全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４６(１): ３７￣４６(２０１６)
收稿日期: ２０１５￣０２￣０６ꎻ 修回日期: ２０１５￣１０￣１４
基金项目: 国家自然科学基金资助项目(３１４７１７４２ꎻ３１４７０２３５)
通讯作者: 陈功友ꎬ 教授ꎬ 主要从事分子植物病理学研究ꎻ Ｔｅｌ: ０２１￣３４２０５８７３ꎬ Ｆａｘ: ０２１￣３４２０５８７３ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｇｙｏｕｃｈｅｎ＠ｓｊｔｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
第一作者: 刘　 良ꎬ 男ꎬ 山东莱芜人ꎬ 硕士研究生ꎬ 主要从事分子植物病理学研究ꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１６.０１.００５
７种检疫性植物病原黄单胞菌 ＩＩＩ型分泌系统和
效应蛋白编码基因的差异性分析
刘 良ꎬ马文秀ꎬ邹丽芳ꎬ陈晓斌ꎬ 陈功友∗
(上海交通大学农业与生物学院ꎬ上海 ２００２４０)
摘要:γ￣变形菌纲(γ￣Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ)的黄单胞菌属(Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ)的大多数种类可引起植物病害ꎬ多数是我国检疫对象ꎮ 与
其他革兰氏阴性植物病原细菌一样ꎬ植物病原黄单胞菌可通过高度保守的 ＩＩＩ型分泌系统( ｔｙｐｅ￣ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍꎬ Ｔ３ＳＳ)
分泌效应蛋白(Ｔ３ＳＳ￣ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓꎬ Ｔ３ＳＥｓ)进入植物细胞ꎬ在非寄主植物和抗病寄主植物上产生过敏反应(ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉ￣
ｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅꎬ ＨＲ)以及在感病寄主植物上具有致病性ꎮ 尚不清楚哪些种类的黄单胞菌具有 Ｔ３ＳＳ和缺少哪些 Ｔ３ＳＥ是否可
作为检疫的依据ꎮ 搜集 ７ 种检疫性植物病原黄单胞菌ꎬ通过 ＰＣＲ 和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交试验结果发现:香蕉细菌性青枯病菌
(Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｍｕｓａｃｅａｒｕｍ)的 ＩＣＭＰ２８７和 ＡＴＣＣ４９０８４菌株、甘蔗流胶病菌(Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｖａｓｃｕｌｏｒｕｍ)ＡＴＣＣ１３９０１
菌株、洋葱细菌性叶枯病菌(Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ａｌｌｉｉ)的 ＬＭＧ５７６和 ＬＭＧ５７８菌株中不含有 ｔａｌｅ基因ꎬ并且 ＡＴＣＣ１３９０１菌株
既不含有 Ｔ３ＳＳ基因也不含有 ｈｐａ１ 和 ｘｏｐＱ 基因ꎻ菜豆细菌性疫病菌(Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｐｈａｓｅｏｌｉ)ＡＴＣＣ４９１１９ 菌株不含有
ｈｐａ１基因ꎮ 相应地ꎬ推测含有 ２ ~ １２ 个 ｔａｌｅ 基因的黄单胞菌有:大豆斑疹病菌(Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｇｌｙｃｉｎｅｓ) ＩＣＭＰ５７３２ 和
ＡＴＣＣ４３９１１菌株、豌豆细菌性疫病菌(Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｖｉｇｎｉｃｏｌａ)ＡＴＣＣ１１６４８ 菌株、棉花细菌性角斑病菌(Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ
ｐｖ. ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍ)ＡＴＣＣ１２１３１和(Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｐｈａｓｅｏｌｉ)ＡＴＣＣ４９１１９菌株ꎮ 大豆细菌性斑疹病菌 ＡＴＣＣ４３９１１菌株尽管
含有 ｈｐａ１、ｘｏｐＱ和 ｈｒｃＣ基因ꎬ但在非寄主烟草上不能激发 ＨＲ反应ꎻ而甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株不含有 ｈｐａ１、ｘｏｐＱ
和 ｈｒｃＣ基因ꎬ却激发烟草产生 ＨＲ反应ꎮ 这些结果对于分析比较不同植物病原黄单胞菌的致病性因子和设计特定的植物
检疫靶点提供了科学线索ꎮ
关键词:黄单胞菌ꎻ ＩＩＩ型分泌系统ꎻ 效应蛋白ꎻ 过敏反应
Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｙｐｅ￣ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ Ｔ３ＳＳ￣ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ
ａｍｏｎｇ ｓｅｖｅｎ ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｐａｔｈｏｖａｒｓ　 ＬＩＵ Ｌｉａｎｇ ꎬ ＭＡ Ｗｅｎ￣ｘｉｕꎬ ＺＯＵ Ｌｉ￣ｆａｎｇꎬ
ＣＨＥＮ Ｘｉａｏ￣ｂｉｎꎬ ＣＨＥＮ Ｇｏｎｇ￣ｙｏｕ　 (Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏ Ｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ
２００２４０ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｍｏｓｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｇｅｎｕｓ ｉｎ γ￣Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ ａｒｅ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａꎬ ｃａｕｓｉｎｇ ｈｙｐｅｒ￣
ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ (ＨＲ) ｏｎ ｎｏｎ￣ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｎ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ
ｖｉａ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｔｙｐｅ￣ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ (Ｔ３ＳＳ) ｔｈｒｏｕｇｈ ｗｈｉｃｈ Ｔ３ＳＳ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ (Ｔ３ＳＥｓ) ａｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ
ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌｓ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｉｔ ｒｅｍａｉｎｓ ｕｎｃｌｅａｒ ｗｈｉｃｈ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ ｌａｃｋｉｎｇ ｏｆ Ｔ３ＳＳ ａｎｄ Ｔ３ＳＥｓ ｔｈａｔ ｃａｎ ｂｅ ｔｈｅ
ｔａｒｇｅｔｓ ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｏ ｄｅｓｉｇｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｂｅｓ ｆｏｒ ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ. Ｈｅｒｅꎬ ｓｅｖｅｎ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ. ＰＣＲ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ.
ｍｕｓａｃｅａｒｕｍ ＩＣＭＰ２８７ ａｎｄ ＡＴＣＣ４９０８４ ｓｔｒａｉｎｓ (ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ａｇｅｎｔｓ ｏｆ ｂａｎａｎａ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ)ꎬ Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ.
ｖａｓｃｕｌｏｒｕｍ ＡＴＣＣ１３９０１ ｓｔｒａｉｎ (ｇｕｍｍｉｎｇ ｉｎ ｓｕｇａｒｃａｎｅ)ꎬ ａｎｄ Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ａｌｌｉｉ ＬＭＧ５７６ ａｎｄ ＬＭＧ５７８
ｓｔｒａｉｎｓ (ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｏｎｉｏｎ) ｌａｃｋｅｄ ｔｈｅ ｔａｌｅ ｇｅｎｅｓ ｗｈｉｃｈ ｅｎｃｏｄｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒ￣ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓꎬ ｏｆ

　
植物病理学报 ４６卷
ｔｈｅｓｅ ｔｈｒｅｅ ｓｐｅｃｉｅｓ Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｖａｓｃｕｌｏｒｕｍ ＡＴＣＣ１３９０１ ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ ｎｅｉｔｈｅｒ ｈｐａ１ ｎｏｒ ｘｏｐＱ ａｎｄ ｈｒｃＣ ｇｅｎｅｓ
ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔ３ＳＳꎻ ａｎｄ Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｐｈａｓｅｏｌｉ ＡＴＣＣ４９１１９ ｓｔｒａｉｎ (ｃｏｍｍｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ｉｎ ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｂｅａｎｓ)
ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ ｘｏｐＱ ａｎｄ ｈｒｃＣ ｇｅｎｅｓ ｂｕｔ ｈｐａ１. Ｉｎ ｃｏｎｔｒａｓｔꎬ ２ ｔｏ １２ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｔａｌｅ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ
ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｇｌｙｃｉｎｅｓ ＩＣＭＰ５７３２ ａｎｄ ＡＴＣＣ４３９１１ (ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｕｓｔｕｌｅ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ)ꎬ Ｘ. ａｘｏ￣
ｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｖｉｇｎｉｃｏｌａ ＡＴＣＣ１１６４８ (Ｃｏｗｐｅａ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｂｌｉｇｈｔ ａｎｄ Ｐｕｓｔｕｌｅ)ꎬ Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍ
ＡＴＣＣ１２１３１ (ｃｏｔｔｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ)ꎬ ａｎｄ Ｘ. ｃ. ｐｖ. ｐｈａｓｅｏｌｉ ＡＴＣＣ４９１１９. ＨＲ ａｓｓａｙｓ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ
ｔｈａｔ ｏｎｌｙ Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｇｌｙｃｉｎｅｓ ＡＴＣＣ４３９１１ ｓｔｒａｉｎ ｄｉｄ ｎｏｔ ｔｒｉｇｇｅｒ ＨＲꎬ ｄｅｓｐｉｔｅ ｔｈａｔ ｈｐａ１ꎬ ｘｏｐＱꎬ ｈｒｃＣ ａｎｄ
ｔａｌｅ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｒａｉｎ. Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ａｎｄ ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ ｐｒｏｂｅｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅｍ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓꎻ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ (Ｔ３ＳＳ)ꎻ Ｔ３ＳＳ￣ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ (Ｔ３ＳＥｓ)ꎻ ｈｙｐｅｒｓｅｎ￣
ｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ (ＨＲ)
中图分类号: Ｓ４３２.４２　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１６)０１￣００３７￣１０
　 　 γ￣变形杆菌纲(γ￣Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ)的黄单胞菌
属(Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ)的大多数种类ꎬ是植物病原细
菌ꎮ 它们是一类杆状、革兰氏阴性、化能异养、严格
呼吸代谢型的原核生物ꎬ多生长于植物组织内或表
面ꎬ并能在土壤和水体中生存[１]ꎮ 据记载ꎬ黄单胞
菌属中有 ３０９个种或致病变种ꎬ可危害 １２４ 种单子
叶和 ２６８ 种双子叶植物ꎬ其中 ６ 个模式种ꎬ即野油
菜 黄 单 胞 菌 (Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ)、 稻 黄 单 胞 菌
(Ｘ. ｏｒｙｚａｅ)、白纹黄单胞菌(Ｘ. ａｌｂｉｌｉｎｅａｎｓ)、地毯
草黄单胞菌(Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ)、葡萄黄单胞菌(Ｘ. ｖｉ￣
ｔｉｓ)和草莓黄单胞菌(Ｘ. ｆｒａｇａｒｉａｅ)ꎬ对植物为害严
重ꎬ可产生坏死、腐烂和枯萎等症状[２]ꎮ 现行的
«中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录»
中收录了 １４种或致病变种的植物病原黄单胞菌ꎮ
在检疫手段上ꎬ常利用 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交、特有基因序
列的多聚酶链式反应(ＰＣＲ)和扩增片段长度多态
性(ＡＦＬＰ)技术ꎬ区别黄单胞菌不同种或致病变
种[３]ꎮ 据报道ꎬ植物病原黄单胞菌致病性决定因
子在种或致病变种的不同菌株间有变化[４]ꎬ明确
检疫靶点显得尤为重要ꎮ
植物病原黄单胞菌和其他革兰氏阴性植物病
原细菌一样ꎬ可在非寄主植物和抗性寄主植物上激
发过敏反应(ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅꎬ ＨＲ)以及在
感病寄主植物上具有致病性( ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ)ꎮ 决
定这一特性的遗传学基础是 ｈｒｐ / ｈｒｃ 基因簇ꎬ其可
形成三型分泌系统 ( ｔｙｐｅ￣ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍꎬ
Ｔ３ＳＳ)ꎬ将效应蛋白(Ｔ３ＳＳ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓꎬ Ｔ３ＳＥｓ)注入
植物细胞中ꎬ干扰和改变植物的生理生化和代谢途
径从而导致在非寄主植物和抗性寄主植物上激发
ＨＲ以及在感病寄主植物上引致病害发生[５~７]ꎮ 就
Ｔ３ＳＳ装置而言ꎬ一般认为构成 Ｔ３ＳＳ 基体并定位
于细菌外膜的 ＨｒｃＣ 蛋白编码基因较为保守[８]ꎮ
植物病原黄单胞菌是否均具有 Ｔ３ＳＳ 系统来进行
寄生致病ꎬ有待检验ꎮ
ＨＲ是一种快速的局部细胞程序化死亡的形
式ꎬ阻止和限制病原菌在植物中的扩展ꎬ是植物免
疫性被激活的结果ꎬ属抗病反应ꎮ 因此ꎬ非寄主植
物上的 ＨＲ产生与否ꎬ常被作为革兰氏阴性植物病
原细菌的重要生物学性状[９]ꎮ 有无例外ꎬ尚不清
楚ꎮ 植物病原黄单胞菌在非寄主植物上产生 ＨＲ
的物质ꎬ主要是 ｈａｒｐｉｎ 蛋白类ꎬ例如 Ｈｐａ１ 和
ＳｓｂＸ [１０]ꎮ 植物病原黄单胞菌是否均有 ｈａｒｐｉｎ 类蛋
白编码基因存在ꎬ也有待研究ꎮ
植物病原黄单胞菌的 Ｔ３ＳＥ 蛋白ꎬ主要有 ２
类:ＴＡＬＥｓ 和 Ｎｏｎ￣ＴＡＬＥｓꎮ ＴＡＬＥ 蛋白是一类转
录活化因子( ｔｒａｎｓｃｒｉｔｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒ￣ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ)ꎬ
其在不同种或致病变种中存在与否ꎬ或数量不
等[１１~１４]ꎮ 首次报道的 ｔａｌｅ 基因是辣椒斑点病菌
(Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ)中的 ａｖｒＢｓ３[１５]ꎬ随
后在棉花细菌性角斑病菌(Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｍａｌ￣
ｖａｃｅａｒｕｍ)、柑橘溃疡病菌(Ｘ. ｃｉｔｒｉ ｓｕｂｓｐ. ｃｉｔｒｉ)和
稻黄单胞菌 (Ｘ. ｏｒｙｚａｅ)中均有发现和鉴定[１６]ꎮ
ｔａｌｅ基因结构上存在共性:５’端和 ３’端具有几乎
一样的酶切位点ꎬＤＮＡ￣ＤＮＡ间的同源性达 ９７％以
上ꎬＮ 端具有高度保守的 Ｔ３ＳＳ 分泌信号ꎬ中间区
域是几乎完全相同的由 ３４个氨基酸组成的直接重
复单元ꎬ重复单元的第 １２ 和 １３ 位氨基酸是可变
８３

　
　 １期 刘 良ꎬ等:７种检疫性植物病原黄单胞菌 ＩＩＩ型分泌系统和效应蛋白编码基因的差异性分析
的ꎬＣ 端含有亮氨酸拉链结构 ( Ｌｅｕｃｉｎｅ ｚｉｐｐｅｒꎬ
ＬＺ)、３个核定位信号(Ｎｕｃｌｅａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌｓꎬ
ＮＬＳｓ)和酸性转录激活域(ａｎ ａｃｉｄｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａ￣
ｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎꎬ ＡＤ)等[１５ꎬ１７ꎬ１８]ꎮ 其差异性主要
表现在 ３４ 个氨基酸重复单元的重复数及第 １２ 位
和第 １３位氨基酸的种类ꎮ ２００９ 年德国科学家 Ｕｌ￣
ｌａ Ｂｏｎｕｓ和美国科学家 Ａｄａｍ Ｂｏｇｎａｄｏｖｅ分别通过
实验生物学和计算生物学途径破译 ＴＡＬＥ 蛋白
ＲＶＤ结合 ＤＮＡ的密码ꎬ进一步揭示了 ＴＡＬＥ蛋白
的功能:其通过 Ｔ３ＳＳ 途径进入植物细胞核中ꎬ结
合在抗病基因或感病基因亦或其他转录因子的启
动子上(ＴＡＬＥ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔꎬ ＥＢＥ)ꎬ从而导致
抗病性或感病性的产生ꎮ ｔａｌｅ 基因主要和寄主植
物中的感病基因互作ꎬ保证病原菌的寄生性和致病
性ꎬ被 Ｒ基因识别的仅仅是少数ꎮ 如 ＰｔｈＸｏ１ 与水
稻的感病基因 Ｘａ１３ (Ｏｓ８Ｎ３)对应时才发生感
病性ꎬ而隐性抗性基因 ｘａ１３ 主要是在启动子区
域不存在 ＰｔｈＸｏ１ 的 ＥＢＥꎬ躲避了 ＰｔｈＸｏ１ 的识
别 [１９~ ２２] ꎮ
Ｎｏｎ￣ＴＡＬＥꎬ主要是指通过 Ｔ３ＳＳ 途径分泌而
能够进入到植物细胞中的 Ｘｏｐ 蛋白(Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｏｕｔｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ)ꎬ其主要功能是抑制植物抗病免疫性
产生[２３]ꎮ 现有基因组学比较发现ꎬ植物病原黄单
胞菌大约产生 ３０个左右的 Ｘｏｐ 蛋白ꎬ其中有些种
类高度保守 (也称 Ｃｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ) [２４ꎬ２５]ꎮ 例如ꎬ
ＸｏｐＱ 在完成基因组测序的植物病原黄单胞菌中
均存在ꎮ 是否如此ꎬ还有待测定ꎮ
为了探究植物病原黄单胞菌是否存在 Ｔ３ＳＳ系
统ꎬ是否均含有 ｔａｌｅ、ｈｐａ１以及 ｘｏｐＱ基因ꎬ本研究以
水稻白叶枯病菌和水稻条斑病菌为对照ꎬ对 ７ 种检
疫性的植物病原黄单胞菌ꎬ通过 ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交
和非寄主烟草上 ＨＲ 进行测定与分析ꎬ以期为比较
致病性差异和设计检疫性检测靶点提供科学依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 材料
１.１.１　 供试菌株和质粒　 本研究所用的供试菌株
和质粒见表 １ꎮ 黄单胞病菌所用培养基为固体 ＮＡ
Ｔａｂｌｅ １　 Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
Ｓｔｒａｉｎ ｏｒ ｐｌａｓｍｉｄ Ｒｅｌｅｖａｎｔ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　 　 　 　 　 Ｓｏｕｒｃｅ
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
　 ＤＨ５α Ф８０ꎬ ｌａｃ Ｚꎬ △Ｍ１５ꎬ ｒｅｃＡ１ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
Ｘ. ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚａｅ
　 ＰＸＯ９９Ａ ５￣ａｚａｃｙｔｉｄｉｎｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔꎬ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅ ｒａｃｅ ６ꎬ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎꎬ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
　 ＰΔｈｒｃＵ ｈｒｃＵ ｋｎｏｃｋｅｄ￣ｏｕｔ ｍｕｔａｎｔ ｏｆ ＰＸＯ９９Ａ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｘ. ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚｉｃｏｌａ
　 ＲＳ１０５ Ｒｉｆｒꎬ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎꎬ ｃａｕｓｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｅａｆ ｓｔｒｅａｋ ｉｎ ｒｉｃｅ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｘ. ａ. ｐｖ. ａｌｌｉｉ
　 ＬＭＧ５７６ ｃａｕｓｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｏｎｉｏｎꎬ Ｈａｗａｉｉ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
　 ＬＭＧ５７８ ｃａｕｓｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｏｎｉｏｎꎬ Ｈａｗａｉｉ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｘ. ａ. ｐｖ. ｖａｓｃｕｌｏｒｕｍ
　 ＡＴＣＣ１３９０１ ｃａｕｓｉｎｇ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｇｕｍｍｏｓｉｓ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｘ. ａ. ｐｖ. ｖｉｇｎｉｃｏｌａ
　 ＡＴＣＣ１１６４８ ｃａｕｓｉｎｇ ｃｏｗｐｅａ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ａｎｄ ｐｕｓｔｕｌｅ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｘ. ｃ. ｐｖ. ｐｈａｓｅｏｌｉ
　 ＡＴＣＣ４９１１９ ｃａｕｓｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｂｅａｎ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｘ. ａ. ｐｖ. ｇｌｙｃｉｎｅｓ
　 ＩＣＭＰ５７３２ ｃａｕｓｉｎｇ ｓｏｙｂｅａｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｕｓｔｕｌｅ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
　 ＡＴＣＣ４３９１１ ｃａｕｓｉｎｇ ｓｏｙｂｅａｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｕｓｔｕｌｅ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｘ. ｃ. ｐｖ. ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍ
　 ＡＴＣＣ１２１３１ ｃａｕｓｉｎｇ ｃｏｔｔｏｎ ａｎｇｕｌａｒ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｘ. ｃ. ｐｖ. ｍｕｓａｃｅａｒｕｍ
　 ＩＣＭＰ２８７ ｃａｕｓｉｎｇ ｂａｎａｎａ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
　 ＡＴＣＣ４９０８４ ｃａｕｓｉｎｇ ｂａｎａｎａ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｐｌａｓｍｉｄ
　 ＰＺＷ ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ＳＫ( ￣) ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｔｈＸｏ１ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
９３

　
植物病理学报 ４６卷
和液体 ＮＢ培养基ꎬ２８℃培养[６]ꎮ 大肠杆菌(Ｅｓｃｈｅ￣
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ)于 ＬＢ培养基中 ３７℃培养ꎮ 培养基中相
应的抗生素终浓度为:氨苄青霉素 ( ＡＰ ) １００
μｇ / ｍＬꎬ利福平(Ｒｉｆ) ７５ μｇ / ｍＬꎮ
１.２　 方法
１.２.１　 ＰＣＲ检测　 为了分析供试菌株中是否含有
ｈｐａ１、ｘｏｐＱ和 ｈｒｃＣ基因或是其同源物ꎬ依据其在
ＰＸＯ９９Ａ基因组中的序列[１３] ꎬ分别选取基因内部
高度保守区域的序列设计引物(表 ２)ꎮ 通过菌
落￣ＰＣＲ 方式进行扩增ꎬ以 ＰＸＯ９９Ａ和 ＲＳ１０５ 菌株
(表 １)为阳性参照ꎬｄｄｗ 为阴性参照ꎮ ＰＣＲ 扩增
在 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＰＣＲ仪(ＡＧ２２３３１ꎬＨａｍｂｕｒｇꎬＧｅｒｍａ￣
ｎｙ)上进行ꎮ ＰＣＲ 反应条件:９５℃预变性 ５ ｍｉｎꎻ
９４℃变性 ５０ ｓꎬ５４℃退火 ４５ ｓꎬ７２℃延伸 ５０ ｓꎻ３２
个循环ꎻ７２℃充分延伸 １０ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ 产物在 １％
的琼脂糖凝胶上电泳ꎬ经过成像系统检测ꎮ 试验
重复 ３ 次ꎮ
１.２.２　 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交验证　 应用 Ａｘｙｇｅｎ 公司细菌
基因组试剂盒进行供试菌株基因组 ＤＮＡ 提取ꎬ经
ＢａｍＨ Ｉ酶切后以 ａｖｒＢｓ３ / ｐｔｈＡ家族基因 ｐｔｈＸｏ１[２６]
的 Ｓｐｈ Ｉ片段为探针进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交ꎬ验证供试
菌株中是否含有 ｔａｌｅ 基因ꎮ 应用上海捷倍思技术
有限公司质粒 ＤＮＡ提取试剂盒提取 ＰＺＷ 菌株质
粒(表 １)ꎬ经 Ｓｐｈ Ｉ 酶切ꎬ获得 ３ ｋｂ 的 Ｓｐｈ Ｉ 片段ꎬ
纯化后标记为探针ꎮ 以 ＰＸＯ９９Ａ基因组为模板ꎬ利
用表 ２ 标注引物进行 ＰＣＲ 扩增ꎬ获得 ｈｐａ１、ｘｏｐＱ
和 ｈｒｃＣ 基因的保守序列片段构建探针ꎻ供试菌株
基因组 ＤＮＡ提取后经相应酶切ꎮ 探针的标记、预
杂交和杂交见上海 Ｒｏｃｈｅ ＤＩＧ 试剂盒操作手册ꎮ
试验重复 ３次ꎮ
１.２.３ 烟草上过敏反应测定 　 烟草品种为本氏烟
(Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ)ꎬ于上海交通大学农业与
生物学院温室种植ꎬ２５℃１２ ｈ 光照培养至 ４ ~ ６ 叶
期使用ꎮ 供试菌株以及模式菌株 ＰＸＯ９９Ａ在 ＮＢ培
养基中 ２８℃培养过夜ꎬ５ ０００ ｒｐｍ离心收集菌体ꎬ用
灭菌蒸馏水调菌体浓度至 １０８ ＣＦＵ / ｍＬ(ＯＤ６００约为
０.３)ꎬ然后利用灭菌无针头注射器将菌液注入烟草
叶中ꎬ２４ ｈ后观察是否有过敏反应产生ꎮ 每个供试
菌株测试 ３张叶片ꎬ试验重复 ３次ꎮ
２　 结果
２.１　 植物检疫性病原黄单胞菌中 ｔａｌｅ基因存在与
否以及数量的差异性
　 　 以模式菌株 ＰＸＯ９９Ａ为参照ꎬ对供试的 １０个植
物病原黄单胞菌菌株(表 １)进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交检
测ꎮ 根据 ｔａｌｅ家族基因结构的保守性(图 １￣Ａ)ꎬ分
别对测试菌株的 ｇＤＮＡ 进行 ＢａｍＨ Ｉ 酶切ꎬ以
ｐｔｈＸｏ１基因中间的 Ｓｐｈ Ｉ片段为探针进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ
杂交ꎮ 试 验 结 果 显 示: 菜 豆 细 菌 性 疫 病 菌
ＡＴＣＣ４９１１９菌株中含有 ２ 个 ｔａｌｅ 基因ꎻ大豆斑疹
病菌 ＡＴＣＣ４３９１１ 菌株含有 ４ 个 ｔａｌｅ 基因ꎬ而 ＩＣ￣
ＭＰ５７３２菌株含有 ６ 个 ｔａｌｅ 基因ꎬ并且 ２ 个菌株间
可能共有 ４ 个相同的 ｔａｌｅ 基因ꎻ推测ꎬ棉花细菌性
角斑病菌 ＡＴＣＣ１２１３１菌株含有 １２ 个 ｔａｌｅ 基因ꎬ因
为杂交信号强烈的条带可能含有至少 ２ 个 ｔａｌｅ 基
因ꎻ豌豆细菌性疫病菌 ＡＴＣＣ１１６４８ 菌株至少含有
５个 ｔａｌｅ 基因ꎻ香蕉细菌性青枯病菌 ＩＣＭＰ２８７ 和
ＡＴＣＣ４９０８４菌株、甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株
以及洋葱细菌性叶枯病菌 ＬＭＧ５７６ 和 ＬＭＧ５７８ 菌
株则不含有 ｔａｌｅ基因(图 １￣Ｂ)ꎮ
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｐｒｉｍｅｒｓ ａｎｄ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
Ｐｒｉｍｅｒｓ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ５’ ￣ ３’
Ａｎｎｅａｌｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ / ℃
Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ
ｔｉｍｅ / ｓ
ＰＣＲ
ｐｒｏｄｕｃｔ / ｂｐ
Ｔａｒｇｅｔｓ
ｈｐａ１￣Ｆ ＧＡＡＴＴＣＴＴＴＧＡＡＣＡＣＡＣＡＡＴＴＣＧＧＣ ５８ ４５ ４１８ ｈｐａ１
ｈｐａ１￣Ｒ ＴＴＡＣＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＧＣＴＧＴＣＧＣＴＣ
ｘｏｐＱ￣Ｆ ＧＧＣＣＣＧＡＧＡＧＣＡＴＴＣＣＡＡＧＴＴＣＣＴ ５８ ５０ ４９３ ｘｏｐＱ
ｘｏｐＱ￣Ｒ ＧＧＣＣＴＧＧＡＴＧＣＣＴＴＣＣＣＡＣＡＧＧＣ
ｈｒｃＣ￣Ｆ ＴＧＧＣＣＡＧＴＣＴＧＴＴＧＣＧＣＡＧＣＡＴＡ ５６ ５５ ５１７ ｈｒｃＣ
ｈｒｃＣ￣Ｒ ＣＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＧＣＣＡＴＣ
０４

　
　 １期 刘 良ꎬ等:７种检疫性植物病原黄单胞菌 ＩＩＩ型分泌系统和效应蛋白编码基因的差异性分析
Ｆｉｇ. １　 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｒａｎ￣
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒ￣ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ (ｔａｌｅ)
ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ
Ａ: Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍａｐ ｏｆ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｒｅｇｉｏｎｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉ￣
ｖａｔｏｒ￣ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ (ＴＡＬＥ) ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ.
Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓ: Ｓ ａｎｄ Ｂ ｉｎｄｉｃａｔｅ Ｓｐｈ Ｉ ａｎｄ ＢａｍＨ Ｉ ｓｉｔｅｓꎬ ｒｅ￣
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ｄａｓｈｅｄ ｌｉｎｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ Ｓｐｈ Ｉ
ｓｉｔｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｂｅ. Ｔ３Ｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｔｈｅ ｓｅ￣
ｃｒｅｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌ ａｔ Ｎ￣ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｏｆ ＴＡＬＥｓ ｔｈａｔ ｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ
ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｖｉａ ｔｈｅ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ. ＬＺ ＝ ｌｅｕｃｉｎｅ ｚｉｐ￣
ｐｅｒꎬ ＮＬＳ ＝ ｎｕｃｌｅａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌꎬ ａｎｄ ＡＤ ＝ ａｎ ａｃｉｄｉｃ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ. Ｂ: Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｔｅｓｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｂｙＢａｍＨ Ｉ ａｎｄ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ａｎ
ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｐｈ Ｉ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｐｔｈＸｏ１ ａｓ ａ ｐｒｏｂｅ. Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｓ￣
ｓａｙｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ ｗｉｔｈ ｏｎｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ.
Ｔｈｅ ｂａｎｄ ｗｉｔｈ ａ ｒｅｄ ａｓｔｅｒｉｓｋ(∗) ｍａｒｋｅｒ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈａｔ ＩＣ￣
ＭＰ５７３２ ｓｔｒａｉｎ ｈａｓ ｔｗｏ ｍｏｒｅ ｂａｎｄｓꎬ ２.８ ｋｂ ａｎｄ ３.６ ｋｂꎬｒｅｓｐｅｃ￣
ｔｉｖｅｌｙꎬ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ＡＴＣＣ４３９１１. ＰＸＯ９９Ａ ｐｒｅｓｅｎｔｓ Ｘ. ｏｒｙｚａｅ
ｐｖ. ｏｒｙｚａｅꎻ ＬＭＧ５７６ ａｎｄ ＬＭＧ５７８ꎬ Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ａｌｌｉｉꎻ
ＩＣＭＰ５７３２ ａｎｄ ＡＴＣＣ４３９１１ꎬ Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｇｌｙｃｉｎｅｓꎻ ＩＣ￣
ＭＰ２８７ ａｎｄ ＡＴＣＣ４９０８４ꎬ Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｍｕｓａｃｅａｒｕｍꎻ
ＡＴＣＣ１３９０１ꎬ Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｖａｓｃｕｌｏｒｕｍꎻ ＡＴＣＣ１１６４８ꎬ
Ｘ. ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ ｐｖ. ｖｉｇｎｉｃｏｌａꎻ ＡＴＣＣ１２１３１ꎬ Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ.
ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍ ａｎｄ ＡＴＣＣ４９１１９ꎬ Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｐｈａｓｅｏｌｉ
(ｓａｍｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇｓ) .
２.２ 　 甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株不存在
Ｔ３ＳＳ编码基因
根据白叶枯病菌 ＰＸＯ９９Ａ基因组中 ｈｒｃＣ 基因
(Ｇｅｎｅ ＩＤ:８６８５９７３７３)ꎬ在 ＮＣＢＩ 数据中进行 ｂｌａｓｔ
搜索ꎬ根据保守序列位置(图 ２￣Ａ)设计引物(表
２)ꎬ然后以测试菌株的 ｇＤＮＡ 为模板ꎬＰＣＲ 扩增
ｈｒｃＣ 基 因ꎮ 结 果 发 现ꎬ 除 甘 蔗 流 胶 病 菌
ＡＴＣＣ１３９０１菌株外ꎬ其他测试菌株与阳性菌株
ＰＸＯ９９Ａ和 ＲＳ１０５一样ꎬ均能够 ＰＣＲ扩增获得 ｈｒｃＣ
基因 产 物 ( 图 ２￣Ｂ )ꎬ 提 示 甘 蔗 流 胶 病 菌
ＡＴＣＣ１３９０１菌株可能不含有 ｈｒｃＣ 同源基因ꎮ 进
一步以 ＰＸＯ９９Ａ菌株的 ｈｒｃＣ 为探针ꎬ对测试菌株
ｇＤＮＡ 进行 Ｘｈｏ Ｉ 和 ＢａｍＨ Ｉ 酶切 (图 ２￣Ａ) 和
Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交ꎬ发现仅甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１
菌株不产生 ｈｒｃＣ 基因的杂交信号ꎬ其他测试菌株
均有杂交信号ꎬ虽然杂交信号条带大小不一(可能
因为酶切位点位置不一导致)ꎬ但阳性对照的杂交
信号条带大小与实际大小一致(图 ２￣Ａ、图 ２￣Ｃ)ꎮ
这说明ꎬ甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株不含有
ｈｒｃＣ同源基因ꎮ
Ｆｉｇ. ２ 　 ＰＣＲ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｈｒｃＣ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
Ａ: Ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｒｃＣ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ ＰＸＯ９９Ａ .Ｔｈｅ ｏｆｆ￣
ｗｈｉｔｅ ｒｅｇｉｏｎ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈｅ ｐｒｏｂｅ ｉｎ ｓｉｚｅ ｏｆ ５１７ ｂｐ. Ｔｈｅ ｓｐａｃｅ
ｂｅｔｗｅｅｎ Ｘｈｏ Ｉ ａｎｄ ＢａｍＨ Ｉ ｓｉｔｅｓ ｍｅａｎｓｐｏｓｓｉｂｌｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ
ｂａｎｄ ｉｎ ｓｉｚｅ ｏｆ ３ ４３０ ｂｐ. Ｂ:Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｈｒｃＣ ＰＣＲ￣
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ １％ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ. Ｃ:Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡｓ ｗｅｒｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ
ｗｉｔｈ Ｘｈｏ Ｉ ａｎｄ ＢａｍＨ Ｉ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ
ｈｒｃＣ ｐｒｏｂｅ. ＰＣＲ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｓｓａｙｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｔｈｒｅｅ
ｔｉｍｅｓ ｗｉｔｈ ｏｎｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ.
１４

　
植物病理学报 ４６卷
２.３ 　 甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株不含有
ｘｏｐＱ基因
　 　 根据白叶枯病菌 ＰＸＯ９９Ａ基因组中 ｘｏｐＱ 基因
(Ｇｅｎｅ ＩＤ:８５４８８４１１８)ꎬ在 ＮＣＢＩ 数据中进行 ｂｌａｓｔ
搜索ꎬ根据保守序列位置(图 ３￣Ａ)设计引物(表
２)ꎬ然后以测试菌株的 ｇＤＮＡ 为模板ꎬＰＣＲ 扩增
ｘｏｐＱ 基 因ꎮ 结 果 发 现ꎬ 除 甘 蔗 流 胶 病 菌
ＡＴＣＣ１３９０１菌株外ꎬ其他测试菌株与阳性菌株
ＰＸＯ９９Ａ和 ＲＳ１０５ 一样ꎬ均能够 ＰＣＲ 扩增获得
ｘｏｐＱ 产 物 ( 图 ３￣Ｂ )ꎬ 提 示 甘 蔗 流 胶 病 菌
ＡＴＣＣ１３９０１菌株可能不含有 ｘｏｐＱ 同源基因ꎮ 进
一步以 ＰＸＯ９９Ａ菌株的 ｘｏｐＱ 为探针ꎬ对测试菌株
ｇＤＮＡ 进行 ＥｃｏＲ Ｉ 和 Ｋｐｎ Ｉ 酶切 (图 ３￣Ａ) 及
Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交ꎬ发现仅甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１
菌株不产生 ｘｏｐＱ 基因的杂交信号ꎬ其他测试菌株
均有杂交信号ꎬ尽管杂交信号条带大小不一(可能
因为酶切位点位置不一导致)(图 ３￣Ｃ)ꎮ 这说明甘
蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株不含有 ｘｏｐＱ 同源
基因ꎮ
Ｆｉｇ. ３ 　 ＰＣＲ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｘｏｐＱ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
Ａ: Ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｘｏｐＱ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ ＰＸＯ９９Ａ .Ｔｈｅ ｏｆｆ￣
ｗｈｉｔｅ ｒｅｇｉｏｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｂｅ ｉｎ ｓｉｚｅ ｏｆ ４９３
ｂｐ. Ｔｈｅ ｓｐａｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＥｃｏＲ Ｉ ａｎｄ Ｋｐｎ Ｉ ｓｉｔｅｓ ｐｒｅｓｅｎｔｓ ｐｏｓｓｉ￣
ｂｌｙ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｂａｎｄ(ｓ) ｉｎ ｓｉｚｅ ｏｆ ３ １６８ ｂｐ. Ｂ: Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ￣
ｓｉｓ ｏｆ ｘｏｐＱ ＰＣＲ￣ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ １％ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ. Ｃ:Ｇｅｎｏｍｉｃ
ＤＮＡｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｂｙ ＥｃｏＲ Ｉ ａｎｄ Ｋｐｎ
Ｉ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｘｏｐＱ ｐｒｏｂｅ (ｏｆｆ￣ｗｈｉｔｅ ｒｅ￣
ｇｉｏｎ) .ＰＣＲ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｓｓａｙｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ
ｗｉｔｈ ｏｎｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ.
２.４　 甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株和菜豆细菌
性疫病菌 ＡＴＣＣ４９１１９ 菌株不含有 ｈｐａ１ 同
源基因
　 　 水稻白叶枯病菌和条斑病菌的 ｈｐａ１ 基因产物
为 ｈａｒｐｉｎ蛋白ꎬ可在烟草上激发 ＨＲ[１０]ꎮ 在 ＮＣＢＩ
中搜索黄单胞菌基因组数据ꎬ选取 ４１８ ｂｐ 的保守
区域(图 ４￣Ａ)设计引物(表 ２)ꎬ以 ｇＤＮＡ 为模板ꎬ
ＰＣＲ扩增测试菌株中 ｈｐａ１ 同源基因ꎮ 结果显示ꎬ
ＰＣＲ方法不能从甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１菌株和
菜豆细菌性疫病菌 ＡＴＣＣ４９１１９ 菌株有效扩增
ｈｐａ１同源基因ꎬ但能从其他测试黄单胞菌中有效
扩增(图 ４￣Ｂ)ꎮ 提示甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌
株和菜豆细菌性疫病菌 ＡＴＣＣ４９１１９菌株中可能不
存在 ｈｐａ１同源基因ꎮ 测序发现ꎬ这些 ＰＣＲ 产物均
为 ｈｐａ１ 同源基因ꎮ 按照邻位相连法 (Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣
ｊｏｉｎｉｎｇꎬＮＪ 法)构建系统进化树[３]ꎬ结果显示ꎬ６ 种
不同植物来源的 １０个菌株的 ｈｐａ１基因可聚类为 Ｉ
和 ＩＩ簇 (图 ４￣Ｄ)ꎬ相似性为 ８０％以上ꎬ其中水稻和
香蕉来源的为 ＩＩ 簇ꎬ其余为 Ｉ 簇ꎮ 在 Ｉ 簇中ꎬ大豆
斑疹病菌 ＩＣＭＰ５７３２ 和 ＡＴＣＣ４３９１１ 菌株的 ｈｐａ１
基因相似性为 １００％ꎮ
为进一步确定结果的准确性ꎬ以水稻白叶枯病
菌 ＰＸＯ９９Ａ菌株 ｈｐａ１ 基因的 ＰＣＲ 产物构建探针ꎬ
Ｐｓｔ Ｉ酶切测试菌株的 ｇＤＮＡꎬ进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交ꎮ
杂交结果显示ꎬ阳性对照菌株 ＰＸＯ９９Ａ和水稻条斑
病菌 ＲＳ１０５菌株显示 ２条杂交信号条带ꎬ分别约为
１.２ ｋｂ和 ２.０ ｋｂ(图 ４￣Ｃ)ꎮ 经检测 ＰＸＯ９９Ａ基因组
序列和 ＲＳ１０５ 菌株的 ｈｒｐ 基因簇序列ꎬ在 ｈｐａ１ 探
针近 ３’端存在 Ｐｓｔ Ｉ酶切位点ꎬ并且 １.２ ｋｂ 条带大
小与 ｈｐａ１基因 Ｐｓｔ Ｉ酶切产生 １ ２７１ ｂｐ大小一致ꎬ
另一条 ２.０ ｋｂ条带推测是 ｈｐａ１ 基因 ３’端被 ｈｐａ１
探针杂交所致ꎮ 杂交结果还显示:香蕉细菌性青枯
病菌 ＡＴＣＣ４９０８４ 和 ＩＣＭＰ２８７ 菌株以及洋葱细菌
性叶枯病菌 ＬＭＧ５７６ 和 ＬＭＧ５７８ 菌株的杂交条带
与阳性对照菌株 ＰＸＯ９９Ａ和 ＲＳ１０５ 菌株的杂交条
带一致ꎻ甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株和大豆斑
疹病菌 ＡＴＣＣ４３９１１ 菌株不存在 ｈｐａ１ 基因的杂交
信号ꎬ其他黄单胞菌测试菌株在 ２ ｋｂ 处显示杂交
信号(图 ４￣Ｃ)ꎮ 提示甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌
株和大豆斑疹病菌 ＡＴＣＣ４３９１１ 菌株不含有 ｈｐａ１
同源基因ꎮ
２４

　
　 １期 刘 良ꎬ等:７种检疫性植物病原黄单胞菌 ＩＩＩ型分泌系统和效应蛋白编码基因的差异性分析
Ｆｉｇ. ４ 　 ＰＣＲ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｈｐａ１ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
Ａ: Ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｐａ１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ ＰＸＯ９９Ａ .Ｔｈｅ ｏｆｆ￣
ｗｈｉｔｅ ｒｅｇｉｏｎ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｂｅ ｉｎ ｓｉｚｅ ｏｆ ４１８
ｂｐ. Ｔｈｅ ｓｐａｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ Ｐｓｔ Ｉ ｓｉｔｅｓ ｍｅａｎｓａ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｓｉｚｅ
ｏｆ １ ２７１ ｂｐ. Ｂ:Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｈｐａ１ ＰＣＲ￣ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ １％
ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ. Ｃ:Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉ￣
ｇｅｓｔｅｄ ｂｙ Ｐｓｔ Ｉ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｈｐａ１ ｐｒｏｂｅ
(ｏｆｆ￣ｗｈｉｔｅ ｒｅｇｉｏｎ) . ＲＳ１０５ ｓｔａｎｄｓ ｆｏｒ Ｘ. ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚｉｃｏｌａ
(ｓａｍｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇｓ) .ＰＣＲ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｓｓａｙｓ ｗｅｒｅ
ｒｅｐｅａｔｅｄ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ ｗｉｔｈ ｏｎｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ. Ｄ:
Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ ｂｏｏｔｓｔｒａｐ ｔｒｅｅ ｉｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
ｈｐａ１ ｇｅｎｅｓ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ.
２.５　 大豆斑疹病菌 ＡＴＣＣ４３９１１ 菌株不能在烟草
上产生 ＨＲ
　 　 以模式菌株 ＰＸＯ９９Ａ为阳性参照ꎬ以其 Ｔ３ＳＳ受
破坏的 ＰΔｈｒｃＵ菌株为阴性参照(表 １)ꎬ将供试菌株
菌体浓度调至 ＯＤ６００ ＝ ０.３(约 １０８ＣＦＵ / ｍＬ)注射烟
草叶ꎮ ２４ ｈ后发现ꎬ只有大豆斑疹病菌 ＡＴＣＣ４３９１１
菌株与 ＰΔｈｒｃＵ菌株一样ꎬ不能在烟草上产生 ＨＲꎬ而
其他测试菌株均可在烟草上有效产生 ＨＲꎬ其中包括
大豆斑疹病菌另一菌株 ＩＣＭＰ５７３２(图 ５)ꎮ
Ｆｉｇ. ５ 　 Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ
ｔｏｂａｃｃｏ ｂｙ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｔｒａｉｎｓ
ＰＸＯ９９Ａ ｐｒｅｓｅｎｔｓ ａｓ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ ＰΔｈｒｃＵꎬ ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ
ｃｏｎｔｒｏｌ.ＨＲ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ ｗｉｔｈ
ｏｎｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ.
３　 讨论
植物病原黄单胞菌的 Ｔ３ＳＳ 分泌系统在致病
过程中起重要作用[２７]ꎮ 以编码组成 Ｔ３ＳＳ 的 ｈｒｃＣ
基因为检测靶点ꎬ通过 ＰＣＲ 和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交试验
结果发现:在甘蔗流胶病菌 ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株中没
有检测到 ｈｒｃＣ 基因ꎬ推测其不含有 Ｔ３ＳＳ 系统ꎻ相
反ꎬ在稻黄单胞菌、香蕉细菌性青枯病菌、洋葱细菌
性叶枯病菌、菜豆细菌性疫病菌、大豆斑疹病菌、豌
豆细菌性疫病菌和棉花细菌性角斑病菌中检测到
ｈｒｃＣ基因ꎬ从而断定这些菌株含有 Ｔ３ＳＳ 系统(图
４￣Ｃ)ꎬ这与已有的研究结果吻合[２８~３０]ꎮ 据报道ꎬ引
起甘蔗白纹病的白纹黄单胞菌(Ｘ. ａｌｂｉｌｉｎｅａｎｓ)也
不拥有 Ｔ３ＳＳ系统[３１]ꎮ 据此推测:甘蔗流胶病菌和
白纹黄单胞菌在甘蔗上寄生ꎬ可能因为甘蔗上糖分
较多ꎬ细菌不需要通过 Ｔ３ＳＳ 效应蛋白操控植物细
胞代谢就能寄生获得所需营养ꎮ 本实验室前期对
稻黄单胞菌 Ｔ３ＳＳ 编码基因表达受不同的六碳糖
诱导ꎬ也说明了这一点[３２ꎬ３３]ꎮ 在甘蔗流胶病菌
ＡＴＣＣ１３９０１ 菌株中也没有检测到 ｘｏｐＱ 基因ꎮ
ＸｏｐＱ是革兰氏阴性植物病原细菌中高度保守的
Ｔ３ＳＥ蛋白ꎬ也称之为核心效应蛋白[２４ꎬ ２５]ꎬ主要通
过抑制寄主植物的免疫性而有利于病原菌的侵
染[２３]ꎮ 在检测的黄单胞菌 ７ 个致病变种中ꎬ仅甘
蔗流胶病菌中未见 ｘｏｐＱ基因(图 ３)ꎮ 说明甘蔗流
胶病菌无 Ｔ３ＳＳꎬ即不需要分泌 ＸｏｐＱ 蛋白而有利
于其在甘蔗上的致病性ꎮ
３４

　
植物病理学报 ４６卷
革兰氏阴性植物病原细菌在非寄主烟草上的
ｈａｒｐｉｎ蛋白得到鉴定[３４ꎬ ３５]ꎮ 植物病原黄单胞菌中
ｈｐａ１基因产物被确认为 ｈａｒｐｉｎ 蛋白ꎬ其富含甘氨
酸(Ｇ)ꎬ对热稳定和蛋白酶敏感[３６]ꎮ 在本研究测
试的菌株中ꎬ不拥有 Ｔ３ＳＳ 和 ＸｏｐＱ 的甘蔗流胶病
菌也未检测到 ｈｐａ１ 基因(图 ２)ꎬ然而其却能够在
烟草上产生 ＨＲ(图 ５)ꎮ 这说明其激发 ＨＲ 产生的
物质可能与拥有 Ｔ３ＳＳ 的其他黄单胞菌有所不同ꎬ
其激发 ＨＲ 产生的物质基础还有待鉴定ꎮ 从植物
检疫的角度看ꎬ依据 Ｔ３ＳＳ 或 ｘｏｐＱ 亦或 ｈｐａ１ 基因
靶点ꎬ区分甘蔗流胶病菌与其他拥有 Ｔ３ＳＳ 的黄单
胞菌具有指导意义ꎮ
菜豆细菌性疫病菌 ＡＴＣＣ４９１１９菌株也未检测
到 ｈｐａ１基因ꎬ但其他测定的菌株检测到 ｈｐａ１ 基因
(图 ２)ꎮ 这表明 ｈｐａ１基因位点可能不能够作为检
测区别植物病原黄单胞菌种或致病变种的靶点ꎮ
有趣的是ꎬ除大豆斑疹病菌 ＡＴＣＣ４３９１１菌株外ꎬ其
他供试菌株均在烟草上产生 ＨＲ(图 ５)ꎻ大豆斑疹
病菌 ＡＴＣＣ４３９１１ 菌株含有 Ｔ３ＳＳ 基因和 ｈｐａ１ 基
因ꎬ其 ｈｐａ１基因序列同其他测试的植物病原黄单
胞菌的 ｈｐａ１基因具有很高的同源性ꎬ但该菌株不
能在烟草上产生 ＨＲꎮ 这一现象有待进一步研究ꎮ
ＴＡＬＥ蛋白是某些植物病原黄单胞菌通过
Ｔ３ＳＳ 途径分泌进入植物细胞核中起转录因子作
用ꎬ结合在抗病基因或感病基因亦或转录因子基因
的启动子 ＥＢＥ上ꎬ引发植物抗病或感病[３７]ꎮ 在测
定的 ７个致病变种中ꎬ大豆斑疹病菌、菜豆细菌性
疫病菌、豌豆细菌性疫病菌和棉花细菌性角斑病菌
含有 ２ ~ １２ 个 ｔａｌｅ 基因ꎬ而香蕉细菌性青枯病菌、
甘蔗流胶病菌和洋葱细菌性叶枯病菌均不含有
ｔａｌｅ基因(图 １￣Ｂ)ꎮ 这表明 ｔａｌｅ基因可以作为靶点
用于检疫检测ꎮ 同一致病变种的不同菌株中ꎬｔａｌｅ
基因数量不一ꎮ 例如ꎬ大豆斑疹病菌的 ＩＣＭＰ５７３２
菌株含有 ７个 ｔａｌｅ基因ꎬＡＴＣＣ４３９１１菌株含有 ５个
ｔａｌｅ基因(图 １￣Ｂ)ꎮ 鉴于 ｔａｌｅ基因对病害发生的重
要性ꎬ以 ｔａｌｅ基因为靶点用于检疫检测ꎬ可监控病
原菌的毒性组成ꎮ 水稻白叶枯病菌、水稻条斑病菌
和柑橘溃疡病菌(Ｘ. ｃｉｔｒｉ ｓｕｂｓｐ. ｃｉｔｒｉ)的毒性组成
检测ꎬ就是基于 ｔａｌｅ基因数量检测而进行的[３]ꎮ 需
要指出的是ꎬ水稻、棉花、豆科植物、柑橘和番茄上
寄生致病的黄单胞菌均检测到 ｔａｌｅ 基因[１５ꎬ ３８~４１]ꎬ
而香蕉细菌性青枯病菌、甘蔗流胶病菌和洋葱细菌
性叶枯病菌中却未检测到 ｔａｌｅ 基因(图 １￣Ｂ)ꎮ 这
是否意味着人类驯化的大宗植物上的黄单胞菌更
易进化产生 ｔａｌｅ基因? 大豆斑疹病菌、菜豆细菌性
疫病菌、豌豆细菌性疫病菌和棉花细菌性角斑病菌
中的 ＴＡＬＥ蛋白对应相应植物上的靶标基因是什
么ꎬ还有待研究ꎮ
随着功能基因组学的发展ꎬ以病菌相关致病因
子为靶点进行专性检测ꎬ在植物检疫中越来越受关
注ꎮ 本研究通过 ＰＣＲ 和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 方法检测上
述菌株的 ｈｐａ１、ｘｏｐＱ、ｈｒｃＣ 和 ｔａｌｅ 基因ꎬ发现其存
在基因型差异ꎬ在非寄主烟草上的 ＨＲ 试验发现
Ｔ３ＳＳ与 ＨＲ现象并无正相关性ꎮ 这些结果对比较
不同植物病原黄单胞菌的致病性和植物检疫特异
靶标的设计提供了科学线索ꎮ
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ａｌｄｏｌａｓｅ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｏｌｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃａｒｂｏｎ ｍｅ￣
ｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｒｐ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｒｉｃｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｘａｎ￣
ｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚｉｃｏｌａ[Ｊ] . ＰＬｏＳ Ｏｎｅꎬ ２０１２ꎬ ７
(２): ｅ３１８５５.
[３３] Ｇｕｏ Ｗꎬ Ｚｏｕ Ｌ Ｆꎬ Ｃａｉ Ｌ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｌｕｃｏｓｅ￣６￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅ
ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ￣
ｒｉｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎꎬ ｃｅｌｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｆ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚｉｃｏｌａ [ Ｊ] . Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐａ￣
ｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓꎬ ２０１５ꎬ ７８: ８７￣９４.
[３４] Ｗｅｉ Ｚ Ｍꎬ Ｌａｂｙ Ｒ Ｊꎬ Ｚｕｍｏｆｆ Ｃ Ｈꎬｅｔ ａｌ. Ｈａｒｐｉｎꎬ ｅｌｉｃｉ￣
ｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ
ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ[ Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ １９９２ꎬ ２５７
(５０６６): ８５￣８８.
[３５] Ｌｉ Ｙ Ｒꎬ Ｍａ Ｗ Ｘꎬ Ｃｈｅ Ｙ Ｚꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｈｉｇｈｌｙ￣ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ
ｓｉｎｇｌｅ￣ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｓ ａ ｈａｒｐｉｎ￣ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｏ ｔｒｉｇｇｅｒ ｐｌａｎｔ ｉｍｍｕ￣
ｎｉｔｙ[Ｊ] . ＰＬｏＳ Ｏｎｅꎬ ２０１３ꎬ ８(２): ｅ５６２４０.
[３６] Ｚｏｕ Ｌ ｆꎬ Ｗａｎｇ Ｘ Ｐꎬ Ｘｉａｎｇ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｈｒｐ ｃｌｕｓｔｅｒｓ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚｉｃｏｌａ ｔｈａｔ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｎｏｎｈｏｓｔ ｔｏｂａｃｃｏ
ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｉｎ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｈｏｓｔ ｒｉｃｅ[ Ｊ] . Ａｐｐｌｉｅｄ
ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００６ꎬ ７２(９): ６２１２￣
６２２４.
[３７] Ｍｏｒｂｉｔｚｅｒ Ｒꎬ Ｅｌｓａｅｓｓｅｒ Ｊꎬ Ｈａｕｓｎｅｒ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ａｓｓｅｍｂｌｙ
ｏｆ ｃｕｓｔｏｍ ＴＡＬＥ￣ｔｙｐｅ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ ｂｙ ｍｏｄｕ￣
ｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ [ Ｊ] . Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２０１１ꎬ ３９
(１３): ５７９０￣５７９９.
[３８] Ｏｃｈｉａｉ Ｈꎬ Ｉｎｏｕｅ Ｙꎬ Ｔａｋｅｙａ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｏｍｅ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚａｅ ｓｕｇｇｅｓｔｓ
ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｉｎ￣
ｓｅｒｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｔｏ ｉｔｓ ｒａｃｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ[ Ｊ] . Ｊａｐａｎ Ａｇｒｉ￣
ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｑｕａｒｔｅｒｌｙꎬ ２００５ꎬ ３９(４): ２７５￣２８７.
[３９] Ｄｅ Ｆｅｙｔｅｒ Ｒꎬ Ｙａｎｇ Ｙꎬ Ｇａｂｒｉｅｌ Ｄ Ｗ. Ｇｅｎｅ￣ｆｏｒ￣ｇｅｎｅｓ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｏｔｔｏｎ Ｒ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｍａｌｖａｃｅａｒｕｍａｖｒ ｇｅｎｅｓ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ １９９３ꎬ ６(２): ２２５￣２３７.
[４０] Ｓｗａｒｕｐ Ｓꎬ Ｙａｎｇ Ｙꎬ Ｋｉｎｇｓｌｅｙ Ｍ Ｔꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ Ｘａｎ￣
ｔｈｏｍｏｎａｓ ｃｉｔｒｉ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｇｅｎｅꎬ ｐｔｈＡꎬ ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃａｌ￣
ｌｙ ｅｎｃｏｄｅｓ ｇｒａｔｕｉｔｏｕｓ ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｎ ｎｏｎｈｏｓｔｓ[ Ｊ] . Ｍｏ￣
ｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ １９９２ꎬ ５(３): ２０４￣
２１３.
[４１] Ｍｏｒｅｉｒａ Ｌ Ｍꎬ Ａｌｍｅｉｄａ Ｎ Ｆꎬ Ｐｏｔｎｉｓ Ｎꎬ ｅｔ ａｌ. Ｎｏｖｅｌ ｉｎ￣
ｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｃｉｔｒｕｓ ｃａｎｋｅｒ ｂａｓｅｄ ｏｎ
ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｗｏ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｆｕｓｃａｎｓ ｓｕｂｓｐ. ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉｉ[Ｊ] . ＢＭＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓꎬ ２０１０ꎬ
１１(１): ２３８.
责任编辑:于金枝
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