全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４６(１): １２４￣１３０(２０１６)
收稿日期: ２０１５￣０３￣０５ꎻ 修回日期: ２０１５￣０６￣２４
基金项目: 公益性行业(农业)科研专项(２０１３０３０２５)ꎻ中央高校基本科研业务费专项(２０１５ＮＸ００５)
通讯作者: 张国珍ꎬ教授ꎬ博士ꎬ主要从事植物病原真菌学的研究ꎻＴｅｌ:０１０￣６２７３３２５９ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｚｈａｎｇｇｚｈ＠ｃａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
共同第一作者: 张佳ꎬ女ꎬ山东聊城人ꎬ博士研究生ꎬ主要从事草莓灰霉病菌多样性研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｚｊｑｑ８６＠１６３.ｃｏｍ
张璨ꎬ男ꎬ北京人ꎬ硕士ꎬ主要从事草莓灰霉病菌的抗药性研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｚｈａｎｇｃａｎ１１０８＠ｑｑ.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１６.０１.０１５
草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗性检测及
抗性菌株的生物学特性研究
张 佳１＃ꎬ张 璨１＃ꎬ芦 帆１ꎬ蔡 乐２ꎬ张国珍１∗
( １中国农业大学农学与生物技术学院植物病理学系ꎬ农业部植物病理学重点实验室ꎬ北京 １００１９３ꎻ２北京市昌平区植保植检站ꎬ北京 １０２２００)
摘要:由灰葡萄孢(Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ Ｐｅｒｓ.)引起的草莓灰霉病是严重危害草莓的病害之一ꎮ 为了解草莓灰霉病菌对杀菌剂嘧
菌酯的抗性情况ꎬ本研究针对 ２０１２年从国内 １０ 省市采集和分离的 １３４ 株草莓灰霉病菌菌株ꎬ利用特异性引物 ＢｃＡＲ￣Ｆ /
ＢｃＡＲ￣Ｒ扩增其 ｃｙｔｂ基因的部分序列ꎬ进行了嘧菌酯抗性的分子检测ꎻ对检测出的抗性菌株在嘧菌酯浓度分别为 ２２.４、１１２
和 ２２４ μｇ􀅰ｍＬ￣１的含药培养基上进行抗性验证ꎻ此外ꎬ还比较了抗性菌株与敏感菌株主要生物学性状的差异ꎮ 结果表明ꎬ
有 ５４个菌株对嘧菌酯表现抗性ꎬ均属于中等抗性水平ꎬ占检测总数的 ４０.３％ꎬ分布于北京市、湖北、江苏、河北、辽宁和四川
各省ꎻ对 １５个抗性菌株 ｃｙｔｂ基因的序列分析表明ꎬ其第 １４３位发生突变ꎬ由甘氨酸变为丙氨酸ꎻ对随机选取的 ４ 株抗性菌
株和 ２株敏感菌株的适合度测定结果发现ꎬ抗性菌株和敏感菌株在最适生长温度、菌落生长速度、孢子萌发率方面没有表
现出规律性差异ꎬ但抗性菌株的产孢量和致病力均显著低于敏感菌株ꎮ
关键词:草莓ꎻ灰葡萄孢ꎻ嘧菌酯ꎻ抗药性ꎻｃｙｔｂ基因
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ￣ｒｅ￣
ｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｆｒｏｍ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ　 ＺＨＡＮＧ Ｊｉａ１ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｃａｎ１ꎬ ＬＵ Ｆａｎ１ꎬ
ＣＡＩ Ｌｅ２ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｇｕｏ￣ｚｈｅｎ１ 　 ( １Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｔｈｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ
Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ２Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈａｎｇｐｉｎｇ Ｄｉｓ￣
ｔｒｉｃｔꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２００ꎬ Ｃｈｉｎａ )
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｇｒａｙ ｍｏｌｄ ｏｆ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ Ｐｅｒｓ. ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｅｒｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｎ
ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ. Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｂ. ｃｉｎｅｒｅａ ｆｒｏｍ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｔｏ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎꎬ ａ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｆｕｎｇｉ￣
ｃｉｄｅ ｃｏｍｍｏｎｌｙ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｒｏｔｅｃｔ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｆｒｕｉｔｓ / ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｆｒｏｍ ｆｕｎｇａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓꎬ ｉｎ Ｃｈｉｎａꎬ １３４ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ
ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ １０ ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ ｏｒ ｃｉｔｉｅｓ ｉｎ ２０１２ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ ｗｉｔｈ
ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ＢｃＡＲ￣Ｆ / ＢｃＡＲ￣Ｒ. Ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｏｎ ＰＤＡ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ
ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ. Ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ￣ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｃｏｍｐａｒｅｄ.
Ｏｕｒ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ５４ ｉｓｏｌａｔｅｓ (４０.３％) ｆｒｏｍ Ｂｅｉｊｉｎｇꎬ Ｈｕｂｅｉꎬ Ｊｉａｎｇｓｕꎬ Ｈｅｂｅｉꎬ Ｌｉａｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｓｉｃｈｕａｎꎬ
ｗｅｒｅ ｍｏｄｅｒａｔｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ. Ｉｔ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ａ ｇｌｙｃｉｎｅ ｗａｓ ｒｅｐｌａｃｅｄ ｂｙ ａｎ ａｌａｎｉｎｅ ａｔ ｐｏｓｉｔｉｏｎ １４３ ｉｎ
ｃｙｔｂ ｇｅｎｅ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ １５ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ. Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｏｐｔｉｍｕｍ ｇｒｏｗｔｈ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎬ
ｃｏｌｏｎｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅꎬ ａｎｄ ｓｐｏｒｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗｈｅｎ ４ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ２ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ￣ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｓｏ￣
ｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｔｏ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ
ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｗｈｅｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ￣ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙꎻ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａꎻ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎꎻ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎻ ｃｙｔｂ

　
　 １期 张 佳ꎬ等:草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗性检测及抗性菌株的生物学特性研究
中图分类号: Ｓ４３６.６８４　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１６)０１￣０１２４￣０７
　 　 灰霉病是草莓生产中最常见和危害最严重的
病害之一ꎬ主要发生在采果期ꎬ采摘后通常迅速腐
烂ꎬ造成果实不能食用和出售[１]ꎮ 引起该病害的
病原菌灰葡萄孢(Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ Ｐｅｒｓ.)是一种寄
主范围广、遗传变异速度快的病原真菌ꎬ极易产生
抗药性[２]ꎮ
嘧菌酯属于甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂ꎬ该类杀
菌剂对子囊菌、担子菌和卵菌均有很高的杀菌活
性[３]ꎮ 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂通过与线粒体上
的细胞色素 ｂ的 Ｑｏ位点结合(细胞色素 ｂ 是细胞
色素 ｂｃ１复合体的一部分)ꎬ从而阻止细胞色素 ｂ
和细胞色素 ｃ１之间的电子转移ꎬ抑制病原菌的呼
吸作用[４]ꎮ 然而一些病原真菌体内存在旁路氧化
途径ꎬ在离体条件下可以促使该类杀菌剂失去抑制
效果ꎬ水杨肟酸(简称为 ＳＨＡＭ)等自由氧清除剂
可以阻止旁路氧化途径的启动[４]ꎮ
随着分子生物学技术的快速发展ꎬ分子技术开
始用于病原菌对杀菌剂的抗药性检测ꎮ 对一些杀
菌剂的作用机制和病原菌的抗性位点已有了较深
入的研究ꎬ而且ꎬ利用分子生物学方法进行抗药性
检测ꎬ不但能节省检测时间ꎬ还可以提高检测的灵
敏度[５]ꎮ Ｍａ 等[６]研究发现ꎬ灰霉病菌对嘧菌酯抗
药性的产生是由于 ｃｙｔｂ 基因第 １４３ 位密码子发生
突变ꎬ由甘氨酸变为丙氨酸ꎮ Ｊｉａｎｇ 等[７]设计了一
对特异性 ＰＣＲ引物 ＢｃＡＲ￣Ｆ / ＢｃＡＲ￣Ｒꎬ建立了快速
检测灰霉病菌对嘧菌酯抗性的分子方法ꎮ
国外已有报道ꎬ在一些国家ꎬ灰葡萄孢对甲氧
基丙烯酸酯类杀菌剂产生了抗性ꎮ ２０１１ 年ꎬ美国
卡莱罗纳州的 ２１６株草莓灰霉病菌中ꎬ有 ６６.７％的
菌株对吡唑醚菌酯产生了抗药性[８]ꎮ ２０１１ 年ꎬ德
国北部包括草莓在内的小果类果树的 ３５３ 株灰葡
萄孢菌株ꎬ对多种杀菌剂产生了抗性ꎬ其中 ７６.８％
的菌株对肟菌酯表现抗性[９]ꎮ 在添加 ＳＨＡＭ的培
养基上ꎬ用菌丝生长速率法检测希腊蔬菜上的灰葡
萄孢对嘧菌酯和吡唑醚菌酯的抗性ꎬ其抗性水平分
别达 ８５０和 １ ０００ [１０]ꎮ
国内关于灰霉病菌对嘧菌酯的抗性情况有少
量报道ꎮ ２００９ 年ꎬ我国浙江省来自不同寄主上的
１８４ 株灰葡萄孢中ꎬ有 ８ 株对嘧菌酯产生了抗
性[７]ꎮ Ｈｕａｎｇｐｕ等[１１]监测了 ２０１０~２０１２年间浙江
省果蔬灰霉病菌对嘧菌酯的抗药性ꎬ发现灰霉病菌
对嘧菌酯的抗性频率由 １２. ５％上升到 ２８. ３％ꎮ
Ｃｈｅｎ等[１２]于 ２００９ 年发现ꎬ我国台湾省草莓灰霉
病菌对嘧菌酯的抗性频率高达 ８７.５％ꎬ嘧菌酯对某
些菌株的 ＥＣ５０值甚至超过 ５００ μｇ􀅰ｍＬ￣１ꎮ 目前ꎬ
国内尚未见其他地区草莓上的灰霉病菌对嘧菌酯
抗性的报道ꎮ 本研究利用 Ｊｉａｎｇ 等[７]建立的分子
检测方法ꎬ对以北京地区为主的国内共 １０ 个省区
的草莓灰霉病菌进行嘧菌酯抗性情况检测ꎬ并测定
了抗性菌株的适合度ꎬ旨在为嘧菌酯的合理使用以
及草莓灰霉病的药剂防治提供理论依据ꎮ
１　 材料和方法
１.１　 供试菌株
　 　 草莓灰霉病菌(Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ):以北京地区
为主ꎬ从河北、辽宁、湖北和江苏等 １０ 个省市的草
莓主产区采集草莓灰霉病病果ꎬ带回实验室进行分
离、纯化和培养ꎬ每个病果只保留一个单孢菌株ꎬ共
得到 １３４株草莓灰霉病菌(表 １)ꎮ
１.２　 供试药剂及仪器
　 　 ９６.０％嘧菌酯原药由黑龙江强尔生化技术开发
有限公司生产ꎬ中国农业大学种子病理药理学研究
室提供ꎬ９９％水杨肟酸(ＳＨＡＭ)ꎬ均溶于甲醇制成
１０５μｇ􀅰ｍＬ￣１母液ꎬ置于 ４℃冰箱中黑暗保存备用ꎮ
ＰＣＲ仪(ＥＤＣ￣８１０):北京东胜创新生物科技
有限公司生产ꎻ凝胶成像仪(Ｎｅｗ ＢｉｏＩｎｄｕｓｔｒｙ)ꎮ
１.３　 培养基
　 　 ＰＤＡ培养基:去皮马铃薯 ２００ ｇꎬ葡萄糖 ２０ ｇꎬ
琼脂粉 ２０ ｇꎬ蒸馏水定容至 １ ０００ ｍＬꎻＷＡ培养基:
琼脂粉 ２０ ｇꎬ蒸馏水定容至 １ ０００ ｍＬꎮ
１.４　 菌株基因组 ＤＮＡ提取
　 　 将纯化的菌株在铺有灭菌玻璃纸的 ＰＤＡ平板上
２０℃黑暗培养 ３ ｄꎬ收集菌丝体ꎬ根据 Ｓａｇｈａｉ￣Ｍａｒｏｏｆ
等的 ＣＴＡＢ法[１３]提取菌丝体的基因组 ＤＮＡꎮ
１.５　 草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗药性分子检测
１.５.１　 草莓灰霉病菌对嘧菌酯抗性的分子检测　
用 Ｊｉａｎｇ 等设计的特异性引物对 ＢｃＡＲ￣Ｆ / ＢｃＡＲ￣
５２１

　
植物病理学报 ４６卷
Ｒ[７]进行 ＰＣＲ扩增ꎬ取 １０ μＬ 扩增产物进行 １％琼
脂糖凝胶电泳ꎬ经溴化乙锭染色后在凝胶成像仪下
观察扩增结果ꎬ有扩增条带的为抗性菌株ꎬ无扩增
条带的为敏感菌株ꎮ
ＰＣＲ反应体系为 ２５ μＬ:２×Ｔａｑ ＰＣＲ Ｍｉｘ １２.５
μＬꎬ正反向引物 ( １０ μｍｏｌ􀅰Ｌ￣１ )各 １ μＬꎬ模板
５０ ｎｇꎮＰＣＲ扩增程序:９５℃预变性 ３ ｍｉｎꎻ９４℃变性
４０ ｓꎬ６０℃退火 ４０ ｓꎬ７２℃延伸 １.５ ｍｉｎꎬ４０ 个循环ꎻ
７２℃延伸 ５ ｍｉｎꎮ 引物合成及测序均由三博远志生
物技术有限公司完成ꎮ
１.５.２　 抗性菌株 ｃｙｔｂ基因的序列分析　 随机选取
１５株抗性菌株(编号分别是 ＢＪ￣１、ＢＪ￣３、ＢＪ￣５、ＢＪ￣
１１、ＢＪ￣１３、ＢＪ￣１４、ＢＪ￣１６、ＢＪ￣２２、ＪＳ￣１、ＦＳ￣７、ＲＺＹ￣２、
ＲＺＹ￣３、ＲＺＹ￣４、ＢＬＹ和 ＱＹＤ)及 ３株敏感菌株(编
号分别是 ＢＪ￣４、ＢＪ￣１２ 和 ＳＹ￣６)的扩增产物进行测
序ꎬ所得序列在 ＮＣＢＩ 网站中进行 ＢＬＡＳＴ 分析ꎮ
参照序列为 Ｂｏｔｒｙｏｔｉｎｉａ ｆｕｃｋｅｌｉａｎａ的 ｃｙｔｂ基因序列
(ＧｅｎＢａｎｋ登录号 ＡＢ２６２９６９.１)ꎮ
１.６　 草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗性类型划分
　 　 经分子生物学检测后ꎬ对所有抗嘧菌酯的灰霉病
菌菌株进行抗性类型的划分ꎬ方法如下:根据 Ｚｈａｎｇ
等[１４]的试验结果ꎬ在 ＳＨＡＭ 浓度为 ５０ μｇ􀅰ｍＬ￣１
条件下ꎬ采用菌丝生长速率法建立的灰葡萄孢对嘧
菌酯的敏感基线的 ＥＣ５０值为 ２.２４±１.２９ μｇ􀅰ｍＬ￣１ꎮ
参照 ＦＡＯ标准[１５]即测试菌株的 ＥＣ５０值比敏感菌
株高 ５ ~ １０ 倍定义为抗性菌株ꎮ 本研究对抗性类
型的划分方法为:ＲＦ≤１０ 的为敏感菌株(Ｓ)ꎬ１０<
ＲＦ≤５０ 的为低抗菌株(ＬＲ)ꎬ５０<ＲＦ≤１００ 的为中
抗菌株(ＭＲ)ꎬＲＦ>１００的为高抗菌株(ＨＲ)ꎮ 为方
便检测ꎬ以敏感基线为标准ꎬ按照抗性倍数的 １０、
５０和 １００ 倍设置 ３ 个鉴别浓度ꎬ分别为 ２２.４、１１２
和 ２２４ μｇ􀅰ｍＬ￣１ꎬ将所有经分子检测为抗嘧菌酯
的菌株接种于含有上述药剂浓度的 ＰＤＡ 平板上ꎬ
每个浓度重复 ３ 次ꎮ ２０℃黑暗条件下培养 ３ ｄ 后
计算生长抑制率ꎮ 参照如下标准划分菌株的不同
群体ꎬ敏感菌株:嘧菌酯浓度为 ２２.４ μｇ􀅰ｍＬ￣１时ꎬ
生长抑制率≥５０％ꎻ低抗菌株:嘧菌酯浓度为 ２２.４
和 １１２ μｇ􀅰ｍＬ￣１时ꎬ生长抑制率分别为<５０％和≥
５０％ꎻ中 抗 菌 株: 嘧 菌 酯 浓 度 为 １１２ 和 ２２４
μｇ􀅰ｍＬ￣１时ꎬ生长抑制率分别为<５０％和≥５０％ꎻ高
抗菌株:嘧菌酯浓度为 ２２４ μｇ􀅰ｍＬ￣１时ꎬ生长抑制
率<５０％ꎮ
１.７　 抗嘧菌酯草莓灰霉病菌的适合度测定
１.７.１　 供试菌株 　 随机选取 ４ 株抗性菌株(编号
为 ＢＪ￣５、ＢＤ￣７、ＳＣ￣５和 ＪＳ￣１)、２ 株敏感菌株(编号
为 ＳＹ￣６和 ＳＸ￣１)进行适合度测定ꎮ
１.７.２　 菌丝生长对温度的敏感性和菌落生长速度
的测定 　 将供试菌株在 ＰＤＡ 培养基上培养 ３ ｄ
后ꎬ在菌落边缘同心环上打取菌饼(直径 ５ ｃｍ)ꎬ接
种在 ＰＤＡ培养基平板的中央ꎬ每个菌株 ３次重复ꎬ
置于不同温度 ( ５℃、 １０℃、 １５℃、 ２０℃、 ２５℃ 和
３０℃)下黑暗培养ꎬ３ ｄ 后测量各菌株的菌落直径
并求平均值ꎬ比较不同温度下各菌株的菌落生长速
度ꎬ以确定菌株对温度的敏感性和最适生长温度ꎮ
１.７.３　 产孢能力及孢子萌发率测定　 将测试菌株
在 ＰＤＡ培养基平板上 ２０℃培养ꎬ待其菌落长满培
养皿后ꎬ继续黑暗培养 ５ ｄꎬ促进其产孢ꎮ 参考
Ｚｈａｏ等测定产孢量的方法[１６]ꎬ在产孢培养基平板
上每皿加入无菌水ꎬ用涂布器将分生孢子刮下ꎬ将
孢子悬浮液用 ４ 层纱布过滤ꎬ定容至 ２０ ｍＬꎬ之后
在振荡器上震荡 １ ｍｉｎꎬ使孢子充分分散均匀ꎬ在
显微镜下用血球计数板计数ꎬ测定各菌株的产孢
量ꎮ 将制备的孢子悬浮液稀释成适当浓度ꎬ取
４０ μＬ均匀涂布在 ＷＡ 平板上ꎬ于 ２０℃黑暗培养
６ ｈꎬ镜检 １００ 个孢子中萌发的孢子数并计算孢子
萌发率ꎬ每个菌株 ３次重复ꎮ
１.７.４　 致病力测定　 将孢子悬浮液稀释成浓度约
为 １０５个孢子􀅰ｍＬ￣１ꎬ加入适量吐温 ２０ꎬ用于叶片
接种ꎮ 采集大小、叶龄一致的健康草莓叶片ꎬ用清
水冲洗干净ꎬ晾干ꎮ 将叶片置于接种盘中ꎬ每个叶
片主叶脉两侧各设 １个接种点并刺伤处理ꎬ每点接
种 ２０ μＬ孢子悬浮液ꎬ以接种无菌水为对照ꎮ 每个
菌株接种 ３ 个叶片ꎮ 于 ２０℃黑暗条件保湿 ７２ ｈ
后ꎬ十字交叉法测量病斑直径ꎮ
２　 试验结果
２.１　 草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗药性
２.１.１　 草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗药性分子检测
采用特异性引物 ＢｃＡＲ￣Ｆ / ＢｃＡＲ￣Ｒ 对 １３４ 株草莓
灰霉病菌的 ｃｙｔｂ 基因进行了 ＰＣＲ 扩增ꎬ可以扩增
出大小约为 ２５０ ｂｐ 条带的即为抗性菌株ꎬ未出现
扩增条带的为敏感菌株(图 １)ꎮ
６２１

　
　 １期 张 佳ꎬ等:草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗性检测及抗性菌株的生物学特性研究
Ｆｉｇ. １　 ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒｔｉａｌ ｃｙｔｂ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｐｒｉｍｅｒｓ ＢｃＡＲ￣Ｆ/ ＢｃＡＲ￣Ｒ
Ｍ: ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒꎻ Ｌａｎｅ１￣６: Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓꎻ Ｌａｎｅ ７￣１２: Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓꎻ Ｌａｎｅ １３: Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ.
　 　 经过 ＰＣＲ检测ꎬ在 １３４ 株草莓灰霉病菌中ꎬ有
５４株出现了扩增条带ꎬ表明为抗嘧菌酯的菌株ꎬ占
检测总菌株数的 ４０.３％ꎬ分布于多个省市ꎬ包括湖
北、江苏、河北、辽宁、四川ꎻ在上海、广东、陕西和山
东省的菌株中未检测到抗性菌株(表 １)ꎮ
２.１.２　 抗性菌株 ｃｙｔｂ基因的序列分析　 本研究测
定了 １５ 个抗性菌株的 ｃｙｔｂ 基因的序列ꎬ将所得序
列与 ＧｅｎＢａｎｋ中 Ｂｏｔｒｙｏｔｉｎｉａ ｆｕｃｋｅｌｉａｎａ ｃｙｔｂ基因的
核苷酸序列(登录号:ＡＢ２６２９６９. １)进行了比较ꎮ
发现敏感菌株 ｃｙｔｂ基因的核苷酸序列与参照序列
的相似性为 １００％ꎬ而抗性菌株均在第 １４３ 位发生
了碱基突变(ＧＧＴ→ＧＣＴ)ꎬ其编码的氨基酸由甘
氨酸(ｇｌｙｃｉｎｅ)变为丙氨酸(ａｌａｃｉｎｅ)(图 ２)ꎮ
２.１.３　 草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗性验证和抗性
类型　 将分子检测为抗嘧菌酯的菌株接种在添加
５０ μｇ􀅰ｍＬ￣１ ＳＨＡＭꎬ嘧菌酯浓度分别为 ２２.４、１１２
和 ２２４ μｇ􀅰ｍＬ￣１的 ＰＤＡ 平板上ꎬ２０℃黑暗条件下
培养 ３ ｄ后ꎬ所有菌株在含有 ２２.４ μｇ􀅰ｍＬ￣１和 １１２
μｇ􀅰ｍＬ￣１嘧菌酯的培养基上的生长抑制率均小于
５０％ꎬ而在浓度为 ２２４ μｇ􀅰ｍＬ￣１的 ＰＤＡ培养基上ꎬ
检测菌株的生长抑制率均大于 ５０％(具体结果未
列出)ꎮ 表明本研究经 ＰＣＲ 扩增检测出的抗性菌
株确实为抗性菌株ꎬ验证了特异性 ＰＣＲ 检测灰霉
病菌对嘧菌酯抗性这一方法的可靠性ꎮ 根据设定
浓度的检测ꎬ本研究检测出的抗性菌株均属于中等
抗性水平ꎮ
Ｔａｂｌｅ １　 Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｇｉｏｎｓ ｔｏ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｏｒ ｃｉｔｙ Ｙｅａｒ Ｎｏ. ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ Ｎｏ. ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ / ％
Ｂｅｉｊｉｎｇ ２０１２ ６４ ３５ ５４.７
Ｈｕｂｅｉ ２０１２ １０ ６ ６０.０
Ｊｉａｎｇｓｕ ２０１２ １０ ４ ４０.０
Ｈｅｂｅｉ ２０１２ １５ ３ ２０.０
Ｌｉａｏｎｉｎｇ ２０１２ １１ ３ ２７.３
Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２ ６ ０ ０.０
Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ２０１２ ３ ０ ０.０
Ｓｈａｎｘｉ ２０１２ ７ ０ ０.０
Ｓｉｃｈｕａｎ ２０１２ ６ ３ ５０.０
Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２０１２ ２ ０ ０.０
Ｔｏｔａｌ １３４ ５４ ４０.３
７２１

　
植物病理学报 ４６卷
Ｆｉｇ. ２　 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｔ ｐｏｓｉｔｉｏｎ １４３ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ￣ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ
Ｎｏｔｅ: Ｇ ａｎｄ Ａ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｘ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｇｌｙｃｉｎｅ ａｎｄ ａｌａｃｉｎｅꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ: ＢＪ￣１ꎬ ＢＪ￣３ꎬ ＢＪ￣５ꎬ ＢＪ￣１１ꎬ
ＢＪ￣１３ꎬ ＢＪ￣１４ꎬ ＢＪ￣１６ꎬ ＢＪ￣２２ꎬ ＪＳ￣１ꎬ ＦＳ￣７ꎬ ＲＺＹ￣２ꎬ ＲＺＹ￣３ꎬ ＲＺＹ￣４ꎬ ＢＬＹꎬ ＱＹＤꎻ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ: ＢＪ￣４ꎬ ＢＪ￣１２ꎬ ＳＹ￣６.
２.２　 抗嘧菌酯灰霉病菌菌株的生物学特性
２.２.１　 对温度的敏感性　 供试菌株在设定的 ６ 个
温度条件下ꎬ以 ２０℃和 ２５℃时菌落生长速度最快ꎬ
在 ３０℃和 ５℃下菌落生长最慢ꎮ 抗性菌株与敏感
菌株对温度的敏感性没有明显差异ꎻ相同温度下ꎬ
不同菌株的菌落生长速度有一定差异ꎬ但与菌株的
抗药性与否没有关系(表 ２)ꎮ
２.２.２　 产孢能力和孢子萌发　 经对抗性菌株与敏感
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｃｏｌｏｎｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ
Ｉｓｏｌａｔｅ Ｏｒｉｇｉｎ
Ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ / ｍｍ
５℃ １０℃ １５℃ ２０℃ ２５℃ ３０℃
Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅ
ＳＹ￣６ Ｌｉａｏｎｉｎｇ ２２.７ａ ４０.８ｃ ６６.９ａ ８４.４ａｂ ８２.９ａ １３.１ｃ
ＳＸ￣１ Ｓｈａａｎｘｉ １８.４ｂ ４２.８ｂ ５９.４ｄ ８１.０ｃ ７９.５ｂｃ １１.９ｄ
Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅ
ＢＪ￣５ Ｂｅｉｊｉｎｇ １７.９ｂ ４０.８ｃ ６２.９ｃ ８３.７ｂ ７８.５ｃｄ １５.０ｂ
ＢＤ￣７ Ｈｅｂｅｉ ２２.６ａ ４４.３ａ ６５.８ａ ８４.９ａ ７７.８ｄ １６.９ａ
ＳＣ￣５ Ｓｉｃｈｕａｎ １８.６ｂ ３９.５ｃｄ ６４.５ｂ ８４.４ａｂ ７６.４ｅ ７.７ｅ
ＪＳ￣１ Ｊｉａｎｇｓｕ １７.８ｂ ３８.４ｄ ６２.１ｃ ８４.４ａｂ ８０.４ｂ １２.６ｃ
　 Ｄｕｎｃａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｔａ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｐｒｏｇｒａｍ ＳＰＳＳ２０.０ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ. Ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅｓ (ｍｅａｎｓ) ｆｏｌｌｏｗｅｄ
ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ<０.０５.
８２１

　
　 １期 张 佳ꎬ等:草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗性检测及抗性菌株的生物学特性研究
菌株的产孢量测定发现ꎬ４ 个抗性菌株的产孢量显
著低于 ２个敏感菌株ꎬ表明抗性菌株的产孢能力明
显下降ꎮ 抗性菌株 ＢＤ￣７ 的孢子萌发率也比敏感
菌株显著降低ꎬ其他 ３个抗性菌株的孢子萌发率与
敏感菌株差异不显著(表 ３)ꎮ
２.２.３　 对草莓叶片的致病力 　 ４ 个抗性菌株接种
草莓叶片后ꎬ产生的病斑直径显著小于 ２个敏感菌
株(表 ３)ꎬ表明嘧菌酯抗性菌株对离体草莓叶片的
致病力有所下降ꎮ
３　 结论与讨论
灰霉病菌具有寄主范围广、变异较快、易于传
播等特点ꎬ是一类具有高抗药性风险的真菌[２]ꎮ
而且在对灰霉病的药剂防治过程中ꎬ由于杀菌剂的
使用剂量和使用频率较高ꎬ对灰霉病菌形成了较高
的选择压ꎮ 本研究利用 Ｊｉａｎｇ 等[７]建立的分子检
测法并结合在含药培养基上的测定ꎬ发现抗嘧菌酯
的草莓灰霉病菌菌株在国内多个省区有不同程度
的出现ꎬ总体抗性频率为 ４０.３％ꎮ 其中北京地区检
测的菌株数最多ꎬ具有一定代表性ꎬ抗性频率达
５４.７％ꎬ且均为中等抗性水平ꎬ表明国内草莓灰霉
病菌对嘧菌酯的抗性较为普遍ꎮ 鉴于国内的草莓
灰霉病菌对嘧菌酯抗性频率较高ꎬ且抗性水平至少
为中抗ꎬ在防治草莓病害时ꎬ应该将嘧菌酯与其它
类型的杀菌剂交替使用ꎬ减少其使用次数或尽量避
免使用ꎮ 在没有检测到抗性菌株的上海市、广东
省、陕西省和山东省ꎬ由于采样数量偏少ꎬ这些地区
是否存在抗嘧菌酯的菌株还有待进一步测定ꎮ 本
研究同时对 １５ 个抗性菌株 ｃｙｔｂ 基因的序列分析
发现ꎬ对嘧菌酯抗性的产生均是在第 １４３位的氨基
酸发生突变ꎬ由甘氨酸突变成丙氨酸ꎬ结果与文献
报道[１７]相一致ꎬ未发现新的变异类型ꎮ
通过对草莓灰霉病菌抗甲氧基丙烯酸酯类杀
菌剂嘧菌酯菌株的适合度测定发现ꎬ抗性菌株在最
适生长温度、菌落生长速度、孢子萌发率等方面ꎬ与
敏感菌株之间没有明显差异ꎻ而抗性菌株产孢能力
和致病力均显著低于敏感菌株ꎮ 推测抗性菌株在
田间的繁殖和扩散以及对草莓的致病力可能会下
降ꎮ Ｒａｐｏｓｏ等[１８]的研究表明ꎬ对异菌脲和苯菌灵
的抗性灰葡萄孢菌株ꎬ其适合度(致病力和产孢量)
与抗药性水平没有关系ꎻＭａｒｋｏｇｌｏｕ 等[１９]研究了对
甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂吡唑醚菌酯抗性的灰葡萄
孢菌株与敏感菌株的适合度ꎬ发现多数抗性菌株在
产孢量、孢子萌发率和菌核产量等方面有所下降ꎬ而
在其他方面没有显著差异ꎻＫｉｍ 等[２０]发现ꎬ苹果灰
霉病菌对吡唑醚菌酯的抗性菌株与敏感菌株在渗透
压敏感性、菌丝生长速率、孢子萌发率、产孢量和致
病力等方面没有差异ꎮ 总体来看ꎬ前人对灰霉病菌
适合度的研究并未发现抗性菌株的适合度与敏感菌
株有一致的规律性差异ꎬ抗性菌株之间在孢子萌发
率、菌丝生长速率、产孢量和致病力等生物学性状方
面的差异与菌株的抗药性水平也没有明显关系ꎮ 因
此ꎬ本研究认为抗性菌株在适合度方面的差异可能
是由于不同菌株间的遗传背景差异所致ꎮ
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎꎬ ｓｐｏｒｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅꎬ ｌｅｓｉｏｎ ｓｉｚｅ ｏｆ
ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ￣ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｉｓｏｌａｔｅｓ
Ｉｓｏｌａｔｅ Ｏｒｉｇｉｎ Ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ / １０４􀅰ｍＬ￣１ Ｓｐｏｒｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ / ％ Ｌｅｓｉｏｎ ｓｉｚｅ / ｍｍ
Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅ
ＳＹ￣６ Ｌｉａｏｎｉｎｇ ３２.０ ａ ９４.７ ａ ２３.８ ａ
ＳＸ￣１ Ｓｈａａｎｘｉ １６.０ ｂ ９１.７ ａｂ ２１.１ ｂ
Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅ
ＢＪ￣５ Ｂｅｉｊｉｎｇ １３.７ ｃ ８９.３ ｂｃ １２.７ ｄ
ＢＤ￣７ Ｈｅｂｅｉ ８.７ ｄ ８５.３ ｃ １５.８ ｃ
ＳＣ￣５ Ｓｉｃｈｕａｎ ９.０ ｄ ９１.３ ａｂ １１.９ ｄ
ＪＳ￣１ Ｊｉａｎｇｓｕ ９.３ ｄ ９２.７ ａｂ １４.７ ｃ
　 Ｄｕｎｃａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｔａ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｐｒｏｇｒａｍ ＳＰＳＳ２０.０ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ. Ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅ￣
ｒｅｎｔ ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ<０.０５.
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植物病理学报 ４６卷
参考文献
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ｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
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ｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ
[Ｊ]. Ｃｒｏｐ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ ２００５ꎬ ２４(１０): ８５３￣８６３.
[７] 　 Ｊｉａｎｇ Ｊ Ｈꎬ Ｄｉｎｇ Ｌ ＳꎬＭｉｃｈａｉｌｉｄｅｓ Ｔ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｅｌｄ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ
ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ [ Ｊ] . Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ
Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ ２００９ꎬ ９３(２): ７２￣７６.
[８] 　 Ｆｅｒｎáｎｄｅｚ￣Ｏｒｔｕñｏ Ｄꎬ Ｃｈｅｎ Ｆ Ｐꎬ Ｓｃｈｎａｂｅｌ Ｇ. Ｒｅｓｉｓｔａｎ￣
ｃｅ ｔｏ ｐｙｒａｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎ ａｎｄ ｂｏｓｃａｌｉｄ ｉｎ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ
ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｆｉｅｌｄｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃａｒｏｌｉｎａｓ [ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅꎬ ２０１２ꎬ ９６(８): １１９８￣１２０３.
[９] 　 Ｗｅｂｅｒ Ｒ Ｗ Ｓ. Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｔｏ
ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ ｉｎ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｇｅｒｍａｎ ｓｍａｌｌ￣ｆｒｕｉｔ ｐｒｏ￣
ｄｕｃｔｉｏｎ [ Ｊ ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅꎬ ２０１１ꎬ ９５ ( １０ ):
１２６３￣１２６９.
[１０] Ｃｈａｔｚｉｄｉｍｏｐｏｕｌｏｓ Ｍꎬ Ｐａｐａｅｖａｇｇｅｌｏｕ Ｄꎬ Ｐａｐｐａｓ Ａ Ｃ.
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ
ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｉｎ ｌｅｔｔｕｃｅ ｃｒｏｐｓ ｉｎ
Ｇｒｅｅｃｅ [ Ｊ] . Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ
２０１３ꎬ １３７(２): ３６３￣３７６.
[１１] Ｈｕａｎｇｐｕ Ｙ Ｈꎬ Ｄａｉ Ｄ Ｊꎬ Ｓｈｉ Ｈ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｔｏ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ
ｆｒｏｍ ｆｒｕｉｔｓ ａｎｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｉｎ Ｚｈｅｊｉａｎｇ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ
(农药学学报)ꎬ ２０１３ꎬ １５(５): ５０４￣５１０.
[１２] Ｃｈｅｎ Ｌ Ｓꎬ Ｃｈｕｎｇ Ｗ Ｃꎬ Ｃｈｕｎｇ Ｗ Ｈ. Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｂｏ￣
ｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｏｆ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｔｏ ｓｔｒｏｂｉｌｕｒｉｎｓ (ＱｏＩｓ) ｉｎ Ｔａｉ￣
ｗａｎ [Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｂｕｌｌｅｔｉｎꎬ ２００９ꎬ １８(２): ８９￣９９.
[１３] Ｓａｇｈａｉ￣Ｍａｒｏｏｆ Ｍ Ａꎬ Ｓｏｌｉｍａｎ Ｋ Ｍꎬ Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ Ｒ Ａꎬ
ｅｔ ａｌ. Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｓｐａｃｅｒ￣ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ
ｂａｒｌｅｙ: Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅꎬ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｌｏｃａｔｉｏｎꎬ
ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ [ Ｊ] . Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａ￣
ｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ
Ａｍｅｒｉｃａꎬ １９８４ꎬ ８１(２４): ８０１４￣８０１８.
[１４] Ｚｈａｎｇ Ｃ Ｑꎬ Ｌｉｕ Ｙ Ｈꎬ Ｄｉｎｇ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｈｉｆｔ ｏｆ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｔｏ ａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ ｉｎ ｇｒｅｅｎ￣
ｈｏｕｓｅ ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ｔｈｅ ｆｕｎｇｉ￣
ｃｉｄｅ [Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｐａｒａｓｉｔｉｃａꎬ ２０１１ꎬ ３９(３): ２９３￣３０２.
[１５] Ｓａｒａｏｇｌａｎｉｄｉｓ Ｇ Ｓꎬ Ｔｈａｎａｓｓｏｕｌｏｐｏｕｌｏｓ Ｃ Ｃꎬ Ｉｏａｎｎｉｄｉｓ
Ｐ Ｍ. Ｆｉｔｎｅｓｓ ｏｆ Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｂｅｔｉｃｏｌａ ｆｉｅｌｄ ｉｓｏｌａｔｅｓ￣
ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ￣ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ [ Ｊ] . Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ
２００１ꎬ １０７(３): ３３７￣３４７.
[１６] Ｚｈａｏ Ｈꎬ Ｋｉｍ Ｙ Ｋꎬ Ｈｕａｎｇ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｈｉａ￣
ｂｅｎｄａｚｏｌｅ ａｎｄ ｂａｓｅｌｉｎｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｆｌｕｄｉｏｘｏｎｉｌ ａｎｄ
ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｉｌ ｉｎ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ａｐｐｌｅ
ａｎｄ ｐｅａｒ ｉｎ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｓｔａｔｅ [Ｊ] . Ｐｏｓｔｈａｒｖｅｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ ２０１０ꎬ ５６(１): １２￣１８.
[１７] Ｇｒａｓｓｏ Ｖꎬ Ｐａｌｅｒｍｏ Ｓꎬ Ｓｉｅｒｏｔｚｋｉ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ
ｂ ｇｅｎｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｑｏ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ [Ｊ] . Ｐｅｓｔ Ｍａｎａ￣
ｇｅｍｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２００６ꎬ ６２(６): ４６５￣４７２.
[１８] Ｒａｐｏｓｏ Ｒꎬ Ｄｅｌｃａｎ Ｊꎬ Ｇｏｍｅｚ Ｖꎬ ｅｔ ａｌ. Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ
ｆｉｔｎｅｓｓ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎ￣
ｇｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｓｐａｎｉｓｈ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅｓ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐａ￣
ｔｈｏｌｏｇｙꎬ １９９５ꎬ ４５(３): ４９７－５０５.
[１９] Ｍａｒｋｏｇｌｏｕ Ａ Ｎꎬ Ｍａｌａｎｄｒａｋｉｓ Ａ Ａꎬ Ｖｉｔｏｒａｔｏｓ Ａ Ｇꎬ ｅｔ
ａｌ. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ
ｃｉｎｅｒｅａ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ＱｏＩ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ [Ｊ] . Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒ￣
ｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２００６ꎬ １１５(２): １４９￣１６２.
[２０] Ｋｉｍ Ｙ Ｋꎬ Ｘｉａｏ Ｃ Ｌ. Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｆｉｔｎｅｓｓ ｏｆ ｐｙｒａ￣
ｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎ￣ａｎｄ ｂｏｓｃａｌｉｄ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｆｉｅｌｄ
ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｆｒｏｍ ａｐｐｌｅ [ Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｐａ￣
ｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２０１１ꎬ １０１(１１): １３８５￣１３９１.
责任编辑:李晖
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