全 文 ：核 农 学 报 分 , 二
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射线辐照选育肌昔高产菌
株 一 的研究
邱玉 棠 施庆珊 李 崇
广州
李 良秋 林小 平
广东省微生物研究所
用 ’“ 射线 或 辐照在 肉汤平皿上培养 的肌普 产生 菌枯草杆 菌
一 菌落后 , 经 ℃ , 培养 , 查
、
平皿 和摇瓶发哮试验 ,
选育 出肌芬 高产 突变株 一 。 在 以 渡粉水解糖 为碳源 的 发哮培养墓中 , 经 ,
发哮 , 肌普 产童达 , 比 出发 菌株 肌苍产贡 提 高 ,
菌株产肌普能 力稳定 。
关键词 枯草杆 菌 辐照 肌普
目 舀
肌昔又称次黄嗦吟核昔 , 是具有一定 医疗价值的药物及重要 医药工业原料 , 同时 , 作为食
品助鲜剂肌昔酸合成的前体 , 在食品工业 中也占有重要的位置 〔‘
· ’〕口 我国发酵生产肌昔 , 采用紫
外线和化学诱变剂连续处理川获得的枯草杆菌营养缺陷型菌株 , 以淀粉水解糖为碳源 , 摇瓶发
酵产 肌昔 , 工 业发酵产肌昔 , 与国外最先进的 国家 日本泪相 比 , 差距较
大 , 而生产菌株产肌昔率低是其中一个重要因素 。 本文采用‘“ 。了射线辐照肌昔产生菌枯草杆
菌 , 诱变选育高产菌株 。
材 料 与 方 法
菌株 枯草杆菌 一 仁腺嚷吟
、
硫胺素 、组氨酸 、 酪氨酸缺陷型 , 系本
文作者以肇庆市星湖味精 集团 股份有限公司提供的生产菌株枯草杆菌 腺嗦吟 、硫胺素
缺陷型 为出发菌株 , 采用菌体或原生质体亚硝基肌
、 硫酸二 乙酷 、 紫外线等多因子诱变选育
而获得 〕
。
培养基 菌种保藏培养基 蛋 白陈 , 酵母膏 牛肉膏 工 , 琼脂 , 。。 液体
活化培养基 葡萄糖 , 尿素 , 玉米桨 , 蛋 白陈 。, 酵母膏 , 腺嚷吟 。 , 钾 。。
肉汤培养基 葡萄糖 牛 肉膏 , 蛋 白陈 , 酵母 , 琼脂 。 基本培养基
葡萄糖 , 硫酸按 , 柠檬酸钠 , 磷酸氢二钾 , 磷酸二氢钾 , 硫酸镁 。 , 自然 。 添加各种
营养物 的基本培养基 基本培养基 ‘ 腺嚎吟 十硫胺素
。 基本
培养基 腺嗦 吟 十 硫胺 素 , 十 组胺酸 。 基本培 养基 十 腺 嗦吟
十硫胺素 十组氨酸 酪氨酸 。 发酵培养基 均为工业生产原料
此文于 年 月 日收到 。
核 农 学 报 卷
徒份水解搪 。, 磷酸二氢钾 , 尿素 , 硫酸按 。, 玉米浆 , 酵母粉 , 硫酸镁 , 碳酸钙
, 。
辐照处理 用华南农业大学 ℃。 辐照中心钻源辐照在肉汤平皿上培养 的肌昔产生菌
枯 草 杆 菌 一 菌 落 , 平 皿 置 于 距源 心 处 。 辐 照剂量分别 为
、 、 、 、
, 剂量率为 。
初筛和摇瓶复筛 经 或 ‘。 。了辐照后的 个平皿中的菌落 , 在 ℃培养
后 挑 出 。个 长大 的菌落 , 分别 点在 添加各种营养物 的基本培养基平 皿上 , ℃培养
, 挑选出在 , 一 一 十 平皿上生长 良好 , 而在 十 和 十
一 、十 平皿上不生长或基本不生长的单菌落 株 初筛率为 。 。 , 初筛
掉的菌落作负变处理
。 把上述 株单菌落转保藏斜面 , 经液体活化培养基培养后 , 以 接种
量接摇瓶发酵培养基 , ℃发酵 , 测定肌昔产量 。
肌昔测定方法 纸层析法闭 。
结 果 与 讨 论
一 辐照 剂量与致死率的关系
如图 所示 , 随辐照剂量提高 , 致死率 明显上升 , 。。 辐照 , 致死率接近 。 根据筛
选微生物菌种的要求〔‘二及以上结果 , 确定 为合适辐照剂量 。
毛
三、
、
︸,﹂工,火一
图 辐照剂量与致死率的关系
气
干荤汉
生 欠,
照 射剂量 、 。 、 、。
二 不同辐照剂最对产肌昔能力的影响
用 和 分别辐照 一 , 其正变率及最高产肌昔的比较见表 。 从表 可
以看 出 , 辐照剂 。。 或 , 其正变率均较高 , 单株最高产肌昔量比出发菌株产肌昔量
提高较大 。 两个剂量无论是正变率或单株最高产肌昔量均很接近 , 说明 或 均
为较合适的辐照剂量 , 但低辐照剂量致死率低
, 能挑选的菌落更多 , 相对来说更为理想 。
三 肌普突变株 一 的筛选
辐照后的菌落经点平皿初筛和分离纯化 , 挑选出 株单菌落 , 其摇瓶培养结果见表 乙。 经
过摇 瓶复筛后 , 挑选 出两 侏产肌营 最高的苗 株 弓和 号 , 产 肌寸量分别 为 巧 和
, 分别来 自 。 和 辐照处理
。 产肌昔能力最高的 弓菌株编 为 赞从
期 的 射线辐 照选育肌昔高产菌株
一 的研究
, 分别来 自 和 辐 照处理 。 产肌昔 能力最高的 号菌侏编为
比出发菌株产肌昔提高 。
表 不同辐照剂孟正变率及单株最高产肌晋的比较
辐照剂量 菌落数 ’
正变菌株数
一
正变率 单株最高产肌昔 二 比出发菌株提高
写
一 一
。
菌落数为未经初筛菌落数
为 次摇瓶的平均值
习
工
表 辐照后经初筛挑选的 株单菌落摇瓶结果
菌株序号 产肌昔量 菌株序号 产肌昔 菌株序号 产肌昔量
丫
·
一
’ 菌株序号 一 和 的辐照剂量分别为 和
一
四 突变株 一 产肌昔的稳定性
为了检验突变株 一 产肌昔能力是否稳定 , 对斜面移接的第 代到第 代进行摇瓶
产肌昔试验 , 结果列表 。 从表 所列的结果可以看出 , 平均数又一 , 。 。 , 。一
。 。 突变株 一 肌昔产量稳定 。
盯比以 ‘ 脚 了 子 ‘
,
表 突变株 一 肌昔产且稳定性的检验
一
代 数
平均产肌昔 ·
瓶结果平均数
枯草杆菌是国内肌昔生产厂采用的菌株 , 而枯草杆菌 又是国内工业化生产中年平均
产肌昔最高的菌株 。 以此作为出发菌株 , 采用菌体或原生质体经紫外线 、 亚硝基孤或硫酸二乙
醋等多因子诱变 , 分离纯化 , 选育出产肌昔较高的 一 菌株 , 但如再重复这些常规诱变方
法继续选育 , 效果不很明显 。 采用‘ ℃。 辐照诱变肌昔产生菌 , 肌昔产量提高辐度较大 因此 ,
和 射线辐照是肌昔产生菌的一种行之有效的诱变新方法
参 考 文 献
叼 乎 卿 ,
, ,
王 熬全 程光胜 肌普产 生菌枯草芽抱杆菌 , 菌株的选育和发醉 条件 微生物学报 ,
邓祟亮等 枯草杆菌 一 突变株肌昔发醉研究
,
徽生物学通报 , , 叨
,
徐 海 高玉纸上 电泳法侧定核昔 分析化学 , ,
钱存柔 , 碧虹编 徽生物学荃础知识与实脸指导 北京 科学 出版社
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