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The Process Optimization of Cordycepin Production Via Solid- state Fermentation by Cordyceps militaris

蛹虫草固态发酵生产虫草素工艺优化研究


蛹虫草可作为野生冬虫夏草的替代品,虫草素为其重要药用成份,具有较高的药用价值,由于其生产成本较高,迫切需要降低虫草素的生产成本.为了探索高效低成本的虫草素生产工艺条件,本试验对3株蛹虫草优良菌株的生产性能进行了比较,并对4种固态发酵生产虫草素的培养基配方进行了筛选,考察了3种大孔树脂对于虫草素的吸附分离效果,优化了虫草素高效制备的工艺条件.结果表明菌株GIM 5.512在子实体和栽培料中的虫草素含量最高,其最适合虫草素生产的固态发酵料配方为:大米35 g+营养液 55 mL.营养液配方为:葡萄糖 30 g,磷酸二氢钾 10 g,维生素C 10 g,维生素B1 10 g,水1000 mL.DM130树脂为最适宜吸附分离虫草素的树脂.其对虫草素的吸附率和解吸附率分别可达83.47%和51.97%,当洗脱液乙醇浓度为25%、pH值为5.0时,DM130树脂的解吸附效果最好.精制后样品的虫草素纯度可达85.02%.该研究对于高效生产和制备虫草素具有重要的实际生产意义.


全 文 :摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊员员冤院圆园远缘 耀 圆园苑园允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园圆鄄员怨摇 接受日期院圆园员源鄄园远鄄员苑
基金项目院浙江省公益性技术应用研究一般项目渊圆园员源悦猿苑园怨员冤袁湖州市自然科学资金项目渊圆园员园再在园愿冤
作者简介院刘洋袁男袁讲师袁主要从事微生物与生化药学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院造蚤怎赠葬灶早赃园苑岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院同第一作者遥
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤员员鄄圆园远缘鄄园远
蛹虫草固态发酵生产虫草素工艺优化研究
刘 洋摇 黄芳芳摇 王赢蕾摇 胡亚蕾摇 沈佳媛摇 陆云华
渊湖州师范学院生命科学院袁浙江 湖州摇 猿员猿园园园冤
摘摇 要院蛹虫草可作为野生冬虫夏草的替代品袁虫草素为其重要药用成份袁具有较高的药用价值袁由于其
生产成本较高袁迫切需要降低虫草素的生产成本遥 为了探索高效低成本的虫草素生产工艺条件袁本试验
对 猿 株蛹虫草优良菌株的生产性能进行了比较袁并对 源 种固态发酵生产虫草素的培养基配方进行了筛
选袁考察了 猿 种大孔树脂对于虫草素的吸附分离效果袁优化了虫草素高效制备的工艺条件遥 结果表明菌
株 郧陨酝 缘郾 缘员圆 在子实体和栽培料中的虫草素含量最高袁其最适合虫草素生产的固态发酵料配方为院大米
猿缘 早 垣营养液 缘缘 皂蕴遥 营养液配方为院葡萄糖 猿园 早袁磷酸二氢钾 员园 早袁维生素 悦 员园 早袁维生素 月员 员园 早袁水
员园园园 皂蕴遥 阅酝员猿园 树脂为最适宜吸附分离虫草素的树脂遥 其对虫草素的吸附率和解吸附率分别可达
愿猿郾 源苑豫和 缘员郾 怨苑豫 袁当洗脱液乙醇浓度为 圆缘豫 尧责匀 值为 缘郾 园 时袁阅酝员猿园 树脂的解吸附效果最好遥 精制
后样品的虫草素纯度可达 愿缘郾 园圆豫 遥 该研究对于高效生产和制备虫草素具有重要的实际生产意义遥
关键词院蛹虫草曰虫草素曰固态发酵曰工艺优化
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 员员援 圆园远缘
摇 摇 蛹虫草咱悦燥则凿赠糟藻责泽 皂蚤造蚤贼葬则蚤泽 渊蕴援 冤 蕴蚤灶噪暂为我国传
统药用真菌袁又称北冬虫夏草尧北虫草袁隶属于真菌界
子囊菌门渊粤泽糟燥皂赠糟燥贼葬冤尧肉座菌目渊匀赠责燥糟则藻葬造藻泽冤尧麦角
菌科渊悦造葬增蚤糟蚤责蚤贼葬糟藻葬藻冤袁子囊菌属真菌袁是我国名贵中
药材之一袁与冬虫夏草 渊 悦燥则凿赠糟藻责泽 泽蚤灶藻灶泽蚤泽冤 同属异
种咱员暂 遥 研究表明蛹虫草中含有虫草素尧虫草多糖尧虫
草酸尧超氧化物歧化酶尧还有丰富的人体必需氨基酸尧
微量元素等多种生物活性物质咱圆暂 袁某些药效成分甚至
高于冬虫夏草袁可以作为野生虫草的替代品咱猿 原 缘暂 遥
虫草素作为蛹虫草的主要药用成分咱远暂 袁具有抗肿
瘤尧抗菌尧抗病毒尧免疫调节尧抗炎尧抗衰老等药用价值袁
在美国已进入二期临床试验袁用于白血病治疗袁具有较
大的开发利用前景咱苑 原 员园暂 遥 目前袁虫草素的生产主要从
蛹虫草子实体中尧栽培废料和液体发酵中分离提
取咱员员 原 员猿暂 遥 由于蛹虫草子实体的生产周期长袁生产成本
较高袁虫草素含量不高袁导致虫草素的生产成本极
高咱员员暂 遥 液体发酵生产虫草素对工艺条件要求严格袁设
备投入较大袁发酵后产生的废液处理难度大咱员猿暂 遥 固态
发酵是指利用自然底物做碳源及能源袁或利用惰性底
物做固体支持物袁其体系无水或接近于无水的发酵过
程袁具有生产成本低袁工艺控制相对简单等优点袁非常
适合真菌类产品的生产咱员源 原 员缘暂 遥 然而袁对于固态发酵生
产虫草素的生产工艺研究报道较少遥
本试验对 猿 株蛹虫草优良菌株的生产性能进行比
较袁并筛选适合的固态发酵料配方袁优化大孔树脂
渊皂葬糟则燥责燥则燥怎泽 则藻泽蚤灶冤对虫草素提取及制备的工艺条件遥
该研究对于降低虫草素的生产成本和虫草资源的保护
利用和开发具有一定的理论意义遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员摇 供试菌株摇 蛹虫草菌株 悦酝园园员鄢尧郧陨酝 缘郾 缘园圆尧
郧陨酝 缘郾 缘员圆 由湖州师范学院应用微生物与发酵工程实
验室收集整理并保藏遥
员郾 员郾 圆摇 培养基
渊员冤斜面母种培养基摇 马铃薯 圆园园 早袁葡萄糖 圆园 早袁
磷酸二氢钾 员 早袁硫酸镁 园郾 园缘 早袁维生素 月员 员园 皂早袁琼脂
缘远园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
圆园 早袁水 员 园园园 皂蕴袁责匀值 苑郾 园遥
渊圆冤液体培养基 马铃薯 圆园园 早袁葡萄糖 猿园 早袁蛋白
胨 猿 早袁磷酸二氢钾 圆 早袁硫酸镁 员 早袁柠檬酸铵 员 早袁维生
素 月员 缘园 皂早袁水 员 园园园 皂蕴袁责匀值 远郾 园遥
渊猿冤固体栽培料培养基 配方 粤院大米 猿缘 早 垣蚕蛹
粉 员 早 垣营养液 缘缘 皂蕴遥 营养液院葡萄糖 圆园 早袁蛋白胨
圆园 早袁硫酸镁 圆 早袁柠檬酸铵 圆 早袁磷酸二氢钾 员 早袁维生素
月员 圆园园 皂早袁水 员 园园园 皂蕴遥 配方 月院大米 猿缘 早 垣营养液
缘缘 皂蕴遥 营养液院马铃薯 圆园园 早煮出液袁葡萄糖 猿园 早袁蛋
白胨 猿 早袁磷酸二氢钾 圆 早袁硫酸镁 员 早袁柠檬酸铵 员 早袁维
生素 月员 缘园 皂早袁搅拌均匀袁定容至 员 园园园 皂蕴袁营养液 责匀
值为 远郾 缘遥 配方 悦院大米 猿缘 早 垣营养液 缘缘 皂蕴遥 营养
液院渊葡萄糖 猿园 早袁 磷酸二氢钾 员园 早袁维生素 悦 员园 早袁维
生素 月员 员园 早袁 水 员 园园园 皂蕴遥 配方 阅院大米渊猿缘 早冤 垣营
养液 缘缘 皂蕴遥 营养液配方院渊蔗糖 圆园 早袁硫酸镁 缘 早袁 磷
酸二氢钾 员 早袁 水 员 园园园 皂蕴冤遥
员郾 员郾 猿摇 主要仪器及试剂摇 蕴悦圆园园园 高效液相色谱 渊日
本岛津公司 冤曰粤蕴员园源 分析天平 渊梅特勒 原托利多仪
器公司冤曰匀蕴 原圆 恒流泵 渊上海精科实业有限公司 冤曰
阅酝员猿园尧晕运粤鄄陨陨尧粤月 原愿 树脂购于天津海河化工有限公
司遥 虫草素标准品购于中国生物药品鉴定所袁其他色
谱试剂购于湖州飞英化学试剂有限公司遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 菌种培养摇 将供试菌种分别接种于 孕阅粤培养
基斜面上袁圆圆 耀 圆缘益培养 苑 耀 员园 凿袁待菌丝长满斜面遥
员郾 圆郾 圆摇 液体培养摇 将斜面母种接种于含有 圆园园 皂蕴液
体培养基的三角瓶中袁圆圆 耀 圆缘益静置培养 员 耀 圆 凿袁员圆园
则窑皂蚤灶 原员袁震荡培养 猿 耀 源 凿遥
员郾 圆郾 猿摇 人工栽培试验摇 按栽培料配方将大米和营养
液装入塑料盒渊员缘园皂皂 伊 员园园皂皂 伊 员园园 皂皂冤袁员圆员益常
压灭菌 猿园 皂蚤灶袁冷却过夜遥 取 缘 皂蕴 液体菌种袁无菌接
种于栽培料培养基袁圆猿益黑暗条件下培养 苑 凿遥 待菌丝
长满培养基后袁圆猿益光照转色袁白天保持为 圆园 耀 圆猿益尧
晚上为 员园 耀 员圆益袁并在塑料盒上打孔遥 在原基形成
后袁温度保持 圆猿益袁光照 员远 澡袁出草初期湿度保持 愿园豫
左右袁后期加大湿度至 怨园豫左右袁每天通风 圆 耀 猿 次袁
培养 缘缘 凿 采收咱员远暂 遥 每个菌株袁每个配方重复 员园 瓶遥
在菌丝生长过程中进行观察和取样分析检测遥
员郾 圆郾 源摇 虫草素分离提取摇 采用大孔树脂预处理咱员远暂 遥
大孔吸附树脂用无水乙醇浸泡 圆源 澡袁抽滤尧醇洗袁直至
洗出液加水不混浊袁然后用水反复洗涤至无醇味遥 用
圆 月灾 质量分数 缘豫 盐酸浸泡 圆 澡 后水洗至近中性袁再
用 圆 月灾 质量分数 圆豫 氢氧化钠溶液浸泡 圆 澡袁用一定
体积蒸馏水洗至中性袁过滤袁用蒸馏水浸泡备用遥
分别取预处理好的湿树脂 圆 皂蕴置于 圆缘园 皂蕴具塞
磨口三角瓶中袁加入虫草素质量浓度 园郾 缘园 皂早窑皂造 原员的
蛹虫草固体培养基提取浓缩液 员园园 皂蕴袁置于摇床振
摇袁圆源 澡 后取出袁过滤袁测定滤液中虫草素的质量浓
度遥 将上述吸附饱和的树脂过滤后吸干表面的水分袁
各加入 圆园园 皂蕴 圆缘豫 乙醇溶液解吸附置于摇床振摇
圆源 澡 后取出袁过滤袁测定滤液中虫草素的质量浓度遥
根据下列公式计算各种树脂的吸附率和解吸率遥
吸附率与解吸率计算院
吸附率 越 渊原液中虫草素含量 原滤液中虫草素含
量冤 辕原液中虫草素含量 伊员园园豫
解吸附率 越洗脱后虫草素含量 辕 渊原液中虫草素
含量 原吸附后虫草素含量冤 伊 员园园豫
将收集到的大孔树脂洗脱液用真空冷冻干燥袁加
入 怨缘豫乙醇溶解袁而后放于 源益冰箱中袁结出白色针状
晶体袁抽滤袁真空干燥遥
员郾 圆郾 缘摇 虫草素含量测定 摇 色谱条件为 宰粤栽园源缘怨园缘
渊宰葬泽贼藻则 公司袁美国冤渊源郾 远 皂皂 伊 员缘园 皂皂袁缘 滋皂冤袁流动
相为水院甲醇 越 愿缘院员缘渊体积比冤袁用 园郾 源缘滋皂膜过滤袁并
进行超声波脱气 员缘 皂蚤灶遥 流速 员郾 园 皂蕴窑皂蚤灶 原员袁紫外
检测器 杂孕阅 原 员园袁检测波长 圆远园 灶皂袁进样量 圆园 滋蕴袁温
度 猿园益遥
虫草素测定院固体栽培料及子实体置于烘箱中干
燥袁烘干后袁粉碎袁称总重量遥 取干粉 园郾 员 早 置于具塞
试管中袁加入双蒸水 员园 皂蕴袁超声处理 猿园 皂蚤灶袁最后经
园郾 源缘 滋皂滤膜过滤后再进行检测咱员苑暂 遥
员郾 猿摇 数据统计与分析
取样测定虫草素含量计算平均值和标准误差袁采
用 杂孕杂杂 员远郾 园 进行差异显著性分析袁利用 韵则蚤早蚤灶 苑郾 园 绘
制统计图形遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 优良菌种筛选
圆郾 员郾 员摇 菌落及菌丝形态摇 本试验对 猿 个不同的菌种
用配方 悦 的固体栽培料进行培养袁在生长初期菌株
悦酝园园员鄢生长情况较好袁培养 苑 凿 左右菌丝长满菌瓶袁
转色时间为 圆 耀 猿 凿袁同时原基分化和子实体发育阶段袁
原基分化最好袁子实体生长最快袁子实体有子囊头袁子
实体发育整齐遥 郧陨酝缘郾 缘园圆 子实体扭曲袁不光滑尧分枝
多遥 郧陨酝缘郾 缘员圆 菌丝生长最快袁转色比较好袁子实体有
分叉遥 子实体发育形态和发育情况见图 员尧表 员遥
远远园圆
摇 员员 期 蛹虫草固态发酵生产虫草素工艺优化研究
图 员摇 蛹虫草菌株的子实体形态
云蚤早援 员摇 栽澡藻 枣则怎蚤贼 遭燥凿赠 皂燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 悦援 皂蚤造造蚤贼葬则蚤泽 泽贼则葬蚤灶泽
表 员摇 不同蛹虫草菌株人工栽培特性比较
栽葬遭造藻 员摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 贼澡藻 糟怎造贼蚤增葬贼藻 贼则葬蚤贼泽 葬灶凿 枣则怎蚤贼 遭燥凿赠 赠蚤藻造凿 燥枣 悦援 皂蚤造造蚤贼葬则蚤泽
菌株
杂贼则葬蚤灶泽
子实体形态
酝燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 枣则怎蚤贼 遭燥凿赠
子实体颜色
云则怎蚤贼 遭燥凿赠 糟燥造燥怎则
湿重
宰藻贼 憎藻蚤早澡贼 辕 早
干重
阅则赠 憎藻蚤早澡贼 辕 早
出草整齐性
杂赠皂皂藻则贼则蚤糟葬造
悦酝园园员鄢 粗尧短尧子囊头大 橘黄 猿猿郾 怨远苑 猿郾 怨缘缘 整齐
郧陨酝缘郾 缘员圆 粗尧长尧头部分叉 浅黄 圆员郾 猿源圆 圆郾 怨源怨 不整齐
郧陨酝缘郾 缘园圆 扭曲尧不光滑尧头部分叉 浅黄 员员郾 缘猿怨 员郾 苑怨员 不整齐
摇 摇 将成功长出的子实体进行样品处理袁称其鲜重袁
远园益 烘干后袁计算出每盒平均干重和鲜干比渊表 员冤遥
悦酝园园员鄢菌株的平均干重和鲜干高于其他菌株遥
图 圆摇 菌株虫草素含量比较
云蚤早援 圆摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 糟燥则凿赠糟藻责蚤灶 糟燥灶贼藻灶贼 蚤灶
凿蚤枣枣藻则藻灶贼 悦援 皂蚤造造蚤贼葬则蚤泽 泽贼则葬蚤灶泽
圆郾 员郾 圆摇 不同菌种虫草素含量分析摇 提取并测定栽培
料和子实体的虫草素含量袁作为筛选优良菌株的指标
之一遥 不同菌株栽培料和子实体虫草素的提取测定结
果见图 圆遥 由图 圆 可知袁菌株 郧陨酝 缘郾 缘员圆 的栽培料和
子实体中的虫草素含量较高袁分别可达 圆缘缘郾 园怨苑
滋早窑早 原员和 圆源苑郾 怨 滋早窑早 原员遥 菌株 郧陨酝缘郾 缘员圆 子实体中
的虫草素与 悦酝园园员鄢 接近袁但含量明显高于菌株
郧陨酝缘郾 缘园圆渊责 约 园郾 园缘冤遥
圆郾 圆摇 培养基配方筛选
本试验对菌种 郧陨酝 缘郾 缘员圆 进行不同配方渊粤尧月尧悦尧
阅冤的固态发酵培养袁筛选合适的培养基的配方袁对其
栽培料中的虫草素含量进行了测定分析袁结果如图 猿
所示遥 在 悦 配方中栽培料中的虫草素含量最高袁为
员员园郾 猿苑 依 圆圆 滋早窑早 原员袁并与 粤尧月尧 阅 猿 个配方中的虫草
素差异显著渊责 约园郾 园缘冤遥 在 粤配方中栽培料中的虫草
素含量次之袁为 源苑 依 远 滋早窑早 原员袁月尧阅 配方中栽培料中
的虫草素最低遥 表明栽培料培养基配方对于菌株分泌
虫草素有重要影响遥
圆郾 猿摇 虫草素分离提取
圆郾 猿郾 员摇 大孔树脂筛选摇 在同一试验条件下袁相同浓度
和体积的虫草素提取液袁经 猿 种树脂充分吸附袁洗脱袁
试验重复 缘 次渊表 圆冤遥 结果表明袁不同类型大孔树脂
对蛹虫草中虫草素的吸附能力具有较大差异袁其中
阅酝员猿园 的吸附率最大袁可达 愿猿郾 源苑豫 袁解吸附率最高袁
达 缘员郾 怨苑豫 遥 由此得出袁动态试验过程大孔树脂
阅酝员猿园 的吸附和解吸附效果最好遥
圆郾 猿郾 圆摇 阅酝员猿园 对虫草素的吸附和解吸附摇 由图 源 可
知袁阅酝员猿园 树脂对虫草素的吸附较好袁其对固态栽培
料浸提液中的虫草素的吸附率达 愿猿郾 源苑豫 袁在 责匀 值
猿郾 园 条件下袁用 源园豫 乙醇进行解吸附袁解吸附率为
员猿郾 源员豫 遥
圆郾 猿郾 猿摇 阅酝员猿园 解吸附条件优化 摇 在原有洗脱条件
苑远园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
图 猿摇 培养基配方对菌株 郧陨酝 缘郾 缘员圆 虫草素分泌的影响
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 皂藻凿蚤怎皂 枣燥则皂怎造葬 燥灶 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶
燥枣 糟燥则凿赠糟藻责蚤灶 遭赠 悦援 皂蚤造造蚤贼葬则蚤泽 泽贼则葬蚤灶 郧陨酝 缘郾 缘员圆
下袁阅酝员猿园 树脂的洗脱率不够理想袁为了进一步提高
虫草素的洗脱效率袁比较了不同浓度和 责匀 溶液乙醇
的解吸附效果袁结果如下表 猿 所示遥
图 源摇 阅酝员猿园 对虫草素的吸附和解吸附图谱
云蚤早援 源摇 栽澡藻 皂葬责 燥枣 糟燥则凿赠糟藻责蚤灶 葬凿泽燥则责贼蚤燥灶 葬灶凿 凿藻泽燥则责贼蚤燥灶 遭赠 则藻泽蚤灶泽阅酝员猿园
摇 摇 表 猿 表明袁不同浓度乙醇对蛹虫草中虫草素的吸
附能力具有较大差异袁其中当乙醇浓度为 圆缘豫时袁其
解吸附率最高袁可达 源远郾 园愿豫 袁由此可得出袁当洗脱液
的乙醇浓度为 圆缘豫 袁其 责匀值为 缘郾 园 时袁解吸附效果最
佳袁比优化前解吸附率提高了 圆郾 源源 倍遥
圆郾 猿郾 源摇 虫草素精制摇 对大孔树脂 阅酝员猿园 解吸附后样
品进行了精制遥 利用高效液相色谱 渊 澡蚤早澡 责则藻泽泽怎则藻
造蚤择怎蚤凿 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡袁匀孕蕴悦冤进行虫草素纯度检测袁样
品中虫草素纯度为 愿源郾 圆怨豫 遥
表 圆摇 不同树脂对虫草素的吸附与解吸能力
栽葬遭造藻 圆摇 粤凿泽燥则责贼蚤燥灶 糟葬责葬糟蚤贼蚤藻泽 葬灶凿 凿藻泽燥则责贼蚤燥灶
则葬贼藻泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 则藻泽蚤灶泽 枣燥则 糟燥则凿赠糟藻责蚤灶
树脂型号
砸藻泽蚤灶 皂燥凿藻造
极性
孕燥造葬则蚤贼赠
吸附率
粤凿泽燥则责贼蚤燥灶 则葬贼藻 辕 豫
解吸附率
阅藻泽燥则责贼蚤燥灶 则葬贼藻 辕 豫
阅酝员猿园 弱极性 愿猿郾 源苑 缘员郾 怨苑
粤月 原 愿 弱极性 缘苑郾 远圆 圆苑郾 员圆
晕运粤 原域 极性 猿源郾 源远 员源郾 园源
表 猿摇 不同 责匀和体积分数的乙醇溶液对解吸率的影响
栽葬遭造藻 猿摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 藻贼澡葬灶燥造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 葬灶凿
责匀 燥灶 凿藻泽燥则责贼蚤燥灶 则葬贼藻 辕 豫
洗脱液 责匀值
责匀 增葬造怎藻 燥枣 藻造怎贼蚤燥灶
乙醇浓度 耘贼澡葬灶燥造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
员园 圆缘 源园 缘缘
猿郾 园 圆苑郾 怨圆 员苑郾 苑园 员猿郾 源员 苑郾 源源
源郾 园 圆缘郾 圆远 圆员郾 源愿 员猿郾 源圆 缘郾 员愿
缘郾 园 圆缘郾 愿源 源远郾 园愿 源缘郾 愿圆 员圆郾 源苑
远郾 园 圆猿郾 苑远 猿远郾 愿员 源源郾 圆员 员园郾 缘源
猿摇 讨论
在虫草素的生产制备过程中袁优良菌种是利用蛹
虫草高效生产和制备虫草素的关键咱员愿暂 遥 利用蛹虫草
子实体分离提取制备虫草素过程中袁需要首先获得大
量子实体遥 子实体的生长虽然与环境因素有一定关
系袁但其遗传背景因素才是其决定因素遥 不同菌株的
菌落尧菌丝形态类似袁但菌株生长速度尧转色快慢尧子实
体的形成能力和虫草素含量差异较大咱员怨 原 圆园暂 遥 本研究
愿远园圆
摇 员员 期 蛹虫草固态发酵生产虫草素工艺优化研究
比较了 猿 个蛹虫草优良生产菌株的菌丝生长快慢袁转
色尧原基分化及子实体情况袁并且对其子实体尧栽培料
中的虫草素含量测定来判断菌种优良遥 结果发现袁菌
种 郧酝缘郾 缘员圆 相较与其他菌种袁其生长状况好袁栽培料
和子实体中的虫草素含量高袁其次是 悦酝园园员鄢遥 菌株
间差异较大与孙军德等咱员怨 原 圆园暂的研究结果一致遥
菌丝的生长尧子实体的形成对培养基的营养条件
有一定的要求袁适宜的培养基配方对于蛹虫草的生产
是必须的咱猿暂 遥 月葬泽蚤贼澡 等咱圆员暂推测不易被水解的碳氮源
可在蛹虫草的生长期内向蛹虫草提供低浓度营养物
质袁该条件有利于子实体的生成袁这使得大米培养基成
为蛹虫草栽培成功的原因遥 培养基碳氮源袁悦 辕 晕 比袁
培养条件对蛹虫草的生长和虫草素分泌有重要影
响咱圆圆 原 圆缘暂 遥 本研究对菌种 郧酝缘郾 缘员圆 进行了 源 种不同的
固态发酵培养基配方筛选袁结果发现袁栽培料配方 悦
虫草素含量显著高于其他配方遥 表明固态发酵配方对
于虫草素的合成和分泌有重要影响袁与韦会平等咱员缘暂的
研究结果一致遥 另外袁由于子实体形成所需时间较长袁
本研究利用转色之后的固态发酵基质提取和制备虫草
素袁大大缩短了生产时间袁可以降低生产成本遥 与液态
发酵相比生产工艺更为简单袁对设备要求不高袁具有较
好优势遥
大孔树脂是近年来国内外新发展的新型绿色分离
技术袁已广泛应用于天然产物的分离纯化尧药物制备尧
有机化合物分离等各个领域袁具有较大的吸附能力袁洗
脱容易尧机械强度高袁抗污染能力强等优点咱圆远 原 圆苑暂 遥 本
试验选取了目前对虫草素吸附和解吸附最好的 猿 种树
脂进行了比较袁结果表明大孔树脂 阅酝员猿园 的吸附和解
吸附效果最好袁并对影响虫草素在大孔树脂 阅酝员猿园 上
的吸附尧解吸附的工艺参数进行了优化袁结果表明袁责匀
和乙醇浓度对虫草素的解吸附效果影响显著袁在乙醇
体积浓度为 圆缘豫 袁责匀 值为 缘郾 园 时其解吸附效果较好
与胡瑕等报道一致咱圆苑暂 遥 不同大孔树脂的极性差异较
大袁对目标物吸附和解吸附的条件差异较大袁需要对吸
附和解吸附的工艺条件进行优化袁本研究与已报道的
利用大孔树脂分离纯化虫草素的工艺条件有一定差
异咱员远袁圆远 原 圆苑暂 遥 本研究采用乙醇作为洗脱剂袁该洗脱剂绿
色尧无污染尧可回收重复使用袁降低了分离纯化成本遥
但研究发现虫草素提取纯度与文献报道存在有一定差
距袁需进一步提高袁虫草素进一步精制的方法还在研究
之中遥
源摇 结论
本试验对 猿 株蛹虫草优良菌株的生产性能进行比
较袁其中菌株 郧陨酝 缘郾 缘员圆 的栽培料和子实体中的虫草
素含量最高遥 该菌株最适合生产虫草素的固态发酵配
方为院大米 猿缘 早 垣营养液 缘缘 皂蕴曰其营养液配方为院葡
萄糖 猿园 早袁磷酸二氢钾 员园 早袁维生素 悦 员园 早袁维生素 月员
员园 早袁 水 员园园园 皂蕴遥 最适宜吸附分离虫草素的树脂为
阅酝员猿园袁其对虫草素的吸附率和解吸附率分别可达
愿猿郾 源苑豫和 缘员郾 怨苑豫 遥 当洗脱液乙醇浓度为 圆缘豫 尧责匀
值为 缘郾 园 时袁阅酝员猿园 树脂对虫草素的解吸附效果最
好遥
致谢院本研究感谢湖州师范学院生命科学院孙来
玉老师提供高效液相色谱仪器遥
参考文献院
咱 员 暂摇 张姝袁 张永杰袁 月澡怎泽澡葬灶 杂袁 徐建平袁 王成树袁 刘杏忠援 冬虫夏草
菌和蛹虫草菌的研究现状尧问题及展望咱允暂 援 菌物学报袁 圆园员猿袁猿圆
渊源冤院 缘苑苑 原 缘怨苑
咱 圆 暂摇 阅葬泽 杂 运袁 酝葬泽怎凿葬 酝袁 杂葬噪怎则葬蚤 粤 袁 杂葬噪葬噪蚤遭葬则葬 酝援 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造 怎泽藻泽 燥枣
贼澡藻 皂怎泽澡则燥燥皂糟燥则凿赠糟藻责泽 皂蚤造蚤贼葬则蚤泽院 糟怎则则藻灶贼 泽贼葬贼藻 葬灶凿 责则燥泽责藻糟贼泽 咱 允暂 援
云蚤贼燥贼藻则葬责蚤葬袁 圆园员园袁愿员渊愿冤院 怨远员 原 怨远愿
咱 猿 暂摇 宋金俤袁刘超袁华秀红袁林金盛援 蛹虫草产业化栽培瓶颈及其对
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