本试验以山楂叶为研究对象,选取乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取温度为自变量,总黄酮得率为响应值,进行四因素三水平的Box-Benhnken试验。利用响应面分析法优化山楂叶总黄酮超声提取工艺,并对山楂叶总黄酮清除DPPH自由基、ABTS自由基能力及其还原力进行探讨。结果表明,超声波辅助乙醇提取山楂叶总黄酮的最佳工艺条件为乙醇体积分数70%,料液比1 :35,提取时间39min,提取温度72℃,在此工艺条件下总黄酮得率预测值为29.198 mg ·g-1,实测值为28.991 mg ·g-1,与理论预测值的相对误差仅为0.71%。山楂叶总黄酮清除DPPH自由基和ABTS自由基的半抑制浓度(IC50)分别为718.96μg ·mL-1和64.43μg ·mL-1,而且对Fe3+具有一定的还原能力。试验结果表明,山楂叶总黄酮具有一定的抗氧化活性。本研究为山楂叶功能成分的进一步开发利用提供了科学依据和技术参考。
全 文 :摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊愿冤院员缘源苑 耀 员缘缘愿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园怨鄄圆怨摇 接受日期院圆园员缘鄄园员鄄园远
基金项目院公益性行业渊农业冤科研专项渊圆园员猿园猿园苑远冤
作者简介院弓威袁男袁主要从事农产品副产物综合利用研究遥 耘皂葬蚤造院早扎赠圆园园苑灶岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院王锋袁男袁副研究员袁主要从事农产品副产物综合利用研究遥 耘鄄皂葬蚤造院枣藻灶早憎葬灶早愿愿岳 泽燥澡怎援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园愿鄄员缘源苑鄄员圆
山楂叶有效成分提取工艺优化及抗氧化活性研究
弓摇 威摇 顾丰颖摇 贺摇 凡摇 王摇 锋
渊中国农业科学院农产品加工研究所 辕农业部农产品加工综合重点实验室袁北京摇 员园园员怨猿冤
摘摇 要院本试验以山楂叶为研究对象袁选取乙醇体积分数尧料液比尧提取时间尧提取温度为自变量袁总黄酮
得率为响应值袁进行四因素三水平的 月燥曾鄄月藻灶澡灶噪藻灶试验遥 利用响应面分析法优化山楂叶总黄酮超声提
取工艺袁并对山楂叶总黄酮清除 阅孕孕匀自由基尧粤月栽杂自由基能力及其还原力进行探讨遥 结果表明袁超声
波辅助乙醇提取山楂叶总黄酮的最佳工艺条件为乙醇体积分数 苑园豫 袁料液比 员颐 猿缘袁提取时间 猿怨皂蚤灶袁提
取温度 苑圆益袁在此工艺条件下总黄酮得率预测值为 圆怨郾 员怨愿 皂早窑早 原员袁实测值为 圆愿郾 怨怨员 皂早窑早 原员袁与理论预
测值的相对误差仅为 园郾 苑员豫 遥 山楂叶总黄酮清除 阅孕孕匀自由基和 粤月栽杂 自由基的半抑制浓度渊 陨悦缘园冤分
别为 苑员愿郾 怨远滋早窑皂蕴 原员和 远源郾 源猿滋早窑皂蕴 原员袁而且对 云藻猿 垣具有一定的还原能力遥 试验结果表明袁山楂叶总黄
酮具有一定的抗氧化活性遥 本研究为山楂叶功能成分的进一步开发利用提供了科学依据和技术参考遥
关键词院山楂叶曰总黄酮曰超声波曰响应面设计曰抗氧化
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园愿援 员缘源苑
摇 摇 山楂叶为蔷薇科山楂属植物山里红渊悦则葬贼葬早藻怎泽
孕蚤灶灶葬贼蚤枣蚤凿葬 月早藻援 灾葬则 酝葬躁燥则晕援 耘援 月则冤或山楂渊悦则葬贼葬早藻怎泽
孕蚤灶灶葬贼蚤枣蚤凿葬 月早藻援 冤的干燥叶袁富含黄酮类化合物袁目前
从山楂叶中分离出的黄酮类化合物已有 远园 余种遥 黄
酮类化合物具有抗炎尧抗氧化尧抗衰老尧抗癌防癌等功
效袁具有重要的药用价值袁成为近年来研究热点之
一咱员 原 猿暂 遥 吕德国等咱源暂研究表明山楂叶总黄酮含量在
员园 月末渊即果实采收后冤达到最高峰袁但通常在山楂果
实采摘完成后袁叶子被作为废弃物处理袁这在一定程度
上造成了资源的巨大浪费遥 提取山楂叶总黄酮袁既能
充分利用山楂树资源袁又能满足人们对功能食品日益
增长的消费需求遥
黄酮提取工艺的优劣直接影响其利用率袁传统提
取方法袁如水浸渍法尧溶剂萃取法尧回流提取法等提取
时间长尧溶剂消耗大尧提取率低袁且易造成污染袁已不能
满足现代工厂生产的需求遥 近年来超声辅助提取法广
泛应用于植物细胞破碎袁超声波辐射产生的空化效应尧
机械效应和热效应袁能快速破坏植物细胞袁加快黄酮类
成分的溶解袁能够最大程度提高总黄酮得率咱缘 原 愿暂 遥 该
方法可极大地缩短提取时间袁降低溶剂消耗袁提高生产
效率袁而且具有成本低袁操作简单袁无污染等优
点咱怨 原 员圆暂 遥 响应面法渊则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿燥造燥早赠冤是近
年来应用比较广泛的试验优化方法袁采用二次回归的
方法拟合各因素与响应值之间的关系袁通过回归方程
寻求最佳工艺参数咱员猿暂 遥 传统的正交试验已不能满足
工业生产中各条件参数的优化袁而响应面法则可以对
影响试验指标的各因素水平及交互作用进行优化和评
价袁可快速有效确定多因素系统的最佳条件袁该方法比
正交试验更为有效咱员源暂 袁目前尚未有利用响应面分析法
优化超声波辅助乙醇提取山楂叶总黄酮工艺的研究报
道遥
本文在单因素试验的基础上袁采用 月燥曾鄄月藻澡灶噪藻灶
试验设计及响应面分析法袁优化超声波辅助乙醇提取
山楂叶总黄酮的工艺条件曰其次通过测定山楂叶总黄
酮还原能力及自由基清除能力袁评价其抗氧化活性遥
本试验旨在提高山楂叶总黄酮得率袁探讨其抗氧化活
性袁深度挖掘山楂叶的经济价值袁为山楂叶中黄酮类物
质的研究及开发利用提供理论依据和技术参考遥
苑源缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料与试剂
山楂叶院圆园员猿 年 员园 月采于中国科学院植物研究
所袁洗净烘干备用遥
芦丁标准品尧员袁员 原二苯基 原 圆 原三硝基苯肼渊员袁员鄄
凿蚤责澡藻灶赠造鄄圆鄄责蚤糟则赠造澡赠凿则葬扎赠造袁阅孕孕匀冤 渊上海晶纯生化科技
股份有限公司冤曰圆袁圆忆 原联氮 原二渊猿 原乙基 原苯并噻唑
原 远 原 磺 酸 冤 二 铵 盐 咱 圆袁 圆忆鄄葬扎蚤灶燥鄄遭蚤泽 渊 猿鄄藻贼澡赠遭藻灶鄄
扎燥贼澡蚤葬扎燥造蚤灶藻鄄远鄄泽怎造枣燥灶蚤糟 葬糟蚤凿冤 凿蚤葬皂皂燥灶蚤怎皂 泽葬造贼袁 粤月栽杂暂尧
云藻猿 垣 原三吡啶三吖嗪渊 贼则蚤责赠则蚤凿赠造鄄贼则蚤葬扎蚤灶藻袁栽孕栽在冤 渊美国
杂蚤早皂葬公司冤曰无水乙醇尧甲醇尧亚硝酸钠尧氯化铝尧氢氧
化钠尧硫酸亚铁尧抗坏血酸等渊国药集团化学试剂北京
有限公司冤遥 以上化学试剂均为分析纯遥
员郾 圆摇 试验仪器
杂责藻糟贼则葬 酝葬曾 员怨 型酶标仪渊美国 酝燥造藻糟怎造葬则 阅藻增蚤糟藻泽
公司冤曰运匝 原 远园园阅灾 数控超声清洗器渊昆山市超声仪
器有限公司冤曰砸匀孕 原 员园园 高速多功能粉碎机渊浙江荣
浩工贸有限公司冤曰酝藻贼贼造藻则 酝耘圆园源 型电子天平渊上海梅
特勒 原托利多仪器有限公司冤曰砸耘 原 圆园园园耘 旋转蒸发
器渊上海亚荣生化仪器厂冤曰恒温水浴锅 匀匀 原 源渊杭州
蓝天化验仪器厂冤曰圆 原 源蕴杂悦 真空冷冻干燥机渊德国
悦澡则蚤泽贼公司冤遥
表 员摇 月燥曾鄄月藻澡灶噪藻灶 响应面设计试验因素与水平
栽葬遭造藻员摇 云葬糟贼燥则泽 葬灶凿 造藻增藻造泽 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 凿藻泽蚤早灶
水平
蕴藻增藻造
乙醇体积分数 粤
耘贼澡葬灶燥造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕 豫
料液比 月
杂燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥 辕 渊憎 辕 增冤
提取时间 悦
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 辕 皂蚤灶
提取温度 阅
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 辕 益
原 员 远园 员颐 猿园 猿园 远园
园 苑园 员颐 猿缘 源园 苑园
员 愿园 员颐 源园 缘园 愿园
员郾 猿摇 试验方法
员郾 猿郾 员摇 标准曲线的绘制摇 根据 匀藻则葬造凿等咱员缘暂方法并稍
加改进袁准确称取干燥至恒重的芦丁标准品 缘郾 园皂早袁用
甲醇完全溶解袁定容至 员园皂蕴袁即得质量浓度为 园郾 缘皂早窑
皂蕴 原员芦丁标准溶液袁采用倍比稀释法制备浓度为
园郾 圆缘尧园郾 员圆缘尧园郾 园远圆缘尧园郾 园猿员圆缘 皂早窑皂蕴 原员的芦丁标准液遥
精密吸取 缘园滋蕴 芦丁标准溶液袁加入 园郾 缘皂燥造窑蕴 原员
晕葬晕韵圆 溶液 圆园滋蕴袁静置 缘皂蚤灶曰加入 园郾 猿 皂燥造窑蕴 原员 粤造悦造猿
溶液 圆园滋蕴袁静置 远皂蚤灶曰最后加入 园郾 缘 皂燥造窑蕴 原员 晕葬韵匀溶
液 圆园园滋蕴袁在酶标仪中振荡 猿园泽袁以试剂空白作对照袁于
缘员园灶皂下测定吸光度遥 以芦丁质量浓度为横坐标袁吸
光度为纵坐标袁绘制标准曲线袁得到芦丁质量浓度 悦
渊皂早窑皂蕴 原员 冤与吸光度 粤 之间的回归方程为院 粤 越
员郾 缘猿怨怨悦 垣 园郾 园园远圆渊砸圆 越 园郾 怨怨怨愿冤遥
员郾 猿郾 圆摇 山楂叶总黄酮提取及测定摇 将山楂叶烘干尧粉
碎袁过 远园 目筛袁制备山楂叶粉末遥 准确称取 员郾 园园园早 山
楂叶粉末于 员园园皂蕴具塞三角瓶中袁以一定料液比加入
一定体积分数的乙醇溶液袁在一定温度下超声提取一
定时间后抽滤袁滤液转入 员园园皂蕴 容量瓶中袁用一定体
积分数乙醇溶液定容遥 然后按上述 员郾 猿郾 员 方法测定吸
光度袁计算总黄酮得率袁计算公式如下院
得率渊皂早窑早 原员冤 越 悦 伊 灾宰 渊员冤
式中院悦为粗提液总黄酮质量浓度渊皂早窑皂蕴 原员冤曰灾为粗
提液体积渊皂蕴冤曰宰为原料质量渊早冤遥
员郾 猿郾 猿摇 单因素试验 摇 选取乙醇体积分数 渊源园豫 耀
怨园豫 冤尧料液比渊员颐 员缘 耀 员颐 源园冤尧提取温度渊猿园 耀 愿园益冤尧
提取时间渊员园 耀 远园皂蚤灶冤尧超声功率渊猿园园 耀 远园园宰冤进行
单因素试验袁按照 员郾 猿郾 圆 方法测定总黄酮得率袁考察不
同因素对山楂叶总黄酮得率的影响袁每个处理重复 猿
次遥
员郾 猿郾 源摇 响应面优化试验设计摇 在单因素试验的基础
上袁运用 阅藻泽蚤早灶鄄耘曾责藻则贼软件袁根据 月燥曾鄄月藻澡灶噪藻灶 设计原
理袁选择乙醇体积分数渊粤冤尧料液比渊 月冤尧提取时间
渊悦冤尧提取温度渊阅冤源 个对黄酮提取影响显著的因素作
为响应因素袁以总黄酮得率为响应值袁设计四因素三水
平的响应面试验遥 试验设计如表 员遥
员郾 猿郾 缘摇 山楂叶总黄酮的纯化摇 在最优工艺条件下提
取山楂叶总黄酮袁旋蒸除醇袁缘 园园园则窑皂蚤灶 原员离心 员缘皂蚤灶袁
收集上清液遥 上清液以 圆皂蕴窑皂蚤灶 原员流速通过 粤月 原 愿
大孔树脂柱袁用蒸馏水洗至无色袁分别用 缘园园皂蕴 源园豫
乙醇和 苑园豫乙醇以 圆皂蕴窑皂蚤灶 原员流速洗脱袁合并洗脱
液袁真空浓缩袁冷冻干燥袁得到山楂叶总黄酮提取物袁纯
度为 猿园郾 源员豫 遥
员郾 猿郾 远摇 阅孕孕匀 自由基清除能力测定 摇 参照 酝燥造葬灶
等咱员远暂方法遥 准确吸取 员园滋蕴 不同浓度总黄酮提取液袁
然后加入 猿园园滋皂燥造窑蕴 原员阅孕孕匀溶液 圆园园滋蕴袁猿苑益下孵育
猿园皂蚤灶袁以 怨缘豫乙醇溶液作为空白对照袁在 缘员缘灶皂下测
愿源缘员
摇 愿 期 山楂叶有效成分提取工艺优化及抗氧化活性研究
定吸光度袁以抗坏血酸溶液作为阳性对照遥 根据以下
公式计算清除率院
清除率 越 渊员 原 粤杂粤园冤 伊 员园园豫 渊圆冤
式中院粤杂为加入总黄酮提取液后的吸光度曰粤园为空白
对照的吸光度遥
以清除率对样品浓度进行回归处理袁计算样品的
半数抑制浓度渊陨悦缘园冤值遥员郾 猿郾 苑 摇 粤月栽杂 自由基清除能力测定 摇 参照 砸燥遭藻则贼葬
等咱员苑暂方法袁取 苑郾 源 皂皂燥造窑蕴 原员粤月栽杂 溶液 猿园园滋蕴与等体
积 圆郾 远 皂皂燥造窑蕴 原员 运圆杂圆韵愿 混合袁室温尧黑暗下静置 员圆澡袁
用无水乙醇稀释一定倍数袁直至稀释液在 苑猿源灶皂 下吸
光度为 园郾 苑园园 依 园郾 园圆 时袁作为 粤月栽杂 反应液遥 吸取
圆园滋蕴不同浓度总黄酮提取液袁然后加入 圆愿园滋蕴 粤月栽杂
反应液袁猿园益下静置 缘皂蚤灶袁以无水乙醇作为空白对照袁
在 苑猿源灶皂下测定吸光度袁以抗坏血酸溶液作为阳性对
照遥 根据公式渊圆冤计算清除率袁以清除率对样品浓度
进行回归处理袁计算出样品的半数抑制浓度渊陨悦缘园冤值遥
员郾 猿郾 愿摇 还原能力测定渊云砸粤孕 法冤 摇 参照 月藻灶扎蚤藻 等咱员愿暂
方法袁将 猿园园 皂皂燥造窑蕴 原员 晕葬粤糟 缓冲溶液渊责匀 值 猿郾 远冤尧
员园 皂皂燥造窑蕴 原员 栽孕栽在 溶液和 圆园皂皂燥造窑蕴 原员 云藻悦造猿 溶液按
体积 员园颐 员颐 员混合配制 云砸粤孕溶液遥 吸取 圆园滋蕴不同浓
度总黄酮提取液袁加入 员猿园滋蕴 云砸粤孕溶液袁猿苑益下孵育
愿皂蚤灶袁以试剂空白作为对照袁在 缘怨猿灶皂 下测定吸光度遥
以不同摩尔浓度渊园 耀 缘园园滋皂燥造窑蕴 原员冤云藻杂韵源 绘制标准曲
线袁得到 云藻杂韵源 浓度 悦渊滋皂燥造窑蕴 原员冤与吸光度 粤之间的
线性回归方程为院 粤 越 园郾 园园员远悦 垣 园郾 园员苑猿 渊 砸圆 越
园郾 怨怨远缘冤遥 以抗坏血酸作为阳性对照袁样品的抗氧化
能力以 云藻杂韵源 浓度表示遥
员郾 源摇 数据分析
采用 杂孕杂杂 员苑郾 园 处理数据袁所有试验数据均为 猿
次重复试验的平均值遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 总黄酮测定方法考察
圆郾 员郾 员摇 精密度试验摇 园郾 圆缘皂早窑皂蕴 原员的芦丁标准液重
复测定 缘 次后袁相对标准偏差渊砸杂阅冤为 员郾 员愿豫 袁精密
度良好遥
圆郾 员郾 圆摇 重复性试验摇 取同一批山楂叶样品重复测定
缘 次后袁总黄酮得率的相对标准偏差渊砸杂阅冤为 圆郾 圆豫 袁
重复性良好遥
圆郾 员郾 猿摇 加标回收试验摇 含有芦丁标准品 缘郾 园皂早 的山
楂叶样品重复测定 缘 次后袁测得加标平均回收率为
员园缘郾 园苑豫 袁相对标准偏差渊砸杂阅冤为 员郾 园苑豫 遥
圆郾 圆摇 单因素试验结果
圆郾 圆郾 员摇 乙醇体积分数对山楂叶总黄酮得率的影响摇
由图 员 原 粤可知袁随着乙醇体积分数增大袁总黄酮得率
呈现先增加后降低的趋势袁在乙醇体积分数为 苑园豫时
达到最高点遥 根据相似相溶原理袁苑园豫乙醇溶液极性
与山楂叶黄酮极性相似袁可以使其充分溶于溶剂中从
而被提取出来咱员怨暂 遥 当乙醇体积分数较低时袁糖类尧蛋
白质等水溶性物质大量溶出曰当乙醇体积分数过高时袁
会增加叶绿素等脂溶性物质溶出袁这些成分会与黄酮
形成竞争袁与乙醇 原水分子体系结合袁影响黄酮类化合
物溶出袁降低得率咱圆园 原 圆员暂 遥 因此袁在响应面优化设计中
乙醇体积分数范围为 远园豫 耀愿园豫 遥
圆郾 圆郾 圆摇 提取温度对山楂叶总黄酮得率的影响摇 由图
员 原 月可知袁在 猿园 耀 苑园益范围内袁总黄酮得率随着温度
的升高而增加袁在 苑园益达到最高点袁继续升温总黄酮
得率稍有下降遥 经分析认为袁高温促使细胞壁的渗透
性增强袁增大黄酮类化合物的溶解度及扩散系数袁降低
溶剂粘度袁提高得率咱圆圆暂 遥 温度过高会引起黄酮类化合
物的氧化降解袁破坏黄酮结构袁同时高温容易造成溶剂
挥发损失及山楂叶中其它成分的大量溶出袁影响总黄
酮提取遥 因此袁在响应面优化设计中温度范围为 远园 耀
愿园益遥
圆郾 圆郾 猿摇 提取时间对山楂叶总黄酮得率的影响摇 由图
员 原 悦可知袁山楂叶总黄酮得率随着提取时间的延长先
升高后降低袁当提取时间为 源园皂蚤灶 时总黄酮得率达到
最大值遥 由 云蚤糟噪 扩散定律可知袁在一定范围内袁总黄
酮得率与提取时间成正比袁超声提取时间越长得率越
高袁但增长幅度逐渐降低咱圆猿暂 遥 然而长时间的超声处理
会破坏部分黄酮结构袁使一些热敏组分发生降解转化袁
降低总黄酮得率遥 因此袁响应面优化设计的提取时间
范围为 猿园 耀 缘园皂蚤灶遥
圆郾 圆郾 源摇 料液比对山楂叶总黄酮得率的影响 摇 由图 员
原 阅可知袁随着料液比的增大袁山楂叶总黄酮得率逐步
提高袁在料液比为 员颐 猿缘 时总黄酮得率达到最大值袁但
料液比继续增加时总黄酮得率下降袁这是由于当料液
比较低时袁总黄酮溶解不充分袁当增加料液比时可以提
高总黄酮的溶出率咱圆源暂 曰当料液比过大时袁提取液中的
总黄酮浓度减小袁导致植物细胞内外浓度差下降袁渗透
压降低袁影响总黄酮的溶出遥 因此袁响应面优化设计的
料液比范围为 员颐 猿园 耀 员颐 源园遥
圆郾 圆郾 缘摇 超声功率对山楂叶总黄酮得率的影响摇 由图
员 原 耘可知袁超声功率范围在 猿园园 耀 源愿园宰 内变化时袁总
黄酮得率呈上升趋势袁在 源愿园宰处出现最高值袁随后得
怨源缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
图 员摇 不同处理对山楂叶总黄酮得率的影响
云蚤早援 员摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 枣则燥皂 澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽
率下降遥 在一定超声功率范围内袁提高功率可以使空
化作用和机械效应加强袁有效破碎细胞壁袁加快分子扩
散速度及总黄酮溶出速率遥 当功率过高时袁部分黄酮
会在超声波的作用下发生降解或结构发生变化袁影响
总黄酮得率遥 利用 杂孕杂杂 员苑郾 园 软件进行方差分析袁结
果表明超声功率对总黄酮得率影响不显著遥
圆郾 猿摇 响应面优化试验
圆郾 猿郾 员摇 月燥曾鄄月藻澡灶噪藻灶设计结果与分析摇 单因素试验结
果表明袁最佳单因素条件为院乙醇体积分数 苑园豫 尧提取
温度 苑园益尧料液比 员 颐 猿缘尧提取时间 源园皂蚤灶尧超声功率
源愿园宰遥 因超声功率对黄酮得率影响不显著袁故固定超
声功率为 源愿园宰袁选择乙醇体积分数尧料液比尧提取时
间尧提取温度 源 个因素设计响应面试验渊表 圆冤遥
应用 阅藻泽蚤早灶鄄耘曾责藻则贼 软件进行二次多元回归拟合
分析袁得到提取条件与总黄酮得率之间的二次多项式
为院再 越 圆怨郾 园苑 垣 园郾 缘怨粤 垣 园郾 圆源月 原 园郾 员圆悦 垣 园郾 猿远阅 垣
园郾 员圆粤月 垣 园郾 园缘源粤悦 原 园郾 猿愿粤阅 垣 园郾 园缘员月悦 原 园郾 园愿源月阅
原 园郾 园员园悦阅 原 员郾 愿猿粤圆 原 园郾 远愿月圆 原 园郾 源圆悦圆 原 园郾 苑缘阅圆遥 式
中袁再为山楂叶总黄酮得率的预测值遥
由表 猿 可知袁整体回归模型具有高度显著性渊孕 约
园郾 园园园员冤袁失拟项不显著袁决定系数 砸圆 越 园郾 怨员圆远袁校正
系数 砸粤凿躁 圆 越 园郾 愿圆缘员袁说明方程对试验拟合良好袁试验
园缘缘员
摇 愿 期 山楂叶有效成分提取工艺优化及抗氧化活性研究
误差小袁可以用此模型对山楂叶总黄酮提取工艺进行
分析和预测遥 变异系数反映了模型的置信度袁悦灾值越
低袁说明模型的置信度越高咱圆缘暂 遥 本试验的 悦灾 值为
员郾 远远豫 袁表明置信度较高袁模型方程能够较好地反应真
实试验值袁可用此模型分析响应值的变化咱圆远暂 遥 回归方
程各项方差分析表明袁粤尧阅尧粤圆尧月圆尧悦圆尧阅圆 对山楂叶总
黄酮得率有显著的影响渊孕 约 园郾 园缘冤袁各交互作用不显
著袁各因素对山楂叶总黄酮得率的影响依次是 粤 跃 阅
跃 月 跃 悦遥
表 圆摇 响应面试验设计与结果
栽葬遭造藻 圆摇 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 凿藻泽蚤早灶 葬灶凿 则藻泽怎造贼泽
序号
悦燥凿藻
乙醇体积分数 粤
耘贼澡葬灶燥造
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕 豫
料液比 月
杂燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥渊憎 辕 增冤
提取时间 悦
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶
贼蚤皂藻 辕 皂蚤灶
提取温度 阅
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶
贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 辕 益
总黄酮得率
栽燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 赠蚤藻造凿 辕
渊皂早窑早 原员 冤
员 原 员郾 园园 原 员郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆远郾 圆圆远
圆 员郾 园园 原 员郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆苑郾 员猿园
猿 原 员郾 园园 员郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆缘郾 愿苑园
源 员郾 园园 员郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆苑郾 圆远猿
缘 园郾 园园 园郾 园园 原 员郾 园园 原 员郾 园园 圆苑郾 怨愿源
远 园郾 园园 园郾 园园 员郾 园园 原 员郾 园园 圆苑郾 缘怨远
苑 园郾 园园 园郾 园园 原 员郾 园园 员郾 园园 圆愿郾 猿猿缘
愿 园郾 园园 园郾 园园 员郾 园园 员郾 园园 圆苑郾 怨园苑
怨 原 员郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 原 员郾 园园 圆源郾 源源缘
员园 员郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 原 员郾 园园 圆远郾 愿愿怨
员员 原 员郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 员郾 园园 圆远郾 源源缘
员圆 员郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 员郾 园园 圆苑郾 猿愿苑
员猿 园郾 园园 原 员郾 园园 原 员郾 园园 园郾 园园 圆苑郾 源怨源
员源 园郾 园园 员郾 园园 原 员郾 园园 园郾 园园 圆愿郾 员源圆
员缘 园郾 园园 原 员郾 园园 员郾 园园 园郾 园园 圆苑郾 猿员园
员远 园郾 园园 员郾 园园 员郾 园园 园郾 园园 圆愿郾 员远园
员苑 原 员郾 园园 园郾 园园 原 员郾 园园 园郾 园园 圆远郾 愿猿远
员愿 员郾 园园 园郾 园园 原 员郾 园园 园郾 园园 圆苑郾 源缘猿
员怨 原 员郾 园园 园郾 园园 员郾 园园 园郾 园园 圆远郾 缘员员
圆园 员郾 园园 园郾 园园 员郾 园园 园郾 园园 圆苑郾 猿源缘
圆员 园郾 园园 原 员郾 园园 园郾 园园 原 员郾 园园 圆苑郾 园怨苑
圆圆 园郾 园园 员郾 园园 园郾 园园 原 员郾 园园 圆愿郾 园远圆
圆猿 园郾 园园 原 员郾 园园 园郾 园园 员郾 园园 圆苑郾 愿员远
圆源 园郾 园园 员郾 园园 园郾 园园 员郾 园园 圆愿郾 源源苑
圆缘 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆愿郾 远圆苑
圆远 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆怨郾 苑源圆
圆苑 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆怨郾 圆园远
圆愿 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆怨郾 园苑源
圆怨 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 园郾 园园 圆愿郾 愿员源
摇 摇 注院 员 耀 圆源 为析因试验袁圆缘 耀 圆怨 为中心试验遥
晕燥贼藻院员 耀 圆源 则藻责则藻泽藻灶贼泽 枣葬糟贼燥则蚤葬造 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽袁圆缘 耀 圆怨 则藻责则藻泽藻灶贼泽 糟藻灶贼则葬造 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽援
员缘缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
表 猿摇 回归方程系数显著性检验表
栽葬遭造藻 猿摇 栽藻泽贼 燥枣 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻 枣燥则 则藻早则藻泽泽蚤燥灶 藻择怎葬贼蚤燥灶 糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽
方差来源
杂燥怎则糟藻
自由度
凿枣
平方和
杂怎皂 燥枣 泽择怎葬则藻泽
均方
酝藻葬灶 泽择怎葬则藻
云值
云 增葬造怎藻
孕值
孕 增葬造怎藻
显著性
杂蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻
模型 酝燥凿藻造 猿园郾 缘缘园 员源 圆郾 员愿园 员园郾 源源园 约 园郾 园园园员 鄢鄢
粤 源郾 圆源园 员 源郾 圆源园 圆园郾 圆怨园 园郾 园园园缘 鄢鄢
月 园郾 远怨园 员 园郾 远怨园 猿郾 圆怨园 园郾 园怨员源
悦 园郾 员苑园 员 园郾 员苑园 园郾 愿园园 园郾 猿愿远愿
阅 员郾 缘圆园 员 员郾 缘圆园 苑郾 圆缘园 园郾 园员苑缘 鄢
粤月 园郾 园远园 员 园郾 园远园 园郾 圆怨园 园郾 远园员圆
粤悦 园郾 园员圆 员 园郾 园员圆 园郾 园缘远 园郾 愿员缘怨
粤阅 园郾 缘远园 员 园郾 缘远园 圆郾 苑园园 园郾 员圆圆愿
月悦 园郾 园员园 员 园郾 园员园 园郾 园源怨 园郾 愿圆愿源
月阅 园郾 园圆愿 员 园郾 园圆愿 园郾 员猿园 园郾 苑圆园源
悦阅 源郾 园园园 伊 员园 原 源 员 源郾 园园园 伊 员园 原 源 员郾 怨员猿 伊 员园 原猿 园郾 怨远缘苑
粤圆 圆员郾 远远园 员 圆员郾 远远园 员园猿郾 远圆园 约 园郾 园园园员 鄢鄢
月圆 圆郾 怨远园 员 圆郾 怨远园 员源郾 员缘园 园郾 园园圆员 鄢鄢
悦圆 员郾 员源 员 员郾 员源园 缘郾 源猿园 园郾 园猿缘圆 鄢
阅圆 猿郾 远远园 员 猿郾 远远园 员苑郾 缘员园 园郾 园园园怨 鄢鄢
残差 砸藻泽蚤凿怎葬造 圆郾 怨猿园 员源 园郾 圆员园
失拟性 蕴葬糟噪 燥枣 枣蚤贼 圆郾 圆园园 员园 园郾 圆圆园 员郾 圆员园 园郾 源远源员
纯误差 孕怎则藻 藻则则燥则 园郾 苑猿园 源 园郾 员愿园
总离差 悦燥则 贼燥贼葬造 猿猿郾 源苑园 圆愿
砸圆 园郾 怨员圆远
砸圆粤凿躁 园郾 愿圆缘员
摇 摇 注院鄢 表示差异显著渊孕 约 园郾 园缘冤袁鄢鄢表示差异极显著渊孕 约 园郾 园员冤遥
晕燥贼藻院鄢 皂藻葬灶泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 葬贼 园郾 园缘 造藻增藻造袁鄢鄢藻曾贼则藻皂藻造赠 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 葬贼 园郾 园员 造藻增藻造援
圆郾 猿郾 圆摇 双因素交互作用分析摇 图 圆 耀图 苑 为乙醇体
积分数尧料液比尧提取时间和提取温度任意 圆 个因素取
零水平时袁其余 圆 个因素对山楂叶总黄酮得率的影响袁
圆 个因素的交互作用可由响应面三维立体图直观地反
映出来咱圆苑 原 圆愿暂 遥 等高线与因素坐标轴交点数越多袁则该
因素对总黄酮得率影响越显著袁即为主效应因素咱圆怨暂 遥
由图 圆 可知袁当料液比不变时袁随着乙醇体积分数的增
大袁总黄酮得率呈现先增加后降低的趋势袁表现为曲线
较陡曰当乙醇体积分数不变时袁料液比对总黄酮得率的
影响呈现先增大后减小的趋势袁但趋势不明显遥 由等
高线图可知袁乙醇体积分数对总黄酮得率的影响比料
液比更显著遥
由图 猿 可知袁当乙醇体积分数不变时袁提取时间对
总黄酮得率影响不明显袁表现为曲线较平缓曰当提取时
间不变时袁乙醇体积分数对总黄酮得率的影响呈现先
增大后降低的趋势袁变化较为显著遥 由等高线图可知袁
乙醇体积分数对总黄酮得率影响较为明显遥
由图 源 可知袁当提取温度不变时袁随着乙醇体积分
数的增大袁总黄酮得率先升高后降低袁曲面较陡曰当乙
醇体积分数不变时袁随着提取温度的升高袁总黄酮得率
逐渐增大袁之后趋于平缓遥 与提取温度相比袁乙醇体积
分数对总黄酮得率影响更为显著遥
由图 缘 可知袁当提取时间一定时袁随着料液比的升
高袁总黄酮得率逐渐增大袁当料液比在 员颐 猿缘 附近时袁得
率达到最高袁之后稍有下降曰当料液比一定时袁随着提
取时间的延长袁总黄酮得率先升高后降低袁变化趋势不
明显遥 与提取时间相比袁料液比的主效应大于提取时
间遥
由图 远 可知袁当提取温度不变时袁料液比对总黄酮
得率的影响呈现先增大后减小的趋势曰当料液比不变
时袁提取温度对总黄酮得率的影响与料液比类似遥 由
其对应的等高线图可知袁两者对总黄酮得率的影响相
圆缘缘员
摇 愿 期 山楂叶有效成分提取工艺优化及抗氧化活性研究
图 圆摇 乙醇体积分数和料液比对总黄酮得率的影响
云蚤早援 圆摇 耘贼澡葬灶燥造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 泽燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽
图 猿摇 乙醇体积分数和提取时间对总黄酮得率的影响
云蚤早援 猿摇 耘贼澡葬灶燥造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽
差不大遥
由图 苑 可知袁当提取温度一定时袁随着提取时间的
延长袁总黄酮得率变化不明显袁表现为曲面坡度较平
缓曰当提取时间一定时袁随着提取温度的升高袁总黄酮
得率逐渐增大袁之后稍有下降遥 与提取时间相比袁提取
温度为影响总黄酮得率的主要因素遥
在各因素所选的水平范围内响应值均存在最高
点遥 通过 阅藻泽蚤早灶鄄耘曾责藻则贼软件最优化分析后袁得到超声
波辅助乙醇提取山楂叶总黄酮的最佳工艺条件为院乙
醇体积分数 苑员郾 源苑豫 袁料液比 员颐 猿缘郾 愿苑尧提取时间
猿愿郾 苑愿皂蚤灶袁提取温度 苑员郾 怨员益渊图 圆 耀图 苑冤遥
圆郾 猿郾 猿摇 提取工艺优化及验证摇 结合生产实际的可操
作性袁将响应面优化分析所得到的各因素理论最优值
调整为院乙醇体积分数 苑园豫 尧料液比 员 颐 猿缘尧提取时间
猿怨皂蚤灶尧提取温度 苑圆益遥 在此条件下进行试验验证袁总
黄酮平均得率为 圆愿郾 怨怨员皂早窑早 原员袁与理论预测值 圆怨郾 员怨愿
皂早窑早 原员高度相符袁误差值仅为 园郾 苑员豫 袁证实了该模型
的有效性遥
圆郾 猿郾 源摇 提取工艺对比分析摇 由于山楂叶品种尧采集日
期以及生长环境等因素都会对总黄酮含量的测定产生
影响袁且相关文献中的数据差异较大袁不利于提取方法
的比较咱猿园 原 猿员暂 遥 因此本试验分别按照超声波辅助提取
法尧乙醇回流提取法咱猿园暂 尧普通浸提法咱猿员暂的工艺条件提
取山楂叶总黄酮袁比较不同提取方法的优劣遥 由表 源
可知袁超声波辅助提取法明显优于乙醇回流提取法和
普通浸提法袁差异极显著渊孕 约园郾 园员冤袁总黄酮得率比乙
猿缘缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
图 源摇 乙醇体积分数和提取温度对总黄酮得率的影响
云蚤早援 源摇 耘贼澡葬灶燥造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽
图 缘摇 提取时间和料液比对总黄酮得率的影响
云蚤早援 缘摇 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 葬灶凿 泽燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽
图 远摇 提取温度和料液比对总黄酮得率的影响
云蚤早援 远摇 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 葬灶凿 泽燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽
源缘缘员
摇 愿 期 山楂叶有效成分提取工艺优化及抗氧化活性研究
图 苑摇 提取温度和提取时间对总黄酮得率的影响
云蚤早援 苑摇 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 葬灶凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽
表 源摇 不同提取法对山楂叶总黄酮得率的影响
栽葬遭造藻 源摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿 燥灶 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 赠蚤藻造凿 枣则燥皂 澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽
提取方法
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶
皂藻贼澡燥凿
乙醇体积分数 粤
耘贼澡葬灶燥造
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕 豫
料液比 月
杂燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿
则葬贼蚤燥渊憎 辕 增冤
提取温度 悦
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶
贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 辕 益
提取时间 阅
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶
贼蚤皂藻 辕 皂蚤灶
总黄酮得率
栽燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 赠蚤藻造凿 辕
渊皂早窑早 原员 冤
超声波辅助提取法
哉造贼则葬泽燥灶蚤糟鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿 苑园 员颐 猿缘 苑圆 猿怨 圆愿郾 怨怨员 依 园郾 缘园愿
乙醇回流法
耘贼澡葬灶燥造 则藻枣造怎曾蚤灶早 苑园 员颐 猿园 远源 猿源 圆园郾 苑愿愿 依 园郾 缘园怨
普通浸提法
杂贼藻藻责蚤灶早 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 苑园 员颐 猿缘 圆缘 苑圆园 员缘郾 员园苑 依 园郾 圆苑猿
醇回流提取法提高了 猿怨郾 园豫 袁比普通浸提法提高了
怨员郾 怨豫 遥 由此可见袁超声波辅助提取法是一种非常有
效的提取黄酮类化合物的技术袁利用响应面法优化得
到的提取工艺可大大提高山楂叶总黄酮得率遥
圆郾 源摇 山楂叶总黄酮的抗氧化分析
圆郾 源郾 员摇 阅孕孕匀自由基清除能力摇 阅孕孕匀 自由基是一种
相对稳定的自由基袁常作为抗氧化能力的评价指
标咱猿圆暂 遥 山楂叶总黄酮对 阅孕孕匀 自由基清除能力测定
结果如图 愿 所示遥 提取物对 阅孕孕匀自由基的清除率与
其浓度呈正量效关系袁即随着质量浓度的增大袁对
阅孕孕匀自由基清除能力也增大遥 当山楂叶总黄酮质量
浓度在 远圆郾 缘 耀 圆缘园滋早窑皂蕴 原员时袁随着质量浓度的增加袁
其对 阅孕孕匀 自由基清除能力增长较快曰当质量浓度在
圆缘园 耀 员 园园园滋早窑皂蕴 原员时袁其对 阅孕孕匀自由基清除能力增
长较慢遥 方差分析表明袁不同浓度的提取物清除
阅孕孕匀自由基能力存在显著性差异渊孕 约 园郾 园员冤曰浓度相
同时袁山楂叶总黄酮与抗坏血酸存在显著性差异渊孕 约
园郾 园员冤遥 在相同的质量浓度下袁山楂叶总黄酮对 阅孕孕匀
自由基的清除率低于抗坏血酸对自由基的清除率遥 当
图 愿摇 山楂叶总黄酮 阅孕孕匀自由基清除能力
云蚤早援 愿摇 阅孕孕匀 则葬凿蚤糟葬造 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 糟葬责葬糟蚤贼蚤藻泽 燥枣
贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 赠蚤藻造凿 枣则燥皂 澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽
质量浓度为 员 园园园滋早窑皂蕴 原员时袁山楂叶总黄酮清除率为
远园郾 猿源豫 袁抗坏血酸清除率为 苑苑郾 苑苑豫 遥 两者的 陨悦缘园值
分别为 苑员愿郾 怨远滋早窑皂蕴 原员和 猿远园郾 猿苑滋早窑皂蕴 原员袁由此可知
山楂叶总黄酮具有一定的 阅孕孕匀自由基清除能力遥
圆郾 源郾 圆摇 粤月栽杂自由基清除能力摇 粤月栽杂 自由基是由过
缘缘缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
硫酸钾氧化 粤月栽杂 产生的一种自由基袁当体系中存在
氢供体的抗氧化剂时袁粤月栽杂 自由基会因发生还原反
应而褪色咱员苑暂 遥 山楂叶总黄酮对 粤月栽杂 自由基清除能
力测定结果见图 怨遥 提取物对 粤月栽杂 自由基的清除率
与其浓度呈正量效关系袁即随着质量浓度的增大袁对
粤月栽杂自由基清除能力也增大遥 方差分析表明袁不同
浓度的提取物清除 粤月栽杂自由基能力存在显著性差异
渊孕 约 园郾 园员 冤遥 当山楂叶总黄酮质量浓度为 圆园园
滋早窑皂蕴 原员时袁对 粤月栽杂 自由基清除率为 怨猿郾 愿员豫 曰当抗
坏血酸质量浓度为 远园滋早窑皂蕴 原员时袁对 粤月栽杂 自由基清
除率为 怨猿郾 愿愿豫 遥 两者的 陨悦缘园值分别为 远源郾 源猿滋早窑皂蕴 原员
和 员缘郾 缘园滋早窑皂蕴 原员袁说明山楂叶总黄酮具有一定的
粤月栽杂自由基清除能力遥
表 缘摇 山楂叶总黄酮还原力测定结果
栽葬遭造藻 缘摇 栽澡藻 则藻凿怎糟蚤灶早 葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 枣则燥皂 澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽 辕 渊滋皂燥造窑蕴 原员冤
质量浓度
酝葬泽泽 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
云藻杂韵源 浓度悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 云藻杂韵源
山楂叶总黄酮
栽燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 燥枣 澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽
抗坏血酸
粤泽糟燥则遭蚤糟 葬糟蚤凿
猿园 愿怨郾 园苑远 依 园郾 苑猿苑 圆圆圆郾 远愿员 依 员郾 远园猿
源园 员苑远郾 源缘员 依 园郾 远源猿 猿缘猿郾 苑缘苑 依 员郾 苑缘苑
缘园 圆苑圆郾 怨苑怨 依 圆郾 园园员 源愿员郾 圆苑愿 依 员郾 远圆缘
图 怨摇 山楂叶总黄酮 粤月栽杂自由基清除能力
云蚤早援 怨摇 粤月栽杂 则葬凿蚤糟葬造 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 糟葬责葬糟蚤贼蚤藻泽 燥枣
贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 赠蚤藻造凿 枣则燥皂 澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽
圆郾 源郾 猿摇 还原力摇 还原力较强的抗氧化剂可以很好的
提供电子袁其供应的电子可以将 云藻猿 垣还原成 云藻圆 垣 袁还
原力的高低可以间接反应抗氧化能力的强弱遥 山楂叶
总黄酮还原力测定结果见表 缘袁随着山楂叶总黄酮质
量浓度的增加袁还原能力不断提高遥 方差分析表明袁不
同浓度提取物的还原力存在显著性差异渊孕 约 园郾 园员冤遥
在相同质量浓度水平下袁对照组抗坏血酸还原力显著
高于山楂叶总黄酮样品组渊孕 约 园郾 园员冤袁说明山楂叶总
黄酮还原能力弱于抗坏血酸袁但仍然表现出一定的还
原能力遥
猿摇 讨论
人体中产生的自由基往往会导致某些疾病的发
生袁严重影响人类健康袁目前使用的抗氧化剂大多是化
学合成物袁存在一定的安全隐患袁因此寻求天然抗氧化
剂成为当今研究热点之一咱猿猿暂 遥 通过优化提取工艺获
可得更高产量的天然抗氧化剂遥
植物叶总黄酮的提取主要以乙醇为溶剂袁常用的
方法有回流法尧浸提法尧微波法等遥 姜少娟等咱猿源暂利用
超声波辅助乙醇 原乙酸乙酯溶液提取沙棘叶总黄酮袁
提取率高达 怨郾 员苑豫 袁优于回流提取法曰吴华勇等咱猿缘暂利
用响应面法优化竹叶总黄酮袁提取率达 圆郾 园愿豫 袁比正
交最优工艺的提取率提高 圆园豫 遥 周海旭等咱猿远暂采用回
流法对山楂叶总黄酮进行响应面优化袁回流提取 员澡后
总黄酮得率仅为 苑郾 源源皂早窑早 原员遥 刘通等咱猿苑暂通过微波辅
助提取山楂叶总黄酮袁得率为 苑郾 源怨皂早窑早 原员遥 利用本试
验优化所得的结果提取总黄酮袁实际得率高达 圆愿郾 怨怨员
皂早窑早 原员遥本试验与前人研究结果有一定差异袁可能与
山楂叶品种尧采集时间及生长环境等有关遥 通过对比
试验可知袁利用超声波辅助提取可达到更高的得率袁在
工业化生产中可大大提高生产效率遥 刘荣华等咱猿愿暂研
究表明山楂叶总黄酮对超氧阴离子具有较强的清除能
力袁其中分离得到的芦丁尧槲皮素尧金丝桃苷尧牡荆素尧
槲皮素 原猿 原 韵 原 茁 原 阅葡萄糖苷 缘 种黄酮类化合物清
除能力均强于抗坏血酸遥 叶希韵等咱猿怨暂研究表明山楂
叶提取物能够降低溶血磷脂先胆碱和黄嘌呤氧化酶对
血管内皮细胞的损伤袁从而起到保护细胞的作用遥 本
远缘缘员
摇 愿 期 山楂叶有效成分提取工艺优化及抗氧化活性研究
试验结果显示山楂叶总黄酮具有一定的清除自由基能
力袁但弱于抗坏血酸袁这是因为经过大孔树脂纯化后的
山楂叶总黄酮含量仅为 猿园郾 源员豫 袁纯度不高遥 因此袁若
要确切了解山楂叶总黄酮清除自由基能力袁必须将山
楂叶总黄酮进一步纯化袁进行更深层次的研究遥
源摇 结论
本研究利用响应面设计法优化山楂总黄硐超声辅
助乙醇提取工艺条件袁得出最佳工艺为院乙醇体积分数
苑园豫 尧料液比 员 颐 猿缘尧提取时间 猿怨皂蚤灶尧提取温度 苑圆益遥
在此条件下实际测定的总黄酮得率可达 圆愿郾 怨怨员 皂早窑
早 原员袁与模型预测值 圆怨郾 员怨愿皂早窑早 原员高度相符袁表明该模
型能较好地预测实际得率袁在实际应用中具有一定的
参考价值遥
山楂叶总黄酮在一定浓度范围内具有还原能力袁
且对 阅孕孕匀自由基尧粤月栽杂自由基均具有较好的清除效
果袁陨悦缘园分别为 苑员愿郾 怨远滋早窑皂蕴 原员和 远源郾 源猿滋早窑皂蕴 原员遥 结
果表明山楂叶总黄酮具有一定的抗氧化活性遥
参考文献院
咱 员 暂摇 汪晓鸣袁刘超袁曹磊袁李珂昕援山楂黄酮提取物对辐照肉糜脂肪氧
化的抑制能力咱允暂 援 核农学报袁圆园员员袁圆缘渊猿冤院缘员源 原 缘员苑
咱 圆 暂 摇 运燥燥噪 杂 匀袁 杂燥灶 再 韵袁 允葬灶早 再 杂援 陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 燥枣 糟鄄允怎灶 晕鄄贼藻则皂蚤灶葬造
噪蚤灶葬泽藻 泽藻灶泽蚤贼蚤扎藻泽 贼怎皂燥则 糟藻造造泽 贼燥 枣造葬增燥灶燥蚤凿鄄蚤灶凿怎糟藻凿 葬责燥责贼燥泽蚤泽 贼澡则燥怎早澡
凿燥憎灶鄄则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 允怎灶阅咱允暂 援 栽燥曾蚤糟燥造燥早赠 葬灶凿 粤责责造蚤藻凿 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠袁
圆园园愿袁圆圆苑渊猿冤院源远愿 原 源苑远
咱 猿 暂摇 王军妮袁黄艳红袁牟志美袁王彦文援植物次生代谢物黄酮类化合物
的研究进展咱允暂 援 蚕业科学袁圆园园苑袁猿猿渊猿冤院源怨怨 原 缘园缘
咱 源 暂摇 吕德国袁李志霞袁鲁巍巍袁秦嗣军援山楂叶黄酮提取工艺优化及周
年积累动态和分布特性的研究咱允暂 援吉林农业大学学报袁圆园员园袁猿圆
渊猿冤院圆苑员 原 圆苑远
咱 缘 暂摇 徐怀德袁闫宁环袁陈伟袁刘丽芳援黑莓原花青素超声波辅助提取优
化及抗氧化性研究咱允暂 援 农业工程学报袁圆园园愿袁圆源渊圆冤院圆远源 原 圆远怨
咱 远 暂 摇 孕葬灶 郧袁 再怎 郧袁 在澡怎 悦袁 匝蚤葬燥 允援 韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 怎造贼则葬泽燥怎灶凿鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿
藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 渊 哉粤耘冤 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 糟燥皂责燥怎灶凿泽 渊 云悦冤 枣则燥皂 澡葬憎贼澡燥则灶
泽藻藻凿 渊匀杂冤 咱 允暂 援 哉造贼则葬泽燥灶蚤糟泽 杂燥灶燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园员圆袁员怨 渊猿冤院源愿远 原
源怨园
咱 苑 暂摇 董华强袁宁正祥袁崔志新袁李琳袁于立静袁林丽超援微波辅助提取多
穗柯嫩叶黄酮工艺研究咱允暂 援 农业工程学报袁圆园园苑袁圆猿渊圆冤院圆员猿 原
圆员苑
咱 愿 暂摇 梁艳袁应苗苗袁吕英华袁陆仙英袁张英援 微波辅助提取仙人掌多糖
的工艺研究咱允暂 援农业工程学报袁圆园园远袁圆圆渊苑冤院员缘怨 原 员远圆
咱 怨 暂 摇 王文昕袁董全援 响应面法优化超声辅助提取花生红衣多酚工艺
咱允暂 援食品科学袁圆园员圆袁猿猿渊圆圆冤院员 原 缘
咱员园暂摇 宰葬灶早 允袁 杂怎灶 月袁 悦葬燥 再袁 栽蚤葬灶 再袁 蕴蚤 载援 韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 怎造贼则葬泽燥怎灶凿鄄
葬泽泽蚤泽贼藻凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 燥枣 责澡藻灶燥造蚤糟 糟燥皂责燥怎灶凿泽 枣则燥皂 憎澡藻葬贼 遭则葬灶 咱 允暂 援
云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁圆园园愿袁 员园远渊圆冤院愿园源 原 愿员园
咱员员暂摇 在澡葬灶早 匀 云袁 再葬灶早 载 匀袁 在澡葬燥 蕴 阅援 哉造贼则葬泽燥灶蚤糟鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 燥枣
藻责蚤皂藻凿蚤灶 悦 枣则燥皂 枣则藻泽澡 造藻葬增藻泽 燥枣 耘责蚤皂藻凿蚤怎皂 葬灶凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶
皂藻糟澡葬灶蚤泽皂咱允暂 援 陨灶灶燥增葬贼蚤增藻 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻 驭 耘皂藻则早蚤灶早 栽藻糟澡灶燥造燥早蚤藻泽袁
圆园园怨袁员园渊员冤院缘源 原 远园
咱员圆暂摇 在澡葬灶早 匝 粤袁 在澡葬灶早 在 匝袁 再怎藻 载 云援 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 燥责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣
怎造贼则葬泽燥怎灶凿鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿 燥蚤造 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 枣则燥皂 葬怎贼燥糟造葬增藻凿 葬造皂燥灶凿 责燥憎凿藻则
咱允暂 援 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁圆园园怨袁员员远渊圆冤院缘员猿 原 缘员愿
咱员猿暂摇 蔡为荣袁顾小红袁汤坚援仙人掌皮黄酮提取工艺优化咱 允暂 援农业工
程学报袁圆园园愿袁圆源渊远冤院圆怨怨 原 猿园猿
咱员源暂摇 田东袁袁其朋袁孙新晓袁申晓琳援 响应面法优化多粘菌素 月 的发
酵条件咱允暂 援中国农学通报袁圆园员园袁圆远渊员缘冤院缘猿 原 缘苑
咱员缘暂摇 匀藻则葬造凿 栽 允袁 郧葬凿早蚤造 孕袁 栽蚤造造藻赠 酝援 匀蚤早澡鄄贼澡则燥怎早澡责怎贼 皂蚤糟则燥 责造葬贼藻 葬泽泽葬赠泽
枣燥则 泽糟则藻藻灶蚤灶早 枣造葬增燥灶燥蚤凿 糟燥灶贼藻灶贼 葬灶凿 阅孕孕匀鄄泽糟葬增藻灶早蚤灶早 葬糟贼蚤增蚤贼赠 蚤灶
泽燥则早澡怎皂 遭则葬灶 葬灶凿 枣造燥怎则 咱 允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 贼澡藻 杂糟蚤藻灶糟藻 燥枣 云燥燥凿 葬灶凿
粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁圆园员圆袁怨圆渊员员冤院圆猿圆远 原 圆猿猿员
咱员远暂摇 酝燥造葬灶 粤 蕴袁 云造葬灶葬早葬灶 允袁 宰藻蚤 宰援 杂藻造藻灶蚤怎皂鄄糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 早则藻藻灶 贼藻葬 澡葬泽
澡蚤早澡藻则 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬灶凿 责则藻遭蚤燥贼蚤糟 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 贼澡葬灶 则藻早怎造葬则 早则藻藻灶 贼藻葬 咱允暂 援
云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园怨袁员员源渊猿冤院愿圆怨 原 愿猿缘
咱员苑暂摇 砸燥遭藻则贼葬 砸袁 孕藻造造藻早则蚤灶蚤 晕袁 孕则燥贼藻早早藻灶贼藻 粤援 粤灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠
葬责责造赠蚤灶早 葬灶 蚤皂责则燥增藻凿 粤月栽杂 则葬凿蚤糟葬造 糟葬贼蚤燥灶 凿藻糟燥造燥则蚤扎葬贼蚤燥灶 葬泽泽葬赠 咱允暂 援
云则藻藻 砸葬凿蚤糟葬造 月蚤燥造燥早赠 葬灶凿 酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁 员怨怨怨袁圆远渊怨 辕 员园冤院员圆猿员 原 员圆猿苑
咱员愿暂摇 月藻灶扎蚤藻 陨 云 云袁 杂贼则葬蚤灶 允 允援 栽澡藻 枣藻则则蚤糟 则藻凿怎糟蚤灶早 葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 责造葬泽皂葬
渊云砸粤孕冤 葬泽 葬 皂藻葬泽怎则藻 燥枣 野葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 责燥憎藻则冶院 贼澡藻 云砸粤孕 葬泽泽葬赠咱允暂 援
粤灶葬造赠贼蚤糟葬造 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 员怨怨远袁圆猿怨渊员冤院苑园 原 苑远
咱员怨暂摇 冯进袁曾晓雄袁李春阳援响应面法优化蓝莓叶多酚提取工艺咱 允暂 援
食品科学袁圆园员猿袁猿源渊源冤院 缘怨 原 远源
咱圆园暂摇 王昌涛袁孙啸涛袁周雪援 响应面分析法优化雪灵芝黄酮提取工艺
咱允暂 援食品科学袁圆园员猿袁猿源渊员源冤院怨员 原 怨缘
咱圆员暂摇 再葬灶早 蕴袁 允蚤葬灶早 允 郧袁 蕴蚤 宰 云援 韵责贼蚤皂怎皂 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 责则燥糟藻泽泽 燥枣
责燥造赠责澡藻灶燥造泽 枣则燥皂 贼澡藻 遭葬则噪 燥枣 孕澡赠造造葬灶贼澡怎泽 藻皂遭造蚤糟葬 蕴援 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻
则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿燥造燥早赠 咱 允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 杂藻责葬则葬贼蚤燥灶 杂糟蚤藻灶糟藻袁
圆园园怨袁猿圆渊怨冤院员源猿苑 原 员源源源
咱圆圆暂摇 李珍袁哈益明袁李安袁李伟明袁王锋袁李庆鹏援响应面优化苹果皮渣
多酚超声提取工艺研究咱允暂 援 中国农业科学袁圆园员猿袁源远渊圆员冤院源缘远怨
原 源缘苑苑
咱圆猿暂摇 再怎藻 栽袁 杂澡葬燥 阅袁 再怎葬灶 再袁 宰葬灶早 在 蕴袁 匝蚤葬灶早 悦 再援 哉造贼则葬泽燥怎灶凿鄄
葬泽泽蚤泽贼藻凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶袁 匀孕蕴悦 葬灶葬造赠泽蚤泽袁 葬灶凿 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣
责燥造赠责澡藻灶燥造泽 枣则燥皂 怎灶则蚤责藻 葬责责造藻咱 允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 杂藻责葬则葬贼蚤燥灶 杂糟蚤藻灶糟藻袁
圆园员圆袁猿缘渊员远冤院圆员猿愿 原 圆员源缘
咱圆源暂摇 李芳亮袁高杨袁王锐袁孙彦芳袁杨腾飞援 响应面优化微波辅助提取
糜米多糖工艺咱允暂 援食品科学袁圆园员圆袁猿猿渊圆园冤院源远 原 缘园
咱圆缘暂摇 张群飞袁徐大纶袁杨文鸽援 响应面法优化碱性蛋白酶酶解虾籽的
工艺条件咱允暂 援核农学报袁圆园员源袁圆愿渊缘冤院愿苑远 原 愿愿圆
咱圆远暂摇 岳瑞雪袁孙健袁钮福祥袁徐飞袁朱红援 响应面分析法优化甘薯乙醇
发酵条件咱允暂 援核农学报袁圆园员源袁圆愿渊愿冤院员源园园 原 员源园远
咱圆苑暂摇 杂蚤灶 匀 晕袁 再怎泽燥枣 杂袁 粤遭凿怎造 匀葬皂蚤凿 晕 杂援 韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 澡燥贼 憎葬贼藻则
藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 枣燥则 泽葬责燥凿蚤造造葬 躁怎蚤糟藻 怎泽蚤灶早 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿燥造燥早赠咱允暂 援
允燥怎则灶葬造 燥枣 云燥燥凿 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早袁圆园园远袁苑源渊猿冤院猿缘圆 原 猿缘愿
咱圆愿暂摇 阅藻澡早澡葬灶 原 杂澡燥葬则 在袁 匀葬则凿葬糟则藻 粤 运袁 酝藻藻则凿蚤灶噪 郧袁 月则藻灶灶葬灶 悦援
蕴赠糟燥责藻灶藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 枣则燥皂 藻曾贼则怎凿藻凿 责则燥凿怎糟贼泽 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 贼燥皂葬贼燥 泽噪蚤灶
咱允暂 援 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 允燥怎则灶葬造 燥枣 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻 驭 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁圆园员员袁源远
渊圆冤院猿远缘 原 猿苑员
苑缘缘员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员缘袁圆怨渊愿冤院员缘源苑 耀 员缘缘愿
咱圆怨暂摇 再蚤 悦袁 杂澡蚤 允袁 载怎藻 杂 允袁 允蚤葬灶早 再 酝袁 蕴蚤 阅援 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 泽怎责藻则糟则蚤贼蚤糟葬造
枣造怎蚤凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 责葬则葬皂藻贼藻则泽 燥灶 造赠糟燥责藻灶藻 赠蚤藻造凿 葬灶凿 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠
咱允暂 援 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁圆园园怨袁 员员猿渊源冤院员园愿愿 原 员园怨源
咱猿园暂摇 施红林袁黄琦袁褚沈佳援 响应面分析法优化山楂叶中黄酮的提取
工艺咱允暂 援浙江科技学院学报袁圆园员源袁圆远渊猿冤院员远缘 原 员苑员
咱猿员暂摇 杨云援中药化学成分提取手册咱酝暂援 北京院中国中医药出版社袁
员怨怨愿
咱猿圆暂摇 杂 佗灶糟澡藻扎鄄酝燥则藻灶燥 悦援 砸藻增蚤藻憎院 酝藻贼澡燥凿泽 怎泽藻凿 贼燥 藻增葬造怎葬贼藻 贼澡藻 枣则藻藻
则葬凿蚤糟葬造 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 葬糟贼蚤增蚤贼赠 蚤灶 枣燥燥凿泽 葬灶凿 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 泽赠泽贼藻皂泽 咱允暂 援 云燥燥凿
杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造袁 圆园园圆袁 愿渊猿冤院 员圆员 原 员猿苑
咱猿猿暂摇 温建丰袁杨文鸽袁徐大纶援 响应面法优化花蟹肉制备抗氧化肽的
酶解工艺咱允暂 援核农学报袁圆园员猿袁圆苑渊员圆冤院员愿愿员 原 员愿愿远
咱猿源暂摇 姜少娟袁马养民袁孔东宁袁史清华袁傅建熙援 超声波法提取沙棘果
渣中总黄酮的最佳工艺研究咱 允暂 援 西北农林科技大学学报院自然
科学版袁圆园园远袁猿源渊员园冤院员愿源 原 员愿愿
咱猿缘暂摇 吴华勇袁黄赣辉袁顾振宇袁董婧袁余飞援 响应曲面法优化竹叶总黄
酮的提取工艺研究咱允暂 援食品科学袁圆园园愿袁圆怨渊员员冤院员怨远 原 圆园园
咱猿远暂摇 周海旭袁高晗袁曲良苗袁李忠海援响应面法优化山楂叶中黄酮提取
工艺咱允暂 援河南农业大学学报袁圆园员员袁源缘渊远冤院苑员圆 原 苑员缘
咱猿苑暂摇 刘通袁文连奎援微波辅助提取山楂叶黄酮的试验研究咱允暂 援农产品
加工渊学刊冤袁圆园员源袁愿渊缘冤院员园 原 员愿
咱猿愿暂摇 刘荣华袁余伯阳袁邱声祥袁白桂昌援 山楂叶中多元酚类成分抗超
氧阴离子活性研究及构效关系咱 允暂 援 中国药学杂志袁圆园园缘袁源园
渊员源冤院员园远远 原 员园远怨
咱猿怨暂摇 叶希韵袁 王耀发援 山楂叶总黄酮对血管内皮细胞氧化损伤的保
护作用咱允暂 援 中国现代应用药学袁 圆园园圆袁 员怨渊源冤院 圆远缘 原 圆远愿
韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 栽藻糟澡灶燥造燥早赠 燥枣 耘枣枣藻糟贼蚤增藻 悦燥皂责燥灶藻灶贼泽 云则燥皂
匀葬憎贼澡燥则灶 蕴藻葬增藻泽 葬灶凿 粤泽泽藻泽泽皂藻灶贼 燥枣 粤灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 粤糟贼蚤增蚤贼赠
郧韵晕郧 宰藻蚤摇 郧哉 云藻灶早赠蚤灶早摇 匀耘 云葬灶摇 宰粤晕郧 云藻灶早
渊悦燥皂责则藻澡藻灶泽蚤增藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 粤早则燥鄄孕则燥凿怎糟贼泽 孕则燥糟藻泽泽蚤灶早袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 辕
陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 粤早则燥鄄责则燥凿怎糟贼泽 孕则燥糟藻泽泽蚤灶早 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园员怨猿冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 燥遭躁藻糟贼蚤增藻 燥枣 贼澡藻 泽贼怎凿赠 蚤泽 贼燥 燥责贼蚤皂蚤扎藻 怎造贼则葬泽燥怎灶凿鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿 藻贼澡葬灶燥造 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 枣则燥皂 澡葬憎贼澡燥则灶
造藻葬增藻泽 葬灶凿 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 贼澡藻 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 蚤灶 增蚤贼则燥援 匀葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽 憎藻则藻 怎泽藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 责葬责藻则援 栽澡藻
则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿燥造燥早赠 憎葬泽 怎泽藻凿 贼燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 贼澡藻 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 责则燥糟藻泽泽蚤灶早 责葬则葬皂藻贼藻则泽袁 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 藻贼澡葬灶燥造
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶袁 泽燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥袁 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 葬灶凿 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻援 栽澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 憎葬泽 糟澡燥泽藻灶 葬泽 则藻泽责燥灶泽藻 增葬造怎藻袁
葬灶凿 皂葬贼澡藻皂葬贼蚤糟葬造 皂燥凿藻造 憎葬泽 藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿 遭赠 蚤皂责造藻皂藻灶贼蚤灶早 枣燥怎则 枣葬糟贼燥则泽 葬灶凿 贼澡则藻藻 造藻增藻造泽援 栽澡藻 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼燥贼葬造
枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 憎葬泽 藻增葬造怎葬贼藻凿 遭赠 阅孕孕匀袁 粤月栽杂 则葬凿蚤糟葬造 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 葬灶凿 则藻凿怎糟蚤灶早 责燥憎藻则 葬泽泽葬赠泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻
遭藻泽贼 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻糟澡灶燥造燥早赠 憎葬泽 藻贼澡葬灶燥造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 苑园豫 袁 泽燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥 燥枣 员颐 猿缘袁 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 燥枣 猿怨 皂蚤灶 葬灶凿
藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥枣 苑圆益 援 栽澡藻 葬糟贼怎葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 赠蚤藻造凿 憎葬泽 圆愿郾 怨怨员 皂早窑早 原员袁 憎澡蚤糟澡 泽澡燥憎藻凿 葬 则藻造葬贼蚤增藻 藻则则燥则 燥枣
园郾 苑员豫 糟燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 责则藻凿蚤糟贼藻凿 增葬造怎藻 渊圆怨郾 员怨愿 皂早窑早 原员冤 援 栽澡藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 枣燥则 缘园豫 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 渊陨悦缘园冤 燥枣 阅孕孕匀
则葬凿蚤糟葬造 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 憎葬泽 苑员愿郾 怨远 滋早窑皂蕴 原员葬灶凿 陨悦缘园 增葬造怎藻 憎葬泽 远源郾 源猿滋早窑皂蕴 原员 蚤灶 粤月栽杂 则葬凿蚤糟葬造泽糟葬增藻灶早蚤灶早 葬泽泽葬赠泽援 栽澡藻 蚤则燥灶 蚤燥灶泽 则藻凿怎糟贼蚤燥灶 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 澡葬凿 糟藻则贼葬蚤灶 则藻凿怎糟蚤灶早 责燥憎藻则援 栽澡藻泽藻 则藻泽怎造贼泽
蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽 燥枣 澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽 澡葬增藻 早燥燥凿 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 蚤灶 增蚤贼则燥援 栽澡藻 则藻泽藻葬则糟澡 糟葬灶 责则燥增蚤凿藻 葬
泽糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟 贼澡藻燥则赠 遭葬泽蚤泽 枣燥则 枣怎则贼澡藻则 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 贼藻糟澡灶蚤糟葬造 则藻枣藻则藻灶糟藻 燥枣 澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽援
运藻赠憎燥则凿泽院澡葬憎贼澡燥则灶 造藻葬增藻泽袁 贼燥贼葬造 枣造葬增燥灶燥蚤凿泽袁 怎造贼则葬泽燥怎灶凿鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿袁 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿燥造燥早赠袁 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠
愿缘缘员