全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４５(４): ４１８￣４２４(２０１５)
收稿日期: ２０１４￣０３￣１１ꎻ 修回日期: ２０１５￣０３￣２７
基金项目: 现代农业产业技术体系北京市叶类蔬菜创新团队建设专项资金资助
通讯作者: 谢华ꎬ副研究员ꎬ主要从事植物软腐病研究ꎻＴｅｌ:０１０￣５１５０３８３２ꎻＦａｘ:０１０￣５１５０３９８０ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｘｉｅｈｕａ＠ｂａａｆｓ.ｎｅｔ.ｃｎ
第一作者: 王茜ꎬ女ꎬ安徽芜湖人ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事植物病理学研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｗａｎｇｑｉａｎ１９９０９１３＠１２６.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０４.０１１
一株芹菜(Ａｐｉｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ Ｌ.)软腐病菌Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ的特征
王 茜１ꎬ 张宝海２ꎬ 赵 亮１ꎬ 马荣才１ꎬ 谢 华１∗
( １北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心ꎬ 北京 １０００９７ꎻ ２北京市农林科学院蔬菜研究中心ꎬ 北京 １０００９７)
摘要:从北京通州地区芹菜软腐病样中分离获得的菌株 ＱＣ０１在实验室条件下能浸软芹菜叶柄组织ꎬ并能引起温室种植的
芹菜软腐症状的产生ꎮ 经病原菌表型特征分析ꎬ确定该菌株为有鞭毛的革兰氏阴性果胶杆菌 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍꎮ ＱＣ０１ 与参
试的 Ｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ(Ｐｃｏ)菌株 Ｔ５和 ＣＣ１均具备在 ３７℃以及在含有 ７％ ＮａＣｌ培养基中生长的能力ꎻ能分
解柠檬酸盐和液化明胶ꎻ除常见碳源外ꎬＱＣ０１还能降解 α￣甲基葡糖苷、麦芽糖、山梨醇、阿拉伯糖和阿拉伯半乳聚糖ꎮ 基于
１６Ｓ ｒＲＮＡ基因完整序列系统发育关系表明ꎬＱＣ０１与其他 Ｐｃｏ 菌株聚集成明显的 Ｐｃｏ类群ꎮ ＱＣ０１和 ＣＣ１ ｔｙｐｅ ＩＩ与已报道
的 Ｐｃｏ 菌株 ＪＫＩ ５８２ ｔｙｐｅ ＩＩ和 ＮＢ １８９２的 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因完整序列相似性为 １００％ꎮ 这是首次在中国发现 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ引发芹菜软腐病ꎮ
关键词:芹菜ꎻ 软腐病ꎻ 软腐果胶杆菌
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ ｓｔｒａｉｎ ｃａｕｓｉｎｇ
ｓｏｆｔ ｒｏｔ ｄｅｓｅａｓｅ ｏｆ ｃｅｌｅｒｙ (Ａｐｉｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ Ｌ.) ＷＡＮＧ Ｑｉａｎ１ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｂａｏ￣ｈａｉ２ꎬ ＺＨＡＯ
Ｌｉａｎｇꎬ ＭＡ Ｒｏｎｇ￣ｃａｉ１ꎬ ＸＩＥ Ｈｕａ１ ( １Ｂｅｉｊｉｎｇ Ａｇｒｏ￣Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９７ꎬＣｈｉｎａꎻ ２Ｂｅｉｊｉｎｇ
Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９７ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＱＣ０１ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｆｔ ｒｏｔｔｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｃｅｌｅｒｙ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｔｏｎｇｚｈｏｕ Ｄｉｓｔｒｉｃｔꎬ ｉｔ ｃｏｕｌｄ
ｍａｃｅｒａｔｅ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｃｅｌｅｒｙ ｐｅｔｉｏｌｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓꎬ ａｎｄ ｃａｕｓｅ ｓｏｆｔ ｒｏｔ
ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｎ ｃｅｌｅｒｙ ｉｎ ｖｉｖｏ ｐｌａｎｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ. Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＱＣ０１ ｗａｓ ａ
Ｇｒａｍ￣ｎｅｇａｔｉｖｅꎬ ｒｏｄ￣ｓｈａｐｅｄ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗｉｔｈ ｆｌａｇｅｌｌｕｍ. ＱＣ０１ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｗｉｔｈ Ｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ
(Ｐｃｏ)ｓｔｒａｉｎｓ ＣＣ１ ａｎｄ Ｔ５ ｃｏｕｌｄ ｇｒｏｗ ａｔ ３７℃ ａｎｄ ｅｖｅｎ ｉｎ ７％ ＮａＣｌ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍꎻ ｃｏｕｌｄ ｕｔｉｌｉｚｅ α￣ｍｅｔｈｙｌ
ｇｌｕｃｏｓｉｄｅꎬ ｍａｌｔｏｓｅꎬ ｓｏｒｂｉｔｏｌꎬ ａｒａｂｉｔｏｌ ａｎｄ ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｒｅｇｕｌａｒ ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅｓ. Ｉｎ ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓꎬ ＱＣ０１ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ Ｐｃｏ ｓｔｒａｉｎｓ ｇｒｏｕｐｅｄ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ａｓ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ Ｐｃｏ
ｃｌｕｓｔｅｒ. Ｔｈｅ ｅｎｔｉｒｅ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＱＣ０１ ｈａｄ ａ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ １００％ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｗｏ ｒｅｐｏｒｔｅｄ Ｐｃｏ
ｓｔｒａｉｎｓ ＪＫＩ ５８２ ｔｙｐｅ ＩＩ ａｎｄ ＮＢ １８９２. Ｉｔ ｗａｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｔｈａｔ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ
ｃａｕｓｅｄ ｓｏｆｔ ｒｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ ｃｅｌｅｒｙ ｉｎ Ｃｈｉｎａ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｃｅｌｅｒｙꎻ ｓｏｆｔ ｒｏｔ ｄｉｓｅａｓｅꎻ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ
中图分类号: Ｑ９３９ 文献标识码: Ａ 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１５)０４￣０４１８￣０７
植物细菌性软腐病在世界范围内广泛发生ꎮ
大部分病原物属于肠杆菌(Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ)的
Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ(原 Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ)和 Ｄｉｃｋｅｙａ
(原 Ｅ. ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ) ２ 个属ꎮ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ 可侵
４期 王 茜ꎬ等:一株芹菜(Ａｐｉｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ Ｌ.)软腐病菌 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ的特征
染至少 １６个双子叶和 １１个单子叶被子植物家族软
腐病[１]ꎬ该属目前被划分为 ４ 个种:Ｐ.ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
(Ｐｃ)、Ｐ. ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍ(Ｐａ)、Ｐ.ｂｅｔａｖａｓｃｕｌｏｒｕｍ(Ｐｂ)
和 Ｐ. ｗａｓａｌｉａｅ(Ｐｗ) [２]ꎮ 与后三个种相比ꎬＰｃ 表现
出高度多样性[３]ꎬ可进一步描述为 ３ 个亚种:Ｐ. ｃ.
ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ(Ｐｃｃ) [２]、Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ
(Ｐｃｏ) [４]和 Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｂｒａｓｉｌｉｅｎｃｅ(Ｐｃｂ) [５ꎬ６]ꎮ
Ｐｃｃ是自然条件下普遍存在寄主范围和地理
分布最为广泛的植物病原菌[３ꎬ７]ꎬ能侵染温带和亚
热带种植的马铃薯、白菜、甘蓝、胡萝卜、番茄、洋
葱、芹菜、萝卜、辣椒、大葱和黄瓜等数百种蔬菜ꎬ以
及某些花卉植物ꎬ如马蹄莲、菊花、兰花、蝴蝶兰和
君子兰等ꎮ Ｐｃｂ 则最早描述引发了巴西马铃薯黑
胫病和美国威斯康辛州马铃薯软腐病[５ꎬ８]ꎬ此后也
被描述导致了西椒、胡萝卜和万年青植物的软腐
病ꎬ菌株分离于美国、加拿大、南非、秘鲁、德国、日
本、以色列[１ꎬ５]ꎮ 最近研究发现在叙利亚收集到 Ｐｃ
菌株有大约 ２０％被鉴定为 Ｐｃｂ[９]ꎻ在南非和津巴布
韦该亚种是马铃薯黑胫和软腐病主要和常见致病
菌ꎬ而常见的马铃薯致病菌 Ｐｃｃ 和 Ｐａ 的在此发生
的几率反而较低[１０ꎬ１１]ꎮ 与 Ｐｃｃ 和 Ｐｃｂ 亚种相比ꎬ
关于 Ｐｃｏ亚种菌株及生态分布报道很少ꎬ最早的报
道 Ｐｃｏ引发了法国菊苣软腐病[４]ꎮ
芹菜属伞形科 (Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ)芹属 ( Ａｐｉｕｍ
Ｌｉｎｎ)ꎬ在北京市叶类蔬菜产业中占有重要地位ꎬ年
播种面积近 ６ 万亩ꎬ种植以西芹(Ａ.ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ Ｌ.)
为主ꎮ 根据 ２００９ 年和 ２０１０ 年来自北京市农业局
提供的数据ꎬ整理分析发现ꎬ２００９ 年和 ２０１０ 年在
北京郊区县中通州芹菜所占份额均在 ４０％以上ꎬ
超过了 ２万 ５千亩ꎮ ２０１２ 年 ６ ~ ７ 月对“中国芹菜
第一村”通州果村芹菜生产状况调查中发现ꎬ在高
温多湿的条件下软腐病爆发ꎬ芹菜茎和叶柄腐烂发
臭ꎬ整株瘫倒死亡ꎬ造成严重产量损失ꎮ
本研究对从北京通州果村芹菜生产地块芹菜
软腐病发病组织中分离获得的菌株 ＱＣ０１ 进行了
致病性分析ꎬ发现 ＱＣ０１在离体和活体条件下均能
引起芹菜叶柄组织典型软腐症状ꎬ经表型特征及
１６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列的系统分析ꎬ该菌株被鉴定为
Ｐｃｏ亚种ꎮ 这是首列引发我国芹菜软腐病病原菌
的报道ꎬ该病原菌的鉴定对于控制芹菜软腐病从而
降低果胶杆菌对芹菜产业的影响具有重要意义ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 菌株来源
本研究的菌株 ＱＣ０１来自北京通州果村芹菜软
腐病发生田块芹菜病株样品(２０１２ 年 ６ 月)ꎮ 参试
的菌株包括本实验室先前经全细胞脂肪酸、部分生
理生化、核糖体 ＲＮＡ基因 ＩＴＳ(ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ
ｓｐａｃｅｒ)序列、１６Ｓ ｒＲＮＡ基因部分序列分析鉴定的分
别来源北京白菜和大葱的 Ｐｃｏ菌株 Ｔ５和ＣＣ１ꎬ以及
来自北京顺义白菜的 Ｐｃｃ菌株 Ｓ３[１２]ꎮ
１.２ 致病性测定
健康芹菜叶柄用于离体致病性分析ꎮ 将芹菜
基部叶柄切成 ２ ~ ３ ｃｍ 长ꎬ用 ７５％酒精擦拭消毒ꎬ
下衬 ２层无菌滤纸ꎬ置于无菌培养皿中ꎬ用灭菌小
刀在其中心划十字型伤口ꎬ培养皿中加入 ５ ｍＬ 无
菌水保持湿度ꎮ 将于液体 ＬＢ中培养的菌株 ＱＣ０１
用 ０.９ ％的 ＮａＣｌ 无菌生理盐水洗涤 ３ 次ꎬ调节浓
度至 ２×１０８ ＣＦＵｍＬ￣１的菌悬液ꎬ加入 １０ μＬ菌悬
液到植物十字型伤口中ꎬ随后用封口膜将培养皿口
封住ꎬ于 ２８℃培养ꎬ每皿接种两段西芹叶柄ꎬ重复 ３
次ꎮ ２４ ｈ时观察并记录浸软发病情况ꎮ 同时ꎬ以
同样方法将菌株回接到温室种植的芹菜上ꎬ观察活
体芹菜植株是否发病ꎮ 同等条件下ꎬ设 ０.９％的无
菌 ＮａＣｌ生理盐水侵染的芹菜为对照ꎮ
１.３ 病原菌表型特征分析
观察菌株在 ＬＢ 培养基上的菌落形态、Ｋｉｎｇ’ ｓ
Ｂ培养基上是否产生荧光以及在结晶紫果胶酸盐
(ｃｒｙｓｔａｌ ｖｉｏｌｅｔ ｐｅｃｔａｔｅꎬ ＣＶＰ)培养基上杯状凹陷产
生情况[１３]ꎻ显微镜下革兰氏染色和鞭毛染色情况ꎮ
将菌株分别用划线法接种于柠檬酸盐平板上和穿刺
法接种于明胶平板上ꎬ观察柠檬酸盐培养基的颜色
变化和明胶培养基的液化现象[１４ꎬ１５]ꎮ ３７℃生长、耐
盐性测定以及碳源利用试验所用方法及操作参考文
献[１４]和[１５]ꎮ 同等条件下ꎬ设 Ｐｃｃ Ｓ３和 Ｐｃｏ ＣＣ１
和 Ｔ５ꎬ以及不接菌的培养基为对照ꎮ 每次实验前用
ＬＢ培养基在 ２８℃条件下活化菌株ꎬ实验时确保无
杂菌污染并按母液 /培养液＝１ / １００比例接种ꎮ
１.４ Ｂｉｏｌｏｇ 微生物自动鉴定试验
将菌株 ＱＣ０１ 和对照菌株 ＣＣ１、Ｔ５ 和 Ｓ３ 于
ＬＢ 平板上活化并转接 ２ ~ ３ 次后ꎬ挑单克隆于
９１４
植物病理学报 ４５卷
ＢＵＧ培养基上富集培养ꎮ 根据 Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动
检定系统手册ꎬ将菌体接种至 ＩＦ￣Ａ 培养液(Ｂｉｏｌｏｇ
公司)中并调节浊度至 ９０％~ ９８％ꎮ 将含有菌体的
接种液倒入无菌微型槽中ꎬ利用八道电动移液器
(Ｂｉｏｌｏｇ公司)ꎬ将菌悬液接种至 ＧＥＮ ＩＩＩ 型微平板
中ꎮ 微平板中每个微孔内接种 １００ μＬ菌悬液ꎮ 置
于 ２８℃培养箱中培养 ２４ ｈ 时ꎬ利用 ＭＬ３￣ＤＣ 软件
读数并保存数据ꎮ
１.５ 病原菌 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因完整序列分析
将 ＮＣＢＩ 中 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中 Ｐｃ、Ｐａ、Ｐｂ 和
Ｐｗ菌株 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因完整序列进行了比对ꎬ根
据一致性序列的侧翼区域ꎬ设计了包含基因完整序
列的一对引物 Ｐｅ１(５′￣ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴ￣
ＣＡＧ￣３′) 和 Ｐｅ２ ( ５′￣ＡＧＧＴＧＡＴＣＣＡＡＣＣＧＣＡＧ￣
ＧＴＴ￣３′)ꎮ 将菌株 ＱＣ０１、ＣＣ１、Ｔ５和 Ｓ３菌株分别划
线接种于 ＬＢ固体培养基上ꎬ２８℃培养 １８ ｈꎬ挑取单
克隆于 １００ μＬ 灭菌 ｄｄＨ２Ｏ 中ꎬ９５℃裂解细胞 １０
ｍｉｎꎬ１２ ０００ ｒｍｉｎ￣１离心 ５ ｍｉｎ去除细胞碎片ꎬ分别
取 ２.５ μＬ上清液作为模版进行 ＰＣＲ扩增ꎮ 每个菌
株 ＰＣＲ反应体系均为 ５０ μＬꎬ还包括 ０.２ ｍＭ ｄＮＴＰ、
０.２ μＭ(上、下游)引物、１×ｂｕｆｆｅｒ (Ｍｇ２＋ ｐｌｕｓ) 和 ２.５
Ｕ Ｆａｓｔ Ｐｆｕ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ (ＴｒａｎｓＧｅｎ公司)ꎮ
ＰＣＲ 反应条件为 ９５℃预变性 ２ ｍｉｎꎻ９５℃变
性 ２０ ｓꎬ５５℃复性 ２０ ｓꎬ７２℃延伸 １ ｍｉｎꎬ３５个循环ꎻ
７２℃延伸 ５ ｍｉｎꎮ 回收约 １.５ ｋｂ大小 ＰＣＲ产物ꎬ将
其连接到 ｐＧＥＭＴ￣ Ｅａｓｙ(Ｐｒｏｍｅｇａ公司)载体上ꎬ转
化到 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α 感受态细胞中ꎮ 重组
质粒经 ＮｏｔⅠ酶切和 ＰＣＲ鉴定正确后ꎬ送交中美泰
和生物技术公司测序ꎮ 考虑到 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因存
在多态性拷贝ꎬ每个菌株均测定了 ４个克隆ꎮ 利用
ＭＥＧＡ ５.０５ 软件中 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗꎬ将获得的 ＱＣ０１、
ＣＣ１、Ｔ５和 Ｓ３的 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因完整序列在 ＮＣＢＩ
中进行 ＢＬＡＳＴ 分析ꎬ并以 Ｄｉｃｋｅｙａ ｄａｄａｎｔｉｉ ｓｔｒａｉｎ
５８２为外组ꎬ选用 ＵＰＧＭＡ法将 ＮＣＢＩ 中发表的 ２５
个 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株(包括 １１个 Ｐｃｃ、５个 Ｐｃｂ、３
个 Ｐｃｏ、３ 个 Ｐｗ、２ 个 Ｐａ 和 １ 个 Ｐｂ)１６Ｓ ｒＲＮＡ 基
因用于系统发育树的构建ꎮ
２ 结果与分析
２.１ 病原菌致病性
将菌株 ＱＣ０１ 回接到宿主芹菜叶柄上ꎬ２４ ｈ 时
接种 ＱＣ０１的芹菜已经完全呈水渍状腐烂ꎬ且伴有
明显恶臭气味(图 １￣Ａ、Ｂ)ꎻ同时ꎬ接种到温室培养的
芹菜叶柄基部ꎬ２４ ｈ 时软腐症状从伤口处扩散ꎬ发
褐ꎬ具恶臭气味ꎬ叶柄瘫倒(图 １￣Ｃ、Ｄ)ꎮ 接种０.９％
的无菌 ＮａＣｌ生理盐水的对照未发病ꎮ 对发病的芹
菜叶柄按照上述分离方法重新分离病原菌ꎬ经形态
观察与所接菌株形态上完全一致ꎮ 故分离得到的菌
株 ＱＣ０１是引起芹菜细菌性软腐病的致病菌株ꎮ
２.２ 病原菌表型特征
将菌株 ＱＣ０１ 在 ２８℃培养 １６ ｈ 后ꎬ 在 ＬＢ 培
养基上可见直径为１.０~１.５ ｍｍ乳白色稍突起的圆
Ｆｉｇ. １ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＱＣ０１ ｏｎ ｃｅｌｅｒｙ (０.９％ ＮａＣｌ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌｓ)
Ａꎬ Ｂ: Ｃｅｌｅｒｙ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｆｔｅｒ ２４ ｈꎻ ＣꎬＤ: Ｃｅｌｅｒｙ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｆｔｅｒ ２４ ｈ.
０２４
４期 王 茜ꎬ等:一株芹菜(Ａｐｉｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ Ｌ.)软腐病菌 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ的特征
形菌落ꎬ表面光滑ꎬ边缘清晰整齐(图 ２￣Ａ)ꎮ 普通
光学显微镜下革兰氏染色菌体为两端钝圆ꎬ红色的
革兰氏阴性杆菌(图 ２￣Ｂ)ꎻ鞭毛染色显示其具有 ２
~８根周生鞭毛(图 ２￣Ｃ)ꎮ
ＱＣ０１与对照菌株在 Ｋｉｎｇ’ ｓ Ｂ 培养基上均没
有产生明显的荧光ꎻ在 ＣＶＰ 培养基上均能产生典
型的杯状凹陷ꎬ表明该菌株有利用果胶的能力ꎻ均
具备在 ３７℃和含有 ７％ ＮａＣｌ的培养基中生长的能
力ꎻ均能利用柠檬酸盐和液化明胶ꎻ均可以利用葡
萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、木糖、甘露醇、甘油、肌醇、
鼠李糖和水杨甙糖醇类化合物作为碳源发酵产酸ꎮ
同时ꎬ不同于 Ｓ３ 菌株ꎬＱＣ０１、ＣＣ１ 和 Ｔ５ 利用碳源
种类更多ꎬ还可以消化麦芽糖、阿拉伯半乳聚糖、
α￣甲基葡糖苷、阿拉伯糖和山梨醇(表 １)ꎮ
２.３ Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动鉴定系统
根据菌株对 ＧＥＮ ＩＩＩ微平板中 ７１种碳源和 ２３
种化学物质的利用情况ꎬ由于系统内仅收录了
Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属中 Ｐｃｃ亚种和 Ｐａ种数据ꎬ该 ４株
菌株的自动鉴定结果均为 Ｐｃｃ亚种ꎮ 其中ꎬ与生理
生化鉴定结果相符ꎬＱＣ０１ 和 Ｐｃｏ 菌株 ＣＣ１、Ｔ５ 均
能够利用麦芽糖、山梨醇和阿拉伯醇ꎬ在微平板上
Ｆｉｇ. ２ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＱＣ ０１
Ａ: Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｌｏｎｙ ｏｎ ＬＢ ｍｅｄｉｕｍꎻ Ｂ ａｎｄ Ｃ: Ｇｒａｍ ａｎｄ ｆｌａｇｅｌｌｕｍ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ｏｐｔｉｃｓ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ (１ ０００×) ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
Ｔａｂｌｅ １ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＱＣ ０１ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ＣＣ１ꎬＴ５ ａｎｄ Ｓ３
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
Ｓｔｒａｉｎｓ
ＱＣ０１ ＣＣ１ Ｔ５ Ｓ３
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
Ｓｔｒａｉｎｓ
ＱＣ０１ ＣＣ１ Ｔ５ Ｓ３
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｏｎ
Ｋｉｎｇ’ｓ Ｂ ｍｅｄｉｕｍ
－ － － －
Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ
ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎ
＋ ＋ ＋ －
Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｃｔａｔｅ ＋ ＋ ＋ ＋
Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ
α￣ｍｅｔｈｙｌ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ
＋ ＋ ＋ －
Ｇｒｏｗｔｈ ａｔ ３７℃ ＋ ＋ ＋ ＋ Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｆｒｕｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ＮａＣｌ ａｔ
ｍａｘｉｍｕｍ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
７％ ７％ ７％ ７％ Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｘｙｌｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｔｒａｔｅ ＋ ＋ ＋ ＋ Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｌａｔｉｎ ＋ ＋ ＋ ＋ Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｇｌｙｃｅｒｏｌ ＋ ＋ ＋ ＋
Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｇｌｕｃｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ａｒａｂｉｎｏｓｅ ＋ ＋ ＋ －
Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍａｌｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ － Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｉｎｏｓｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋ ＋
Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｓｕｃｒｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｒｈａｍｎｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋
Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌａｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｓａｌｉｃｉｎ ＋ ＋ ＋ ＋
Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｇａｌａｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ Ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｓｏｒｂｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋ －
Ｎｏｔｅ: ＋ ꎬ ａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅꎻ －ꎬ ａｓ ｎｅｇａｔｉｖｅꎻ Ｓ３ꎬ ＣＣ１ ａｎｄ Ｔ５ ｈｅｒｅ ａｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ
１２４
植物病理学报 ４５卷
产生显色反应ꎬ而 Ｐｃｃ菌株 Ｓ３则不能够利用这 ３种
糖醇ꎮ 同时ꎬＧＥＮ ＩＩＩ 微平板反应还发现了不同于
Ｓ３的菌株ꎬＱＣ０１、ＣＣ１和 Ｔ５能够利用葡糖醛酸ꎬ进
一步扩大了 ＱＣ０１、ＣＣ１、Ｔ５和 Ｓ３的碳源利用差异ꎮ
２.４ 病原菌 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因的序列分析
以菌株 ＱＣ０１、ＣＣ１、Ｔ５ 和 Ｓ３ 基因组 ＤＮＡ 为
模版ꎬ１６Ｓ ｒＲＮＡ 基因扩增引物 ＰＣＲ扩增均得到一
条约 １ ５００ ｂｐ 的扩增产物(图 ３)ꎮ 测序后 ＱＣ０１、
ＣＣ１、Ｔ５和 Ｓ３的 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列准确为 １ ５３０
ｂｐꎬ为 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因的完整序列ꎮ
菌株 ＱＣ０１ 和 Ｔ５ 各获得一种类型 １６Ｓ ｒＲＮＡ
基因序列ꎬ而 ＣＣ１得到两种类型 ｔｙｐｅ Ｉ 及 ｔｙｐｅ ＩＩꎮ
其中 ＱＣ０１和 ＣＣ１ ｔｙｐｅ ＩＩ与菊苣寄主来源 Ｐｃｏ 菌
株 ＪＫＩ ５８２ ｔｙｐｅ ＩＩ ( ＪＦ９２６７３０. １ ) 和 ＮＢ １８９２
(ＪＦ９２６７２８.１)的序列相似性为 １００％ꎬ而 ＣＣ１ ｔｙｐｅ
Ｉ和 Ｔ５ 则与 Ｐｃｏ 菌株 ＣＦＢＰ１８７８( ＪＦ９２６７２７.１)和
ＪＫＩ ５８２ ｔｙｐｅ Ｉ( ＪＦ９２６７２９.１)序列相似性为 １００％ꎬ
这两种基因序列类型仅有一个碱基替换的核苷酸
差异ꎬ发生在第 ７１位置ꎬ该位置前者基因类型均为
Ｇꎬ后者基因类型均为 Ａꎮ
Ｆｉｇ. ３ Ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ＰＣＲ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｒｏｍ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅｓ ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ
１: ＱＣ ０１ꎻ ２: ＣＣ１ꎻ ３: Ｔ５ꎻ ４: Ｓ３ꎻ ５: Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ Ｍ:
２００ ｂｐ ＤＮＡ ｐｌｕｓ ｌａｄｄｅｒ.
基于 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因完整序列ꎬ以 Ｄ. ｄａｄａｎｔｉｉ
菌株 ５８２为外组ꎬ将 ＱＣ０１、ＣＣ１、Ｔ５及 Ｓ３与已发表
的其他 ２５ 个 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ 菌株构建系统发育树
(图 ４)ꎮ 菌株 ＱＣ０１与其他所有 Ｐｃｏ 菌株聚类成了
明显的 Ｐｃｏ类群ꎮ 该 Ｐｃｏ类群又与由 Ｐｃｃ和 Ｐｃｂ菌
株各自形成的 Ｐｃｃ和 Ｐｃｂ亚类群组成的另一类群构
成了 Ｐｃ分枝ꎮ 此外ꎬＰａ和 Ｐｂ菌株共同组成的类群
与 Ｐｗ菌株组成类群也聚集形成另外分枝ꎮ
３ 讨论
本研究对从北京通州芹菜软腐病样中分离到
的菌株 ＱＣ０１进行了形态和生理生化表型特征观
察以及分子诊断ꎬ将其鉴定为 Ｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂ￣
ｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍꎮ 该亚种先前报道引发了法国菊苣
软腐病[４]ꎬ也有瑞士菊苣和芹菜、新西兰风信子、
以及北京白菜和大葱寄主来源的该菌株的报
道[２ꎬ６ꎬ１２]ꎮ 菌株 ＱＣ０１ 形态表型特征上符合软腐
Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ的描述ꎮ 不同于 Ｐａ 和 Ｐｗ 菌株低
于 ３６℃ ~３７℃生长特性ꎬ又有别于 Ｐｂ 菌株不能利
用柠檬酸盐和明胶特性ꎬＱＣ０１ 与参试菌株 ＣＣ１、
Ｔ５和 Ｓ３ 均可以在 ３７℃ꎬ甚至含有 ７％ ＮａＣｌ 培养
基中正常地生长ꎬ具备降解柠檬酸和明胶特征(表
１)ꎬ这与发表的 Ｐｃ 菌株表现一致[２ꎬ４ꎬ６]ꎬ支持其属
于 Ｐｃ种的归类ꎮ 同时ꎬ不同于 Ｐｃｃ 菌株 Ｓ３ꎬＱＣ０１
与 Ｐｃｏ菌株 Ｔ５和 ＣＣ１能够利用 α￣甲基葡糖苷、麦
芽糖、山梨醇、阿拉伯醇、阿拉伯半乳聚糖及葡糖醛
酸作为碳源产酸ꎮ 可见ꎬＱＣ０１ 菌株不同于 Ｐｃｃ 和
Ｐｗ菌株ꎬ它与 Ｐｃｏ、Ｐａ和 Ｐｂ菌株同样能利用 α￣甲
基葡糖苷[２ꎬ４]ꎻ在山梨糖醇和阿拉伯醇的利用上ꎬ
它与 Ｐｃｏ菌株一致ꎬ而不同于 Ｐｃｃ、Ｐａ、Ｐｗ和 Ｐｂ菌
株不具备这两个糖醇利用特性[２ꎬ４]ꎮ
分子诊断工具如 １６Ｓ ｒＲＮＡ 序列已经发展为
用于表型特性无法解决的 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ 种或亚
种的鉴别ꎮ 为了准确特征分离到的 ＱＣ０１ 菌株ꎬ本
研究克隆了 ＱＣ０１、ＣＣ１、Ｔ５ 和 Ｓ３ 菌株 １６Ｓ ｒＲＮＡ
基因完整序列(图 ３)ꎬ并将其与发表的 ２５ 个软腐
果胶杆菌 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因完整序列类型进行了比
对分析发现ꎬＱＣ０１ 和 ＣＣ１ ｔｙｐｅ ＩＩ 与 ＪＫＩ ５８２ ｔｙｐｅ
ＩＩ( ＪＦ９２６７３０. １)和 ＮＢ １８９２( ＪＦ９２６７２８. １)完全一
致ꎻ而 ＣＣ１ ｔｙｐｅ Ｉ 和 Ｔ５ 则与 ＪＫＩ ５８２ ｔｙｐｅ Ｉ
(ＪＦ９２６７２９.１)和 ＣＦＢＰ １８７８( ＪＦ９２６７２７.１)完全一
致ꎻ这两序列类型仅表现出一个碱基替换的核苷酸
差异ꎮ Ｎａｂｈａｎ 等[６] 认为 ＣＦＢＰ１８７８、 ＮＢ１８９２ 和
ＪＫ１５８２ 菌株之间 １６ ｒＲＮＡ基因序列的一致性与其
来源于菊苣狭窄寄主范围和分布局限于欧洲有关ꎮ
而采自北京地区的寄主分别为芹菜、白菜和大葱的
ＱＣ０１、ＣＣ１和 Ｔ５菌株在 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列上与
它们表现出的高度稳定性则暗示 Ｐｃｏ 亚种可能具
有高水平的同质性ꎮ
２２４
４期 王 茜ꎬ等:一株芹菜(Ａｐｉｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ Ｌ.)软腐病菌 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ的特征
Ｆｉｇ. ４ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＱＣ ０１
ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｔｒａｉｎｓ
Ｄｉｃｋｅｙａ ｄａｄａｎｔｉｉ ｓｔｒａｉｎ ５８２ ａｓ ｏｕｔｇｒｏｕｐ.
基于 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因完整序列类型的多样性ꎬ
ＱＣ０１与 ＣＣ１、Ｔ５以及其他发表 Ｐｃｏ菌株构成了一
个明显 Ｐｃｏ类群ꎬ与 Ｐｃｃ和 Ｐｃｂ菌株共同形成的类
群正常地聚集在 Ｐｃ 分枝中ꎬ显示出其属于 Ｐｃ 亚
种分类地位[４ꎬ６]ꎬ同时也将 Ｐｃｃ 和 Ｐｃｂ 菌株分聚为
代表其亚种的各自类群ꎬ确认了 Ｐｃ 种内 ３ 个亚种
的划分[６]ꎮ 本研究首次在国内芹菜软腐病害样品
中发现 Ｐｃｏ致病菌ꎬ这为进一步开展对该病害的综
合控制技术研究奠定了基础ꎮ
参考文献
[１] Ｍａ Ｂꎬ Ｈｉｂｂｉｎｇ Ｍ Ｅꎬ Ｋｉｍ Ｈ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ｈｏｓｔ ｒａｎｇｅ
ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｙｌｏｇｅｎｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｆｔ ｒｏｔ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅ￣
ｒｉａｌ ｇｅｎｅｒａ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｄ Ｄｉｃｋｅｙａ[ Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｐａ￣
ｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２００７ꎬ ９７ (９): １１５０－１１６３.
[２] Ｇａｒｄａｎ Ｌꎬ Ｇｏｕｙ Ｃꎬ Ｃｈｒｉｓｔｅｎ Ｒꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｏｆ
３２４
植物病理学报 ４５卷
ｔｈｒｅｅ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｔｏ
ｓｐｅｃｉｅｓ ｌｅｖｅｌ: Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍ ｓｐ. ｎｏｖ.ꎬ
Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｅｔａｖａｓｃｕｌｏｒｕｍ ｓｐ. ｎｏｖ. ａｎｄ Ｐｅｃｔｏｂａｃ￣
ｔｅｒｉｕｍ ｗａｓａｂｉａｅ ｓｐ. ｎｏｖ[Ｊ] . Ｉｎｔ. Ｊ. Ｓｙｓｔ. Ｅｖｏｌ. Ｍｉｃｒｏ￣
ｂｉｏｌ.ꎬ ２００３ꎬ ５３ (２): ３８１－３９１.
[３] Ａｖｒｏｖａ Ａ Ｏꎬ Ｈｙｍａｎ Ｌ Ｊꎬ Ｔｏｔｈ Ｒ Ｌꎬｅｔ ａｌ. Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎ￣
ｔｉｎｇ ｆｏｒ ｔａｘｏｎｏｍｙ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｆｔ ｒｏｔ
ｂａｃｔｅｒｉａ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ａｎｄ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ
[Ｊ] . Ａｐｐｌ. Ｅｎｖｉｒｏｎ. Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.ꎬ ２００２ꎬ ６８(４): １４９９－
１５０８.
[４] Ｇａｌｌｏｉｓ Ａꎬ Ｓａｍｓｏｎ Ｒꎬ Ａｇｅｒｏｎ Ｅꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏ￣
ｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒａ ｓｕｂｓｐ. ｎｏｖ.ꎬ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ
ｏｄｏｒｏｕｓ ｓｏｆｔ ｒｏｔ ｏｆ ｃｈｉｃｏｒｙ ( Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ Ｌ.)
[Ｊ] . Ｉｎｔ. Ｊ. Ｓｙｓｔ. Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ.ꎬ １９９２ꎬ ４２ (４): ５８２－５８８.
[５] Ｄｕａｒｔｅ Ｖꎬ ｄｅ Ｂｏｅｒ Ｓ Ｈꎬ Ｗａｒｄ Ｌ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｈａｒａｃｔｅ￣
ｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｙｐｉｃａｌ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｔｒａｉｎｓ ｃａｕｓｉｎｇ
ｂｌａｃｋｌｅｇ ｏｆ ｐｏｔａｔｏ ｉｎ Ｂｒａｚｉｌ [ Ｊ] . Ｊ. Ａｐｐｌ. Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.ꎬ
２００４ꎬ ９６ (３): ５３５－５４５.
[６] Ｎａｂｈａｎ Ｓꎬ Ｄｅ Ｂｏｅｒ Ｓ Ｈ ꎬＷｙｄｒａ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ
ｒｅｌａｔｅｄｎｅｓｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂ￣
ｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍꎬ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ.
ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ ａｎｄ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ.
ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｅ ｓｕｂｓｐ. ｎｏｖ [Ｊ] . Ｊ. Ａｐｐｌ. Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.ꎬ ２０１２ꎬ
１１３ (４): ９０４– ９１３.
[７] Ｃｈａｒｋｏｗｓｋｉ Ａ Ｏ. Ｔｈｅ ｓｏｆｔ ｒｏｔ Ｅｒｗｉｎｉａ[Ｍ] . Ｂｅｒｌｉｎ:
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓꎬ ２００６ꎬ ４２３－５０５.
[８] Ｙａｐ Ｍ Ｎꎬ Ｂａｒａｋ Ｊ Ｄꎬ Ｃｈａｒｋｏｗｓｋｉ１ Ａ Ｏ. Ｇｅｎｏｍｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ａｎｄ
ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ [ Ｊ ] . Ａｐｐｌ. Ｅｎｖｉｒｏｎ.
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.ꎬ ２００４ꎬ ７０ (５): ３０１３－３０２３.
[９] Ｎａｂｈａｎ Ｓꎬ Ｗｙｄｒａ Ｋꎬ Ｌｉｎｄｅ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｔｗｏ
ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ＤＮＡ ａｓｓａｙｓꎬ ＡＦＬＰ ａｎｄ ＭＬＳＡꎬ ｆｏｒ
ｅｐｉｄｅｍｉｃ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｐｅｃｔｏｌｙｔｉｃ
ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｆｏｃｕｓ ｏｎ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ
ｓｐｅｃｉｅｓ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ [ Ｊ ] . Ｐｌａｎｔ
Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２０１２ꎬ ６１ (３): ４９８－５０８.
[１０] Ｗａｎ ｄｅｒ Ｍｅｒｗｅ Ｊ Ｊꎬ Ｃｏｕｔｉｎｈｏ Ｔ Ａꎬ Ｋｏｒｓｔｅｎ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ ｃａｕｓｉｎｇ
ｂｌａｃｋｌｅｇ ｏｎ ｐｏｔａｔｏｅｓ ｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ [Ｊ] . Ｅｕｒ. Ｊ. Ｐｌａｎｔ
Ｐａｔｈｏｌ.ꎬ ２０１０ꎬ １２６ (２) : １７５－１８５.
[１１] Ｎｇａｄｚｅ Ｅꎬ Ｉｃｉｓｈａｈａｙｏ Ｄꎬ Ｃｏｕｔｉｎｈｏ Ｔ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｒｏｌｅ ｏｆ
ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｏｘｉｄａｓｅꎬ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅꎬ ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ａｍｍｏ￣
ｎｉａ ｌｙａｓｅꎬ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄꎬ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｈｅｎｏｌｓ
ｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｐｏｔａｔｏｅｓ ｔｏ ｓｏｆｔ ｒｏｔ[ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅꎬ
２０１２ꎬ ９６ (２): １８６－１９２.
[１２] Ｚｈｕ Ｌꎬ Ｘｉｅ Ｈꎬ Ｃｈｅｎ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. Ｒａｐｉｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎꎬ ｉｄｅｎｔｉ￣
ｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｐｐ. [ Ｊ ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ
２０１０ꎬ ９２ (２): ４６９－４７３.
[１３] Ｃｕｐｐｅｌｓ Ｄꎬ Ｋｅｌｍａｎ Ａ. Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｅｄｉａ
ｆｏｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｆｔ￣ｒｏｔ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ａｎｄ ｐｌａｎｔ
ｔｉｓｓｕｅ[Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ １９７４ꎬ ６４ (１): ４６８－４７５.
[１４] Ｇａｒｒｉｔｙ Ｇ Ｍ ꎬ Ｂｅｌｌ Ｊ Ａꎬ Ｌｉｌｂｕｒｎ Ｔ Ｇ. Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕ￣
ａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ [Ｍ] . Ｂｅｒｌｉｎ: Ｓｐｒｉｎｇｅｒ
Ｖｅｒｌａｇꎬ ２００４.
[１５] Ｆａｎｇ Ｚ Ｄ.Ｐｌａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｍｅｔｈｏｄｓ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)
[Ｍ] . Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｅｓｓ (中国农业出
版社)ꎬ １９９８.
责任编辑:曾晓葳
４２４