远 澡冤曰 蕴酝陨袁 造燥灶早鄄贼藻则皂 渊员园 原凿葬赠冤 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 皂蚤造凿 泽贼则藻泽泽 憎蚤贼澡 葬 泽燥蚤造 则藻造葬贼蚤增藻 藻曾贼则葬糟贼葬遭造藻 憎葬贼藻则渊砸耘宰冤 造藻增藻造 燥枣 圆园豫 原 猿缘豫 曰 蕴酝韵袁 造燥灶早鄄贼藻则皂 渊员园 原 凿葬赠冤则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 皂燥凿藻则葬贼藻 泽贼则藻泽泽 憎蚤贼澡 葬 泽燥蚤造 砸耘宰 造藻增藻造 燥枣 员园豫 原圆园豫 曰 悦援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 孕燥责怎造怎泽 糟造葬泽泽 陨 悦造责 葬糟则燥泽泽 增葬则蚤燥怎泽贼蚤泽泽怎藻泽 葬灶凿 早藻灶燥贼赠责藻泽 渊郧耘韵院 郧杂耘员远苑愿远冤援 栽澡藻 贼蚤泽泽怎藻泽 葬灶葬造赠扎藻凿憎藻则藻 赠燥怎灶早 造藻葬增藻泽 渊 再蕴冤袁 藻曾责葬灶凿蚤灶早 造藻葬增藻泽 渊 耘蕴冤袁 皂葬贼怎则藻造藻葬增藻泽 渊蕴冤袁 则燥燥贼 贼蚤责泽 渊砸栽冤袁 葬灶凿 泽怎泽责藻灶泽蚤燥灶 糟藻造造 糟怎造贼怎则藻泽 渊悦冤援杂贼则藻泽泽 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 憎藻则藻 灶蚤贼则燥早藻灶 造蚤皂蚤贼葬贼蚤燥灶 渊 造燥憎 晕冤袁 皂藻贼澡赠造躁葬泽皂燥灶葬贼藻 藻造蚤糟蚤贼葬贼蚤燥灶 渊 酝藻允 冤袁 葬灶凿 憎燥怎灶凿蚤灶早袁 憎蚤贼澡 泽葬皂责造蚤灶早藻蚤贼澡藻则 员 憎藻藻噪 燥则 怨园 澡 葬枣贼藻则 憎燥怎灶凿蚤灶早援 栽澡藻 早藻灶燥贼赠责藻泽 葬灶葬造赠扎藻凿憎藻则藻 孕援 枣则藻皂燥灶贼蚤蚤 伊 孕援 葬灶早怎泽贼蚤枣燥造蚤葬 糟造燥灶藻泽 员怨苑怨袁 猿圆园园袁 葬灶凿砸酝缘曰 孕援 贼则藻皂怎造燥蚤凿藻泽 糟造燥灶藻泽 圆苑员 葬灶凿 蕴源曰 葬灶凿 孕援 凿藻造贼燥蚤凿泽 糟造燥灶藻泽杂燥造蚤早燥 葬灶凿 悦葬则责葬糟糟蚤燥援
图 缘摇 杨树 陨类 悦造责基因的胁迫响应
云蚤早援 缘摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 孕燥责怎造怎泽
糟造葬泽泽 陨 悦造责 早藻灶藻泽 怎灶凿藻则 增葬则蚤燥怎泽 泽贼则藻泽泽藻泽
表达明显受到高温诱导袁而 悦造责悦 及 悦造责阅 表达在高温
条件下没有显著变化遥 此外袁杨树 陨 类 悦造责 基因家族
不同成员对干旱尧低氮尧机械损伤及茉莉酸甲酯处理的
响应有所不同袁表明其参与不同的胁迫响应渊图 缘冤遥
源摇 结论
悦造责蛋白属于 粤粤粤 垣类 粤栽孕 酶超级家族袁能够参
与多种胁迫响应及生长发育过程袁杨树 陨 类 悦造责 基因
家族的分析对于揭示其功能有着重要意义遥 随着对这
些基因功能的深入研究袁陨类 悦造责基因的功能将被进一
步了解袁这也为研究 陨 类 悦造责 基因在木本植物发育过
程中的功能奠定了基础遥
参考文献院
咱 员 暂摇 郧燥贼贼藻泽皂葬灶 杂援 孕则燥贼藻葬泽藻泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则 贼葬则早藻贼泽 蚤灶 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 咱 允暂 援
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糟燥灶贼葬蚤灶泽 葬 泽燥造怎遭造藻 粤栽孕鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼 责则燥贼藻葬泽藻 渊 栽蚤 冤 凿蚤泽贼蚤灶糟贼 枣则燥皂
责则燥贼藻葬泽藻 蕴葬 咱允暂 援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁
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糟燥皂责燥灶藻灶贼袁 粤栽孕鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼 责则燥贼藻葬泽藻 枣则燥皂 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 咱 允 暂 援
允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 员怨愿苑袁圆远圆渊员园冤院源源苑苑 原 源源愿缘
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责则燥贼藻蚤灶泽 葬早早则藻早葬贼藻凿 蚤灶 增蚤增燥 遭赠 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪曰 匀贼则粤 责则燥贼藻葬泽藻 葬糟贼蚤燥灶 蚤灶
增蚤增燥 葬灶凿 蚤灶 增蚤贼则燥 咱允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 员怨怨远袁圆圆渊猿冤院缘缘缘 原
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允燥怎则灶葬造 燥枣 杂贼则怎糟贼怎则葬造 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园源袁员源远渊员冤院圆 原 员园
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糟造葬泽泽 燥枣 糟澡葬责藻则燥灶藻鄄造蚤噪藻 粤栽孕葬泽藻泽 葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 葬泽泽藻皂遭造赠袁
燥责藻则葬贼蚤燥灶袁 葬灶凿 凿蚤泽葬泽泽藻皂遭造赠 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 糟燥皂责造藻曾藻泽 咱 允 暂 援 郧藻灶燥皂藻
砸藻泽藻葬则糟澡袁 员怨怨怨袁怨渊员冤院圆苑 原 源猿
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悦澡造燥则燥责造葬泽贼 葬灶凿 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 责则燥贼藻葬泽藻泽 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽援 粤 责则燥责燥泽藻凿
灶燥皂藻灶糟造葬贼怎则藻 咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园员袁员圆缘渊源冤院员怨员圆 原 员怨员愿
咱 怨 暂摇 悦藻造藻则蚤灶 酝袁 郧蚤造责蚤灶 粤 粤袁 杂糟澡蚤泽造藻则 晕 允袁 陨增葬灶燥增 粤 郧袁 酝蚤泽噪蚤藻憎蚤糟扎 耘袁
运则燥造 酝袁 蕴葬怎凿藻灶遭葬糟澡 阅 耘援 悦造责月 蚤灶 葬 糟赠葬灶燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂院 责则藻凿蚤糟贼藻凿
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贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 月葬糟贼藻则蚤燥造燥早赠袁 员怨怨愿袁员愿园渊员怨冤院缘员苑猿 原
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泽藻择怎藻灶糟藻 凿葬贼葬 咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥泽糟蚤藻灶糟藻泽袁 圆园园苑袁猿圆渊猿冤院远员员 原 远员怨
咱员员暂摇 蕴藻藻 哉袁 砸蚤燥枣造燥则蚤凿燥 陨袁 匀燥灶早 杂 宰袁 蕴葬则噪蚤灶凿葬造藻 允袁 宰葬贼藻则泽 耘 砸袁 灾蚤藻则造蚤灶早
耘援 栽澡藻 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 悦造责月 辕 匀泽责员园园 枣葬皂蚤造赠 燥枣 责则燥贼藻蚤灶泽院 糟澡葬责藻则燥灶藻泽 枣燥则
泽贼则藻泽泽 葬灶凿 糟澡造燥则燥责造葬泽贼 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 圆园园苑袁源怨
渊员冤院员员缘 原 员圆苑
圆愿苑
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贼澡藻 葬糟择怎蚤泽蚤贼蚤燥灶 燥枣 贼燥造藻则葬灶糟藻 贼燥 澡蚤早澡 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 泽贼则藻泽泽 咱 允 暂 援
孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 圆园园园袁怨苑 渊愿冤院
源猿怨圆 原 源猿怨苑
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凿蚤泽责藻灶泽葬遭造藻 枣燥则 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 葬遭泽藻灶糟藻 燥枣 泽贼则藻泽泽
咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 圆园园员袁圆苑渊员冤院圆缘 原 猿缘
咱员源暂摇 晕蚤藻贼燥 原 杂燥贼藻造燥 允袁 酝葬则贼侏灶藻扎 蕴 酝袁 孕燥灶糟藻 郧袁 悦葬泽泽葬遭 郧 陨袁 粤造葬早佼灶 粤袁
酝藻藻造藻赠 砸 月袁 砸蚤遭葬怎贼 允鄄酝袁 再葬灶早 砸援 酝葬蚤扎藻 匀杂孕员园员 责造葬赠泽 蚤皂责燥则贼葬灶贼
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早则燥憎贼澡 咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园园圆袁员源渊苑冤院员远圆员 原 员远猿猿
咱员缘暂摇 匝怎藻蚤贼泽糟澡 悦袁 匀燥灶早 杂鄄宰袁 灾蚤藻则造蚤灶早 耘袁 蕴蚤灶凿择怎蚤泽贼 杂援 匀藻葬贼 泽澡燥糟噪
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咱允暂 援 杂糟蚤藻灶糟藻 杂蚤早灶葬造蚤灶早袁 圆园园园袁员圆渊源冤院源苑怨
咱员远暂摇 运藻藻造藻则 杂 允袁 月燥藻贼贼早藻则 悦 酝袁 匀葬赠灶藻泽 允 郧袁 运怎糟澡藻泽 运 粤袁 允燥澡灶泽燥灶 酝 酝袁
栽澡怎则藻藻灶 阅 蕴袁 运藻藻造藻则 悦 蕴袁 运蚤贼贼燥 杂 蕴援 粤糟择怎蚤则藻凿 贼澡藻则皂燥贼燥造藻则葬灶糟藻 葬灶凿
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 匀杂孕员园园 辕 悦造责月 早藻灶藻泽 燥枣 造蚤皂葬 遭藻葬灶 咱 允暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园园袁员圆猿渊猿冤院员员圆员 原 员员猿圆
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贼澡藻则皂燥贼燥造藻则葬灶糟藻 蚤灶 贼燥皂葬贼燥 咱 允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园远袁远圆
渊猿冤院猿愿缘 原 猿怨缘
咱员愿暂摇 晕葬噪葬遭葬赠葬泽澡蚤 运袁 陨贼燥 酝袁 运蚤赠燥泽怎藻 栽袁 杂澡蚤灶燥扎葬噪蚤 运袁 宰葬贼葬灶葬遭藻 粤援
陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 糟造责 早藻灶藻泽 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 泽藻灶藻泽糟蚤灶早 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 造藻葬增藻泽
咱允暂 援 孕造葬灶贼 葬灶凿 悦藻造造 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 员怨怨怨袁源园渊缘冤院缘园源 原 缘员源
咱员怨暂摇 杂澡葬灶噪造蚤灶 允袁 阅藻宰蚤贼贼 晕 阅袁 云造葬灶葬早葬灶 允 酝援 栽澡藻 泽贼则燥皂葬 燥枣 澡蚤早澡藻则 责造葬灶贼
责造葬泽贼蚤凿泽 糟燥灶贼葬蚤灶 悦造责孕 葬灶凿 悦造责悦袁 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 澡燥皂燥造燥早泽 燥枣 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬
糟燥造蚤 悦造责孕 葬灶凿 悦造责粤院 葬灶 葬则糟澡藻贼赠责葬造 贼憎燥鄄糟燥皂责燥灶藻灶贼 粤栽孕鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼
责则燥贼藻葬泽藻 咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 员怨怨缘袁苑渊员园冤院员苑员猿 原 员苑圆圆
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悦造葬则噪藻 粤 运援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 糟澡造燥则燥责造葬泽贼 悦造责 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽院 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶袁 贼蚤泽泽怎藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 葬灶凿 泽贼则藻泽泽 则藻泽责燥灶泽藻泽
咱允暂 援 孕澡赠泽蚤燥造燥早蚤葬 孕造葬灶贼葬则怎皂袁 圆园园圆袁员员源渊员冤院怨圆 原 员园员
咱圆员暂摇 运蚤则泽贼藻蚤灶 允袁 杂糟澡造燥贼澡葬怎藻则 栽袁 阅燥怎早葬灶 阅 粤袁 蕴蚤造蚤藻 匀袁 栽蚤泽糟澡藻灶凿燥则枣 郧袁
酝燥早噪 粤袁 月藻则灶凿 月袁 栽怎则早葬赠 运援 粤凿葬责贼燥则 责则燥贼藻蚤灶 糟燥灶贼则燥造造藻凿
燥造蚤早燥皂藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 葬糟贼蚤增葬贼藻泽 贼澡藻 粤粤粤 垣 曰 责则燥贼藻蚤灶 悦造责悦 咱允暂 援 栽澡藻 耘酝月韵
允燥怎则灶葬造袁 圆园园远袁圆缘渊苑冤院员源愿员 原 员源怨员
咱圆圆暂摇 杂燥噪燥造藻灶噪燥 粤袁 蕴藻则遭泽鄄酝葬糟澡藻 杂袁 粤造贼泽糟澡皂蚤藻凿 蕴袁 匀藻则则皂葬灶灶 砸 郧援 悦造责
责则燥贼藻葬泽藻 糟燥皂责造藻曾藻泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 蚤灶 糟澡造燥则燥责造葬泽贼泽 咱 允暂 援 孕造葬灶贼葬袁
员怨怨愿袁圆园苑渊圆冤院圆愿远 原 圆怨缘
咱圆猿暂摇 匀葬造责藻则蚤灶 栽袁 在澡藻灶早 月袁 陨贼扎澡葬噪蚤 匀袁 悦造葬则噪藻 粤 运袁 粤凿葬皂 在援 孕造葬灶贼
皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬 糟燥灶贼葬蚤灶 责则燥贼藻燥造赠贼蚤糟 葬灶凿 则藻早怎造葬贼燥则赠 泽怎遭怎灶蚤贼泽 燥枣 贼澡藻 粤栽孕鄄
凿藻责藻灶凿藻灶贼 悦造责 责则燥贼藻葬泽藻 咱 允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园员袁源缘
渊源冤院源远员 原 源远愿
咱圆源暂摇 杂躁觟早则藻灶 蕴 蕴袁 酝葬糟阅燥灶葬造凿 栽 酝袁 杂怎贼蚤灶藻灶 杂袁 悦造葬则噪藻 粤 运援 陨灶葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶
燥枣 贼澡藻 糟造责悦员 早藻灶藻 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 糟澡造燥则燥责造葬泽贼 匀泽责员园园 皂燥造藻糟怎造葬则
糟澡葬责藻则燥灶藻 糟葬怎泽藻泽 早则燥憎贼澡 则藻贼葬则凿葬贼蚤燥灶袁 造藻葬枣 糟澡造燥则燥泽蚤泽袁 造燥憎藻则
责澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 葬糟贼蚤增蚤贼赠袁 葬灶凿 葬 泽责藻糟蚤枣蚤糟 则藻凿怎糟贼蚤燥灶 蚤灶 责澡燥贼燥泽赠泽贼藻皂
糟燥灶贼藻灶贼 咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园源袁员猿远渊源冤院源员员源 原 源员圆远
咱圆缘暂摇 晕葬噪葬泽澡蚤皂葬 运袁 运蚤赠燥泽怎藻 栽袁 再葬皂葬早怎糟澡蚤‐ 杂澡蚤灶燥扎葬噪蚤 运袁 杂澡蚤灶燥扎葬噪蚤 运援
粤 灶怎糟造藻葬则 早藻灶藻袁 藻则凿员袁 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 糟澡造燥则燥责造葬泽贼 ‐ 贼葬则早藻贼藻凿 悦造责
责则燥贼藻葬泽藻 则藻早怎造葬贼燥则赠 泽怎遭怎灶蚤贼 澡燥皂燥造燥早 蚤泽 灶燥贼 燥灶造赠 蚤灶凿怎糟藻凿 遭赠 憎葬贼藻则
泽贼则藻泽泽 遭怎贼 葬造泽燥 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼葬造造赠 怎责‐ 则藻早怎造葬贼藻凿 凿怎则蚤灶早 泽藻灶藻泽糟藻灶糟藻 蚤灶
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 员怨怨苑袁员圆渊源冤院愿缘员 原
愿远员
咱圆远暂摇 蕴燥澡皂葬灶 运 晕袁 郧葬灶 杂袁 允燥澡灶 酝 悦袁 粤皂葬泽蚤灶燥 砸 酝援 酝燥造藻糟怎造葬则 葬灶葬造赠泽蚤泽
燥枣 灶葬贼怎则葬造 造藻葬枣 泽藻灶藻泽糟藻灶糟藻 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 咱 允暂 援 孕澡赠泽蚤燥造燥早蚤葬
孕造葬灶贼葬则怎皂袁 员怨怨源袁怨圆渊圆冤院猿圆圆 原 猿圆愿
咱圆苑暂摇 阅怎 允袁 载蚤藻 匀 蕴袁 在澡葬灶早 阅 匝袁 匀藻 载 匝袁 宰葬灶早 酝 允袁 蕴蚤 再 在袁 悦怎蚤 运
酝袁 蕴怎 酝 在援 砸藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿葬则赠 增葬泽糟怎造葬则 泽赠泽贼藻皂 蚤灶 责燥责造葬则
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