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UPLC-based Analysis of 5-deoxystrgol Extracted From Bamboo Shoots of Different Species

不同竹种竹笋中5-脱氧独脚金醇的UPLC分析


5-脱氧独角金醇(5-DS)是植物激素独脚金内酯的合成前体,是当前独脚金内酯定量的重要指标。为研究独角内脂对植物分枝/分蘖的抑制作用,本研究通过比较不同提取剂、提取纯化方法对刚竹属不同竹种竹笋5-DS含量的影响。结果发现:乙酸乙酯作为提取剂,利用超声辅助提取可节约前处理时间并提高提取率,固相萃取纯化可有效减少杂峰干扰。经以上处理后,使用超高效液相色谱仪(UPLC)能快速准确检测竹笋组织中5-DS的含量。40~8 000 ng·mL-1范围内线性关系良好,检出限为8.7 ng·mL-1,定量限为29.0 ng·mL-1;平均加标回收率在87.9%~116.5%。检测发现不同种类竹笋中5-DS含量变化为11.27~51.17 ng·g-1(FW),其中毛竹中5-DS含量最高。本研究使用超高效液相色谱仪建立竹笋中5-DS的前处理和检测方法,方法准确、精密度高、重现性好,可为竹子的分枝生理研究提供参考。


全 文 :核 农 学 报!"#$%!"&"# $$$$) ($$"#
!"#$%&"()#*+&$,-$.*#/#$&0*.+%*+1
收稿日期!"#$)*#A*"+!接受日期!"#$%*#$*#
基金项目!国家科技支撑计划""#$,-./"#-#"# !浙江省重中之重林学一级学科开放基金项目"iD"#$,#%#
作者简介!胡骁伟!男!主要从事森林培育专业竹林培育与利用方向研究% 0*1234$6= 3^X4X;8XT
通讯作者!刘颖坤!男!实验师!主要从事竹林培育与利用研究% 0*1234$ 43=<389N=8$;gg>:71
文章编号!$###*A%%$""#$%##*$$$)*#+
不同竹种竹笋中 % B脱氧独脚金醇的 fJ`K分析
胡骁伟$!李国栋$!刘颖坤$!桂仁意$!张少伟"!谢寅峰,
" $ 浙江农林大学H亚热带森林培育国家重点实验室培育基地! 浙江 临安!,$$,##&
"浙江省建德市林业局! 浙江 建德!,$$##&, 南京林业大学森林资源与环境学院! 江苏 南京!"$##,+#
摘!要!% B脱氧独角金醇% B/I(是植物激素独脚金内酯的合成前体!是当前独脚金内酯定量的重要指
标# 为研究独角内脂对植物分枝H分蘖的抑制作用!本研究通过比较不同提取剂"提取纯化方法对刚竹
属不同竹种竹笋 % B/I 含量的影响# 结果发现%乙酸乙酯作为提取剂!利用超声辅助提取可节约前处
理时间并提高提取率!固相萃取纯化可有效减少杂峰干扰# 经以上处理后!使用超高效液相色谱仪
fJ`K(能快速准确检测竹笋组织中 % B/I 的含量# )# (A ### 89&1` B$范围内线性关系良好!检出限
为 AG+ 89&1` B$!定量限为 "&G# 89&1` B$$平均加标回收率在 A+G&Q ($$G%Q# 检测发现不同种类竹
笋中 % B/I 含量变化为 $$G"+ (%$G$+ 89&9B$D_(!其中毛竹中 % B/I 含量最高# 本研究使用超高效
液相色谱仪建立竹笋中 % B/I 的前处理和检测方法!方法准确"精密度高"重现性好!可为竹子的分枝
生理研究提供参考#
关键词!固相萃取$超高效液相色谱仪$竹笋$独脚金内酯$% B脱氧独角金醇
/EF$$#G$$A&H5>3@@8>$##*A%%$G"#$%G#>$$$)
!!独脚金内酯"@T?39742:T78X!I @`#是一类新型植物激
素!被作为除生长素和细胞分裂素 " 类激素以外调控
植物分枝的第 , 类激素 $ B"( % 目前!测试的 I @`种类
有 % B脱氧独脚金醇"%*PX7^<@T?974!%*/I#)独脚金醇)
乙酸独脚金内酯)黑蒴醇)高粱内酯)列当醇等!其中 %
B/I 普遍存在!含量较高!是高粱)玉米)水稻)拟南芥
等众多植物中 I @`定量的主要指标 , B%( % 目前测定 %
B/I 的主要方法是色谱和质谱联用!该方法灵敏度
高!选择性强!但是复杂的基质仍然会干扰目标植物激
素的定量分析!测定费用也较大!超高效液相色谱具体
有分离能力强!分析速度快!分析费用低等优点!已经
成为比较理想的植物内源激素分析方法 B$#( !而目前
国内对 I @`的定量测定研究较少% 竹类植物具有生长
快)繁殖能力强和容易更新的特点 $$( !是我国的-第二
森林.!是集经济)生态和社会效益于一体的优良林
种!竹产业是我国现代林业的 ) 大朝阳产业之一!是南
方山区的富民产业 $"( % 对竹子生理生化的研究能为
竹林培育及经营提供理论基础% 竹笋的萌发与生长是
竹子生长的特色!竹子地下茎上的芽萌发!形成竹笋!
竹笋 B幼竹高生长时期!竹秆上的侧芽保持休眠状态!
只有高生长时期接近结束时!侧枝开始抽枝展叶% I @`
作为重要的侧芽生长抑制物质!有可能在竹笋萌发及
高生长期对竹鞭和竹秆侧芽的抑制中起到重要作用%
本试验以竹笋为材料建立了竹笋内 % B/I 的分离提
取和纯化方法!测定了刚竹)黄秆乌哺鸡)毛竹)高节
竹)雷竹 % 种刚竹属竹笋内 % B/I 的含量!为竹子的
分枝生理研究提供参考%
!"材料与方法
!#!"材料与试剂
刚竹 ":59"1/*591KB.$.3.1#) 黄秆乌哺鸡 ":5K
B.B&;#)毛竹 ":5K+3#.1#)高节竹 ":5K+3#.1#)雷竹
":5KB."&1*+%1#的竹笋均采自浙江农林大学翠竹园%
"#$) 年 % 月 ( 月采集长度为 "% (,#:1的新鲜竹笋
样品 , 份!立即拿回实验室!于 B+# O保存备用%
)$$$
! 期 不同竹种竹笋中 % B脱氧独脚金醇的 fJ`K分析
% B/I 标准品 "纯度 x&AQ!获自日本东京大
学#&乙酸乙酯"色谱纯!中国阿拉丁试剂有限公司#&
正己烷"色谱纯!美国 U0/F.公司#&甲醇"色谱纯!美
国 U0/F.公司#!乙腈)丙酮)乙酸乙酯"提取用#均为
分析纯%
!#$"仪器与设备
.KWfFUbUZ f4T?2JX?[7?128:X` K超高效液相色谱
系统!包含二元溶剂管理器!样品管理器!柱温箱和二
阵管阵列检测器"美国 _2TX?@公司#&.KWfFUbfJ`K
-Y0I63X4P LJ$A 柱!"G$ 11 C$## 11!$G+ "1"美国
_2TX?@公司#&真空离心浓缩仪 LmK" B"% K/S4=@
"德国 K6?3@T公司#&Z343*W/3?X:TBA 超纯水仪"美国
1343S7?X公司#&YX3P74S6 2`]7?7T2)##$ 旋转蒸发仪
"德国 YX3P74S6 公司#&FM` fKi固相萃取柱!硅胶 ,
1`*"## 19B$"北京英莱克公司#%
!#%"试验方法
$G,G$!提取方法!刘颖坤等 $,(已经在毛竹根系中检
测到 % B/I 的存在!在此基础上!参照 }`SXd*LyXd
等 $)( )/X42=^等 $%( ).?7:2等 $( )f1X62?2等 $+(的方
法并作改进!进一步研究 % B/I 的提取和纯化方法%
取出竹笋冷冻样!去除笋萚再切片!用液氮冷冻后研磨
成粉!立即称取 % 9至 %# 1` 离心管!加入 ) O下预冷
的乙酸乙酯 )# 1` % 超声辅助提取 $% 138!) O下静置
浸提 , 6!再次超声辅助提取 $% 138% 以 ) ### ?*138 B$
于 ) O下离心 $# 138!取上清液!沉淀用 % 1` 提取剂
洗涤 " 次% 合并上清液!于 )# O下旋转减压蒸干%
$G,G"!纯化方法!蒸干的残余物用乙酸乙酯$正己烷
k$%lA% 的溶液 " 1` 溶解% 溶解物过硅胶柱"活化用
乙酸乙酯H正己烷 k$%lA%!, 1` #!并用乙酸乙酯l正
己烷 k$%lA% 的溶液 $ 1` 淋洗!弃去上样液和淋洗
液!再用乙酸乙酯H正己烷 k%#l%# 的溶液 , 1` 洗脱!
收集洗脱液% 洗脱液用真空离心浓缩仪浓缩至干!用
%## "` 甲醇复溶!过 #G"" "1微孔滤膜后!转入样品
瓶供分析用%
$G,G,!标准样品制备!样品 % B/I 含量用外标峰面
积法定量!绘制浓度与峰面积标准曲线% 取 " 19
% B/I 溶于 %# 1` 甲醇得浓度为 )# "9*1` B$标准样
品贮备液!然后逐级稀释得以下浓度的标准溶液$A
###)) ###) " ###) $ ###) %##) "##) $##) A#) )# 89*
1` B$!于 B+# O冰箱保存备用%
$G,G)!色谱条件!.KWfFUbfJ`K-0YI63X4P LJ$A
柱"$G# 11C$## 11! $G+ "1#!流动相 .为 #G"%Q
"aHa#的甲酸 B水溶液&流动相 -为 #G"%Q "aHa#的
甲酸 B甲醇溶液!流速为 #G" 1`*138 B$!分析时间
$% 138!柱温 "% O!检测波长 "%# 81!进样体积 ,G#
"` % % B/I 的洗脱条件$# () 138 由 +%Q .变为
,%Q .!)G# (AG# 138 持续 ,%Q .!AG# ($#G# 138
,%Q .变为 #Q .!$#G# ($)G# 138 持续为 #Q .!
$)G# ($%G# 138 由 #Q .变为 +%Q .%
$"结果与分析
$#!"提取剂选择
试验采用提取 % B/I 的常用不同极性试剂乙酸
乙酯)丙酮)乙腈作为提取剂!以含量""9*1` B$#为指
标!考察不同提取剂对竹笋中 % B/I 提取率的影响%
结果表明$在 "%# 81检测波长下!乙酸乙酯提取的
% B/I含量最高!提取效果最好!丙酮次之!乙腈相对
最差!乙酸乙酯的提取效果与丙酮和乙腈呈显著差异!
丙酮和乙腈之间无显著差异% 由此选择乙酸乙酯为提
取剂% 值得注意的是以乙酸乙酯为提取剂!提取离心
后样品出现 , 层分离现象!即上层为乙酸乙酯相!中层
为植物组织!下层为水%
注$不同字母代表在 :p#G#% 水平上差异显著%
M7TX$ I1244XTX?@1X28 @39383[3:28T
P3[X?X8:X@2T#G#% 4XaX4>
图 !"不同提取剂对 = ]@D提取影响
/*01!";;4I.-;8*;;4549.4W.56I.*-96049.
-94W.56I.*-94;;*I*49I7
$#$"提取方法优化
为了提高提取效率!以乙酸乙酯为提取剂!对提取
方法进行优化$方案 $!) O下浸提 $" 6&方案 "!超声
辅助提取 $% 138!) O下浸提 , 6!再次超声辅助提取
$% 138% 对比提取出的 % B/I 含量!发现方案 " 提取
效率优于方案 $% 结果表明短时超声辅助提取的提取
率比 $" 6 提取更优!" 者存在显著差异%
%$$$
核!农!学!报 "& 卷
图 $"超声对 = ]@D提取影响
/*01$";;4I.-;G,.56:-9*I4W.56I.*-9-9
4W.56I.*-94;;*I*49I7
$#%"色谱条件优化
"G,G$!检测波长优化!对 % B/I 标准溶液进行全波
长扫描!结果表明目标物的最大吸收波长虽为 ",+
81!但 ",+ 81下目标峰的峰形展宽比较严重!基线也
发生漂移% 而 "%# 81下基线)峰形均较好!因此本研
究选择 "%# 81作为检测波长%
"G,G"!色谱柱优化!本研究选用 .KWfFUbfJ`K
-0YK$A 柱"$G# 11C$## 11! $G+ "1#)-0YK$A
柱 " $G# 11C%# 11! $G+ "1# 和 .KWfFUbfJ`K
-0YI63X4P LJ$A 柱"$G# 11C$## 11! $G+ "1#, 根
色谱柱!在流动相)柱温)检测器波长等条件一定的情
况下!通过对比 , 根色谱柱分离 % B/I 的效果!显示 ,
根柱子都能将目标物与杂峰分开!但是前两者允许的
流速相对较小!会出现峰展宽和拖尾现象!第 , 根色谱
柱允许的进样量相对最大!有利于痕量物质的分析!且
允许的流速相对最大!可在保持理想分离效果的前提
下缩短分离时间!满足分析目标物的要求!因此本研究
选用第 , 根色谱柱%
"G,G,!流动相优化!对比甲醇和乙腈作为流动相!乙
腈作有机相时发生基线漂移!且甲醇比乙腈更加经济!
因此选择甲醇为有机相% 流速对分离度和峰型有一定
影响!一方面流速越大!洗脱能力越强!分析所需的时
间也越短!另一方面流速过大会导致重叠现象!影响分
离效果!也影响流动相的充分混合!而且会导致柱压升
高!对柱子损伤较大% 考虑到流速要使目标物与杂峰
分开和使保留时间相对较短 " 个因素!最佳流速确定
为 #G" 1`*138 B$% 一般流动相中适量加酸具有调整
峰形的作用!本试验在流动相中添加 #G##Q)#G$#Q)
#G"%Q)#G%#Q"体积比#的甲酸!比较不同甲酸含量
的流动相对峰形的影响% 结果表明!#G"%Q的甲酸含
量下目标峰的峰形最好%
$#<"分析方法评价
"G)G$!液相色谱法的线性关系!取 $G,G, 中梯度质
量浓度 % B/I 标准样品溶液!在 $G,G) 的色谱条件下
进样 % "` !得到不同浓度的标准溶液的峰面积!以标
准溶液的质量浓度 ""9*1` B$#为横坐标!以峰面积
"1m*@#积分值为纵坐标!制作标准曲线!获得线性回
归方程$bk"& %)$cB$ $+$G&!?" k#G&&&+!% B/I 在
浓度为 )# (A ### 89*1` B$之间呈良好的线性关系%
相同试验重复 , 次!变异系数为 )G%$"Q!重现性较
好%
"G)G"!检出限与定量限!植物样品中痕量物质的准
确检测!很大程度上依赖于仪器的检出限!检出限越
低!检测样品中痕量物质就越准确% 在测定标准曲线
的同时!测定 % B/I 的检出限"信噪比 IHMx,# 和定
量限 " IHM x$# # 分 别 为 AG+ 89*1` B$ 和 "&G#
89*1` B$%
"G)G,!液相色谱法精密度!取质量浓度为 $ ###)
$##))# 89*1` B$的标准品!分别连续进样 次!通过保
留时间)峰面积计算相对标准偏差"L/I#考察精密度%
结果表明上述 , 个浓度的 % B/I 保留时间 L/I 分别
为 $GAQ)$G,Q)$GQ!峰面积 L/I 分别为 "G,Q)
$G&Q)"G+Q!说明该方法的精密度较好%
"G)G)!液相色谱法稳定性!称取竹笋鲜样粉末 % 9!
以乙酸乙酯为提取剂!超声辅助提取!按 $G,G" 纯化!
制备样品溶液!过 #G"" "1微孔滤膜!按 $G,G) 色谱条
件进样 , "` 测定峰面积!每 " 6 测定 $ 次!结果表明
% B/I在 $" 6 内稳定!测定 % B/I 的平均峰面积为 A
&A#!相对标准偏差为 %G$Q!说明该方法有良好的稳
定性%
"G)G%!液相色谱法重复性!重复测定样品中 % B/I
含量 % 次!计算 % B/I 相对标准偏差为 +G,)Q!说明
此方法重复性较好%
"G)G!液相色谱法加标回收率!取 % 9竹笋鲜样粉
末 ) 份!其中 $ 份不加 % B/I 标准样品!另外 , 份分别
加入 #G")#GA)"G# "9% B/I 标准品!标准样品)植物
样品和添加有标准样品的植物样品分别记为 I#)I$)
I"!每个添加水平设置 , 个重复!根据公式$回收率 k
"I" BI$#HI# C$##Q!计算其加标回收率% 测定结果
表明!% B/I 的回收率 A+G&Q ($$G%Q!此办法的回
收率符合定量分析要求%
$#="竹笋样品中 = ]@D的定性和定量
在 $G,G) 的液相色谱条件下!% B/I 色谱图显示
其相对保留时间为 AGA% j#G#", 138"图 )#!光谱图显
示 % B/I 的最大吸收波长为 ",+81"图 ,#% 样品可以
$$$
! 期 不同竹种竹笋中 % B脱氧独脚金醇的 fJ`K分析
在 $% 138 内得到很好的分离!竹笋提取物在 AGA% j
#G#,$ 138 处有出峰"图 #!保留时间和 % B/I 基本一
致!对比样品与 % B/I 的光谱图!发现样品峰在
",%G"81左右有较强吸收!与 % B/I 光谱图基本一致
"图 %#!由此判断竹笋提取物中含有 % B/I%
测定刚竹)黄秆乌哺鸡)毛竹)高节竹)雷竹 % 种刚
竹属竹笋中 % B/I 含量!测定结果见图 +!试验所测定
的刚竹属 % 种竹笋均含有 % B/I!含量都在同一数量
级!各竹种之间存在极显著差异!其中毛竹的含量最
高!为 %$G$+ j,G,$ 89*9B$"D_#!其次是黄秆乌哺鸡!
为 "#G) j,G%$ 89*9B$ "D_#!高节竹最低!为 $$G"+
j,G,& 89*9B$"D_#%
图 %"= ]@D标准品液相光谱图
/*01%"T4345:48+M6:4,*RG*8:+4I.5-056A
-;:.698658-;= ]@D
图 <"= ]@D标准品液相色谱图
/*01<"T4345:48+M6:4,*RG*8IM5-A6.-056A
-;:.698658-;= ]@D
%"讨论
本试验采用液相色谱法以 % B/I 为评价指标!研
究了提取 I @`的 , 种常用提取剂乙腈)丙酮)乙酸乙酯
图 ="竹笋提取 = ]@D液相光谱图
/*01="T4345:48+M6:4,*RG*8:+4I.5-056A -;= ]@D
4W.56I.48;5-A)6A)--(:M--.
图 >"竹笋提取物液相色谱图
/*01>"T4345:48+M6:4,*RG*8IM5-A6.-056A
-;4W.56I.-;)6A)--(:M--.
图 ?"刚竹属 = 种竹笋 = ]@D含量
",c%&Bd=e#
/*01?"= ]@DI-9.49.*9= :+4I*4:-;)6A)--
:M--.:-;SM7,-:.6IM7:",c%&Bd=e#
对 % B/I 提取率的影响!发现乙酸乙酯作为提取剂效
果最佳% , 种提取剂中极性乙腈 x丙酮 x乙酸乙酯!
其中目标物属于弱极性化合物!与乙酸乙酯极性相近!
可能是乙酸乙酯提取效率更高的原因% 激素的提取多
+$$$
核!农!学!报 "& 卷
采取过夜提取的方法!也有超声等短时提取的方

$A( !本试验通过对比过夜提取和超声辅助提取 " 种
提取方法!结果显示超声辅助提取效果更好% % B/I
具有不稳定性!决定其生物活性的 KB/环由烯醇醚
键相连!这一结构很容易被包括水在内的亲核试剂裂
解 $& B"$( % 通过选择检测波长)色谱柱)流动相)流速!
对流动相酸化处理调整峰型优化色谱系统!确定了
fJ`K分析竹笋中 % B/I 的工作条件% 本试验发现
% B/I最大吸收峰在 ",+ 81!但 ",+ 81下目标峰的峰
形展宽比较严重!基线也发生漂移!"%# 81下基线)峰
形均较好% 有研究者在对 % B/I 进行测定时多选用
乙腈为流动相 $ B"( !本试验发现甲醇作为流动相基线
较乙腈更稳定% 对检出限)精密度)稳定性)重复性等
方面进行方法学考察!色谱条件均可满足 fJ`K分析
测定竹笋中 % B/I 的要求!表明这是一种快速)准确
的测定方法%
I @`在单子叶和双子叶植物中都存在!其含量却
有所不同% 本试验测定的 % 种竹笋中 % B/I 的含量
变化在 $$G"+ (%$G$+ 89*9B$ "D_#之间!在营养充分
情况下!紫云英中 % B/I 含量不到 $S9*9B$ "D_#!一
些植物甚至没有检测到 % B/I!而在水稻和高粱中则
达到数十或数百 S9*9B$ "D_# "" B")( !说明不同科属
% B/I含量有所不同!且差异性较大% 水稻)高粱和竹
子都属于禾本科植物!其中 % B/I 含量比其他科属物
种高!预示禾本科植物对 % B/I 含量的需求较大!
% B/I也可能在禾本科植物中有异于其他非禾本科植
物的特殊作用% 竹子是多年生大型禾本木质植物!其
高含量的 % B/I 可能与其特殊的生长生理相适应%
试验数据表明各竹种间 % B/I 含量呈现显著差异!表
明同属不同种植物中 % B/I 含量也存在差异!这与
V2134等 "%(对不同亚洲栽培稻中 % B/I 含量的研究结
果相一致% 刘颖等 $,(研究发现!毛竹根系中可检测到
% B/I 的存在% 本研究发现!在不同刚竹属竹笋中也
存在大量的 % B/I!说明其在竹笋的笋期发育中存在
重要作用% 竹笋 B幼竹高生长时期!竹秆上的侧芽保
持休眠状态!只有高生长时期接近结束时!侧枝开始抽
枝展叶 "( !I @`能抑制植物分枝H分蘖!可能在这个生
长时期扮演重要角色% 毛竹笋中 % B/I 含量最高!说
明 % B/I 的合成可能对竹子单株生长量的积累有一
定的作用%
I @`作为重要的侧芽生长抑制物质!有可能在竹
笋萌发及高生长期对竹鞭和竹秆侧芽的抑制中起到重
要作用!因此结合竹子的生长特征!测定不同时期竹笋
B幼竹中的 % B/I 的含量可进一步揭露 % B/I 在笋
芽萌发和成竹过程中所发挥的作用% 对 I @`合成基因
的定位表达的研究表明 I @`在植物根部伸长区)整个
维管系统和邻近腋芽处的组织都有表达
"+ B"&( !因此检
测 I @`在竹子中不同器官及部位的含量!追溯笋中 I @`
的来源!有助于理解鞭芽休眠)笋芽萌发及竹笋抽枝展
叶的机制% 此外!植物激素的调节作用往往要通过多
种激素之间的互作! I @`被认为是生长素的第二信
使 ,# B,$( !所以结合多种激素研究也显得尤为重要%
<"结论
本试验采用液相色谱法对经过分离)纯化后的竹
笋提取液进行梯度洗脱分离测定 % B/I!建立了竹笋
中 % B/I 的液相色谱分析方法% 方法学考察表明该
方法的线性范围)精密度)准确度)稳定性等均满足痕
量成分的分析测定要求% 试验检测的刚竹属 % 种竹笋
中均含有 % B/I!说明 I @`可能在竹类中普遍存在!并
可能在竹笋高生长期对竹秆侧芽的抑制中起到重要作
用%
参考文献!
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" (!f1X62?2Z! Y282P2.! b7@63P2I! .N3<212i! .?3TXU! U2NXP2B
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8=T?3X8TB@T?X@@?X@S78@X@38 S428T@V(>F8TX?82T3782457=?8247[
174X:=42?@:3X8:X@! "#$,! $)"%# $ &"A B&,#)
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VD! b28 Kb>J?79?X@@38 g=28T3T2T3aX2824<@3@7[S428T67?178X@
V(>K638X@XI:3X8:X-=4XT38! "#$$! %") H%# $ ,%% B,
+ (!符继红! 孙晓红! 王吉德! 褚金芳! 闫存玉>植物激素定量分析
方法研究进展V(>科学通报! "#$#! %%",,# $ ,$, B,$+
A (!侯凯! 陈郡雯! 申浩! 翟娟园! 陈黎! 吴卫>川白芷内源激素的
提取纯化和高效液相色谱法同步测定V(>核农学报! "#$,! "+
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对黄瓜果实生长及内源激素水平的影响V(>核农学报! "#$"!
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角金醇的超高效液相色谱分析V(>浙江农林大学学报! "#$,!
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