全 文 ： 2012, Vol. 33, No. 08 食品科学 ※分析检测188
固相萃取-反相高效液相色谱法测定红毛丹中
抑霉唑的残留动态
高智席 1，江忠远 1，李新发 1，吴艳红 1，牟青松 1，敖克厚 1，邓传跃 2
(1.遵义师范学院化学系，贵州 遵义 563002；2.西南大学化学化工学院，重庆 400715)
摘 要：建立固相萃取 -反相高效液相色谱法测定红毛丹中抑霉唑的残留动态分析的方法。色谱柱为 Shim-pack VP-
ODS(150mm× 4.6mm，5μm)，检测波长 229nm，流动相为甲醇 -离子对溶液(75:25，V/V)，流速 0.85mL/min，
进样量 20μL。抑霉唑在 15.0～960.0μg/L(r＝ 0.9994)范围内与峰面积呈良好线性关系，检出限为 5μg/L，抑霉唑回
收率为 86.4%～104.5%，相对标准偏差 0.84%～2.87%。同时，还对抑霉唑由红毛丹皮向肉的迁移，在红毛丹体
上的降解动态进行分析。该方法操作简便快速，可作为红毛丹中抑霉唑含量监测的方法。
关键词：抑霉唑；固相萃取；反相高效液相色谱；红毛丹
Residue Dynamic Analysis of Imazalil in Rambutan by RP-HPLC with Solid-Phase Extraction
GAO Zhi-xi1，JIANG Zhong-yuan1，LI Xin-fa1，WU Yan-hong1，MU Qing-song1，AO Ke-hou1，DENG Chuan-yue2
(1. Department of Chemistry, Zunyi Normal College, Zunyi 563002, China；
2. School of Chemistry and Chemical Engineering, Southwest University, Chongqing 400715, China)
Abstract： A reversed-phase high performance liquid chromatographic method with solid-phase extraction was proposed for
the residue dynamic analysis of imazalil in rambutan. The analyte was separated on a Shim-pack VP-ODS (150 mm × 4.6 mm,
5μm) using a mobile phased composed of a mixture at a volume ratio of 75:25 of methanol and acidic Na2H2PO4 solution
approximately at pH 5 (adjusted with 85% phosphoric acid) at a flow rate of 0.85 mL/min, and detected at 229 nm. The injection
amount was 20 μL. An excellent linearity of imazalil in the range of 15.0－960.0 μg/L was achieved (r ＝0.9994). The detection
limit was 5.0 μg/L. The average spike recovery rates were in the range of 86.4%－ 104.5% with relative standard deviation of
0.84%－ 2.87%. The method was fast, simple, and applicable for the determination of imazalil residue in rambutan.
Key words：imazalil；solid-phase extraction；RP-HPLC；rambutan
中图分类号：O657.72 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2012)08-0188-03
收稿日期：2011-05-30
基金项目：贵州省遵义市科技局项目([2008]26号)；贵州省教育厅自然科学基金项目([2010]085号)
作者简介：高智席(1969 —)，男，副教授，硕士，研究方向为仪器分析。E-mail：wyhgzx@163.com
抑霉唑[烯丙基1-(2,4-二氯苯基)-2-咪唑-1-基乙基醚]是
近年来开发的一种结构新颖、作用机制独特、高效、低
毒和广谱的嘧啶胺类内吸性杀菌剂，并具有预防和治疗作
用。对侵袭谷物、水果和蔬菜的病原体——交链孢菌、
寄生霜霉、灰霉枝孢和霉根霉等具有良好的抑杀作用[1]。
红毛丹是一种极具经济价值的热带水果，外观美、
营养丰富、富含碳水化合物、各种维生素和矿物质。
长期食用可润肤养颜、清热解毒、增强人体免疫力。
但红毛丹在我国只有海南等少数地区分布，主要依赖东
南亚进口，储存运输的周期比较长，保鲜能力又比较
差。因此，抑霉唑常被应用于红毛丹收获前和收获后
的生产、储存及保鲜过程中。
通常测定抑霉唑的方法有高效液相色谱法[2-5]、气相
色谱法[6-12]，气相色谱 -质谱联用法[13-15]等。但关于红毛
丹中抑霉唑残留动态分析的高效液相色谱测定方法未见
报道。本实验拟建立固相萃取反相高效液相色谱分离，
二极管阵列检测器测定红毛丹中抑霉唑残留动态分析的
方法。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器
红毛丹(市售)，0～5℃冷藏。
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抑霉唑标准品 (含量≥ 99%) 国家标准物质标
准样品信息中心；无水硫酸钠(AR，130℃烘 2h，贮
于干燥器中备用)、甲醇(分析纯)、磷酸( 9 5 %，分析
纯)、正己烷(分析纯)、乙酸乙酯(分析纯)、磷酸二氢
钠( 9 9 %，分析纯)；二次蒸馏水。
所有溶液使用前均由 0.45μm孔径的滤膜过滤。离
子对溶液：称 4.45g Na2H2PO4·2H2O溶于 1000mL二次蒸
馏水中，滴加质量分数 85%磷酸调至 pH≈ 2.5，摇匀，
超声振荡 15min，用 0.45μm的孔径滤膜过滤，备用。
LC-2010AT型高效液相色谱仪(LCsolution色谱工作
站，CBM-20A系统控制器，SPD-M20A二极管阵列检
测器，SIL-20A自动进样器) 日本 Shimadzu公司；
SY3200超声波清洗器 上海声源超声波仪器设备有限公
司；EYELAN-1型旋转蒸发仪 德国Heidoph公司；电
子天平 上海越平科学仪器有限公司；DS-1高速组织捣
碎机 上海标本模型厂；THZ-82A型振荡机 江苏富华
仪器有限公司；DHG-9070A型新型电热恒温鼓风干燥箱
宁波江南仪器厂；混合阳离子固相萃取柱(PCX，HRXC，
60mg，3mL)、24DL固相萃取装置 Visiprep公司；
微孔过滤装置。
1.2 色谱条件
色谱柱：Shim-pack VP-ODS(150mm× 4.6mm，
5μm)；流动相：甲醇:离子对溶液 =75:25(V:V)(pH≈
2.5)；紫外检测波长：229nm；流速：0.85mL/min；柱温：
室温；进样量：20μL。
1.3 样品前处理及测定
1.3.1 标准溶液的配制
准确称取抑霉唑标准品0.0401g(精确至0.0001g)，置
于 50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀后
即为质量浓度 802μg/mL抑霉唑的储备液。用移液管准
确移取不同体积的抑霉唑标准溶液分别置于25mL容量瓶
中，再用甲醇定容得一系列不同浓度的抑霉唑标准溶
液，摇匀并贴上标签，保存(0～10℃)，备用。
1.3.2 样品前处理
样品红毛丹在 802μg/mL抑霉唑溶液中蘸浸后取出，
然后在间隔不同的时间将红毛丹皮削下，将红毛丹皮和红
毛丹肉分别编号并保存，样品保存在冷藏柜里(0～5℃)。
不同编号的样品依次进行残留量测定。
将未经清洗的红毛丹肉与红毛丹皮经组织捣碎机捣
碎，各称取其 5.00g(精确到 0.01g)置于带盖塑料离心管
中，准确加入 30mL乙酸乙酯 -环己烷(1:1，V/V)和 2g
氯化钠，在涡旋混合器上涡旋 1min，超声振荡 20min，
在 10000r/min离心机上离心 10min，取上清液净化。
分别用 3mL甲醇，3mL水活化混合型阳离子交换固
相萃取柱，准确移取 3mL(具体由样品含量高低来确定)
离心上清液分别上 PCX固相萃取柱，过柱速度 1mL/min
以内。再用 3mL水和 3mL甲醇洗涤混合型阳离子交换固
相萃取柱[16 ]，抽近干后用氨水甲醇溶液 5mL洗脱。在
40℃条件下用氮气吹干，准确加入 1.00mL甲醇溶液，涡
旋振荡 1mi n，过 0.45μm 滤膜，待测定。
2 结果与分析
2.1 检测波长的选择
利用二极管阵列检测器在线扫描配制好的抑霉唑标
准溶液，可得到抑霉唑的吸收波长响应值的紫外吸收图
谱，最大吸光度出现在 229nm处，产品中各杂质在该
波长时对产品的测定无影响，且色谱峰形较好。因此，
选择 229nm作为本方法的最适检测波长。
2.2 流动相的选择
分别以乙腈:离子对溶液和甲醇:离子对水溶液体系作
流动相进行比较，发现甲醇:离子对溶液作流动相时，
抑霉唑与其杂质分离完全且峰形对称；再经过比较不同
配比的甲醇:离子对水溶液体系[4]，发现甲醇 -离子对溶
液(7 5 :2 5，V :V )，柱效最高，保留时间适宜。
2.3 流速选择
在优化流动相和检测波长条件下，以0.30～1.30mL/min
的不同流速进行测定，分析比较发现在 0.85mL/min流速
下的抑霉唑液相色谱峰形较好、出峰时间较早，故选
择 0.85mL/min为检测流速。
2.4 线性范围及检出限
按照上述色谱条件，以质量浓度为横标，峰面积
为纵坐标制作抑霉唑标准曲线，经过回归，得到其线
性方程为 Y＝ 15.502X－ 290.38，r＝ 0.9994。线性范围
为 15～960.0μg/L。抑霉唑标准谱图见图 1，标准出峰
在 2.1765min。用标准工作曲线的最低浓度点，按上述
色谱条件测定 6次，得一组低浓度标准峰面积，求出其
标准偏差，以 3倍标准偏差除以方法的灵敏度，即得方
法的检出限为 5μg/L。抑霉唑标样色谱图和样品色谱图
见图 1 所示。
A
时间 /min
0 1 2 3 4 5 6 7
抑霉唑
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2.5 方法的精密度和回收率
在选定的色谱条件下进行添加回收实验，红毛丹肉
分别以 0.01、0.05、0.1mg/kg 3个添加水平，红毛丹皮
分别以 0.05、0.1、0.2mg/kg 3个添加水平，按照样品处
理方法进行提取净化，测定抑霉唑含量，计算回收率见
表 1。红毛丹肉抑霉唑添加回收率在 86.4%～102.3%，
RSD(n=3)为1.5%～2.87%，红毛丹皮抑霉唑添加回收率在
88.9%～104.5%，RSD(n=3)为 0.84%～1.46%，方法的回
收率和标准偏差达到满意结果。在选定的色谱条件下，
质量浓度 40μg/mL的标准品连续测定 5次，保留时间和
峰面积的RSD分别为 0.15%和 2.68%(n=5)。因此，本方
法具有很高的灵敏度与精密度，重复性好，回收率稳
定，可以为红毛丹样品中抑霉唑的测定提供参考方法。
运用本实验建立的方法对实验所得的上百个红毛丹样品进
行测定，数据稳定可靠。
2.6 样品测定
对样品中红毛丹肉和红毛丹皮中的抑霉唑含量进行
测定，红毛丹肉中含量 2. 36mg/kg，红毛丹皮中含量
21.34mg/kg。
2.7 红毛丹中抑霉唑的降解曲线
从图 2 可以看出，在 30 d 内，在红毛丹肉中抑霉
唑残留量随贮藏时间的推移，呈增加的趋势，而在红
毛丹皮中呈下降趋势，表明抑霉唑在不断地从红毛丹皮
中转移到红毛丹肉中。第 60 天(最后一次分析)，抑霉
唑残留量在红毛丹肉和红毛丹皮中明显降低。说明红毛
丹中残留的抑霉唑随着贮藏时间的延长逐渐降解。
3 结 论
本实验建立红毛丹中抑霉唑的固相萃取 -反相高效
液相色谱残留动态分析的方法。该方法简单快速，精
密度与灵敏度较高，是一种有效检测水果采后的储存过
程中抑霉唑含量的有效方法。
参 考 文 献 ：
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图 1 标准品 (A)和红毛丹肉 (B)中抑霉唑的色谱图
Fig.1 Chromatogram of imazalil standard and imazalil in
rambutan flesh
B
时间 /min
0 1 2 3 4 5 6 7
抑霉唑
1 .红毛丹皮；2 .红毛丹肉；3 .抑霉唑总量。
图 2 抑霉唑在红毛丹中的残留动态曲线
Fig.2 Residue dynamic curves of imazalil in rambutan
25
20
15
10
5
0
3
残
留
量
/(
m
g/
kg
)
时间 /d
0 10 20 30 40 50 60
2
1
红毛丹肉 红毛丹皮
加入量 /(mg/kg)
0.1 0.05 0.01 0.05 0.1 0.2
回收率 /% 86.4 95.6 102.3 88.9 104.5 92.3
RSD/% 2.87 2.10 1.50 0.84 1.46 1.44
表 1 回收率及精密度 ( =3)
Table 1 Recovery rates and RSDs of imazalil in rambutan peel and
flesh ( =3)