全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊猿冤院园远员缘 耀 园远圆圆允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄园苑鄄园愿摇 接受日期院圆园员圆鄄园猿鄄园员
基金项目院青藏高原甘肃甘南社区生态畜牧业关键技术集成与模式示范渊圆园员圆园猿园员园冤袁甘肃牧区优质饲草生产技术研究与示范渊圆园员园园猿园圆猿冤袁牧
草种质资源保护与利用渊晕月圆员猿园员猿缘冤袁国家牧草产业技术体系专项渊悦粤砸杂鄄猿缘冤
作者简介院李玉珠渊员怨苑怨鄄冤袁女袁陕西宁强人袁博士研究生袁主要从事牧草和草坪草种质资源保护与育种的研究遥 耘鄄皂葬蚤造院造蚤赠扎岳 早泽葬怎援 藻凿怎援 糟灶
通讯作者院师尚礼渊员怨远圆鄄冤袁男袁甘肃会宁人袁教授袁主要从事牧草种质资源保护与育种的研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 泽澡蚤泽澡造岳 早泽葬怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园猿鄄园远员缘鄄园怨
代谢互补抑制剂碘乙酰胺和罗丹明对 猿种豆科
牧草原生质体活力和再长的影响
李玉珠摇 师尚礼摇 陶摇 茸
渊甘肃农业大学草业学院袁草业生态系统教育部重点实验室袁甘肃省草业工程实验室袁
中美草地畜牧业可持续发展研究中心袁甘肃 兰州摇 苑猿园园苑园冤
摘摇 要院研究了不同浓度代谢互补抑制剂碘乙酰胺渊 陨韵粤冤和罗丹明 远郧渊砸鄄远郧冤处理与里奥百脉根渊蕴燥贼怎泽
糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽 蕴援 糟增援 蕴藻燥灶冤尧扁蓿豆渊酝藻造蚤造燥贼燥蚤凿藻泽 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 渊蕴援 冤 杂燥躁葬噪冤及清水紫花苜蓿渊酝藻凿蚤糟葬早燥 泽葬贼蚤增葬 蕴援
糟增援 匝蚤灶早泽澡怎蚤冤猿 种豆科牧草愈伤组织原生质体活力和再生力之间的相关性遥 结果表明袁猿 耀 员园皂皂燥造 辕 蕴 的
陨韵粤和 源园 耀 苑园滋早 辕 皂造 的 砸鄄远郧 分别处理 员园皂蚤灶袁可使 猿 种豆科牧草原生质体的活力及植板率明显下降袁
各处理浓度与原生质体活力和植板率之间均存在极显著的负相关渊 责 约 园郾 园员冤遥 培养第 苑 天袁所有处理
均可见再生的小细胞团曰培养 猿园 耀 源园凿袁抑制剂临界浓度下原生质体丧失形成愈伤组织的能力遥 陨韵粤 对
原生质活力的抑制作用更明显袁砸鄄远郧对植板率的影响更显著袁并可使原生质体发出红色荧光袁有利于细
胞融合时亲本原生质体的标识遥 适宜 猿 种豆科牧草的抑制剂及临界浓度分别是院百脉根 缘皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤
或 缘园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧曰扁蓿豆 苑皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤 或 苑园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧曰清水紫花苜蓿 猿皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤 或 源园滋早 辕 皂蕴 砸鄄
远郧遥
关键词院原生质体曰 代谢互补抑制剂曰 原生质体活力曰 植板率曰 荧光
耘云云耘悦栽 韵云 陨韵粤 粤晕阅 砸鄄远郧 韵晕 灾陨粤月陨蕴陨栽再 粤晕阅 砸耘郧耘晕耘砸粤栽陨灾耘
悦粤孕粤悦陨栽再 韵云 孕砸韵栽韵孕蕴粤杂栽杂 云砸韵酝 栽匀砸耘耘 蕴耘郧哉酝耘 云韵砸粤郧耘杂
蕴陨 再怎鄄扎澡怎摇 杂匀陨 杂澡葬灶早鄄造蚤摇 栽粤韵 砸燥灶早
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 郧则葬泽泽造葬灶凿 耘糟燥泽赠泽贼藻皂袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 耘凿怎糟葬贼蚤燥灶袁 悦燥造造藻早藻 燥枣 孕则葬贼葬糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻袁 郧葬灶泽怎 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁
孕则葬贼葬糟怎造贼怎则葬造 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 郧葬灶泽怎 孕则燥增蚤灶糟藻袁 杂蚤灶燥鄄哉援 杂援 悦藻灶贼藻则泽 枣燥则 郧则葬扎蚤灶早造葬灶凿 耘糟燥泽赠泽贼藻皂 杂怎泽贼葬蚤灶葬遭蚤造蚤贼赠袁 蕴葬灶扎澡燥怎袁 郧葬灶泽怎摇 苑猿园园苑园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 泽贼怎凿赠 憎葬泽 糟燥灶凿怎糟贼藻凿 贼燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶泽 葬皂燥灶早 贼澡藻 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠袁 则藻早藻灶藻则葬贼蚤增藻 糟葬责葬糟蚤贼赠 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼泽
蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 贼澡则藻藻 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽 渊 蕴燥贼怎泽 糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽 蕴援 糟增援 蕴藻燥灶袁 酝藻造蚤造燥贼燥蚤凿藻泽 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 渊蕴援 冤 杂燥躁葬噪 葬灶凿 酝藻凿蚤糟葬早燥
泽葬贼蚤增葬 蕴援 糟增援 匝蚤灶早泽澡怎蚤冤 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 皂藻贼葬遭燥造蚤糟 糟燥皂责造藻皂藻灶贼 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则泽 燥枣 陨韵粤 葬灶凿 砸鄄远郧援 砸藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻
增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 葬灶凿 责造葬贼藻 则葬贼藻 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 枣则燥皂 贼澡则藻藻 泽责藻糟蚤藻泽 憎藻则藻 燥遭增蚤燥怎泽造赠 则藻凿怎糟藻凿 怎灶凿藻则 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 燥枣 陨韵粤 渊猿 耀 员园皂皂燥造 辕
蕴冤 葬灶凿 砸鄄远郧 渊源园 耀 苑园滋早 辕 皂造冤 枣燥则 员园皂蚤灶援 栽澡藻 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 葬灶凿 责造葬贼藻 则葬贼藻 燥枣 贼澡则藻藻 泽责藻糟蚤藻泽 憎藻则藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 渊 责 约 园援 园员冤
灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥则则藻造葬贼藻凿 憎蚤贼澡 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 陨韵粤 葬灶凿 砸鄄远郧 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽援 粤造造 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 泽皂葬造造 葬早早则藻早葬贼藻凿
糟藻造造 糟造怎泽贼藻则泽 怎灶凿藻则 贼澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 陨韵粤 葬灶凿 砸鄄远郧 葬枣贼藻则 糟怎造贼怎则藻 枣燥则 苑 凿葬赠泽援 栽澡藻 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 贼澡藻泽藻 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 憎葬泽
蚤灶澡蚤遭蚤贼藻凿 葬灶凿 贼澡藻赠 糟燥怎造凿 灶燥贼 枣燥则皂 糟葬造造蚤 葬枣贼藻则 糟怎造贼怎则藻 枣燥则 猿园 贼燥 源园 凿葬赠泽 怎灶凿藻则 贼澡藻 陨韵粤 葬灶凿 砸鄄远郧 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 葬贼 葬 糟则蚤贼蚤糟葬造
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶援 悦燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 砸鄄远郧袁 陨韵粤 糟燥怎造凿 葬责责葬则藻灶贼造赠 泽怎责责则藻泽泽 贼澡藻 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 燥枣 贼澡藻 贼藻泽贼藻凿 皂葬贼藻则蚤葬造泽袁
憎澡蚤造藻 砸鄄远郧 糟燥怎造凿 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼造赠 蚤皂责葬糟贼 贼澡藻 责造葬贼藻 则葬贼藻 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼泽援 栽澡藻 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 藻皂蚤贼 则藻凿 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻袁 憎澡蚤糟澡 糟燥怎造凿 遭藻
缘员远
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
怎泽藻凿 贼燥 蚤凿藻灶贼蚤枣赠 责葬则藻灶贼 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 蚤灶 贼澡藻 枣怎泽蚤燥灶 责则燥糟藻泽泽援 栽澡藻 泽怎蚤贼葬遭造藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则 葬灶凿 糟则蚤贼蚤糟葬造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 憎藻则藻 缘皂皂燥造 辕 蕴
陨韵粤 燥则 缘园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧 枣燥则 蕴援 糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽袁 苑皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤 燥则 苑园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧 枣燥则 酝援 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 葬灶凿 猿皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤 燥则
源园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧 枣燥则 酝援 泽葬贼蚤增葬援 栽澡藻 葬遭燥增藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡蚤泽 贼藻糟澡灶蚤择怎藻 憎葬泽 藻曾贼则藻皂藻造赠 怎泽藻枣怎造 蚤灶 贼澡藻 泽糟则藻藻灶蚤灶早 责则燥糟藻泽泽
枣燥则 泽藻造藻糟贼蚤燥灶 燥枣 泽怎蚤贼葬遭造藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则 贼燥 蚤灶葬糟贼蚤增葬贼藻 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 燥枣 贼澡则藻藻 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽 葬灶凿 砸 原 远郧 糟燥怎造凿 皂葬则噪 责则燥贼燥责造葬泽贼泽
怎灶凿藻则 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼 造蚤早澡贼援
运藻赠 憎燥则凿泽院责则燥贼燥责造葬泽贼泽曰 皂藻贼葬遭燥造蚤糟 糟燥皂责造藻皂藻灶贼 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则曰 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠曰 责造葬贼藻 则葬贼藻曰 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻
摇 摇 原生质体融合能够在细胞水平上进行种渊间冤尧属
间甚至科间的远缘体细胞杂交咱员暂 袁克服有性杂交不亲
和的障碍袁促进异源种间遗传物质的交流袁是实现作物
品质改良和种质创新的重要育种手段遥 碘乙酰胺
渊陨燥凿燥葬糟藻贼燥皂蚤凿藻袁陨韵粤冤能抑制细胞质糖酵解过程袁对细
胞造成不可逆的伤害咱圆暂 曰罗丹明 远郧渊砸澡燥凿葬皂蚤灶藻 远郧冤是
线粒体葡糖氧化磷酸化反应的抑制剂袁可使线粒体失
活咱猿暂 遥 经二者分别钝化处理的 圆 个亲本原生质体均丧
失了再生愈伤组织的能力袁只有代谢互补的杂种细胞
才能继续生长咱源暂 遥 因此袁利用这 圆 种代谢互补抑制来
筛选核质融合的细胞袁可简化杂交融合后代的筛选程
序咱缘暂 袁是筛选体细胞杂种的常见方法咱远 耀 愿暂 遥
豆科牧草是世界各国草地农业生产的重要组成部
分袁作为蛋白质饲料来源尧生物固氮资源尧生态保育的
重要组分袁在畜牧业生产尧草田轮作尧环境保护和建设
方面发挥着极其重要的作用咱怨暂 遥 与水稻尧小麦等农作
物相比袁豆科牧草体细胞杂交技术起步晚袁研究少且多
集中在苜蓿属咱员园 耀 员猿暂 袁而采用碘乙酰胺和罗丹明处理双
亲原生质体进行体细胞杂交的研究袁仅见安骥飞对苜
蓿和百脉根原生质体进行钝化处理测定各自分裂率的
报道咱员源暂 遥
紫花苜蓿被称为野牧草之王冶袁不仅产量高袁营养
丰富袁还能形成根瘤进行固氮咱员缘暂 袁是全世界栽培最悠
久尧面积最大尧利用最广泛的豆科牧草咱员远暂 袁但其仍有一
些品质尚待改良袁如青饲易造成家畜臌胀病袁耐寒性不
强袁耐酸性和耐牧性差等遥 百脉根耐酸性强袁号称野瘠
地苜蓿冶 咱员苑暂 袁其富含缩合单宁袁可防止家畜臌胀病遥 扁
蓿豆抗寒性强袁可在紫花苜蓿不能越冬生长的寒冷地
区良好生长咱员愿暂 遥 因此袁利用原生质体融合技术袁将百
脉根和扁蓿豆的优良种性转移给紫花苜蓿袁就有机会
获得抗寒性强尧抗臌胀病的新型苜蓿种质遥
本研究分别选取新近育成的刈牧兼用型野生栽培
品 种 清 水 紫 花 苜 蓿 渊 酝藻凿蚤糟葬早燥 泽葬贼蚤增葬 蕴援 糟增援
匝蚤灶早泽澡怎蚤冤 咱员怨暂 尧抗寒且种子产量高的半匍匐型品种里奥
百脉根渊蕴燥贼怎泽 糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽 蕴援 糟增援 蕴藻燥灶冤 咱圆园暂及广布我国
北方 地 区袁 营 养 价 值 高尧 适 应 性 强 的 扁 蓿 豆
渊酝藻造蚤造燥贼燥蚤凿藻泽 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 渊蕴援 冤 杂燥躁葬噪冤 咱员愿暂为试验材料袁在
已掌握各自原生质体分离和培养体系的基础上袁探索
上述 圆 种抑制剂碘乙酰胺和罗丹明对 猿 种牧草原生质
体细胞质失活的效应值袁以期确定使各自原生质体失
活的最佳抑制剂和适宜的作用浓度袁为进一步体细胞
杂交时融合细胞的筛选提供基础数据遥
员摇 材料和方法
员郾 员摇 供试材料的获得
猿 种豆科牧草的种子均由甘肃农业大学草业生态
系统教育部重点实验室提供遥 剪取各供试材料无菌苗
下胚轴渊园郾 缘糟皂 长冤及子叶渊园郾 缘皂皂 宽冤接种于 酝杂 愈
伤组织诱导培养基上袁添加的植物生长调节剂袁百脉根
为 圆皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 垣 圆皂早 辕 蕴 运栽曰扁蓿豆和清水紫花苜蓿
为 园郾 缘皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 垣 员皂早 辕 蕴 晕粤粤 垣 员皂早 辕 蕴 月粤遥 每 员缘
耀 圆园凿进行选择继代袁继代 缘 耀 远 次后袁获得质地疏松尧
结构致密的淡黄色或淡绿色愈伤组织袁用于原生质体
的酶解遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 原生质体的分离与纯化摇 按照本课题组所建
立的扁蓿豆尧百脉根和清水紫花苜蓿原生质体酶解条
件咱员愿袁员怨袁圆员暂 袁分别从 猿 种豆科牧草愈伤组织中游离出原
生质体遥 酶液组合及酶解时间见表 员遥 酶溶剂 悦孕宰
包括 圆苑郾 圆皂早 辕 蕴 运匀圆孕韵源尧员园员郾 园皂早 辕 蕴 运晕韵猿尧员源愿园郾 园皂早 辕蕴 悦葬悦造圆窑圆匀圆韵尧圆源远郾 园皂早 辕 蕴 酝早杂韵源窑苑匀圆韵尧园郾 员远皂早 辕 蕴运陨尧园郾 园圆缘皂早 辕 蕴 悦怎杂韵源窑缘匀圆韵尧缘郾 园皂皂燥造 辕 蕴 酝耘杂渊圆袁渊晕鄄皂燥责则澡燥造蚤灶燥冤 藻贼澡葬灶藻 泽怎造枣燥灶蚤糟 葬糟蚤凿冤尧园郾 缘缘皂燥造 辕 蕴 甘露醇袁
责匀缘郾 愿袁经 园郾 圆圆滋皂微孔滤膜过滤灭菌遥
圆缘益 依员益尧黑暗条件下袁在 猿园 耀 缘园则 辕 皂蚤灶 的摇床
上震荡愈伤组织袁分离原生质体遥 酶解完成后将酶解
材料分别经 员园园尧源园园 目无菌尼龙网筛过滤袁除去未酶
解完全的组织和细胞团袁滤液经 员园园 伊 早 离心 员园 耀 员圆
皂蚤灶收集原生质体遥 用 悦孕宰 酶溶剂悬浮袁再离心袁重
复 员 耀 圆 次遥 最后利用各自的原生质体培养液洗涤 员
次袁并将原生质体密实细胞体积调整相同遥
远员远
摇 猿 期 代谢互补抑制剂碘乙酰胺和罗丹明对 猿 种豆科牧草原生质体活力和再长的影响
表 员摇 猿 种豆科牧草的酶液组合及酶解时间
栽葬遭造藻 员摇 悦燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 藻灶扎赠皂藻 泽燥造怎贼蚤燥灶 葬灶凿 藻灶扎赠皂燥造赠泽蚤泽 贼蚤皂藻 枣燥则 猿 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽
牧草种类
造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽
纤维素酶
糟藻造造怎造葬泽藻 燥灶燥扎怎噪葬 砸鄄员园渊豫 冤
果胶酶
责藻糟贼蚤灶葬泽藻 再鄄圆猿渊豫 冤
半纤维素酶
澡藻皂蚤糟藻造造怎造燥泽藻渊豫 冤
崩溃酶
凿则蚤泽藻造葬泽藻 渊豫 冤
酶解时间
藻灶扎赠皂燥造赠泽蚤泽 贼蚤皂藻渊澡冤
里奥百脉根
蕴援 糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽 蕴援 糟增援 蕴藻燥灶 圆 园郾 缘 园郾 猿 园 员圆
扁蓿豆
酝援 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 渊蕴援 冤 杂燥躁葬噪 圆 园郾 缘 园郾 猿 园 员圆
清水紫花苜蓿
酝援 泽葬贼蚤增葬 蕴援 糟增援 匝蚤灶早泽澡怎蚤 圆 园郾 缘 园 园郾 猿 员园
员郾 圆郾 圆摇 原生质体的钝化和培养
员郾 圆郾 圆郾 员摇 碘乙酰胺处理摇 将 缘 个浓度梯度渊园尧猿尧缘尧苑尧
员园皂皂燥造 辕 蕴冤 陨韵粤 溶解于 悦孕宰 溶液袁责匀 值均调至 缘郾 愿袁
抽滤灭菌遥 使用时袁将纯化的原生质体悬浮于不同浓
度的 陨韵粤溶液中袁在 圆缘益左右的室温下处理 缘皂蚤灶袁然
后离心 缘皂蚤灶渊员园园 伊 早冤袁收集原生质体袁用 悦孕宰酶溶剂
洗涤 圆 次袁再用各自的原生质体培养液洗涤 员 次遥
员郾 圆郾 圆郾 圆摇 罗丹明 远郧 处理摇 将 缘 个浓度梯度渊园尧源园尧
缘园尧远园 和 苑园滋早 辕 皂造冤砸鄄远郧溶解于含 员园园郾 园早 辕 蕴的二甲基
亚砜渊阅酝杂韵冤溶液中袁抽滤灭菌遥 处理方法同 陨韵粤遥
利用各自的原生质体培养液将原生质体密度均调
整为 员郾 缘 伊 员园缘 耀 圆郾 园 伊 员园缘个 辕 蕴袁吸取 圆 耀 猿皂造悬浮于直
径为 远园皂皂的培养皿中袁在 圆缘益 依 员益尧黑暗条件下进
行液体浅层静置培养遥 液体培养基采用 运酝愿孕渊运葬燥葬灶凿 酝蚤糟澡葬赠造怎噪冤培养基袁附加 员园园皂早 辕 蕴 水解酪蛋白尧
员园园皂早 辕 蕴水解乳蛋白尧员豫蔗糖尧园郾 源皂燥造 辕 蕴 甘露醇袁附
加的激素浓度及组合参照 猿 种牧草愈伤组织的诱导浓
度袁责匀 缘郾 愿袁抽滤灭菌遥
员郾 圆郾 猿摇 指标测定摇 原生质体经培养后立即采用荧光
素双醋酸酯渊云造怎燥则藻泽糟藻蚤灶 阅蚤葬糟藻贼葬贼藻袁云阅粤冤法在荧光显微
镜下进行原生质体染色和活力鉴定遥 在活细胞内袁
云阅粤被酯酶裂解即发荧光袁由于荧光素不能自由地通
过质膜袁因而在完整的活细胞中积累起来袁但在死细胞
和损伤细胞中不能积累遥 因此袁有活力的原生质体在
荧光下发出黄绿色荧光袁无活力的原生质体不发光遥
随机选取 缘 个视野分别统计荧光下渊暗场冤和普光下
渊明场冤原生质体的数量袁原生质体活力计算公式如
下咱圆圆暂 院
原生质体活力 越 渊有活力的原生质体数 辕原生质
体总数冤 伊 员园园豫
培养第 苑 天袁在倒置显微镜下测定原生质体的植
板率袁每个处理观察 员园 个视野袁计算公式如下咱源暂 院
植板率 越总克隆数 辕 渊总克隆数 垣总原生质体数冤
伊 员园园豫
培养第 猿园 耀 源园 天袁观察原生质体的再生情况遥
员郾 猿摇 统计分析
用 杂孕杂杂 员猿郾 园 统计软件包中的 悦燥皂责葬则藻 酝藻葬灶泽 法
对试验数据进行单因素方差分析和相关性分析袁差异
显著性用 阅怎灶糟葬灶法进行多重比较遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 不同浓度 陨韵粤处理对 猿 种豆科牧草愈伤组织原
生质体活力的影响
用 陨韵粤处理酶解出的原生质体袁由图 员 可知袁随
着 陨韵粤处理浓度的升高袁猿 种豆科牧草原生质体活力
的下降幅度逐渐增大遥 未经 陨韵粤 处理时袁猿 种豆科牧
草原生质体活力平均值为 苑愿郾 园豫 袁其中袁扁蓿豆最高袁
为 愿缘郾 愿豫 袁清水紫花苜蓿最低为 苑圆郾 愿豫 遥 陨韵粤 浓度增
至 员园皂皂燥造 辕 蕴时袁猿 种牧草原生质体活力分别降为院百
脉根 缘圆郾 园豫 袁扁蓿豆 远员郾 源豫 袁清水紫花苜蓿 缘园郾 远豫 袁其
中袁百脉根的降幅最大袁可达 猿园郾 怨豫 遥
经相关性分析袁百脉根尧扁蓿豆及清水紫花苜蓿原
生质体的活力值与 陨韵粤 浓度之间均存在极显著的负
相关袁相关系数依次为 原 园郾 怨员愿袁 原 园郾 愿远圆袁 原 园郾 怨源园遥 清
水紫花苜蓿原生质体对 陨韵粤 的钝化作用最敏感袁
猿皂皂燥造 辕 蕴的处理浓度下袁其原生质体活力降幅最大袁与
悦运相比袁降幅达 员园郾 圆豫 袁百脉根次之袁扁蓿豆原生质
体活力降幅最小为 缘郾 员豫 遥
圆郾 圆摇 不同浓度 砸鄄远郧 处理对 猿 种豆科牧草愈伤组织
原生质体活力的影响
由图 圆 可知袁随着 砸鄄远郧 浓度的升高袁猿 种豆科牧
草原生质体的活力下降幅度均逐渐增大袁与各自 悦运
相比袁差异均达极显著水平渊责 约 园郾 园员冤遥 当 砸鄄远郧 浓度
增至 苑园滋早 辕 皂造时袁猿 种牧草原生质体的活力分别降为院
百脉根 缘园郾 愿豫 袁扁蓿豆 缘缘郾 远豫 袁清水紫花苜蓿 源怨郾 源豫 袁
其中袁清水紫花苜蓿的降幅最大袁达 圆怨郾 远豫 遥
经 砸鄄远郧钝化处理后袁猿 种豆科牧草原生质体均被
染成红色渊图 猿 原 粤冤袁在荧光显微镜下发出红色荧光
渊图 源冤遥 相关性分析表明袁百脉根尧扁蓿豆尧清水紫花
苑员远
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
摇 摇 摇 摇 摇
图 员摇 不同 陨韵粤浓度处理下 猿 种豆科牧草愈伤组织原生质体的活力
云蚤早援 员摇 孕则燥贼燥责造葬泽贼泽 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 猿 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 陨韵粤 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽
图中不同小写字母表示 猿 种豆科牧草各处理间的差异显著渊责 约 园郾 园缘冤袁下图同遥
月葬则泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽皂葬造造 造藻贼贼藻则泽 葬则藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬贼 贼澡藻 园郾 园缘 造藻增藻造 怎灶凿藻则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶贼则燥造泽 燥枣 猿 增葬则蚤藻贼蚤藻泽袁 贼澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早 枣蚤早怎则藻援
图 圆摇 不同 砸鄄远郧浓度处理下 猿 种豆牧草愈伤组织原生质体的活力
云蚤早援 圆摇 孕则燥贼燥责造葬泽贼泽 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 猿 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 砸鄄远郧 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽
苜蓿的活力值与 砸鄄远郧浓度之间均存在极显著的负相
关袁相关系数依次为 原 园郾 愿怨怨袁 原 园郾 愿远怨袁 原 园郾 怨猿愿遥 清水
紫花苜蓿对 砸鄄远郧的钝化作用最敏感袁源园滋早 辕 皂造的处理
浓度下袁其原生质体活力降幅最大袁达 员圆郾 园豫 渊图 猿冤袁
扁蓿豆原生质体活力的降幅在各处理下总是最小的遥
圆郾 猿摇 不同浓度 陨韵粤处理对 猿 种豆科牧草愈伤组织原
生质体植板率的影响
由图 缘 可知袁经 陨韵粤钝化处理后袁猿 种豆科牧草原
生质体的植板率均低于各自的对照袁且差异极显著渊责
约园郾 园员冤遥 各处理浓度下清水紫花苜蓿原生质体的植
板率均最低遥 员园皂燥造 辕 蕴 陨韵粤处理下 猿 种牧草的植板率
分别为院百脉根 员远郾 源豫 袁扁蓿豆 圆缘郾 源豫 袁清水紫花苜蓿
怨郾 愿豫 袁其中袁清水紫花苜蓿原生质体植板率的降幅最
大袁达 苑源郾 园豫 遥
猿 种牧草原生质体的植板率与 陨韵粤浓度之间均存
在极显著的负相关袁相关系数依次为院百脉根 原 园郾 怨苑缘袁
扁蓿豆 原园郾 怨缘圆袁清水紫花苜蓿 原 园郾 愿苑远遥 清水紫花苜
蓿对 陨韵粤的钝化作用最敏感袁各处理下袁其植板率的
降幅均最大袁百脉根次之袁扁蓿豆原生质体植板率的降
幅在各处理浓度下总是最小的遥
愿员远
摇 猿 期 代谢互补抑制剂碘乙酰胺和罗丹明对 猿 种豆科牧草原生质体活力和再长的影响
图 猿摇 源园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧钝化处理清水紫花苜蓿原生质体的活力渊源园园 伊 冤
云蚤早援 猿 灾蚤葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 憎蚤贼澡 源园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧 燥枣 酝援 泽葬贼蚤增葬 蕴援 糟增援 匝蚤灶早泽澡怎蚤渊源园园 伊 冤
粤院云阅粤明场染色曰月院同一视野 云阅粤暗场染色曰箭头所指为钝化失活的原生质体遥
粤院云阅粤 凿赠藻蚤灶早 蚤灶 造蚤早澡贼 枣蚤藻造凿曰月院云阅粤 凿赠藻蚤灶早 蚤灶 凿葬则噪 枣蚤藻造凿 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 增蚤藻憎曰 粤则则燥憎泽 泽贼葬灶凿 枣燥则 蚤灶葬糟贼蚤增葬贼藻凿 责则燥贼燥责造葬泽贼泽援
图 源摇 清水紫花苜蓿苜蓿原生质
体罗丹明 远郧染色渊员园园 伊 冤
云蚤早援 源摇 砸鄄远郧 凿赠藻蚤灶早 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 燥枣
酝援 泽葬贼蚤增葬 蕴援 糟增援 匝蚤灶早泽澡怎蚤渊员园园 伊 冤
图 缘摇 不同 陨韵粤浓度处理下 猿 种豆科牧草愈伤组织原生质体的植板率
云蚤早援 缘摇 孕则燥贼燥责造葬泽贼泽 责造葬贼藻 则葬贼藻 燥枣 猿 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 陨韵粤 贼则藻葬皂藻灶贼泽
圆郾 源摇 不同浓度 砸鄄远郧 处理对 猿 种豆科牧草愈伤组织
原生质体植板率的影响
由图 远 可知袁随着 砸鄄远郧 处理浓度的升高袁猿 种豆
科牧草原生质体植板率的降幅均逐渐增大袁与各自 悦运
相比袁差异均极显著渊 责 约 园郾 园员冤遥 苑园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧 处理
下袁猿 种牧草的植板率分别为院百脉根 远郾 园豫 袁扁蓿豆
怨郾 远豫 袁清水紫花苜蓿 缘郾 园豫 袁其中袁百脉根的降幅最
大袁达 愿圆郾 园豫 遥
相关性分析表明袁百脉根尧扁蓿豆和清水紫花苜
蓿原生质体的植板率与 砸鄄远郧 浓度间均存在极显著的
负相关袁相关系数依次为 原 园郾 怨远怨袁 原 园郾 愿源猿袁 原 园郾 愿怨苑遥
与各自 悦运相比袁百脉根对 砸鄄远郧的钝化处理最敏感袁源
个处理浓度下袁其植板率的降幅总是最低袁清水紫花苜
蓿次之袁扁蓿豆植板率的降幅总是最小的遥
怨员远
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
图 远摇 不同 砸鄄远郧浓度处理下 猿 种牧草愈伤组织原生质体的植板率
云蚤早援 远摇 孕则燥贼燥责造葬泽贼泽 责造葬贼藻 则葬贼藻 燥枣 猿 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 砸鄄远郧 贼则藻葬皂藻灶贼泽
圆郾 缘摇 不同浓度 陨韵粤处理对 猿 种豆科牧草原生质体再
生能力的影响
在 陨韵粤不同浓度处理下袁猿 种豆科牧草原生质体
的再生能力见表 圆遥 培养第 苑 天袁所有处理均可见再
生白色小细胞团袁经过 猿园 耀 源园凿 的培养袁猿 种牧草的对
照原生质体均可再生成愈伤组织遥 猿皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤 处理
下 袁百脉根和扁蓿豆原生质体仍有较高的分裂能力
渊表 圆袁图 苑冤袁再生的小细胞团经后期培养均可再生愈
伤组织渊图 愿冤曰清水紫花苜蓿不规则原生质体的比例
较高袁再生小细胞团稀少袁后期培养中不能继续发育袁
逐渐褐化死亡遥 陨韵粤 钝化浓度逸缘皂皂燥造 辕 蕴 时袁百脉根
原生质再生的小细胞团停止发育袁未能形成愈伤组织遥
陨韵粤 钝化浓度逸苑皂皂燥造 辕 蕴 时袁扁蓿豆原生质不能形成
再生愈伤组织遥
表 圆摇 不同 陨韵粤浓度处理下 猿 种豆科牧草原生质体愈伤组织的再生情况
栽葬遭造藻 圆摇 砸藻早藻灶藻则葬贼藻凿 糟葬责葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 燥枣 猿 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 陨韵粤 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽
牧草种类
造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽
里奥百脉根
蕴援 糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽 蕴援 糟增援 蕴藻燥灶
扁蓿豆
酝援 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 渊蕴窑冤 杂燥躁葬噪
清水紫花苜蓿
酝援 泽葬贼蚤增葬 蕴援 糟增援 匝蚤灶早泽澡怎蚤
陨韵粤浓度
陨韵粤 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶渊皂皂燥造 辕 蕴冤 园 猿 缘 苑 员园 园 猿 缘 苑 员园 园 猿 缘 苑 员园
培养第 苑 天再生细胞团
则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 糟藻造造 糟燥造燥灶蚤藻泽 蚤灶 苑凿 燥枣 糟怎造贼怎则藻 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣
培养 猿园 耀 源园凿再生愈伤组织
则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 糟葬造造蚤 蚤灶 猿园 耀 源园凿 燥枣 糟怎造贼怎则藻 垣 垣 原 原 原 垣 垣 垣 原 原 垣 原 原 原 原
摇 摇 注院野 垣 冶为能形成再生细胞或愈伤组织袁野 原 冶 为不能形成再生细胞或愈伤组织遥 下表同遥
晕燥贼藻院 野 垣 冶皂藻葬灶泽 糟葬责葬遭造藻 燥枣 枣燥则皂蚤灶早 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 糟藻造造 糟燥造燥灶蚤藻泽 燥则 糟葬造造蚤曰 野 原 冶 皂藻葬灶泽 蚤灶糟葬责葬遭造藻 燥枣 枣燥则皂蚤灶早 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 糟藻造造 糟燥造燥灶蚤藻泽 燥则 糟葬造造蚤援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽
枣燥造造燥憎蚤灶早 贼葬遭造藻援
摇 摇 因此袁就 陨韵粤 钝化效果而言袁使 猿 种豆科牧草原
生质体失活的 陨韵粤临界浓度分别为院百脉根 缘皂皂燥造 辕 蕴曰
扁蓿豆 苑皂皂燥造 辕 蕴曰清水紫花苜蓿 猿皂皂燥造 辕 蕴遥
圆郾 远摇 不同浓度 砸鄄远郧 处理对 猿 种豆科牧草原生质体
再生能力的影响
在不同浓度的 砸鄄远郧处理下袁猿 种豆科牧草原生质
体的再生能力如表 猿 所示遥 培养第 苑 天袁所有处理均
可见再生白色小细胞团袁经过 猿园 耀 源园凿 的培养袁猿 种牧
草的对照原生质体均可再生成愈伤组织遥 源园滋早 辕 皂造 砸鄄
远郧处理下袁百脉根和扁蓿豆原生质体再生的小细胞
团袁经后期的培养可发育成愈伤组织曰清水紫花苜蓿再
生的小细胞团在后期培养中袁均停止发育袁不能形成愈
伤组织遥 砸鄄远郧 钝化浓度逸缘园滋早 辕 皂造时袁百脉根原生质
体不能形成愈伤组织遥 砸鄄远郧 钝化浓度为 苑园滋早 辕 皂造
园圆远
摇 猿 期 代谢互补抑制剂碘乙酰胺和罗丹明对 猿 种豆科牧草原生质体活力和再长的影响
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 表 猿摇 不同浓度 砸鄄远郧处理下 猿 种豆科牧草原生质体愈伤组织的再生情况
栽葬遭造藻 猿摇 砸藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 糟葬责葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 燥枣 猿 造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 砸鄄远郧 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽
牧草种类
造藻早怎皂藻 枣燥则葬早藻泽
里奥百脉根
蕴援 糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽 蕴援 糟增援 蕴藻燥灶
扁蓿豆
酝援 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 渊蕴援 冤 杂燥躁葬噪
清水紫花苜蓿
酝援 泽葬贼蚤增葬 蕴援 糟增援 匝蚤灶早泽澡怎蚤
砸鄄远郧浓度
砸鄄远郧 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶渊滋早 辕 皂造冤 园 源园 缘园 远园 苑园 园 源园 缘园 远园 苑园 园 源园 缘园 远园 苑园
培养第 苑 天再生细胞团
则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 糟藻造造 糟燥造燥灶蚤藻泽 蚤灶 苑凿 燥枣 糟怎造贼怎则藻 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣
培养 猿园 耀 源园凿再生愈伤组织
则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 糟葬造造蚤 蚤灶 猿园 耀 源园凿 燥枣 糟怎造贼怎则藻 垣 垣 原 原 原 垣 垣 垣 垣 原 垣 原 原 原 原
图 苑摇 分裂的扁蓿豆原生质体渊源园园 伊 冤
云蚤早援 苑摇 阅蚤增蚤凿藻凿 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 燥枣
酝援 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 渊蕴援 冤 杂燥躁葬噪渊源园园 伊 冤
箭头所示为处于分裂中的原生质体
葬则则燥憎泽 泽贼葬灶凿 枣燥则 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 蚤灶 凿蚤增蚤泽蚤燥灶 责藻则蚤燥凿
图 愿摇 扁蓿豆原生质体
再生的小愈伤组织
云蚤早援 愿摇 砸藻早藻灶藻则葬贼藻凿 糟葬造造蚤 枣则燥皂 责则燥贼燥责造葬泽贼泽
燥枣 酝援 则怎贼澡藻灶蚤糟葬 渊蕴援 冤 杂燥躁葬噪
时袁扁蓿豆原生质体不能形成再生愈伤组织遥
因此袁就 砸鄄远郧 钝化效果而言袁使 猿 种豆科牧草原
生质体失活的临界浓度分别为院百脉根 缘园滋早 辕 皂造曰扁蓿
豆 苑园滋早 辕 皂造曰清水紫花苜蓿 源园滋早 辕 皂造遥
猿摇 讨论
猿郾 员摇 代谢互补抑制剂 陨韵粤 和 砸鄄远郧 临界浓度的筛选
和确定
陨韵粤钝化细胞质袁通过阻断细胞能量供应来抑制
细胞生长袁有效地简化了细胞杂种的筛选工作咱圆猿暂 袁常
用于不对称体细胞杂交咱圆源 耀 圆苑暂 遥 砸鄄远郧可抑制线粒体氧
化磷酸化袁与 陨韵粤 配合使用袁可对融合细胞进行筛选
而获得体细胞杂种咱远 耀 愿暂 遥 本研究表明袁猿 耀 员园皂皂燥造 辕 蕴
陨韵粤和 源园 耀 苑园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧的浓度处理袁可使 猿 种豆科
牧草原生质体的细胞质不同程度受损袁其中袁苑园滋早 辕 皂造
的 砸鄄远郧处理可使清水紫花苜蓿的活力值和植板率分
别降至 源怨郾 源豫和 缘郾 园豫 袁为各处理中最低袁此时原生质
体仍可分裂形成小细胞团袁这是由于未钝化的原生质
体在一定的培养条件下仍具有生长能力的缘故遥 培养
猿园 耀 源园凿袁再生细胞团有的可发育成愈伤组织袁有的则
停止生长袁最终丧失再生能力遥 因此袁本研究认为在筛
选上述 圆 种抑制剂对豆科牧草原生质体钝化效果的临
界浓度时袁应以原生质体是否失去再生愈伤组织能力
为最终依据袁在活力和植板率均不为 园 的情况下袁原生
质体在后期的培养中也可能因存活原生质体密度低于
培养所需的临界密度而不能再生遥 付莉莉等咱圆源暂在筛
选陆地棉品系 再在 原 员 棉花原生质体的 陨韵粤 钝化浓度
时袁园郾 缘皂皂燥造 辕 蕴的最低失活浓度下原生质体单独培养
不成功袁此时植板率为 猿郾 缘豫 遥 金红咱圆苑暂在研究 陨韵粤 对
苜蓿原生质体存活率影响时发现袁缘郾 园皂皂燥造 辕 蕴 的浓度
处理下存活率为 员缘郾 圆豫 袁原生质体继续培养不能形成
小细胞团袁研究结果均与本文相似遥 而侯喜林咱苑暂用
员郾 园皂皂燥造 辕 蕴的 陨韵粤处理白菜子叶原生质体 圆园皂蚤灶 时袁
原生质体植板率为 园袁完全失活遥 这可能是由于原生
质体来源及 陨韵粤作用时间等不同袁造成 陨韵粤失活效果
员圆远
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊猿冤院园远员缘 耀 园远圆圆
的差异遥
猿郾 圆摇 代谢互补抑制剂 陨韵粤 和 砸鄄远郧 对 猿 种豆科牧草
原生质体的作用效果评价
本研究中袁不同抑制剂对豆科牧草原生质体活力
和生长的影响存在差异遥 与 砸鄄远郧相比袁陨韵粤对 猿 种牧
草原生质体活力的抑制作用更加明显袁员园皂皂燥造 辕 蕴 的浓
度可使活力降幅的平均值达 圆怨郾 怨豫 遥 砸鄄远郧 则对 猿 种
牧草植板率的影响更加显著袁苑园滋早 辕 皂造 的浓度处理袁植
板率平均值仅为 远郾 怨豫 袁降幅平均值达 苑苑郾 圆豫 遥 此外袁
砸鄄远郧作为一种常见的荧光染料袁在钝化原生质体的同
时袁可使其细胞质染成红色袁并发出红色荧光袁在进行
下一步的融合操作时袁可与经其他荧光染料染色的原
生质体明显区分袁有利于融合过程的观察和异源融合
率的统计遥 有研究指出袁陨韵粤 钝化细胞质还会引起细
胞核染色体的丢失咱圆源暂 袁因此有关这 圆 种抑制剂对植物
原生质体的钝化效果和作用方式仍有待进一步研究遥
此外袁不同牧草种类对 陨韵粤 和 砸鄄远郧 的抑制作用
的敏感程度是不同的遥 扁蓿豆愈伤组织原生质体表现
出较强的抗抑制能力袁不同浓度处理下袁其活力总是最
高的袁而清水紫花苜蓿总是最低的遥 就 圆 种抑制剂的
临界浓度而言袁扁蓿豆总是最高的袁清水紫花苜蓿总是
最低的遥 由于 猿 种牧草的原生质体在钝化前的起始密
度相同袁采用了相同的处理方法和培养方式袁因此在不
同抑制剂作用下它们的活力和再生愈伤组织能力出现
差异的原因可能是由于供试材料的遗传背景和基因组
成不同遥
源摇 结论
源郾 员摇 猿 耀 员园皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤 和 源园 耀 苑园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧 的浓度
处理使 猿种豆科牧草的活力和植板率明显下降袁并存在
极显著的负相关渊责 约园郾 园员冤遥 培养 猿园 耀源园凿袁圆 种抑制剂
临界浓度下所有处理均失去再生愈伤组织的能力遥
源郾 圆摇 陨韵粤对 猿 种豆科牧草原生质体活力的抑制作用
更加明显袁砸鄄远郧对 猿 种牧草植板率的影响更显著并可
使原生质体发出红色荧光袁有利于细胞融合时进行亲
本原生质体的标识遥
源郾 猿摇 综合考虑 圆 种抑制剂对原生质体的钝化效果袁适
宜 猿 种牧草的抑制剂及临界浓度分别是院百脉根
缘皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤 或 缘园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧曰扁蓿豆 苑皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤
或 苑园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧曰清水紫花苜蓿 猿皂皂燥造 辕 蕴 陨韵粤 或
源园滋早 辕 皂造 砸鄄远郧遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 姜淑慧袁 管荣展袁 唐三元袁 忻如颖袁 张红生袁 赵立茜袁 潘琴燕援
甘蓝型油菜与蔊菜的原生质体融合与植株再生 咱 允暂 援 遗传袁
圆园园苑袁 圆怨渊远冤院 苑源缘 原 苑缘园
咱 圆 暂摇 栽燥则蚤赠葬皂葬 运袁 匀蚤灶葬贼葬噪 运袁 运葬皂藻赠葬 栽援 孕则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 泽燥皂葬贼蚤糟 澡赠遭则蚤凿
责造葬灶贼泽袁 耶 月则葬泽泽蚤糟燥皂燥则蚤糟葬灶凿蚤葬爷袁 贼澡则燥怎早澡 责则燥贼燥责造葬泽贼 枣怎泽蚤燥灶 遭藻贼憎藻藻灶
酝燥则蚤糟葬灶凿蚤葬 葬增藻灶泽蚤泽 葬灶凿 月则葬泽泽蚤糟葬 燥造藻则葬糟葬藻咱允暂 援 孕造葬灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 员怨愿苑袁
源愿渊圆冤院 员圆猿 原 员圆愿
咱 猿 暂摇 郧藻葬则 粤 砸 蕴援 砸澡燥凿葬皂蚤灶藻 远郧 葬 责燥贼藻灶贼 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则 燥枣 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造
燥曾蚤凿葬贼蚤增藻 责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼蚤燥灶 咱 允 暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁
员怨苑源袁 圆源怨渊员员冤院 猿远圆愿 原 猿远猿苑
咱 源 暂摇 中国科学院上海植物生理研究所袁 上海市植物生理学会编援 现
代植物生理学实验指南咱酝暂援 科学出版社袁 员怨怨怨院 源苑
咱 缘 暂摇 王国平援 原生质体融合技术在枣育种中的应用展望咱 允暂 援 分子
植物育种袁 圆园园愿袁 远渊猿冤院 缘缘缘 原 缘远园
咱 远 暂摇 赵小强袁马晖玲袁周万海袁林摇 栋援 草地早熟禾原生质体培养与
融合咱允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源渊源冤院 苑猿苑 原 苑源猿
咱 苑 暂摇 侯喜林袁曹寿椿袁佘建明袁陆维忠援 碘乙酰胺和罗丹明对不结球
白菜子叶原生质体线粒体失活效果的影响 咱 允暂 援 中国蔬菜袁
圆园园圆袁 源院 员愿 原 员怨
咱 愿 暂 摇 王凌健袁 倪迪安袁 宛新杉袁 夏镇澳援 水稻渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬冤原生质体
经钝化后诱导融合再生可育体细胞杂种咱 允暂 援 实验生物学报袁
员怨怨愿袁 猿员渊源冤院 源员猿 原 源圆员
咱 怨 暂摇 石凤翎袁 王明玖袁 王建光援 豆科牧草栽培咱酝暂援 北京院 中国林业
出版社袁 圆园园猿
咱员园暂摇 栽澡燥皂葬泽 酝 砸袁 允燥澡灶泽燥灶 蕴 月袁 宰澡蚤贼藻 云 云援 杂藻造藻糟贼蚤燥灶 燥枣 蚤灶贼藻则泽责藻糟蚤枣蚤糟
泽燥皂葬贼蚤糟 澡赠遭则蚤凿泽 燥枣 酝藻凿蚤糟葬早燥 遭赠 怎泽蚤灶早 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 原 贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿
贼蚤泽泽怎藻泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 员怨怨园袁 远怨渊圆冤院 员愿怨 原 员怨愿
咱员员暂摇 孕怎责蚤造造蚤 云袁 杂糟葬则责葬 郧 酝袁 阅葬皂蚤葬灶蚤 云袁 粤则糟蚤燥灶蚤 杂援 孕则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣
蚤灶贼藻则泽责藻糟蚤枣蚤糟 泽燥皂葬贼蚤糟 澡赠遭则蚤凿 孕造葬灶贼泽 蚤灶 贼澡藻 早藻灶怎泽 酝藻凿蚤糟葬早燥 贼澡则燥怎早澡
责则燥贼燥责造葬泽贼 枣怎泽蚤燥灶咱允暂 援 栽澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 葬灶凿 粤责责造蚤藻凿 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁 员怨怨圆袁 愿源院
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咱员圆暂摇 孕怎责蚤造造蚤 云袁 月怎泽蚤灶藻造造蚤 杂袁 悦葬糟藻则藻泽 酝 耘袁 阅葬皂蚤葬灶蚤 云援 酝燥造藻糟怎造葬则袁
糟赠贼燥造燥早蚤糟葬造 葬灶凿 皂燥则责澡燥 原 葬早则燥灶燥皂蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 澡藻曾葬责造燥蚤凿
泽燥皂葬贼蚤糟 澡赠遭则蚤凿泽 蚤灶 酝藻凿蚤糟葬早燥咱允暂 援 栽澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 葬灶凿 粤责责造蚤藻凿 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁
员怨怨缘袁 怨园院 猿源苑 原 猿缘缘
咱员猿暂摇 晕藻灶扎 耘袁 孕怎责蚤造造蚤 云袁 阅葬皂蚤葬灶蚤 云袁 粤则糟蚤燥灶蚤 杂援 杂燥皂葬贼蚤糟 澡赠遭则蚤凿 责造葬灶贼泽
遭藻贼憎藻藻灶 贼澡藻 枣燥则葬早藻 造藻早怎皂藻 酝藻凿蚤糟葬早燥 泽葬贼蚤增葬 蕴援 葬灶凿 酝藻凿蚤糟葬早燥 葬则遭燥则藻葬
蕴援 咱允暂 援 栽澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 葬灶凿 粤责责造蚤藻凿 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁 员怨怨远袁 怨猿院员愿猿 原 员愿怨
咱员源暂摇 安骥飞援 苜蓿与百脉根细胞融合的研究咱阅暂援 重庆院 西南农业
大学袁 圆园园缘院 猿圆 原 猿猿
咱员缘暂摇 金淑梅袁 管清杰袁 罗秋香袁 王摇 涛袁 高野哲夫援 柳参奎苜蓿愈伤
组织高频再生遗传和转化体系的建立 咱 允暂 援 分子植物育种袁
圆园园远袁 源 渊源冤院 缘苑员 原 缘苑愿
咱员远暂摇 赵桂琴袁 慕摇 平袁 张摇 勃援 紫花苜蓿基因工程研究进展咱 允暂 援 草
业学报袁 圆园园远袁 员缘渊远冤院 怨 原 员愿
咱员苑暂摇 王明玖援 百脉根的优缺点及其利用管理要与紫花苜蓿比较咱 允暂 援
国外畜牧学要草原与草坪袁 员怨怨怨袁 圆院员 原 猿
咱员愿暂摇 陶摇 茸袁 李玉珠袁 王摇 娟袁 安惠惠袁 郭摇 婧袁 师尚礼援 扁蓿豆愈
伤组织原生质体分离条件的研究咱允暂 援 草地学报袁 圆园员员袁 员怨渊圆冤院
圆愿愿 原 圆怨猿
咱员怨暂摇 陶摇 茸袁 李玉珠袁 师尚礼援 陇东野生紫花苜蓿愈伤组织原生质
体有利条件的筛选咱允暂 援 中国草地学报袁 圆园员员袁 猿猿渊员冤院 猿园 原 猿缘
渊下转第 远园员 页冤
圆圆远
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊猿冤院园缘怨源 耀 园远园员
咱 源 暂 摇 李咏富袁哈益明袁陶乐仁袁李彦杰袁王摇 锋援辐射接枝共聚物 载郧鄄早鄄
晕灾孕溶胀性能及其对苯酚吸附特性的研究咱允暂 援核农学报袁圆园员员袁
圆缘渊员冤 院怨苑 原 员园源
咱 缘 暂 摇 粤造赠 粤 杂袁 杂燥噪噪藻则 匀 匀袁 匀葬泽澡藻皂 粤袁 匀藻遭藻蚤泽澡 粤援 孕则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣
糟藻造造怎造燥泽蚤糟 皂藻皂遭则葬灶藻 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责赠则则燥造蚤凿燥灶藻 皂燥蚤藻贼赠 增蚤葬 则葬凿蚤葬贼蚤燥灶
蚤灶凿怎糟藻凿 早则葬枣贼蚤灶早 葬灶凿 蚤贼泽 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 蚤灶 憎葬泽贼藻憎葬贼藻则 贼则藻葬贼皂藻灶贼 咱 允暂 援
粤皂藻则蚤糟葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤责责造蚤藻凿 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁圆园园缘袁圆渊圆冤 院缘园愿 原 缘员猿
咱 远 暂 摇 蕴蚤 再 允袁 匀葬 再 酝袁 宰葬灶早 云袁 蕴蚤 再 云援 耘枣枣藻糟贼 燥枣 蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 燥灶 贼澡藻
皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼袁 泽贼则怎糟贼怎则藻 葬灶凿 葬责责葬则藻灶贼 增蚤泽糟燥泽蚤贼赠 燥枣 曾葬灶贼澡葬灶 早怎皂 蚤灶
葬择怎藻燥怎泽 泽燥造怎贼蚤燥灶 咱 允暂 援 粤凿增葬灶糟藻凿 酝葬贼藻则蚤葬造泽 砸藻泽藻葬则糟澡袁圆园员员袁圆猿怨 原
圆源圆院圆远猿圆 原 圆远猿苑
咱 苑 暂 摇 王 摇 俊袁尹 摇 华袁李明玉袁汤心虎袁曹 摇 刚援 丙烯酸与纤维素在
远园悦燥辐照下的接枝聚合反应咱允暂 援化学研究与应用袁圆园园源袁员远渊猿冤院
源猿员 原 源猿圆
咱 愿 暂 摇 刘鹏飞袁彭摇 静袁吴季兰援辐射交联制备改性 悦酝悦 水凝胶的溶胀
行为研究咱允暂 援高分子学报袁圆园园远袁渊远冤院苑缘远 原 苑缘怨
咱 怨 暂 摇 赵宝秀袁王摇 鹏袁郑摇 彤袁舒摇 静袁陈建华援 微波辐射合成纤维素
基吸附树脂及对 悦怎圆 垣吸附性能研究咱砸暂援 第 员员 届中国微波能
应用学术研讨会袁源员 原 源源
咱员园暂摇 杂燥造责葬灶 阅袁 栽燥则怎灶 酝袁 郧怎增藻灶 韵援 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 责则藻 原 蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿
皂怎贼怎葬造 早则葬枣贼蚤灶早 燥枣 圆 原 糟澡造燥则燥葬糟则赠造燥灶蚤贼则蚤造藻 燥灶 糟藻造造怎造燥泽藻 遭赠 早葬皂皂葬 原
蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶咱允暂 援 砸葬凿蚤葬贼蚤燥灶 孕澡赠泽蚤糟泽 葬灶凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠 袁圆园员园袁苑怨渊猿冤院圆缘园
原 圆缘源
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