全 文 :植物生理学通讯 第 40 卷 第 4期,2004 年 8 月 463
甜杨的组织培养和快速繁殖
林元震* 林善枝 张志毅** 貊润翌 张蔚 郭睆 张谦
北京林业大学林木花卉教育部重点实验室,北京 100083
Tissue Culture and Rapid Propagation of Populous suaveolens
LIN Yuan-Zhen*, LIN Shan-Zhi, ZHANG Zhi-Yi**, MO Run-Yi, ZHANG Wei, GUO Huan, ZHANG Qian
Key Laboratory for Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants, Ministry of Education, Beijing Forestry
University, Beijing 100083
收稿 2003-10-31 修定 2004-05-24
资助 国家自然科学基金资助项目(30271093)。
* E-mail: cricket_lyz@sohu.com, Tel: 010-63338105
** 通讯作者(E-mail: zhangzy@bjfu.edu.cn, Tel: 010-
63338502)。
1 植物名称 甜杨 (Populous suaveolens)。
2 材料类别 多年生嫁接苗枝条。
3 培养条件 芽启动及增殖培养基:(1) 改良MS
(大量 NH4NO3、 KH2PO4 分别调为0.8、0.34 g·L-1,
微量 MnSO4·4H 2O、ZnSO4·7H 2O 分别调为 15.6、
4.3 mg·L-1,其它成分与MS相同)+6-BA 0.5 mg·L-1
(单位下同)+NAA 0.1;(2) 改良 MS+6-BA 0.2+NAA
0.1;(3) 改良 MS+6-BA 0.3+NAA 0.1;(4)改良
MS+6-BA 0.3+NAA 0.1+GA 0.1。根诱导培养
基:(5)1/2改良MS+IBA 0.1;(6) 1/2改良MS+IBA
0.1+NAA 0.1;(7)1/4改良MS+IBA 0.1;(8)1/4改
良 MS+IBA 0.1+NAA 0.1。上述培养基中加入
2%~3% 蔗糖和 0.55% 琼脂,pH 5.8。培养温度
(25±2)℃,光照12 h·d-1,光照度 2 200 lx。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 取多年生甜杨嫁接苗枝条,剪
成 1~2 cm 的茎段,清水冲净,用 75% 乙醇浸泡
30 s~1 min,再用 0.1% HgCl2 浸洗 5 min,无菌
水冲洗 5 min。再重复此灭菌过程一次。然后接
种到芽萌动培养基(1)和(2)上。
4.2 启动培养与增殖培养 培养15 d左右后,在2
种不同启动培养基中芽萌动并长出 1~2 片小叶。
这时,将芽转接到增殖培养基(3)和(4)上。培养
10 d后,可观察到培养基(4)上的叶呈深绿色,基
部切口处膨大,25 d 后平均增殖2~5 个芽;将这
些小芽接到培养基(4)上继续培养30 d后,这些小
芽绝大部分长成直径约0.3~0.5 cm、高约1.5 cm、
带1~2片叶的壮苗。而培养基(3)上启动较慢,15 d
左右基部膨大,只有少数生长;30 d 仅增加 1个
芽。从结果看,甜杨适合的增殖培养基是培养基
(4)。
4.3 生根培养 将上述的幼苗切成高2 cm左右的单
芽并接种到生根培养基(5)~(8)上,15 d后都能长
出根:培养基(5)的芽基部变红且粗,可生1~3条
红色的根,生根率 60%;(6)上长出 3~8 条不定
根,根粗而短,可长达 9 cm,生根率 88%;(7)
上能长出10 多条根,根细长,生根率可达95%;
(8)上能长出 15 多条根,根粗而短,生根率可达
100%。从结果看,培养基(8)中以附加IBA 0.1和
NAA 0.1 对甜杨组培苗生根较适宜。
4.4 移栽 待生根苗长到5~6 cm高时,掀去封口
膜,炼苗 2~3 d 后,取出生根苗,小心洗掉根
部培养基,移栽入营养土中,盖上塑料膜,早
晚喷水 1 次。10 d 后,苗的成活率可达 80%。
5 意义与进展 甜杨属青杨,抗冻、抗旱能力相对
较强,主要分布于我国内蒙古东部及黑龙江大兴
安岭。其生存区的年平均气温为 -3.8℃,冬季气
温为-40.5~-27.4℃,极端最低气温为-46.9℃。甜
杨是研究木本植物抗冻性及有关抗冻基因问题的理
想材料。目前,甜杨的试管苗已成功地运用于克
隆甜杨抗冻及相关基因的分子研究。甜杨的组织
培养和快繁,尚未见报道。