全 文 ：书西北植物学报!
"#$
!
$$
"
##
#$
!#%$&!#%
!"#$%&#%&()$*+,""-.)/#0-/
!!
文章编号$
#"""()"!%
"
!"#$
#
#(!#%$("*
收稿日期$
!"#$("+(##
%修改稿收到日期$
!"#$(##("#
基金项目$国家自然科学基金"
$##"#%!)
#%中国博士后科学基金"
!"#"")#!#!
!
"#!,%"!-"
#%辽宁省创新团队项目"
.,!"#""+)
#
作者简介$李
!
贺"
#+-&
#!女!博士!副教授!主要从事果树分子生物学研究&
/(0123
$
3245#+--!#
!
#*$6780
"
通信作者$纪明山!博士!教授!主要从事生物农药及农药毒理学研究&
/(0123
$
9
202:
;
<41:
!
#*$6780
草莓
!"#$%&
靶基因
1!0$
的克隆及表达分析
李
!
贺#!!毛健鑫!!戚华彩!!张志宏!!纪明山#"
"
#
沈阳农业大学 植物保护学院!沈阳
##"**
%
!
沈阳农业大学 园艺学院!沈阳
##"**
#
摘
!
要$以栽培草莓品种全明星(为试材!通过
$=(
和
%=(>?@/
技术克隆出
02>$+"
靶基因
!"#$
的
7AB?
全长!
命名为
$%!"#$
&序列分析发现$草莓
!"#$
基因的
7AB?
全长为
-)!C
D
!含有
#*
个碱基的
E83
F
?
尾巴及
!
个高
度保守的
G1(<2>B?
产生位点和
#
个
02>$+"
靶位点%该基因
AB?
全长为
!)C
D
!
%=
端
#$"C
D
处有一个
+C
D
的内
含子序列&生物信息学软件预测显示!草莓
!"#$
基因的启动子除具有
,?,?
)
@??,(C8H
外!还含有
I(C8H
*
@(
C8H
等特异作用元件&实时定量
>,(E@>
结果表明!草莓
02>$+"
与靶基因
!"#$
间的表达模式与拟南芥中的表
达模式相同!推测草莓
!"#$
基因的生物合成也受
02>$+"
的指导&
关键词$草莓%
!"#$
基因%
02>$+"
%实时定量
>,(E@>
中图分类号$
J-*
文献标志码$
?
()*"*
+
,*-./
0
1233")*4*,(
5
3"3)6!"#$%&78,1
+
292-
1!0$:2*261)!;91,<=211
5
.KL5
#
!
!
M?NO21:H2:
!
!
JKLP1712
!
!
QL?BIQ4248:
;
!
!
OKM2:
;
<41:
#
"
"
#E31:GER8G57G28:@835
;
5
!
S45:
F
1:
;
?
;
R27P3GPR13T:2U5R<2G
F
!
S45:
F
1:
;
##"**
!
@42:1
%
!@835
;
58VL8RG27P3GPR5
!
S45:
F
1:
;
?
;
(
R27P3GPR13T:2U5R<2G
F
!
S45:
F
1:
;
##"**
!
@42:1
#
4=391,>9
$
,4502>$+"(G1R
;
5G5W!"#$
;
5:5:105W$%!"#$X1<2<831G5WVR80F
"
$&%

%&(%%)%)*
%++%

?3(#
X2G4G4505G48W<8VE@>1:W>?@/6S5
Y
P5:751:13
F
<2<<48X5WG41GG457AB?X1<78:<2<(
G5W8V1-)!C1<5
D
12RX2G41#*C
DD
83
F
?1:W42
;
43
F
78:<5RU5WW8012:<
!
GX8G1(<2>B?(
;
5:5R1G2:
;
R5
;
28:<
1:W8:502>$+"780
D
3505:G1R
F
<2G56,45VP3(35:
;
G4AB?8V$%!"#$2D
X2G41:2:GR8:<5
Y
P5:758V
+C
D
1GG45#$"C
D
VR80G45%=5:W8V!"#$GR1:<7R2
D
G6K:1WW2G28:G8G45,?,?
)
@??,(C8H
!
2G<
D
R808G5R
D
R5W27G5WC
F
C282:V8R01G271:13
F
<5<13<878:G12:5W<805<
D
572V27R5
;
P31G8R
F
53505:G<!
@(C8H
1:W5G76,45R5,(E@><48X5WG41GG455H
D
R5<<28:
D
1GG5R:8V02>$+"1:W2G;
5G5W
!"#$
;
5:52:F
2<1<20231R01::5RG8"&%,(-.
/
+(+6S8X5W5WP75G41GG45C2838
;
2713V8R01G28:8V
F
!"#$
;
5:5X1<13<87351U5WC
F
02>$+"6
?2
5
<)1-3
$
F
%
!"#$
;
5:5
%
02>$+"
%
R513G205>,(E@>
!!
内源性非蛋白质编码小
>B?
"
<013:8:(
D
R8(
G52:(78W2:
;
>B?
#广泛存在于生物体中!通过对靶
标
0>B?
进行切割或抑制其翻译进而在转录后水
平上调节基因表达+#,&已知的小
>B?
主要分为两
大类!一类是
027R8>B?
"
02>B?
#
+
!
,
!另一类是小
干扰
>B?
"
<0132:G5RV5R2:
;
>B?
!
<2>B?
#
+
$()
,
&植
物内源
<2>B?
是一类由长的双链
>B?
"
W8PC35
B?
!
W<>B?
#产生的小分子
>B?
!其来源
包括转录本*转基因的反向重复序列以及转座子
等+%,&到目前为止!植物
<2>B?
主要包括$反式作
用小
>B?
"
GR1:<(17G2:
;
<2>B?
!
G1(<2>B?
#*天然反
义小
>B?
"
:1GPR131:G2<5:<5GR1:<7R2
D
G(W5R2U5W
<2>B?
!
:1G(<2>B?
#*重复序列相关的小
>B?
"
R5(
D
51G(1<<8721G5W<2>B?
!
R1(<2>B?
#等+*(-,&
G1(<2>B?
是一类植物内源的并且依赖于
02>(
B?
而产生的
<2>B?
+

,
!大小
!#:G
!它以与
02>B?
相似的方式行使生物学功能+,!即通过与靶位点不
完全配对进而对靶
0>B?
进行切割+#!#",&拟南芥
中编码
G1(<2>B?
的
,?S
基因属于
)
个家族
"
!"##
*
!"#!
*
!"#$
和
!"#)
#!其中
!"#$
保守
性较高+)!##,&与大多数
02>B?
不同!
02>$+"
的作
用靶标并非
0>B?
!而是另一类小分子
>B?
&拟
南芥中
,?S$
被鉴定是
02>$+"
的靶标+,!它们之
间的具体作用方式是植物
!"#$
基因由
>B?
聚合
酶
"
转录产生
G1(<2>B?
前体!
02>$+"
在
?IN#
的
参与下介导
G1(<2>B?
前体的剪切!之后在
SIS$
"
DD
R5<<8R8V
;
5:5<235:72:
;
$
#的辅助下!
>A>*
将断裂的
<<>B?
转换成
W<>B?
!然后在
A>Z)
和
L/B#
的帮助下!
A@.)
将
W<>B?
切割为成簇的
G1(<2>B?
!最后成熟的
G1(<2>B?
与
>KS@
结合识别
靶
0>B?
!通过降解
0>B?
来调节基因表达&目
前!关于
!"#$
的报道主要集中在拟南芥*水稻等
植物上+#!(#$,!拟南芥中
02>$+"
指导
!"#$(G1<2>(
B?
的生物合成!而
!"#$(G1<2>B?
通过负调控靶
基因生长素响应因子
?>[
来调控叶的极性发育和
抑制植物从幼年到成年阶段的转变等+#!!#)(#%,&至
今!未见草莓
02>$+"
靶基因
!"#$
的报道!它们在
草莓植株生长发育中的作用也尚不清楚!但本试验
的前期研究发现!与普通的匍匐茎苗相比!在草莓微
繁殖苗对白粉病抗性下降的同时+#*,!
02>$+"
表达
也明显下降+#-,&因此!本研究克隆了草莓
!"#$
基
因的全长!分析了草莓植株中
02>$+"
与其靶基因
!"#$
间的差异表达模式!为揭示草莓
02>$+"
及
其靶基因
!"#$
与白粉病抗性的关系奠定基础&
#
!
材料和方法
@6@
!
植物材料
草莓栽培品种 全明星("
?3#*丰香(
"
,8
F
8:8\1
#*幸香("
S1742:8\1
#和枥乙女("
,8(
7428G805
#露地栽培于沈阳农业大学草莓试验园!常
规栽培管理!采集幼嫩叶片液氮迅速冷冻!然后于
&"]
超低温冰箱中保存!用于基因克隆&
草莓全明星(试管苗继代培养在
MS^"6%
0
;
)
.*(Z? "^6"%0
;
)
.KZ?
培养基上!试管苗用
M
"
表示&试管苗下地移栽
%
个月用
M
%
表示!分别
取
M
"
和
M
%
的幼嫩叶片用液氮迅速冷冻后于
&"
]
超低温冰箱中保存!用于基因表达差异分析&
@6A
!
引物及探针及核酸的提取
利用
ER205R%6"
设计引物及探针!由
,1_1>1
公司合成!其序列见表
#
&
总
>B?
*
AB?
及总核酸的提取采用
@,?Z
法+#,&利用
#6"`
的琼脂糖凝胶电泳检测核酸的完
整性!用
AT""
核酸蛋白分析仪"
Z57\01:@8P3(
G5R
!
TS?
#检测核酸的纯度&
@B$
!
#87C#
分析
反转录反应体积为
!"
#
.
!在
"6!0.
反应管中
先加入总
>B?%
#
.
!
WB,E<
"
#"0083
)
.
#
#
.
!摩
尔浓度为
%"
D
083
)
#
.
的
N32
;
8W
"
,
#
#
和
>1:W80+
表
@
!
本研究所用引物及探针序列
,1C35#
!
ER205R<1:W
D
R8C5F
引物
ER205R
序列"
%=
#
$=
#
S5
Y
P5:75
"
%=
#
$=
# 用途
T<5
ISE([
ISE(>
,,@,,I?@@,,Ia??I>@@,a,,
"
a
$
,
)
@
%
>
$
?
)
I
#
?I@,@?I>?III?,?I
"
>
$
?
)
I
#
!"#$
基因片段的分离
K<831G28:8V!"#$VR1
;
05:G<
ISE(>#
ISE(>!
ISE(>$
,@?II?III?,?I?@??II?
?II?I??I??III,?,II@I
I??@IIII?I??I@II?II@
%=(>?@/
>1
D
2W10
D
32V271G28:8V7AB?%=5:W<
ISE([#
ISE([!
ISE([$
I@@,,,,@,,I?@@,,I,??
@,,,@,@,,@I@?,,,@,??
?@?@?@@@,I@?@@II??,,
$=(>?@/
>1
D
2W10
D
32V271G28:8V7AB?$=5:W<
,?S$([
,?S$(>
??@?@@?@?@,,@,,,,@@@,,,,@,@
??,??@??@??I?,?I??,
!"#$7AB?
全长扩增
?0
D
32V271G28:8VVP3(35:
;
G47AB?8V!"#$
,?S$(>,
,?S$(E@>[
,?S$(E@>>
,?S$(ER8C5
@,@??@,II,I,@I,II?I,@@II@??,,@?I,,I?II?I?,@,,
?@?@,@@?I@,III,,@,,I?@@,
??@,II,I,@I,II?I
[?M(,,@?I,,I?II?I?,@,,(,?M>?
!"#$
定量
>,(E@>
Y
>,(E@>8V!"#$
02>$+"(>,
02>$+"(E@>[
02>$+"(E@>>
02>$+"(ER8C5
@,@??@,II,I,@I,II?I,@@II@??,,@?I,,I?III@I@,?,
?@?@,@@?I@,III??I@,@?II?
??@,II,I,@I,II?I
[?M(,,@?I,,I?III@I@,?,(,?M>?
02>$+"
定量
>,(E@>
Y
>,(E@>8V02>$+"
#S([
#S(>
#S(ER8C5
I,?I,@?,?,I@,,I,@,
I??,I?,I@I,@I@@?I@?@???II
[?M(@?I??I,@III?,,,I,,I@(,?M>?
#S
定量
>,(E@>
Y
>,(E@>8V#S
)%#!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
$$
卷
05R<
各
"6%
#
.
!混匀后
*%]
变性
%02:
!然后迅速
放到冰水混合物中冷却!之后再加入
?Mb
"
%T
)
#
.
#
#
.
!
?MbZPVV5R)
#
.
!
>B1<5
抑制剂"
)"T
)
#
.
#
#
.
&通过
$-]!6%4
!
-"]#%02:
完成反转
录反应&取
#
#
.7AB?
加入
.8:
;
!%
0
AB?
聚合
酶"
%T
)
#
.
#
"6)
#
.
!
ZPVV5R
$
!
#
.
!
WB,E<
"
!6%
0083
)
.
#
"6)
#
.
!正*反向引物"
#"
#
083
)
#
.
#各
#6*
#
.
!最后用水补足到
!"
#
.
进行
E@>
扩增&
E@>
反应程序为
+)]$02:
%
+)]$"<
!
%-]$"<
!
-!
]#02:
!
$%
个循环%
-!]#"02:
&用含
/Z
"
6%
#
;
)
0.
#的
#6%`
琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物&
@BD
!
#4.
分析
$=(>?@/
利用
,1_1>1
的试剂盒
>B?E@>
_2G
"
?Mb
#
b5R6$6"
!结合巢式
E@>
进行&
%=(
>?@/
参照
K:U2GR8
;
5:%=(>?@/<
F
!6"
试剂盒的方法进行!相应药品及接头引物均购自
,1_1>1
公司&扩增产物的检测方法同上&
@6E
!
序列测定和分析
利用
AB?
凝胶回收试剂盒从琼脂糖凝胶中回
收扩增片段!与
D
IM(,
载体连接!然后转化大肠杆
菌
,NE#"
感受态细胞!通过蓝白斑筛选
E@>
鉴定
阳性克隆!测序工作委托华大基因公司进行&
AB?
凝胶回收试剂盒购自
?caI/B
公司!
D
IM(,
载体
购自天根公司!其他药品为国产分析纯&利用
B@(
ZKZ31"
4GG
D
$))
C31;
8U
)
Z317
;
2
#对测序结果进行检索!
AB?M?B*6"
进行序列
分析&
利用二倍体森林草莓"
$123+4%
#基因组"
4G(
G
D
<
$))
F
6
D
31:G1:WV88W6786:d
)#和生物信
息学软件
E31:G@?>/
"
4GG
D
$))
C282:V8R01G27<6
D
P
;
5:G6C5
)
X5CG883<
)
D
31:G71R5
)
4G03
)#来完成草莓
!"#$
基因启动子的预测和分析&
@BF
!
实时定量
#87C#
根据草莓
!"#$
基因序列特点!设计茎环引物
进行实时定量
>,(E@>
反应&反应程序和体系参
照
.2
等+#-,的方法&反应体积为
!"
#
.
!包括
#
#
.
7AB?
"
>B?
为
!
#
;
#!

#
.!6%eM2H
!
#
#
.
增强
子!正*反向引物各
#
#
.
"
#"
#
083
)
.
#!探针
"6%
#
.
!
剩余体积用超纯水补足至
!"
#
.
&每个反应重复
$
次&反应程序为
+%]
变性
#"02:
%
+%]
变性
#%<
!
*"]
退火和延伸
#02:
!
)"
个循环&试剂
!6%e
R513M1"
E
)
B
$
[E!"$
#购自天根公司&使用
?ZK
公司的
-%""
定量
E@>
仪!
+*
孔板和光学膜完
成定量
E@>
反应&以
#SR>B?
基因作为管家基
因!清水模板为阴性对照!采用
!
&
$$
5G计算相对表
达量的高低"
5G
即循环阈值!表示每一个反应管内
的荧光信号到达设定的阀值时所经历的循环数&
$
5Gf
目的基因的平均
5G
值
&
管家基因的平均
5G
值&
$$
5Gf
$
5G"样本
#
#&
$
5G"样本
!
#
#&
!
!
结果与分析
AB@
!
草莓
1!0$
基因片段的分离
根据
?35:
等+,报道的苹果*葡萄*拟南芥*水
稻等物种中
!"#$
基因的序列结构特点!选择保守
区域设计
#
对简并引物"表
#
#!以草莓全明星(幼
嫩叶片的总
>B?
为模板进行
>,(E@>
扩增!得到
了一条约
#+"C
D
的特异条带"图
#
!
?
#&测序结果
表明!该片段大小为
#-C
D
!与拟南芥中
!"#$
"
?G$
;
#-#%
#相关区段的一致性为
%+6!!`
!且存在
!
个
G1(<2>B?
产生位点和
#
个
02>$+"
靶位点!表
明该片段是草莓
!"#$
基因片段&
ABA
!
草莓
1!0$
基因
>GH4
全长的获得
基于已获得的草莓
!"#$
序列片段!设计
$
条
巢式引物!继续以草莓全明星(幼嫩叶片的总
>B?
为模板进行
$=(>?@/
!得到
#
条小于
)""C
D
的特异
谱带"图
#
!
Z
#&克隆测序结果表明该片段大小为
$$C
D
!其中包括
#*
个碱基的
D
83
F
?
尾巴和
$=
接
头引物序列!说明已经到达
$=
末端&利用特异扩增
图
#
!
草莓
!"#$
基因扩增结果
?6!"#$
特异片段%
Z6$=(>?@/
%
@6%=(>?@/
%
A6!"#$
全长%
M6#""C
D
AB?
标准分子量
[2
;
6#
!
ER8WP7G<8V10
D
32V271G28:8V!"#$
;
5:5VR80F
?6!"#$VR1
;
05:G
%
Z6$=(>?@/
%
@6%=(>?@/
%
A6[P3(35:
;
G48V!"#$
%
M6#""C
D
AB?01R\5R
%%#!
##
期
!!!!!!!!!!!!
李
!
贺!等$草莓
02>$+"
靶基因
!"#$
的克隆及表达分析
和
$=(>?@/
所得序列为基序设计
$
条巢式引物进
行
%=(>?@/
!获得大约
)%"C
D
的特异谱带"图
#
!
@
#!克隆测序结果表明$该片段包含完整的
%=
端接
头引物和多个
III
位点!说明已经到达
%=
末端!其
中基因片段长度为
)$$C
D
&将通过
$=(>?@/
和
%=(
>?@/
得到的序列进行拼接!得到一条完成的
7A(
B?
序列!长度为
-)!C
D
!包含
#*
个碱基的
D
83
F
?
尾巴&在此基础上!去掉
D
83
F
?
尾巴在两端设计一
对特异引物!进行
E@>
扩增!获得
#
条大于
-""C
D
的特异片段"图
#
!
A
#!测序结果表明该片段长度为
-!*C
D
!经过比对分析发现!该序列与拼接序列的一
致性为
++6$"`
&经过多次重复测序!排除个别碱
基错配及测序误差最终获得了
#
条
-)!C
D
的草莓
!"#$
基因序列!将其命名为
$%!"#$
&将
$%*
!"#$
与苹果*葡萄及拟南芥中的
!"#$
基因进行
比对分析发现!在
!
个
G1(<2>B?
产生位点和
#
个
02>$+"
靶位点高度保守"图
!
#&
AB$
!
草莓
1!0$
基因
GH4
全长的克隆
采用扩增
!"#$
基因全长的引物!多次以草莓
总核酸为模板的
>,(E@>
和以
AB?
为模板的
E@>
扩增发现"图
$
#$以总核酸为模板有
!
条特异片段!
分别大于
-""C
D
和
""C
D
%而以
AB?
为模板则有
#
条大于
""C
D
的特异片段!该片段大小与以总核
酸为模板的对应片段大小一致&将大于
""C
D
片
段分别克隆测序发现!同一品种中以总核酸为模板
和以
AB?
为模板的序列一致!其中全明星(中片
段大 小 为
!)C
D
!
)
个 品 种 中 序 列 一 致 性 为
+6$+`
&将获得的
AB?
序列与
7AB?
全长进行
比对发现!一致性高达
6##`
!主要差异在于从
%=
端
#$"C
D
处开始多出一段约
+C
D
的序列!分析该
序列应该是草莓
!"#$
基因的内含子区域"图
)
#&
进一步克隆测序表明!以总核酸为模板得到的大于
-""C
D
的序列是
!"#$
基因的
7AB?
全长"图
$
#&
ABD
!
草莓
1!0$
基因启动子的预测分析
将获得的草莓
!"#$
基因的
AB?
序列与二倍
体森林草莓基因组的对应序列进行比对发现!一致
性高达
+-6+%`
&因此!下载了基因组中包含对应
序列在内
$6\C
的序列"
<7V"%#$#%)
$
*$""66
*$%"""
#!根据
>?@/
和特异扩增结果!将
%=
端的
转录起始位点
?
定义为
"
!通过
Z31比对分析将
转录起始位点之前
#"""C
D
序列用来预测栽培草
莓
!"#$
基因的启动子&利用生物学数据库
E31:G(
@?>/
对该序列进行预测分析!发现存在大量顺式
作用元件&其中启动子基本作用元件
,?,?(C8H
位于转录起始位点上游
&!
*
&#"-
*
&!$!
*
&#"
*
&!-
*
&*)
*
&+$$C
D
和
&+*C
D
处!增强子
@??,(C8H
位于转录起始位点上游
&!--
*
&$!
*
图
$
!
草莓
!"#$
基因的扩增产物
#
%
)6
总核酸为模板%
%
6
基因组
AB?
为模板%
#
*
%6
全明星%
!
*
6
丰香%
$
*
-6
幸香%
)
*
6
枥乙女
[2
;
6$
!
,45
D
R8WP7G<8VF
$%!"#$
;
5:5
#
%
)6,8G13:P73527172W1D
31G5<
%
%
6,8G13AB?
1D
31G5<
%
#
!
%6?3%
!
!
*6,8
F
8:8\1
%
$
!
-6S1742:8\1
%
)
!
6,87428G805
图
!
!
草莓
!"#$
基因与其他
!"#$
保守区比较
[1:
*
MW0
*
bU2
*
?G4
分别为草莓"
$%!"#$
#*苹果*葡萄及拟南芥中的
!"#$
基因片段!其中苹果*
葡萄及拟南芥中的
!"#$
基因序列参照
?35:
等+,报道
[2
;
6!
!
?32
;
:05:G8VF
$%!"#$1:W8G45R!"#$
;
5:5<
[1:
!
MW0
!
bU2
!
?G4D
R8WP7G<8V!"#$
;
5:5
%&(%%)%)%++%
!
6%78+-.93+:(4%
!
;(:(+2()(
<
3&%1:W"&%,(-.
/
+(+:=%7(%)%6,45!"#$
;
5:5<<5
Y
P5:75<8V6%78+-.93+:(4%
!
;(:(+2()(
<
3&%1:W"&%,(-.
/
+(+:=%7(%)%1778RW2:
;
G8G45R5
D
8RG8V?35:3:%76
+

,
*%#!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
$$
卷
&)!
*
&%"-
*
&+"+
*
&+)-
*
&+-"C
D
和
&+--C
D
"图
%
#&该启动子还存在着一些光响应元件如
@(
图
)
!
草莓
!"#$
基因的
AB?
序列
下划线为内含子
[2
;
6)
!
,45AB?<5
Y
P5:758V$%!"#$
;
5:5
,45P:W5R32:51R512图
%
!
草莓
!"#$
基因启动子
作用元件的预测分析
[2
;
6%
!
,451:13
F
<2<8VVP:7G28:1353505:G<8V
D
R808G5R8VF
!"#$
;
5:5
图
*
!
草莓
02>$+"
与靶基因
!"#$
的差异表达分析
[2
;
6*
!
,451:13
F
<2<8VW2VV5R5:G5H
D
R5<<28:8V
F
02>$+"1:W2G;
5G!"#$
;
5:5
C8H
*
I(C8H
*
<
D
3
及赤霉素响应元件
I?>/
"图
%
#&
ABE
!
草莓植株中
!"#$%&
与其靶基因
1!0$
间表达
模式分析
为了研究草莓
02>$+"
与其靶基因
!"#$
间的
表达模式!采用实时定量
>,(E@>
技术!分别以
M
"
和
M
%
的总
>B?
为模板系统研究了
02>$+"
与
!"#$
的表达&结果"图
*
#表明
02>$+"
及其靶基因
!"#$
在
M
"
和
M
%
中具有相似的差异表达模式!
02>$+"
"
M
%
)
M
"
f!"6"
#*
!"#$
"
M
%
)
M
"
f#%6#$
#均
在
M
"
中有较低的表达!在
M
%
中高表达&
$
!
讨
!
论
目前!关于
!"#$
基因的报道多集中在拟南
芥+)!!##,*水稻+#+(!#,等植物上&拟南芥中!
?35:
等+,
率先揭示了
!"#$%
基因具有
!
个几乎完全一致的
!#:G
的
G1(<2>B?
产生位点!之后
L8X53
等+##,在
!"#$
基因家族的其他成员中发现了单一的
G1(<2>(
B?
产生位点&已有研究表明$
!"#$
基因在水稻
以及其他的种子植物中都具有高度保守的
G1(<2>(
B?
产生位点和
02>$+"
互补位点+#$!#+(!",&本研究
表明!在草莓中分离得到的
$%!"#$
基因在核酸结
构上与其他该类同源基因类似!包含典型的
G1(<2>(
B?
产生位点和
02>$+"
互补位点&这一序列特征
表明该基因很可能与其他物种中的
!"#$
同源基
因类似!以相同的作用方式在草莓的生长发育过程
中发挥着重要的作用&此外利用二倍体森林草莓的
基因组信息!本研究预测了草莓
$%!"#$
基因的启
动子序列!分析发现包含大量的顺式作用元件!除启
动子基本作用元件
,?,?(C8H
和增强子
@??,(
C8H
外!还存在一些特异调控元件!如光响应元件
@(
C8H
*
I(C8H
等&
由于拟南芥中
02>$+"
与大多数
02>B?
不同!
并非负调控靶基因表达!而是正向介导
!"#$(G1(
<2>B?
的生物合成&即
02>$+"
与其靶基因
!"#$
的表达正相关!而
!"#$
通过负调控靶基因
">$
来影响其发育模式*时限及侧根发育等+#)(#%,!它们之
间的具体模式是降低
02>$+"
的表达!将导致
!"#$
积累水平降低!
">$$
)
">$)
表达水平增加+!!,&至
今!尽管未见任何关于草莓
02>$+"
与靶基因
!"#$
间表达模式的报道&但本研究中!
Y
>,(E@>
结果
"图
*
#显示$草莓
$%!"#$
与
02>$+"
在试管苗
"
M
"
#和试管苗下地移栽
%
个月"
M
%
#的叶片中表达
模式相似!均在试管苗下地移栽
%
个月"
M
%
#叶片中
有较高表达!分析是因为
M
%
中
02>$+"
的高表达导
-%#!
##
期
!!!!!!!!!!!!
李
!
贺!等$草莓
02>$+"
靶基因
!"#$
的克隆及表达分析
致
!"#$
的积累水平增加&因此!基于草莓
02>$+"
与
!"#$
间的表达模式也是正相关!推测草莓
!"#$
基因的生物合成也受
02>$+"
的指导&
参考文献!
+
#
,
!
SL/BA
!
g?BIS
!
@L/BL
!
3:%76M8357P31R
D
4
F
38
;
5:
F
8V02>$+"(
;
P2W5WGR1:<(17G2:
;
<2>B?
;
5:5<
"
!"#$
#
2:G45
;
R1<F
+
O
,
6
?7%):#
@
+:39%:(4+%)-A2.78:(.)
!
""+
!
$
$
#!%&#$!6
+
!
,
!
ITN,
"郭
!
韬#!
.KI.
"李广林#!
g/KJ
"魏
!
强#!
3:%76,45VP:7G28:8V
D
31:G027R8>B?
+
O
,
6"4:%B.:1B.&3%71*C44(-3):1#()1
"西北植
物学报#!
"##
!
$@
"
##
#$
!$)-&!$%)
"
2:@42:5<5
#
6
+
$
,
!
Z?KM
"白
!
描#!
@L/Bg,
"陈文婷#!
cK/Za
"谢丙炎#!
3:%76A2U5R<2G
F
8V
D
31:G>B?<235:72:
;D
1G4X1
F
<1:WR531G5W78R5
D
R8G52:<
+
O
,
6
5=()3+3B8773:().
<
D(
<
3#4(3)43+
"生命科学#!
"#$
!
AE
"
%
#$
%!)&%$#
"
2:@42:5<5
#
6
+
)
,
!
>?O?INE?.?B>
!
b?T@L/>/,L
!
,>/ONO
!
3:%76?W2U5R<51:W5U83PG28:1R23
F
V3P2W<5G8V027R8>B?<2:"&%,(-.
/
+(+:=%7(%)%
+
O
,
6
E3)3+F3237.
/
93):
!
""*
!
A&
"
!)
#$
)"-&$)!%6
+
%
,
!
aNSLK_?g?M
!
E/>?IKB/?
!
E?>_Ma
!
3:%76?
D
1G4X1
F
V8RG45C28
;
5:5<2<8VGR1:<(17G2:
;
<2>B?<2:"&%,(-.
/
+(+
+
O
,
6E3)3+F3*
237.
/
93):
!
""%
!
#+
$
!#*)&!#-%6
+
*
,
!
[?>?QK,?
!
OT>?B/_S?
!
,TS@L.,6,45
;
R8X2:
;
71G138
;
8V<013>B?<1:WG452R1<<8721G28:X2G4W2;
8:1PG5
)
E2X2V102(
3
F
050C5R<
+
O
,
6F3237.
/
93):
!
""
!
@$E
"
-
#$
#!"#&#!#)6
+
-
,
!
>?M?@L?BA>?Bb
!
@L/Bc6S013>B?05G1C832<02:"&%,(-.
/
+(+
+
O
,
6!&3)-+()?7%):#4(3)43
!
""
!
@$
"
-
#$
*&$-)6
+

,
!
?../B/
!
cK/Q
!
ITS,?[SNB?M
!
3:%76M27R8>B?(W2R57G5W
D
41<2:
;
WPR2:
;
GR1:<(17G2:
;
<2>B?C28
;
5:5<2<2:
D
31:G<
+
O
,
65377
!
""%
!
@A@
"
!
#$
!"-&!!#6
+,
!
M?>KB/
!
ONT?BB/,b
!
L/>Q?
!
3:%7602>$+"
!
"&%,(-.
/
+(+,?S$G1<2>B?<
!
1:WG452R1PH2:R5<
D
8:<5V17G8RG1R
;
5GR5
;
P31G8R
F
:5GX8RY
P1:G2G1G2U53
F
R5
;
P31G2:
;
31G5R13R88G
;
R8XG4
+
O
,
1!=3?7%):5377
!
"#"
!
!
$
##")&###-6
+
#"
,
!
STB_?>>
!
@LKBBTS?Mab
!
QLTOL
!
3:%76S013>B?<1;D
31
F
5R<2:
D
31:G1C28G27D
8:<5<1:W:PGR25:GW5
D
R2U1G28:
+
O
,
1!&3)-+()?7%):#4(3)43
!
""-
!
#!
$
"#&$"+6
+
##
,
!
LNg/..MA
!
[?L.I>/BB
!
@L?EM?B/O
!
3:%76I5:805(X2W51:13
F
<2<8VG45>B?(W5
D
5:W5:G>B?
D
83
F
05R1<5*
)
AK@/>(32\5)
D
1G4X1
F
2:"&%,(-.
/
+(+R5U513D
5:W5:7
F
8:02>B?(1:WG1<2>B?(W2R57G5WG1R
;
5G2:
;
+
O
,
6!=3?7%):5377
!
""-
!
#+
$
+!*&+)!6
+
#!
,
!
?c,/..MO
!
SBaA/>O?
!
Z?>,/.AE6@8008:VP:7G28:B?<8V31:W
D
31:G<
+
O
,
6!=3?7%):5377
!
!""-
!
#+
$
#-%"&#-*+6
+
#$
,
!
QLTJL
!
SE>KIIS?
!
M?,,L/g.
!
3:%76?W2U5R<5<5G8V027R8>B?<1:W027R8>B?(32\5<013>B?<2:W5U538
D
2:
;
R275
;
R12:<
+
O
,
6
E3).93>3+3%&4=
!
""
!
#
$
#)%*&#)*%6
+
#)
,
!
[?L.I>/BB
!
MNB,INM/>a,?
!
LNg/..MA
!
3:%76>5
;
P31G28:8V1PH2:R5<
D
8:<5V17G8R$C
F
,?S$G1(<2>B?1VV57GD
(
05:G13G202:
;
1:W
D
1GG5R:2:
;
2:"&%,(-.
/
+(+
+
O
,
158&&3):B(.7.
@
!
""*
!
@F
"
+
#$
+$+&+))6
+
#%
,
!
aNNB/_
!
a?BIOL
!
.KMO
!
3:%76?PH2:R5
;
P31G28:8VG45027R8>B?$+"(W5
D
5:W5:GGR1:<17G2:
;
<0132:G5RV5R2:
;
>B?
D
1G4X1
F
2:
"&%,(-.
/
+(+31G5R13R88GW5U538
D
05:G
+
O
,
1G8473(4"4(-+>3+3%&4=
!
""+
$
#&#"6
+
#*
,
!
L?BZM
"韩柏明#!
.KL
"李
!
贺#!
I?Nca
"高秀岩#!
3:%76/VV57G<8VG2<D
45:8G
FD
58V$&%

%&(%e
%)%)%++%7U6,8
F
8:8\1
+
O
,
1H.8&)%7.
<
#=3)
@
%)

"

&(487:8&%7I)(23&+(:
@
"沈阳农业大学学报#!
""+
!
D&
"
)
#$
)""&)"$
"
2:@42:5<5
#
6
+
#-
,
!
.KL
!
QL?BIQ
!
LT?BI[
!
3:%76M27R8>B?5H
D
R5<<28:
D
R8V235<2:78:U5:G28:131:W027R8
D
R8
D
1
;
1G5WF
"
$&%

%&(%e%)%)%+*
+%AP746
#
D
31:G<
+
O
,
6?7%):5377>3
/
.&:+
!
""+
!
AI
"
*
#$
+#&+"!6
+
#
,
!
@L?BI.
!
QL?BIQ
!
a?BIL
!
3:%76A5G57G28:8VF
>B?1:WAB?U2RP<5F
>,(E@>P<2:
;
G8G13:P73527172W1<1G50
D
31G5
+
O
,
6H.8&)%7.
<
?=
@
:.
/
%:=.7.
@
!
""-
!
#%%
$
)$#&)$*6
+
#+
,
!
gK..K?MS.
!
@?>./S@@
!
JSMNB,_S
!
3:%76?W1G1C1<51:13
F
<2<05G48W2W5:G2V25<1:5:W8
;
5:8P;
<48RG(2:G5RV5R2:
;
>B?G41GG1R
;
5G/
+(+">$!
!
">$$
!
1:W">$)
;
5:5<
+
O
,
6?&.433-()

+.
<
:=3G%:(.)%7"4%-39
@
.
<
#4(3)43+.
<
:=3I)(:3-
#:%:3+.
<
"93&(4%
!
""%
!
#"!
$
+-"$&+-"6
+
!"
,
!
?c,/..MO
!
O?B@
!
>?O?INE?.?B>
!
3:%76?GX8(42GGR2
;;
5RV8R<2>B?C28
;
5:5<2<2:
D
31:G<
+
O
,
65377
!
""*
!
#!-
$
%*%&%--6
+
!#
,
!
.KTZ
!
@L/BQ
!
SNBIc
!
3:%76NR
F
d1<1G2U1W275R(32\5)R5U513<1\5
F
R835V8R<0132:G5RV5R2:
;
>B?<235:72:
;
2:
D
31:GW5U538
D
05:G
+
O
,
6
!=3?7%):5377
!
""-
!
#+
$
!-"%&!-#6
+
!!
,
!
ENT@L(Eh.KSSK/> M B
!
Eh.KSSK/>,
!
/.M?a?B,
!
3:%76SKB/
+
3#
,
>B?2:WP75<<5U5R5W5U538
D
05:G13W5V57G<2:"&%,(-.
/
+(+
:=%7(%)%1:W2:G5R17G"
A>Z#
#!
1\5
F
050C5R8VG45A@.#780
D
35H
+
O
,
6?D.#E3)3:(4+
!
""
!
D
"
*
#$
5#""""+*6
%#!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
$$
卷