全 文 :植物生理学通讯 第 43卷 第 3期,2007年 6月 501
收稿 2007-01-24 修定 2007-03-05
资助 国家科技部科研院所社会公益研究专项(2005DIB4J045)。
* 通讯作者( E - m a i l:x l l z y @ 2 6 3 . n e t;T e l:0 8 9 8 -
23300284)。
神秘果幼胚离体培养再生植株
李志英,徐立 *
中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,海南儋州 571737
In vitro Plant Regeneration from Immature Embryos of Synsepalum dulcificum
(Sch.) Daniell
LI Zhi-Ying, XU Li*
Institute of Tropical Crops Genetic Resources, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Danzhou, Hainan 571737, China
1 植物名称 神秘果[Synsepalum dulcificum (Sch.)
Daniell]。
2 材料类别 幼胚。
3 培养条件 幼胚萌发培养基:(1) MS。不定芽诱
导培养基:(2) MS+BA 6.0 mg·L-1 (单位下同)+NAA
0.2+50 mL·L-1椰子乳(CM)。增殖培养基:(3)
MS+BA 4.0+NAA 0.1+50 mL·L-1 CM。生根培养
基:(4) 1/2MS+IBA 6.0。上述培养基中均添加
20 g·L-1蔗糖和 6.5 mg·L-1卡拉胶,pH 5.8。培养
温度为(25±2) ℃,光强为 40 µmol·m-2·s-1,光照
时间为 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 无菌外植体的获得 取神秘果的幼嫩果实,除
掉果柄,洗涤剂浸泡 30 min,流水冲洗 10 min
后,在超净工作台上吸干水分,浸入含 1 滴吐
温 -20的 0.1%升汞溶液中 20 min,无菌水漂洗 5
次。用无菌纸吸干幼果表面的水分,去掉果皮和
种皮后,剥出带子叶幼胚接种于培养基(1)上。幼
胚于培养基(1)中培养 7 d后,由白色渐渐转为绿
色,剥取时造成的伤口愈合,无褐变,幼胚萌
发率 95%以上,比成熟种子常规播种的出苗率高
40%~50%,萌发提前 80~100 d。利用幼胚为外
植体,可获得 100% 的无菌材料。
4.2 带子叶与否的幼胚发芽和幼芽生长 剥取的幼
胚分为不带子叶幼胚、带1/2子叶幼胚和带完整子
叶幼胚 3种,分别接种到培养基(1)上。培养观察
结果表明,子叶对幼胚的萌发很重要,带子叶的
幼芽生长健壮,但若不及时转接,幼苗有明显的
徒长现象,上胚轴可伸长至 8 cm。而不带子叶
的幼胚,发芽缓慢,幼芽细弱,其真叶迟迟不
能展开。这表明,由幼胚获得无菌苗,应带(部
分)子叶。
4.3 芽的增殖 将萌发的幼芽切成带 1~2个芽的茎
段,接种到培养基(2)上。培养 20 d左右,从腋
芽处萌发 2~4个不定芽。40 d时,不定芽可长至
2 cm左右,切段接种在培养基(3)中进行继代培
养。处于增殖期的不定芽的叶片不伸展。每 40 d
将不定芽切段转到新鲜的培养基(3)中,可以使不
定芽连续增殖,增殖系数平均为 2。
4.4 根的诱导与移栽 取2~3 cm长的不定芽转接到
培养基(4)上诱导 20 d左右,不定芽基部形成少量
愈伤组织。30 d左右,愈伤组织分化出白色不定
根,同时叶片展开,不定芽的生根率为 100%。
将生根苗移栽到由河沙:表土:腐熟有机肥(5:3:2)配成
的基质中,保湿遮荫 15~20 d,移栽成活率 80%
以上。
5 意义与进展 神秘果为山榄科(Sapotaceae)神秘果
属植物,原产热带西非,上个世纪 60年代引入我
国,现在海南、广东、广西、云南、福建省(区)
的南部有栽培。神秘果为常绿灌木,植株生长缓
慢,可常年开花,花香宜人;成熟果实鲜红色,
味微甜,果肉中含有神秘果素,能改变人的味觉,
故可制成变味剂和酸性食品的助食剂。但目前神秘
果的繁殖均采用种子或扦插繁殖,繁殖率低,远
远不能满足花卉市场和食品市场的需求。本文结果
对神秘果的扩大开发利用可能有一定的参考价值。
神秘果的组织培养和植株再生尚未见报道。