全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４４(３): ３０９￣３１２(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣１０￣２６ꎻ 修回日期: ２０１３￣１２￣１２
基金项目: 国家科技支撑计划 ( ２０１２ＢＡＫ１１Ｂ０２)ꎻ国家质检总局项目 ( ２０１１ＩＫ１６９ꎬ ２０１３ＩＫ２７９ꎬ ２０１４ＩＫ０２０)ꎻ宁波市社会发展项目
(２０１２Ｃ５００４１)ꎻ宁波出入境检验检疫局项目(甬 Ｋ１０￣２０１３)
通讯作者: 段维军ꎬ浙江省宁波市人ꎬ高级农艺师ꎬ主要从事有害生物识别与检测技术研究ꎻＴｅｌ:０５７４￣８７０２２９５１ꎬＦａｘ:０５７４￣８７１１３５８４ꎬＥ￣ｍａｉｌ:
ｗｅｉｊｕｎｄｕａｎ＠ ｔｏｍ.ｃｏｍꎮ
研究简报
进境日本罗汉松上可可花瘿病菌的截获鉴定
段维军∗ꎬ 郭立新ꎬ 段丽君
(宁波出入境检验检疫局ꎬ 宁波 ３１５０１２)
Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｂｏｎｅｃｔｒｉａ ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ ｏｎ Ｂｕｄｄｈｉｓｔ ｐｉｎｅ ｉｍｐｏｒｔｅｄ
ｆｒｏｍ Ｊａｐａｎ ＤＵＡＮ Ｗｅｉ￣ｊｕｎꎬ ＧＵＯ Ｌｉ￣ｘｉｎꎬ ＤＵＡＮ Ｌｉ￣ｊｕｎ (Ｎｉｎｇｂｏ Ｅｎｔｒｙ￣ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ
Ｂｕｒｅａｕꎬ Ｎｉｎｇｂｏ ３１５０１２ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｓｔｒａｉｎ １３６５７ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｂｕｄｄｈｉｓｔ ｐｉｎｅ (Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ) ｉｍｐｏｒｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｊａｐａｎ ｉｎ
Ｎｉｎｇｂｏ ｐｏｒｔ ｂｙ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ＰＤＡ ｍｅｔｈｏｄ. ＰＤＡ ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｆｌａｔ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ｗｉｔｈ ｐａｌｅ ｒｏｓｅ ｃｏｌｏｕｒｅｄ ａｅｒｉａｌ
ｈｙｐｈａｅ. Ｍａｃｒｏｃｏｎｉｄｉａ ｗｉｔｈ ｆｉｖｅ ｔｏ ｎｉｎｅ ｓｅｐｔａꎬ ５８.７ ｔｏ ８６.３ μｍ ｌｏｎｇꎬ ５.３ ｔｏ ８. ８ μｍ ｗｉｄｅ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ.
Ｍｉｃｒｏｃｏｎｉｄｉａ ｗｉｔｈ ｚｅｒｏ ｔｏ ｏｎｅ ｓｅｐｔａꎬ ２.８ ｔｏ ９.３ μｍ ｌｏｎｇꎬ ２.４ ｔｏ ５.６ μｍ ｗｉｄｅꎬ ｏｖａｌ ｔｏ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌꎬ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｅｄ
ｏｎ ｍｏｎｏｐｈｉａｌｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｏｂｓｅｒｖｅｄ. Ｐａｒｔｉａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＩＴＳ ｒｅｇｉｏｎꎬ ２８Ｓ ｒＲＮＡꎬ ＥＦ ａｎｄ ＴＵＢ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ １３６５７ ｗｉｔｈ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｐｒｉｍｅｒｓ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｅｄ Ａｌｂｏｎｅｃｔｒｉａ ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＮＣＢＩ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅｙ ｈａｄ
９９％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ. Ｔｈｅ ＥＦ ａｎｄ ＴＵＢ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ １３６５７ ｗｅｒｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｏ Ａ. ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ ｃｌａｄｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｐｈｙ￣
ｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｓｕｌｔｓ. Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｔｗｉｇｓ ｏｆ Ｂｕｄｄｈｉｓｔ ｐｉｎｅ ａｎｄ ｃａｕｓｅｄ ｄｒｙ ｌｅａｖｅｓ
ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｔｗｉｇ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ. Ａ. ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｒｅｐｅａｔｅｄｌｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｐｅｔｉｏｌｅｓ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｔｗｉｇｓ.
Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓꎬ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ １３６５７ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ
ａｓ Ａ. ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ. Ｔｏ ｏｕｒ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅꎬ ｔｈｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａ. ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ ｉｎ Ｃｈｉｎａ. Ｔｈｉｓ ｉｓ
ａｌｓｏ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ａ. ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ ｂｅｉｎｇ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｏｎ Ｂｕｄｄｈｉｓｔ ｐｉｎｅ ｉｎ Ｊａｐａｎ ａｎｄ ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ａｌｂｏｎｅｃｔｒｉａ ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａꎬ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０３￣０３０９￣０４
可可花瘿病菌(Ａｌｂｏｎｅｃｔｒｉａ ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ (Ｂｅｒｋ.
＆ Ｂｒｏｏｍｅ) Ｒｏｓｓｍａｎ ＆ Ｓａｍｕｅｌｓ)属菌物界 ( Ｆｕｎ￣
ｇｉ)、子囊菌门(Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ)、粪壳菌纲(Ｓｏｒｄａｒｉｏ￣
ｍｙｃｅｔｅｓ)、肉座菌目(Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ)、丛赤壳科(Ｎｅｃ￣
ｔｒｉａｃｅａｅ)、白壳属(Ａｌｂｏｎｅｃｔｒｉａ)ꎮ 其无性阶段也被
称之为多隔镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｄｅｃｅｍｃｅｌｌｕｌａｒｅ Ｂｒｉｃｋ
１９０８) [１]ꎬ曾用名包括:Ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉａ ｅｂｕｒｎｅａ Ｒｅｈｍꎬ
Ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉａ ｌｉｃｈｅｎｉｇｅｎａ ＳｐｅｇꎬＣａｌｏｎｅｃｔｒｉａ ｒｉｇｉｄｉｕｓ￣
ｃｕｌａ (Ｂｅｒｋ. ＆ Ｂｒｏｏｍｅ) ＳａｃｃꎬＣａｌｏｎｅｃｔｒｉａ ｓｕｌｃａｔａ
ＳｔａｒｂäｃｋꎬＣａｌｏｎｅｃｔｒｉａ ｔｅｔｒａｓｐｏｒａ ( Ｓｅａｖｅｒ) Ｓａｃｃ. ＆
ＴｒｏｔｔｅｒꎬＦｕｓａｒｉｕｍ ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌｕｍ Ｗ.Ｃ. Ｓｎｙｄｅｒ ＆ Ｈ.
Ｎ. Ｈａｎｓｅｎꎬ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｉｃａｒｉａｅ￣ｃｏｌｏｒａｎｔｉｓ Ｓａｃｃ. ＆
Ｔｒｏｔｔｅｒ ｅｘ Ｄｅ ＪｏｎｇｅꎬＮｅｃｔｒｉａ ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ Ｂｅｒｋ. ＆
Ｂｒｏｏｍｅꎬ Ｎｅｃｔｒｉａ ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ ｆ. ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ Ｅ. Ｊ.
Ｆｏｒｄꎬ Ｂｏｕｒｒｅｔ ＆ Ｓｎｙｄｅｒꎬ Ｓｃｏｌｅｃｏｎｅｃｔｒｉａ ｔｅｔｒａｓｐｏｒａ
Ｓｅａｖｅｒ和 Ｓｐｉｃａｒｉａ ｃｏｌｏｒａｎｓ Ｄｅ Ｊｏｎｇｅ (Ｔｈｅ Ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｆｕｎｇｏｒｕｍ ｄａｔａｂａｓｅ ｗｅｂｓｉｔｅ: ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｓｐｅｃｉｅｓ￣
ｆｕｎｇｏｒｕｍ.ｏｒｇ / Ｉｎｄｅｘ.ｈｔｍꎬ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｂｙ ＣＡＢＩ Ｂｉ￣
ｏｓｅｒｖｉｃｅｓ)ꎮ 目前ꎬ该病菌已被列入我国进境植物
检疫性有害生物名录ꎬ是一种检疫性植物病原真
植物病理学报 ４４卷
菌ꎮ 该病菌分布广泛ꎬ侵染可可造成癌肿病ꎬ严重
时可导致可可绝收[２]ꎬ也能够引起多种植物顶枯
病的发生ꎬ在日本有该菌造成释迦顶枯病的报
道[３]ꎮ
２０１３年 ３ 月ꎬ宁波检验检疫局从日本进境罗
汉松种苗上分离到一株疑似可可花瘿病菌的分离
物ꎬ通过形态学特征观察、致病性测定和序列比对
分析ꎬ对其进行了鉴定ꎬ现报道如下ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 病菌分离与纯化
采用常规 ＰＤＡ平板分离法ꎬ从进境日本罗汉松
种苗枯死幼芽处分离获得分离物ꎬ单孢分离后得到
分离物 １３６５７ꎬ保存于 ＰＤＡ试管斜面(４℃)备用ꎮ
１.２ 方法
１.２.１ 生物学性状观察 将分离物 １３６５７ 接种于
ＰＤＡ平板上ꎬ２５℃下连续暗培养 １０ ｄꎬ观察记录菌
落正反面的颜色和气生菌丝的疏密程度ꎮ 用解剖
针自 ＰＤＡ平板上挑取菌落或菌落中央粘孢团ꎬ制
片后在显微镜下镜检观察大、小型分生孢子的形态
特征ꎬ随机各挑选 ８０ 个大型分生孢子和小型分生
孢子进行形态测量ꎮ
１.２.２ 致病性测定 选用健康罗汉松幼苗进行接
种试验ꎮ 挑取幼嫩健康的罗汉松幼芽部位ꎬ将在
ＰＤＡ平板上培养 １０ ｄ的菌落用直径 ４ ｍｍ打孔器
在菌落边缘打出菌饼后ꎬ将菌饼接种在幼芽上ꎬ菌
丝面贴向幼芽ꎬ共接种 ８ 个幼芽ꎮ 无菌菌饼接种 ３
个幼芽作为对照ꎬ２５℃温室条件下进行隔离培养ꎮ
１.２.３ ＤＮＡ提取 收集 ＰＤＡ平板上培养 １０ ｄ 的
分离物 １３６５７ 菌丝体ꎬ根据试剂盒及仪器使用说
明ꎬ在核酸自动化提取仪(Ｔｈｅｒｍｏ ＫｉｎｇＦｉｓｈｅｒ ｍＬ
型)上使用核酸提取试剂盒(台湾奈米技术开发有
限公司)进行 ＤＮＡ提取ꎮ 提取后经分光光度计测
定 ＤＮＡ浓度后ꎬ冻存于－２０℃冰箱备用ꎮ
１.２.４ 序列扩增和测定 用引物 ＩＴＳ１ / ＩＴＳ４ 扩增
ＩＴＳ 片段[４]ꎬ引物 ＬＲ０Ｒ / ＬＲ５Ｒ 扩增 ２８Ｓ 片段
(ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｂｉｏｌｏｇｙ. ｄｕｋｅ. ｅｄｕ / ｆｕｎｇｉ / ｍｙｃｏｌａｂ /
ｐｒｉｍｅｒｓ.ｈｔｍ.)ꎬ引物 ＥＦＣＥ１ / ＥＦＣＦ２ 扩增 ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ
ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １￣ａｌｐｈａ (ＥＦ)片段( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.
ｑ－ｂａｎｋ. ｅｕ / Ｆｕｎｇｉ / ＤｅｆａｕｌｔＩｎｆｏ. ａｓｐｘ? Ｐａｇｅ ＝ Ｃｅｒａｔｏ￣
ｃｙｓｔｉｓ Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓ)ꎬ引物 ＴＵＢ２Ｆｄ / ＴＵＢ４Ｒｄ 扩
增 β￣ｔｕｂｕｌｉｎ (ＴＵＢ)片段[５]ꎮ ＰＣＲ 扩增产物在 ２％
琼脂糖凝胶上电泳ꎬ用凝胶成像系统进行成像分析ꎬ
并用 ＤＮＡ片段纯化试剂盒进行纯化ꎮ 纯化 ＰＣＲ产
物送上海英俊生物技术有限公司双向测序ꎮ
１.２.５ 序列分析 利用 ＮＣＢＩ网站上的 ＢＬＡＳＴ程
序对所得的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ、２８Ｓ、ＥＦ 和 ＴＵＢ 序列进行
比对分析ꎬ确认序列的可靠性ꎮ 使用 ＭＥＧＡ５.０ 程
序对测得的 １３６５７ 菌株 ＥＦ 序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中下
载的可可花瘿病菌及其相近序列进行比对ꎬ以
ＮＣＢＩ上下载的 Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｕｂｇｌｕｔｉｎａｎｓ ＥＦ 序列
( ＪＸ８６７９４５ ) 和 Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｃｉｒｃｉｎａｔａ ＥＦ 序 列
(ＪＮ６４２１０１)为外群ꎬ采用邻接法(ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ
ｍｅｔｈｏｄꎬ ＮＪ)构建系统进化发育树ꎬ进行 １ ０００ 次
重抽样计算系统树中节点的置信度ꎮ 使用
ＭＥＧＡ５.０程序对测得的 １３６５７ 菌株 ＴＵＢ 序列与
ＧｅｎＢａｎｋ中下载的可可花瘿病菌及其相近序列ꎬ采
用如上所述方法进行比对和系统进化发育分析ꎮ
２ 结果与分析
２.１ 菌落性状
在 ＰＤＡ 培养基上菌丝生长茂盛ꎬ培养皿上菌
落淡粉红色ꎬ底部红色ꎮ 培养皿中央ꎬ可产生粘孢
团ꎬ内有大量大型分生孢子(图 １)ꎮ
Ｆｉｇ. １ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｓｔｒａｉｎ１３６５７ ａｆｔｅｒ １０￣ｄａｙ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ
ｏｎ ＰＤＡ ｍｅｄｉｕｍ
２.２ 病菌形态特征
小型分生孢子着生于气生菌丝的小梗上ꎬ串生、
假头生ꎬ分生孢子梗无色ꎬ有大量小型分生孢子产生
于新生菌落中ꎬ小型分生孢子椭圆形至圆柱形ꎬ无色
透明ꎬ具 ０~１个隔ꎬ大小 ２.８~９.３×２.４~５.６ μｍꎮ
大型分生孢子非常大ꎬ镰刀形或稍弯的柱形ꎬ
０１３
３期 段维军ꎬ等:进境日本罗汉松上可可花瘿病菌的截获鉴定
透明ꎬ壁厚ꎬ顶孢略弯ꎬ渐缩小ꎬ多孢ꎬ通常有 ５ ~ ９
个隔ꎬ多为 ８ 隔ꎬ大小为 ５８.７ ~ ８６.３×５.３ ~ ８.８ μｍ
(图 ２)ꎬ比同属的其余种类都大ꎬ产孢细胞单瓶梗ꎮ
未见到病原的有性态ꎮ
Ｆｉｇ. ２ Ｍａｃｒｏｃｏｎｉｄｉｕｍ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅ １３６５７ ｏｎ ＰＤＡ
Ｓｃａｌｅ Ｂａｒ＝ ２０ μｍ
２.３ 致病性测定
接种 １５ ｄ后叶片开始发病ꎬ在接种点附近出
现幼芽坏死表现为顶枯症状ꎬ叶片叶柄干枯ꎬ易脱
落ꎮ 随病情发展ꎬ幼芽干枯坏死ꎬ无新叶长出ꎮ 对
发病幼芽或其附近干枯叶片的病菌再分离证实了
分离物的致病性ꎮ 无菌菌饼接种的对照叶片未发
现上述症状ꎬ幼芽部位有新叶长出ꎮ
２.４ 序列比对分析
经在 ＧｅｎＢａｎｋ 中进行 Ｂｌａｓｔｎ 分析ꎬ结果表明:
分离物 １３６５７所测 ＩＴＳ 序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中可可花
瘿病菌 (ＧＵ３６３５３７、 ＨＭ７７５３２６) 序列相似性为
９９％(５５７ / ５５９)ꎬ２８Ｓ 序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中可可花瘿
病菌(ＨＭ０４２４１２、ＧＵ０７５８６４)序列相似性为 ９９％
(８８９ / ８９１)ꎬＥＦ 序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中可可花瘿病菌
(ＨＭ０５４０６２、ＨＭ０５４０６１)序列相似性为 ９９％(５７５ /
５７８)ꎬ ＴＵＢ 序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中可可花瘿病菌
(ＨＱ００８９３６、ＨＭ０５４１００、ＨＭ０５４０９９)序列相似性
为 ９９％(３６６ / ３６８)ꎮ
基于 ＥＦ(图 ３)和 ＴＵＢ 序列构建的系统进化
发育树表明ꎬ１３６５７属于 Ａ. ｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ分支ꎬＢｏｏｔ￣
ｓｔｒａｐ支持值分别为 １００和 ９９ꎮ
Ｆｉｇ. ３ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ (ＮＪ) ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ
ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ １３６５７ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｐｅｃｉｅｓ. Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｕｂｇｌｕｔｉｎａｎｓ ａｎｄ
Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｃｉｒｃｉｎａｔａ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｏｕｔｇｒｏｕｐ. Ｎｕｍｅｒａｌｓ ａｔ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｎｏｄｅｓ ａｒｅ ｂｏｏｔｓｔｒａｐ ｖａｌｕｅｓ ｆｏｒ
１ ０００ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ５０％. Ｂｒａｎｃｈ ｌｅｎｇｔｈｓ ａｒｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｔｏ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｃｈａｎｇｅꎬ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｃａｌｅ ｂａｒ ｂｅｌｏｗ ｔｈｅ ｔｒｅｅ.
１１３
植物病理学报 ４４卷
３ 讨论
本研究采用形态学特征结合序列分析和致病
性测定的方法ꎬ准确截获鉴定了来自日本进境罗汉
松种苗上的可可花瘿病菌ꎮ 形态学观察结果表明
该菌具有可可花瘿病菌无性型典型的形态特征ꎬ如
能够产生两种类型分生孢子ꎬ多隔大型分生孢子明
显大于镰刀菌属其他种类大型分生孢子ꎬ不产生厚
垣孢子等ꎬ人工培养难以产生有性态ꎮ 序列测定表
明该菌株与 ＧｅｎＢａｎｋ中的多条可可花瘿病菌序列
相似度极高ꎬ采用 ｒ￣ＤＮＡ 序列分子标记ꎬ如 ＩＴＳ、
２８Ｓ序列ꎬ与其近似种种间序列差异较小ꎬ难以有
效区分ꎬ而 ＥＦ和 ＴＵＢ序列则能够进一步对该菌进
行有效划分ꎮ 本研究根据 ＥＦ 和 ＴＵＢ 序列构建的
系统进化发育树也支持将分离物 １３６５７ 划分在可
可花瘿病菌分支ꎬ从分子水平进一步确认了形态学
结果ꎮ 对于该病菌的种类鉴定可以在利用ｒ￣ＤＮＡ
序列分子标记初步鉴定基础上ꎬ再进行ＥＦ和 ＴＵＢ
序列分析ꎬ以确保鉴定准确性ꎮ 同时ꎬＥＦ 和 ＴＵＢ
序列中多个碱基位点的差异也为建立在此基础上
的该病菌的快速检测方法提供了可能ꎮ 同时致病
性测定结果表明该菌株能够侵染罗汉松幼芽ꎬ造成
顶枝枯死以及叶片干枯ꎮ 以上结果表明所截获病
菌为可可花瘿病菌ꎬ且具有一定致病性ꎬ能够造成
罗汉松顶枯病的发生ꎮ
国家质检总局动植物检疫监管司已于 ２０１３ 年
５月 ３１日向相关口岸发布了警示通报(质检动函
(２０１３)１５０号文件)ꎬ并通报日本方面ꎬ要求调查原
因并采取改进措施ꎮ 此次的截获表明ꎬ从日本进口
罗汉松种苗具有一定风险ꎬ应继续加强对该类进境
种苗上检疫性有害生物的检疫工作ꎬ以防范其危
害ꎮ 本研究属全国首次从日本进境种苗中截获该
病菌ꎬ也是国际上首次报道该病菌能够造成罗汉松
顶枯病的报道ꎬ扩大了对该病菌寄主范围和地理分
布的认识ꎮ
参考文献
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责任编辑:李晖
２１３