全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ ２０１５ꎬ ４２(５): ８２０ － ８２６ ＤＯＩ: １０􀆰 １３８０２ / ｊ. ｃｎｋｉ. ｚｗｂｈｘｂ. ２０１５􀆰 ０５􀆰 ０１８
基金项目: “十二五”国家科技支撑计划(２０１２ＢＡＤ１９Ｂ０８)ꎬ新疆维吾尔自治区大学生创新项目(ｊｑｚｔｐ７２０１３１６４)
∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ)ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｘｊａｕｍｒ＠ ｓｉｎａ. ｃｏｍ
收稿日期: ２０１５ － ０１ － １６
拮抗菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵条件的优化及室内防效测定
刘晓琳１ 　 马　 荣１ꎬ２∗　 梁英梅３ 　 韩文静１ 　 陈　 梦４ 　 王雪剑１
(１.新疆农业大学林学与园艺学院ꎬ 乌鲁木齐 ８３００５２ꎻ ２.北京林业大学ꎬ 省部共建森林培育与
保护教育部重点实验室ꎬ 北京 １０００８３ꎻ ３.北京林业大学标本馆ꎬ 北京 １０００８３ꎻ
４.新疆维吾尔自治区林业有害生物防治检疫局ꎬ 乌鲁木齐 ８３００００)
摘要: 为探讨菌株 ｘｊ０６３￣１ 的最优发酵条件ꎬ以菌体生物量和对病原菌的抑制率为指标ꎬ采用单因
素方法对菌株的发酵条件进行优化ꎬ并将优化的发酵液在离体枣果上进行防效测定ꎮ 结果表明ꎬ当
装液量为 ５０ ｍＬ时ꎬ拮抗菌株生物量 ＯＤ６００为 １􀆰 ９８７ꎬ对病原菌的抑制率为 ６７􀆰 １％ ꎻ接种量为装液量
体积的 ４％时ꎬ生物量 ＯＤ６００为 １􀆰 ５７３ꎬ对病原菌的抑制率为 ５９􀆰 ７％ ꎻ初始 ｐＨ ７􀆰 ０ 时ꎬ其 ＯＤ６００为
１􀆰 ９０５ꎬ对病原菌的抑制率为 ６５􀆰 ６％ ꎻ温度在 ３０℃、转速 １８０ ｒ / ｍｉｎ时ꎬＯＤ６００分别为 １􀆰 ９６９ 和 １􀆰 ９８２ꎬ
对病原菌的抑制率分别为 ６２􀆰 ２％和 ６１􀆰 ２％ ꎮ 拮抗菌株优化后的发酵液通过预防法处理后的枣果
的病斑面积为 ４ ｍｍ２ꎬ对照发病面积为 １２１ ｍｍ２ꎬ抑制率为 ９６􀆰 ７％ ꎻ通过治疗法处理后的枣果的病
斑面积为 １２􀆰 ２５ ｍｍ２ꎬ抑制率为 ８９􀆰 ９％ ꎬ表明菌株 ｘｊ０６３￣１ 具有较好的生防潜力ꎮ
关键词: 枣果黑斑病ꎻ 枯草芽胞杆菌ꎻ 发酵条件优化ꎻ 防效
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｓｔｒａｉｎ ｘｊ０６３￣１
ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｊｕｊｕｂｅ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ
Ｌｉｕ Ｘｉａｏｌｉｎ１ 　 Ｍａ Ｒｏｎｇ１ꎬ２∗ 　 Ｌｉａｎｇ Ｙｉｎｇｍｅｉ３ 　 Ｈａｎ Ｗｅｎｊｉｎｇ１ 　 Ｃｈｅｎ Ｍｅｎｇ４ 　 Ｗａｎｇ Ｘｕｅｊｉａｎ１
(１. Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ａｎｄ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｕｒｕｍｑｉ ８３００５２ꎬ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｕｙｇｕｒ
Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｓｉｌｖｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎꎬ
Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３. Ｍｕｓｅｕｍ ｏｆ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ
Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ４. Ｆｏｒｅｓｔ Ｐｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇꎬ
Ｕｒｕｍｑｉ ８３００００ꎬ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｕｙｇｕｒ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｌｉｑｕｉｄ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｓｔｒａｉｎ ｘｊ０６３￣１ꎬ ｔｈｅ
ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｍａｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
ｂａｃｔｅｒｉａ ａｓ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ｔｈｅ
ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ: ｌｉｑｕｉｄ ｖｏｌｕｍｅꎬ ５０ ｍＬꎻ ｉｎｏｃｕｌｕｍꎬ ４％ ( ｖ / ｖ )ꎻ ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ ７􀆰 ０ꎻ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎬ ３０℃ꎻ ｒｏｔａｔｉｏｎ ｓｐｅｅｄꎬ １８０ ｒ / ｍｉｎ. Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｍａｓｓ ＯＤ６００ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ
ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｅｒｅ １􀆰 ９８７ / ６７􀆰 １％ ꎬ １􀆰 ５７３ / ５９􀆰 ７％ ꎬ １􀆰 ９０５ / ６５􀆰 ６％ ꎬ １􀆰 ９６９ / ６２􀆰 ２％ ａｎｄ １􀆰 ９８２ /
６１􀆰 ２％ ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｗｈｅｎ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｆｉｌｔｒａｔｅ ｗａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｏｎ ｊｕｊｕｂｅ ｆｒｕｉｔｓꎬ ｔｈｅ ｌｅｓｉｏｎ ｄｉａｍｅｔｅｒｓ ｗｅｒｅ ４
ｍｍ２ ｂｙ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎꎬ ａｎｄ １２􀆰 ２５ ｍｍ２ ｂｙ ｔｈｅｒａｐｙꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ９６􀆰 ７％ ｂｙ
ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ８９􀆰 ９％ ｂｙ ｔｈｅｒａｐｙꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｓｔｒａｉｎｓ ｍａｙ
ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｎｅｗ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔｅꎻ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓꎻ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎꎻ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ
　 　 枣果黑斑病(ｊｕｊｕｂｅ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ)是由链格孢属真
菌链格孢菌 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ 引起的ꎬ又名枣缩果
病、枣铁皮病、枣干腰病、枣萎蔫果病、枣雾蔫病和枣
褐腐病等ꎮ 枣果黑斑病在新疆主要危害枣果ꎬ病菌
在枣果白熟期通过伤口和自然孔口侵入枣果ꎬ发病
初期在枣果腰部或胴部出现黑色斑点ꎬ病斑面积不
断扩大ꎬ后期病变部位变黑变硬ꎬ内部果肉易分离ꎬ
病变组织呈现红褐色海绵状ꎬ味苦不堪食用ꎮ 该病
害于 ２００８ 年 ９ 月在新疆阿克苏、和田地区的个别枣
园被首次发现ꎬ２０１０ 年该病害大暴发ꎬ果农损失惨
重(刘晓琳等ꎬ２０１５)ꎮ ２０１１—２０１３ 年ꎬ枣果黑斑病
在新疆阿克苏、和田和喀什地区持续大面积发生ꎬ已
成为影响新疆红枣产业健康发展的重要病害(陈小
飞等ꎬ２０１３)ꎮ 化学防治是枣果黑斑病的主要防治
方法(马荣等ꎬ２０１２ꎻ池振江等ꎬ２０１４)ꎬ虽见效快ꎬ但
易造成药剂残留和耐药性等问题ꎮ 利用拮抗微生物
或其次生代谢产物防治植物病害ꎬ不易使病原菌产
生耐药性ꎬ还对人畜安全无毒、不污染环境等(林雁
冰等ꎬ２０１０)ꎬ已成为当前的研究热点ꎬ并被广泛应
用到农业生产中(臧超群等ꎬ２０１４)ꎮ
芽胞杆菌属菌是生物防治中常用的拮抗菌ꎬ有
关其对链格孢菌引起的真菌病害的生物防治已取得
一定研究成果ꎮ 如王程亮等(２００８)筛选得到的芽
胞杆菌菌株 ＴＳ￣０１ 对苹果斑点落叶病的田间防效达
８４􀆰 ２７％ ꎻ孙卓等(２０１４)利用解淀粉酶芽胞杆菌 Ｂａ￣
ｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＮＤ￣６０ 发酵液对人参黑斑病
菌 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐａｎａｘ Ｗｈｅｔｚ的抑制率达 ８２􀆰 ４３％ ꎬ盆栽
试验的防治效果为 ８０􀆰 ２１％ (保护作用)和 ７２􀆰 ２２％
(治疗作用)ꎮ 枯草芽胞杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ 的应用
较为广泛(王军等ꎬ２０１１)ꎬ杨晓蕾等(２０１４)筛选得
到的枯草芽胞杆菌菌株 ＪＲ￣Ｃ对梨黑斑病菌 Ａｌｔｅｒｎａ￣
ｒｉａ ｋｉｋｕｃｈｉａｎａ Ｔａｎａｋａ防效较好ꎬ并通过胞外酶检测
发现拮抗菌株能够产生蛋白酶和纤维素酶ꎬ该菌株
的代谢产物粗提物可抑制菌丝的正常生长ꎬ经代谢
产物粗提物处理后ꎬ梨黑斑病菌菌丝愈发致密、短
粗ꎬ分枝明显减少ꎮ 但芽胞杆菌细菌的生长受到诸
多物理因素如温度、ｐＨ、氧气等影响(吴义飞和吴小
芹ꎬ２０１４)ꎮ 在其发酵过程中芽孢受营养和培养环
境影响较大ꎬ不同菌株的芽孢产生的条件也不同
(赵晓燕等ꎬ２０１４)ꎮ 由于新疆特殊的地理位置和气
候特点ꎬ使得微生物的生物学特性存在一定差异ꎬ为
更好地开发、利用从新疆枣果中筛选得到的对枣果
黑斑病菌有较好抑菌效果的枯草芽胞杆菌菌株
ｘｊ０６３￣１ꎬ本试验对该菌株的装液量、接种量、初始 ｐＨ
值、温度和转速等发酵条件进行优化ꎬ并将优化后的
菌株发酵液在室内开展对离体枣果黑斑病的防效测
定ꎬ以期为该生防菌制剂的研发及田间生物防治提
供理论依据ꎮ
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试病原菌及菌株:枣果黑斑病病菌由新疆农
业大学林木保护实验室提供ꎮ 通过柯赫氏法则、形
态学特征并结合 ＩＴＳ 和 ＲＰＢ２ 分子生物学方法确定
该致病菌为链格孢菌 Ａ. ａｌｔｅｒｎａｔｅ (刘晓琳等ꎬ
２０１５)ꎮ 拮抗菌株 ｘｊ０６３￣１ 由新疆农业大学林木保
护实验室提供ꎬ菌株从分离枣果黑斑病病菌时分离
得到ꎬ通过平板对峙试验筛选ꎬ综合形态学、生理生
化特征及 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列ꎬ确定为枯草芽胞杆菌 Ｂ.
ｓｕｂｔｉｌｉｓ(马荣等ꎬ２０１４)ꎮ 供试枣果采自阿克苏地区、
和田地区的 ７ 年生白熟期骏枣ꎮ
培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(ｐｏｔａｔｏ ｄｅｘ￣
ｔｒｏｓｅ ａｇａｒ ｍｅｄｉｕｍꎬＰＤＡ):马铃薯(去皮切块)２００ ｇ、
葡萄糖 ２０ ｇ、琼脂粉 １５ ｇ、水１ ０００ ｍＬꎬｐＨ自然ꎬ１ ×
１０５Ｐａ 灭菌 ３０ ｍｉｎꎻ营养琼脂培养基( ｎｕｔｒｉｅｎｔ ａｇａｒ
ｍｅｄｉｕｍꎬＮＡ):牛肉膏 ３ ｇ、蛋白胨 １０ ｇ、蔗糖 １０ ｇ、琼
脂粉 １７ ｇ、水 １ ０００ ｍＬꎬｐＨ ７􀆰 ０ ~ ７􀆰 ２ꎬ１ × １０５Ｐａ灭菌
３０ ｍｉｎꎻ营养肉汤培养基 ( ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｂｒｏｔｈ ｍｅｄｉｕｍꎬ
ＮＢ):ＮＡ培养基去除琼脂之后的液体培养基ꎮ
仪器:ＵＶ￣２８０２Ｓ紫外可见分光光度计ꎬ上海洪
富仪器仪表有限公司ꎻＺＨＷＹ￣１００Ｄ 摇床ꎬ上海智城
仪器制造有限公司ꎻｐＨｓ￣３Ｃ 酸度计ꎬ上海雷磁仪器
厂ꎻ无菌过滤器 ０􀆰 ２２ μｍꎬ德国赛多利斯集团ꎮ
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 菌株种子液、发酵液及无菌滤液的制备
将保存在 ４℃冰箱内的病原菌活化后置于 ＰＤＡ
平板中央ꎬ黑暗条件 ２８℃恒温培养 ７ ｄ 后ꎬ用无菌水
冲洗制成 １ × １０５ 个 / ｍＬ 的孢子悬浮液ꎬ备用ꎮ 采用
划线法将菌株 ｘｊ０６３￣１ 活化后置于 ＮＡ 培养基上ꎬ
３０℃恒温培养 ２８ ｈ后ꎬ挑取单菌落接种置于装有 ５０
ｍＬ ＮＢ培养基的三角瓶中ꎬ３０℃、１８０ ｒ / ｍｉｎ 条件下
摇培 ２８ ｈ 制成种子液ꎮ 在单因素变量的前提下ꎬ分
别以需要优化的不同条件接种于 ＮＢ 培养基中ꎬ摇
培 ２４ ｈ制成发酵液ꎮ 将菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵液用 ０􀆰 ２２
μｍ微孔滤膜过滤即得无菌滤液ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ２ 菌株 ｘｊ０６３￣１ 对病原菌的抑制率测定
将空白 ＰＤＡ平板水平方向平均分成 ４ 等份ꎬ用
打孔器(直径为 ５ ｍｍ)在空白 ＰＤＡ平板中心距离左
１２８５ 期 刘晓琳等: 拮抗菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵条件的优化及室内防效测定
侧 １ / ２ 处打孔后移去培养基块ꎬ注入 ４０ μＬ 菌株
ｘｊ０６３￣１ 的无菌滤液ꎬ以无菌培养基为对照ꎻ在空白
ＰＤＡ中央距离右侧 １ / ２ 处放置培养 ３ ｄ的菌龄一致
的直径 ５ ｍｍ 菌饼ꎬ每处理 ３ 次重复ꎬ２８℃ 恒温培
养ꎬ待对照菌落生长直径达到 ８５ ｍｍ 时ꎬ计算生长
抑制率(Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ. ꎬ２０１２)ꎮ 生长抑制率 ＝ (对照
平板菌落直径 －带拮抗菌的菌落直径) /对照平板
菌落直径 × １００％ ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ３ 菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵条件的优化
装液量:在三角瓶中分别加入 １０、３０、５０、７０、
９０、１１０、１３０ ｍＬ ＮＢ 培养基ꎬ将 １􀆰 ２􀆰 １ 培养的种子液
分别按照不同装液量的 ４％作为接种量ꎬ在 ｐＨ ７、温
度 ２８℃、转速 １８０ ｒ / ｍｉｎ条件下培养 ２８ ｈ 后制得发
酵液ꎬ将发酵液通过紫外分光光度计检测 ６００ ｎｍ 时
菌液的 ＯＤ６００ꎬ以不接拮抗菌的 ＮＢ 培养基为对照ꎬ
ＯＤ６００表示菌体的生物量(胡亮亮等ꎬ２０１１)ꎮ 根据
１􀆰 ２􀆰 ２ 测定病原菌的抑制率ꎬ每处理 ３ 次重复ꎮ
接种量:通过装液量优化试验得出ꎬ最优 ＮＢ 培
养基的装液量为 ５０ ｍＬꎬ分别量取占装液量体积
２％ 、４％ 、６％ 、８％ 、１０％的种子液作为接种量ꎬ在 ｐＨ
７、温度 ３０℃、转速 １８０ ｒ / ｍｉｎ 条件下培养 ２８ ｈ 后ꎬ测
定菌体的生物量和菌株 ｘｊ０６３￣１ 对病原菌的抑制率ꎬ
每处理 ３ 次重复ꎮ
初始 ｐＨ:在三角瓶中装入 ５０ ｍＬ、ｐＨ分别为 ５、
６、７、８、９ 的 ＮＢ培养基ꎬ在种子液接种量为装液量的
４％ 、温度 ２８℃、转速 １８０ ｒ / ｍｉｎ条件下培养 ２８ ｈ后ꎬ
测定菌体的生物量和菌株 ｘｊ０６３￣１ 对病原菌的抑制
率ꎬ每处理 ３ 次重复ꎮ
温度:在三角瓶中装入 ５０ ｍＬ、ｐＨ ７ 的 ＮＢ 培养
基ꎬ种子液接种量为装液量体积的 ４％ ꎬ分别放置在
２０、２５、３０、３５、４０℃的温度下ꎬ转速为 １８０ ｒ / ｍｉｎ 培养
２８ ｈ 后ꎬ测定菌体的生物量和菌株 ｘｊ０６３￣１ 对病原
菌的抑制率ꎬ每处理 ３ 次重复ꎮ
转速:在三角瓶中装入 ５０ ｍＬ、ｐＨ ７􀆰 ０ 的 ＮＢ 培
养基ꎬ种子液接种量为装液量的 ４％ ꎬ分别放置于转
速为 １２０、１４０、１６０、１８０、２００ ｒ / ｍｉｎ下ꎬ３０℃培养 ２８ ｈ
后ꎬ测定菌体的生物量和菌株 ｘｊ０６３￣１ 对病原菌的抑
制率ꎬ每处理 ３ 次重复ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ４ 菌株 ｘｊ０６３￣１对枣果黑斑病菌室内防效的测定
在三角瓶中装入 ５０ ｍＬ、ｐＨ ７ 的 ＮＢ 培养基ꎬ加
入装液量 ４％ 的菌株 ｘｊ０６３￣１ 种子液ꎬ１８０ ｒ / ｍｉｎ、
３０℃ 培养 ２８ ｈ 后得到发酵液ꎬ备用 (涂起红ꎬ
２０１３)ꎮ 将采集的白熟期枣果消毒ꎬ晾干待用ꎮ
预防法:将枣果先浸泡于发酵液中ꎬ２ ｈ 后取
出ꎮ 在枣果胴部用灭菌接种针扎成直径 ５ ｍｍ 的
圆ꎬ然后用无菌脱脂棉沾取浓度为 １ × １０５ 个 / ｍＬ病
原菌孢子悬浮液接种于针孔处ꎬ最后用保鲜膜包裹
后置于无菌托盘内(托盘底层为含有无菌水的无菌
滤纸ꎬ上层用保鲜膜密封)ꎬ以只接种病原菌孢子悬
浮液为对照ꎬ每处理 ２０ 个枣果ꎬ３ 次重复ꎮ 室温培
养 ４８ ｈ后去除枣果表面的保鲜膜ꎬ每天观察记录病
斑面积的变化ꎬ计算抑制率ꎮ 抑制率 ＝ (对照病斑
面积 －处理病斑面积) /对照病斑面积 × １００％ ꎮ
治疗法:先用灭菌接种针在枣果胴部扎成直径
５ ｍｍ 的圆ꎬ然后用无菌脱脂棉沾取病原菌孢子悬浮
液接种在针孔处ꎬ用保鲜膜包裹后置于无菌托盘内
(托盘底层为含有无菌水的无菌滤纸ꎬ上层用保鲜
膜密封)ꎬ以只接种病原菌孢子悬浮液作为对照ꎬ每
处理 ２０ 个枣ꎬ３ 次重复ꎬ室温培养 ４８ ｈ 后去除枣果
表面的保鲜膜ꎬ用灭菌的脱脂棉沾取发酵液ꎬ固定在
枣果病原菌接种处ꎬ２ ｈ 后取下ꎮ 每天观察记录病
斑面积的变化ꎬ计算抑制率(王卫雄等ꎬ２０１４)ꎮ
１􀆰 ３ 数据分析
采用 Ｅｘｃｅｌ ２００３ 和 ＤＰＳ ７􀆰 ０５ 软件进行数据统
计ꎬＤｕｎｃａｎ氏新复极差法进行差异显著性检验ꎮ
２ 结果与分析
２􀆰 １ 菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵条件的优化
２􀆰 １􀆰 １ 装液量及接种量对菌株的影响
装液量在 １０ ~ １３０ ｍＬ 之间时ꎬ菌体的生物量及
对病原菌的抑制率差异显著(图 １)ꎮ 当装液量为
５０ ｍＬ 时ꎬ菌体的生物量达最大ꎬＯＤ６００为 １􀆰 ９８７ꎬ抑
制率最高ꎬ为 ６７􀆰 １％ ꎻ当装液量为 ７０、９０ ｍＬ 时ꎬ
ＯＤ６００逐渐下降为 １􀆰 ９５２ 和 １􀆰 ８７５ꎬ且抑制率降至
６２􀆰 ５％和 ５７􀆰 ６％ ꎻ装液量为 １０、３０、１１０ 和 １３０ ｍＬ
时ꎬＯＤ６００低于 １􀆰 ６６ꎬ抑制率低于 ５７％ ꎮ 说明最适装
液量为 ５０ ｍＬꎮ
在接种量为 ２％ ~ １０％最佳装液量的范围内ꎬ
菌体的生物量及对病原菌的抑制率差异显著(图
１)ꎮ 当接种量为 ４％ 时生物量达最大ꎬ ＯＤ６００ 为
１􀆰 ５７３ꎬ抑制率最高ꎬ为 ５９􀆰 ７％ ꎻ当接种量为 ２％ 、
４％ 、６％ 、８％ 、１０％时ꎬ生物量与抑制率均呈下降趋
势ꎬ说明最适接种量为最佳装液量体积的 ４％ ꎮ
２􀆰 １􀆰 ２ 初始 ｐＨ及温度对菌株的影响
菌株 ｘｊ０６３￣１ 对 ｐＨ 的适应范围较宽ꎬｐＨ 为 ６
时ꎬＯＤ６００为 １􀆰 ８６８ꎬ对病原菌的抑制率为 ６２􀆰 ９％ ꎻｐＨ
为 ７ 时ꎬ ＯＤ６００达 １􀆰 ９０５ꎬ抑制率最高ꎬ为 ６５􀆰 ６％ ꎻｐＨ
为 ５、８、９ 时ꎬ生物量与抑制率均明显下降ꎬ说明菌株
２２８ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
图 １ 不同装液量及接种量对菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵的影响
Ｆｉｇ. １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ ｖｏｌｕｍｅｓ ａｎｄ ｉｎｏｃｕｌｕｍ ｓｉｚｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ｘｊ０６３￣１
图中数据为平均数 ±标准误ꎮ 不同字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ氏新极复差法检验在 Ｐ < ０􀆰 ０５ 水平差异显著ꎮ Ｄａｔｅ ａｒｅ ｍｅａｎ ±
ＳＥ. Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ < ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ.
　
ｘｊ０６３￣１ 的最适初始 ｐＨ为 ７(图 ２)ꎮ
菌株 ｘｊ０６３￣１ 在 ２０ ~ ４０℃范围内均可生长ꎬ对
病原菌的抑制率均在 ５０％以上ꎮ 其中在 ３０℃时菌
株 ｘｊ０６３￣１ 的生物量达最大ꎬＯＤ６００为 １􀆰 ９６９ꎬ抑制率
　 　 　
也最高ꎬ为 ６２􀆰 ２％ ꎻ菌株在 ２０、２５、３５ 和 ４０℃时ꎬ其
ＯＤ６００依次为 １􀆰 ５０２、１􀆰 ８１３、１􀆰 ３５２ 和 １􀆰 ２２１ꎻ抑制率
依次为 ４９􀆰 ８％ 、 ５４􀆰 １％ 、 ５５􀆰 ３％ 和 ５１􀆰 ７％ ꎮ 说明
３０℃为菌株 ｘｊ０６３￣１ 最适发酵温度(图 ２)ꎮ
图 ２ 不同初始 ｐＨ及温度对菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵的影响
Ｆｉｇ. ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨꎬ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ｘｊ０６３￣１
图中数据为平均数 ±标准误ꎮ 不同字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ氏新极复差法检验在 Ｐ < ０􀆰 ０５ 水平差异显著ꎮ Ｄａｔｅ ａｒｅ ｍｅａｎ ±
ＳＥ. Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ < ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ.
　
２􀆰 １􀆰 ３ 转速对菌株的影响
在转速 １２０ ~ ２４０ ｒ / ｍｉｎ 范围内ꎬ菌体的生物量
及对病原菌的抑制率差异显著ꎮ 当转速为 １２０、１４０
和 １６０ ｒ / ｍｉｎ 时ꎬ生物量呈上升趋势ꎬＯＤ６００依次为
１􀆰 ７４４、 １􀆰 ７２３ 和 １􀆰 ８６３ꎬ抑制率依次为 ４６􀆰 ５％ 、
５４􀆰 ２％和 ５１􀆰 ２％ ꎻ当转速为 １８０ ｒ / ｍｉｎ 时ꎬ生物量达
最大ꎬＯＤ６００值为 １􀆰 ９８２ꎬ抑制率达最高为 ６１􀆰 ２％ (图
３)ꎻ当转速高达 ２００、２２０ 和 ２４０ ｒ / ｍｉｎ 时ꎬ生物量与
抑制率均明显下降ꎬ依次为 １􀆰 ７９８ / ５８􀆰 ８％ 、１􀆰 ６６１ /
４９􀆰 ９％和 １􀆰 ５５８ / ４５􀆰 １％ ꎮ 说明菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵所
需的最适转速为 １８０ ｒ / ｍｉｎꎮ
２􀆰 ２ 菌株 ｘｊ０６３￣１发酵液对枣果黑斑病菌的室内防效
拮抗菌株通过预防法和治疗法对枣果黑斑病的
防效均较好(表 １)ꎮ 对照枣果接种病菌后 ２ ｄ 开始
发病ꎬ病斑面积不断扩大ꎬ至接种 １０ ｄ 后病斑不再
图 ３ 不同转速对菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵的影响
Ｆｉｇ. ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｏｔａｔｉｏｎａｌ ｓｐｅｅｄｓ ｏｎ ｔｈｅ
ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ｘｊ０６３￣１
图中数据为平均数 ± 标准误ꎮ 不同字母表示经
Ｄｕｎｃａｎ氏新极复差法检验在 Ｐ < ０􀆰 ０５ 水平差异显著ꎮ
Ｄａｔｅ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＥ. Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ < ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ ｓ ｎｅｗ
ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ. 　
３２８５ 期 刘晓琳等: 拮抗菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵条件的优化及室内防效测定
扩展ꎬ发病面积为 １２１ ｍｍ２ꎮ 菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵液通
过预防法处理后的枣果的病斑面积为 ４ ｍｍ２ꎬ抑制
率为 ９６􀆰 ７％ ꎻ通过治疗法处理后的枣果的病斑面积
为 １２􀆰 ２５ ｍｍ２ꎬ抑制率为 ８９􀆰 ９％ ꎮ
表 １ 菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵液通过预防法和治疗法对枣果黑斑病的防效
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｌｉｑｕｉｄ ｏｎ ｊｕｊｕｂｅ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｍｅｔｈｏｄｓ
方法 Ｍｅｔｈｏｄ 病斑面积 Ｌｅｓｉｏｎ ａｒｅａ (ｍｍ２) 抑制率 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ (％ )
预防法 Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ４􀆰 ００ ± ０􀆰 ２０ ｃ ９６􀆰 ７０ ± １􀆰 ０２ ａ
治疗法 Ｔｈｅｒａｐｙ １２􀆰 ２５ ± ０􀆰 ４１ ｂ ８９􀆰 ９０ ± １􀆰 ０３ ｂ
对照 ＣＫ １２１􀆰 ００ ± ３􀆰 ７８ ａ －
　 　 表中数据为平均数 ±标准误ꎮ 不同字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ氏新极复差法检验在 Ｐ < ０􀆰 ０５ 水平差异显著ꎮ Ｄａｔｅ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＥ. Ｄｉｆｆｅｒ￣
ｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔａｂｌｅ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ < ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ.
３ 讨论
拮抗细菌的代谢产物能有效抑制植物病原真
菌ꎬ也是开发生物农药的重要基础ꎮ 本试验筛选
优化出了菌株 ｘｊ６３￣１ 的培养条件ꎮ 当装液量为 ５０
ｍＬ时ꎬ菌株的生物量及对病菌的抑制效果最好ꎬ
表明装液量的多少直接影响菌体生长过程中对氧
的获得能力ꎮ 装液量过多则菌体在生长过程中获
得的氧含量降低ꎬ装液量过少则无法满足菌体生
长所需的营养条件ꎮ 刘京兰等(２０１４)筛选出内生
解淀粉芽胞杆菌 ＣＣ０９ 最佳装液量为 ５０ ｍＬꎬ少于
或多于该装液量ꎬ均会显著降低菌株合成 Ｉｔｕｒｉｎ Ａ
的产量ꎻ刘培福等(２０１２) 报道了辣椒根腐病菌拮
抗细菌 Ｄ２２１ 的最佳装液量为 ３０ ｍＬꎬ表明不同来
源的菌株生物活性存在一定差异ꎮ
接种量是指待接种的液体培养基与接入的培
养液的体积百分比ꎬ合适的接种量有利于菌体形
成群体优势而缩短延迟期ꎮ 接种量过小则可能使
延迟期延长ꎬ但接种量过大不但不能缩短延迟期ꎬ
反而会产出代谢废物不利于培养物的生长ꎮ 本研
究发现拮抗菌株 ｘｊ６３￣１ 的最适接种量为最佳装液
量体积的 ４％ ꎮ 鞠瑞成等(２０１４)研究发现对尖镰
孢菌具有较好拮抗效果的枯草芽胞杆菌的最优接
种量为 ４％ ꎬ与本研究一致ꎻ陈莉等(２０１４)筛选出
枯草芽胞杆菌 Ｋ￣６￣９ 最佳接种量为 ２％ ꎬ与本研究
存在一定差异ꎬ可能是由于菌株来源和防治对象
的不同导致同一类型菌株的发酵条件存在差异ꎮ
ｐＨ是影响微生物生长和产物合成中极为重要
的状态参数ꎮ 初始 ｐＨ 值的变化对于芽胞杆菌的生
产发酵过程影响较为显著ꎬｐＨ会影响到微生物对培
养基中一些营养物质的吸收利用以及代谢物的渗
漏ꎬ还会影响到培养基中某些重要营养物质和中间
代谢产物的离解ꎬ从而影响微生物对这些物质的吸
收和利用ꎮ 本研究发现拮抗菌株 ｘｊ６３￣１ 的最适初始
ｐＨ为 ７ꎮ 侯敏等(２０１４)筛选出的对番茄枯萎病菌
Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ Ｓｎｙｄｅｒ ｅｔ Ｈａｎ￣
ｓｅｎ具有较好抑制效果的解淀粉芽胞杆菌菌株发酵
的最优 ｐＨ为 ７􀆰 ０ꎻ赵晓燕等(２０１４)等筛选的对烟草
青枯病原菌 Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ 具有较好拮抗效
果的解淀粉芽胞杆菌菌株 ＸＬＡ０３ 的最优发酵 ｐＨ为
７ꎬ与本研究一致ꎮ
温度是影响微生物生长繁殖最重要的因素ꎮ
温度影响微生物膜的液晶结构、酶和蛋白质的合
成与活性(Ｋａｒｉｍ ｅｔ ａｌ. ꎬ１９９３)ꎮ 高温会使微生物
细胞内的蛋白质发生变性或凝固ꎬ同时还破坏了
微生物细胞内的酶活性ꎬ从而杀死微生物ꎻ而低温
又能抑制微生物的生长ꎮ 本研究筛选出拮抗菌株
ｘｊ６３￣１ 发酵最适的温度为 ３０℃ꎮ 而鞠瑞成等
(２０１４)研究的枯草芽胞杆菌的最优发酵温度为
３２℃ꎬ与本试验结果一致ꎮ 温度过高或过低ꎬ芽胞
杆菌的营养体都难以形成ꎬ芽孢则更难以在营养
体内产生ꎬ直接影响拮抗物质的生成ꎬ因此最适温
度的确定对发酵产物的形成具有一定影响ꎮ
摇培转速对菌体溶解氧有很大的影响ꎬ摇培能
使菌体与氧气更好地充分接触ꎮ Ｋａｒｉｍ ｅｔ ａｌ.
(１９９３)研究了球形芽胞杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｌｃｕｓ芽孢
形成与溶解氧的关系ꎬ随着溶解氧浓度的升高ꎬ芽孢
形成量增加ꎬ但溶解氧浓度过高ꎬ反而使产孢量下
降ꎮ 本研究筛选出拮抗菌株 ｘｊ６３￣１ 的最佳转速为
１８０ ｒ / ｍｉｎꎮ 钟冬梅 ( ２００６ ) 与 Ｙｏｕｓｅｎ ＆ Ｗａｌｌｉｓ
(１９８４)研究发现通气量摇瓶转速 １２０ ｒ / ｍｉｎ 的最佳
条件下培养 ３ ｄꎬ发酵液絮凝率可达 ９９􀆰 ８％ ꎻ而鞠瑞
成等(２０１４)筛选的枯草芽胞杆菌发酵的最优转速
也为 １８０ ｒ / ｍｉｎꎮ
在装液量和培养时间上ꎬ本试验结果和曹琦
琦等(２０１３)关于枯草芽胞杆菌 ＮＢ１２ 菌株、高芬
等(２０１４)关于芽胞杆菌 Ｂ￣０７ 菌株的研究结果均
存在差异ꎬ可能与菌株的来源和存在的寄主不同
４２８ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
有关ꎻ与洪鹏等 (２０１３)研究的解淀粉芽胞杆菌
ＨＦ０１ 菌株结果差异较大ꎬ表明同一属的不同种菌
株的发酵条件差异较大ꎮ 单因素试验是优化发酵
培养基条件的常用方法ꎬ但在实际研究和生产中
尤其是考虑到经济因素时ꎬ还需要综合多种试验
设计方法ꎮ
芽胞杆菌在自然界中广泛存在ꎬ能产生多种抗
菌素和酶ꎬ具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力ꎬ广
泛应用于植物病害的生物防治中 ( Ｄｕｆｆｙ ｅｔ ａｌ. ꎬ
１９９７)ꎮ 本研究通过筛选出的最优发酵条件得到的
发酵液对离体枣果黑斑病的防效较好ꎬ首次通过预
防法对枣果黑斑病的防效为 ９６􀆰 ７％ ꎬ通过治疗法的
防效为 ８９􀆰 ９％ ꎬ２ 种处理方法防效均较高ꎬ为该病害
的田间生物防治及后期生物农药的研发提供了理论
依据ꎮ
参 考 文 献 (Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ)
Ｃａｏ ＱＱꎬ Ｚｈｏｕ ＤＢꎬ Ｚｈｅｎｇ Ｌꎬ Ｙａｎｇ Ｍꎬ Ｚｈｏｕ ＥＸ. ２０１３. Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇꎬ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｅｓ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ
ｔｏ ｒｉｃｅ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｆｕｎｇｕｓ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ. Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌꎬ ２９(２): ２７０ － ２７６ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [曹琦
琦ꎬ 周登博ꎬ 郑丽ꎬ 杨媚ꎬ 周而勋. ２０１３. 水稻纹枯病菌拮
抗菌的筛选、鉴定及培养条件探索. 中国生物防治学报ꎬ ２９
(２): ２７０ － ２７６]
Ｃｈｅｎ Ｌꎬ Ｗａｎｇ ＬＰꎬ Ｚｈａｏ Ｙꎬ Ｃｈｅｎ Ｌꎬ Ｄｅｎｇ Ｔ. ２０１４. Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ｃｕｌｔｕｒａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ￣Ｋ￣６￣
９. Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ. ３５ (３): １７２ －
１７６ (ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [陈莉ꎬ汪立平ꎬ赵勇ꎬ陈乐ꎬ邓添. ２０１４.
枯草芽孢杆菌 Ｋ￣６￣９ 发酵条件优化及放大. 食品工业科技ꎬ
３５(３): １７２ － １７６]
Ｃｈｅｎ ＸＦꎬ Ｘｉｏｎｇ ＲＣꎬ Ｘｕ ＳＺꎬ Ｃｈｅｎ ＨＢꎬ Ｘｕ ＳＬ. ２０１３. Ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｉｔ￣
ｕａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｓｐｅｃｔ ｏｎ ｊｕｊｕｂｅ ｂｌａｃｋｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ. Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ (１０): １４１ － １４４ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [陈小
飞ꎬ 熊仁次ꎬ 徐崇志ꎬ 陈恢彪ꎬ 徐胜利. ２０１３. 红枣黑斑病
研究现状与展望. 黑龙江农业科学ꎬ (１０): １４１ － １４４]
Ｃｈｅｎｇ ＣＨꎬ Ｙａｎｇ ＣＡꎬ Ｐｅｎｇ ＫＣ. ２０１２. Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｆ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ
ｈａｒｚｉａｎｕｍ ＥＴＳ ３２３ ｏｎ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎ￣
ｄｉｔｉｏｎｓ. Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ １０２(１１): １０５４ － １０６３
Ｃｈｉ ＺＪꎬ Ｓｕｎ Ｊꎬ Ｌｉ Ｊꎬ Ｌｉｕ ＤＨꎬ Ｚｈａｏ ＳＦ. ２０１４. Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｆｉｅｌｄ
ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ４ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｊｕｊｕｂｅ ｂｌａｃｋ
ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ Ｘｉｎｊａｎｇ. Ａｇｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓꎬ ５３(７): ５１５ － ５１７ (ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [池振江ꎬ 孙洁ꎬ 李进ꎬ 刘多红ꎬ 赵思峰. ２０１４􀆰
４种生物农药对新疆枣果黑斑病的室内及田间药效试验.
农药ꎬ ５３(７): ５１５ － ５１７]
Ｄｕｆｆｙ ＢＫꎬ Ｏｗｎｌｅｙ ＢＨꎬ Ｗｅｌｌｅｒ ＤＭ. １９９７. Ｓｉｏｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｐｈｙｓｉ￣
ｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔａｌｅ￣ａｌｌ ｏｆ ｗｈｅａｔ ｂｙ
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｎｇｉｉ. Ｐｈｙｔｏｐａｈｔｏｌｏｙꎬ ８７(１１): １１１８ － １１２４
Ｇａｏ Ｆꎬ Ｌｉ ＪＨꎬ Ｚｈａｎｇ ＮＳꎬ Ｗａｎｇ ＪＨꎬ Ｗａｎｇ ＭＬ. ２０１４. Ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔｅ ａｎｄ
ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ. Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ ４０(３): ７０ － ７５ (ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [高芬ꎬ 李静虹ꎬ 张娜莎ꎬ 王俊红ꎬ 王梦亮. ２０１４.
‘赞皇枣’黑腐病菌拮抗芽胞杆菌的筛选及发酵条件优化.
植物保护ꎬ ４０(３): ７０ － ７５]
Ｈｏｎｇ Ｐꎬ Ａｎ ＧＤꎬ Ｈｕ ＭＹꎬ Ｇｅｎｇ Ｐꎬ Ｓａｎｇ Ｓ. ２０１３. Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｆｅｒ￣
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＨＦ￣０１. Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌꎬ ２９(４): ５６９ － ５７８ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [洪鹏ꎬ 安国栋ꎬ 胡美英ꎬ 耿鹏ꎬ 桑松. ２０１３. 解淀粉
芽孢杆菌 ＨＦ￣０１ 发酵条件优化. 中国生物防治学报ꎬ ２９
(４): ５６９ － ５７８]
Ｈｏｕ Ｍꎬ Ｚｈａｎ ＦＱꎬ Ｚｈａｎｇ ＨＴꎬ Ｈｏｕ ＸＱꎬ Ｙａｎｇ Ｒꎬ Ｌｏｎｇ ＸＱ. ２０１４.
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｏｒｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎ￣
ｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｓｔｒａｉｎ Ｓ１３ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉａｕｅｆａｃｉｅｎｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｆｕｓａｒ￣
ｉｕｍ ｗｉｌｔ ｔｏｍａｔｏ. Ｘｉｎｊｉｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ ５１(７): １２６９ －
１２７６ (ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [侯敏ꎬ 詹发强ꎬ 张慧涛ꎬ 侯新强ꎬ 杨蓉ꎬ
龙宣杞. ２０１４. 番茄枯萎病拮抗细菌 Ｓ１３ 产芽孢发酵培养
基及发酵条件优化. 新疆农业科学ꎬ ５１(７): １２６９ － １２７６ ]
Ｈｕ ＬＬꎬ Ｘｕ ＨＨꎬ Ｌｉａｏ ＭＤ. ２０１１. Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
ｆｏｒ ａ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ＰＳ０４ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ. Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ３０(３): ２７６ － ２７９ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [胡亮亮ꎬ 徐汉虹ꎬ 廖美德. ２０１１. 胶冻样类芽孢杆菌
ＰＳ０４ 产抗真菌物质培养条件的优化. 华中农业大学学报ꎬ
３０(３): ２７６ － ２７９]
Ｊｕ ＲＣꎬ Ｗａｎｇ Ｐꎬ Ｇｏｎｇ ＣＹꎬ Ｚｈａｏ ＨＴꎬ Ｌｉｕ Ｌꎬ Ｌｉ Ｌꎬ Ｙａｎ ＨＸꎬ Ｚｈａｎｇ
ＰＰꎬ Ｗａｎｇ ＨＰꎬ Ｌｉ ＹＹ. ２０１４. Ｉｓｏｌａｔｉｏｎꎬ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｒ￣
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ. Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎꎬ ３０ (２８): ２９５ － ３００ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [鞠瑞成ꎬ 王鹏ꎬ 公春艳ꎬ 赵宏涛ꎬ 刘露ꎬ 李丽ꎬ 闫洪
雪ꎬ 张鹏鹏ꎬ 王海朋ꎬ 李园园. ２０１４. １ 株枯草芽孢杆菌的
分离鉴定及其发酵条件优化. 中国农学通报ꎬ ３０ (２８):
２９５ － ３００]
Ｋａｒｉｍ ＭＩＡꎬ Ｌｕｃａｓ ＲＪꎬ Ｏｓｂｏｒｎｅ ＫＪꎬ Ｒｏｇｅｒｓ ＰＬ. １９９３. Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
ｏｘｙｇｅｎ ｏｎ ｔｈｅ ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈｅｒｉｃｕｓ
２３６２. Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓꎬ １５(１): ４７ － ５０
Ｌｉｎ ＹＢꎬ Ｌｕ ＪＸꎬ Ｙａｎ Ｘꎬ Ｌｉｕ ＢＹꎬ Ｆａｎｇ Ｓꎬ Ｆａｎ ＹＱ. ２０１０. Ｓｃｒｅｅｎ￣
ｉｎｇꎬ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ￣
ｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ｆｒｏｍ Ｒｅｈｍｉｎｎａｅ ｇｌｕｔｉｎｏｓｏ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ.
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ ３７(３): ２３４ － ２４０ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)
[林雁冰ꎬ 陆家贤ꎬ 颜霞ꎬ 刘博野ꎬ 方松ꎬ 范元青. ２０１０. 地
黄根圈土壤拮抗放线菌筛选、鉴定及发酵条件优化. 植物保
护学报ꎬ ３７(３): ２３４ － ２４０]
Ｌｉｕ ＪＬꎬ Ｘｕｅ ＹＲꎬ Ｌｉｕ ＣＨ. ２０１４. Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｈａｋｅ ｆｌａｓｋ￣ｆｅｒ￣
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｉｔｕｒｉｎ Ａ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ Ｂａ￣
ｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＣＣ０９. Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｈｉｎａꎬ
４１(１): ７５ － ８２ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [刘京兰ꎬ 薛雅蓉ꎬ 刘常宏.
２０１４. 内生解淀粉芽孢杆菌 ＣＣ０９ 产 Ｉｔｕｒｉｎ Ａ摇瓶发酵条件
优化. 微生物学通报ꎬ ４１(１): ７５ － ８２]
Ｌｉｕ ＰＦꎬ Ｈｅ ＦＬꎬ Ｑｕ ＣＨꎬ Ｊｉ ＭＳꎬ Ｚｈａｏ ＣＳ. ２０１２. Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎ￣
ｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｄ２２１ ａｇａｉｎｓｔ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ.
５２８５ 期 刘晓琳等: 拮抗菌株 ｘｊ０６３￣１ 发酵条件的优化及室内防效测定
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ４３(１): １１０ － １１５
(ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [刘培福ꎬ 何付丽ꎬ 曲春鹤ꎬ 纪明山ꎬ 赵长山.
２０１２. 辣椒根腐病拮抗细菌 Ｄ２２１ 发酵条件的研究. 东北农
业大学学报ꎬ ４３(１): １１０ － １１５]
Ｌｉｕ ＸＬꎬ Ｌｉｕ Ｙꎬ Ｍａ Ｒꎬ Ｌｉａｎｇ ＹＭꎬ Ｃｈｅｎ ＢＪꎬ Ｙａｎ Ｊ. ２０１５. Ｉｄｅｎｔｉｆｉ￣
ｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｃａｕｓｉｎｇ ｊｕ￣
ｊｕｂｅ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｉｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇ. Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉ￣
ｖｅｒｓｉｔｙꎬ ３０(３): １３２ － １３８ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [刘晓琳ꎬ 刘玉ꎬ 马
荣ꎬ 梁英梅ꎬ 陈宝军ꎬ 闫军. ２０１５. 新疆枣果黑斑病病原鉴
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Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ
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(责任编辑:高　 峰)
６２８ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷