全 文 ：一九八三年
(第三期 )
无 锡 轻 工 业 学 院 学报
J ou R NO A F T LH EwU l x I s NI T TU TEO F LI G H TI N
DU SR TY (
.急第四期 )
我国牛油果脂的甘油三醋组成测定
汤 逢 温 光 源
用银化硅胶薄层 层析— 胰脂酶催化水解方 法 , 测定 了牛油 果脂 的甘油三醋组成 。 牛油果是我国云 南引种的非洲的品种 。 同时测 定 了可 可脂及代可可 脂 F a n d o m
2 0 的甘 油三醋 组份以 资比较 。
样品脂肪经乳化铝柱 离析得到纯 甘 油三醋 , 在银化硅胶薄层上用正 己 烷— 乙醚— 甲醇— 醋酸 (7 9 : 2 0 : 1 : O。 0 5 , v v/ ) 溶 剂体 系分离成六 条谱带 。 从 各谱带回收的甘 油三醋 用胰脂酶将其水解成 日— 甘 油一醋 。 用 5% H CI 一 C H 3 O H 醋化脂肪酸成 甲醋 。 以 十 七 烷酸 甲醋为 内标物进行 气相 色谱法测 定 。 根据各谱带甘 油三醋 的
脂肪酸的种类与含量和胰脂酶水解而得 日— 甘 油一 醋的脂肪酸种 类与含量 。 可 计出本谱带中各种甘 油三醋 组成 。
试验结果表明 , 牛油 果脂的脂肪酸组成是由豆范酸 0 . 2% , 软脂酸 4 。 9 % , 硬脂
酸 42 。 4% , 油酸 47 。 2% , 亚油 酸 4 。 4% , 亚麻酸 0 。 2 % , 花生酸 O。 7% 。 有十 六种
不 同结 构的甘 油三醋 , 其中 5 3 : 2 。 3% , S Z U : 4 5 。 g % , S U : : 4 5 。 o % , U 3 : 6 . 5 % 。
牛油 果脂含日一 油酸二饱和 酸甘油三醋约 40 % , 比可可脂 中的少得多 , 而二 油
酸饱和 酸甘 油三醋约 42 %却比 可可脂的高出一倍 , 若 以 之代替巧 克力的全部可可 脂
不适 当 。 但 可 以作为制备代可 可脂的原料 。
引 言
我国对于油脂的甘油三醋组成测定尚未开展 。 有些油脂的脂肪酸组成虽然近似 , 但由这
些酸构成的甘油三醋的组成即可能有所不同 。 因此它们的物化性质与用途就可能 有 一 定 差
别 。 国外对甘油三醋的研究十分重视 。
我国种植可可很少 , 食品工业用的可可脂几乎全部靠进口 , 为此代可可脂资源的探讨是
有一定意义的 。 十几年前 , 我国云南省元江地区引种了 非 洲 山 榄 科 (S e tP ac e a e ) 的牛油树
( B u t y r o s p e r m u m P a r k i i k o t s e h y )
, 牛油果脂 ( S h e a b u t t e r )在非洲作为食用油脂 。 我们便
选择它作为研究代可可脂的可能性 。 为了进行比较 , 我们对可可脂和一种进 口合成的代可可
脂 F a n d o m 2 0 0 进行了测定 。
本文收到日期 1 9 83 年 8 月 10 日
I 5
研究油脂中甘油三醋组份限于分析手段 , 进展缓慢 。 1 9 2 7 年 , 于书 l id f c h l` ]首先 应 用 低
温分步结晶与氧化法相结合的方法测定油脂中的甘油三醋组 份 。 随 后 k a r t l , a `“ ! 的氧化—分部法 , D ut t o n[ 3 ]的逆流分布法在测定油脂的甘油三醋组份中用者较多 , 由 B ak e r 和W i卜
l ia m s山 设计 , H a m m o n d 等人 l5[ 用于甘油三醋结构测定的热梯度分部法来得到推广 , 用下
述的方法比它更好 。 L u e os 等人 少 ’ “ 1对金属离子 、 尤其是银离子与不饱和烃类之间形 成 络
合物的研究 , 导致 B ar r e t 等人 〔’ ” l 把银化硅胶薄层层析技术应用到甘油三醋的分离与测 定
并得到推广 。 目前最好的分离甘油三醋的方法的高效液相色谱法 。 随着生物化学家们对胰脂
酶的研究 , M a t t s o n t ’ 4 1于 1 9 5 2 年观察到胰脂酶可以水解甘油三醋 分 子 a ( a 产 ) 位 置 的脂肪
酸 , 而对 日位置的脂肪酸则不起作用 。 D u t t o n S a v a r y [` 5 ’ 和 M a t t s o n 等人 [ ’ 6 , 用胰 脂酶 水
解研究了许多天然油脂的甘油三醋 , 并分离测定了 日— 甘油一醋的脂肪 酸 组 成 。 用 此 法
G un
s t o n C , 「`了’ ` 8 ’ B la n k[ ` ” ’ “ ” l 等对很多植物与动物油脂的甘油三醋结构进行测定 , 结 果 与
M or le y 等人 俘 ` I 用合成的甘油三醋作为研究对象所测得的结果相符合 。 本文对牛 油 果 脂甘
油三醋组份研究采用的方法是 I U P A C[ 2“ l介绍的氧化铝柱层析纯化样品及酶促水 解 方 法 ,
B a r r e t t t
` ” l 、 B l a n k [` ” ’ 2 0 1、 B e z a r d 等人 L2 3 1介绍的银化硅胶薄层层析分 离 方 法 , L u d d y f2 4 1
介绍的水解产物的分离方法 , S t of fe ls s ] 的甲醋化法 , I U P A C[ 绷 的气相色谱法 , 以及 B la -
n k l
’ ” l的计算方法 Q
实 验
实 验 材 料
纯净甘油三醋 : 用正已烷法 〔川 分另lJ萃取牛油果和可 可豆中的脂肪 。 萃取物用旋转式真空
薄膜浓缩器在微弱氮气流 、低于 50 ℃ 的条件下蒸去溶剂 。 将牛油果脂 、 可可脂代可 可 脂 F an -
d o m 2 0 通过氧化铝柱 , ` 2 ” l 层析纯去除非甘油三醋物 , 样品的熔点列于表一 。
表一 种仁含量 及其脂肪熔点
(℃ )
样 种仁含油量
(% ) 化 后
一脂.果
可
由牛可
代可可脂 F a n d o u 2 0 0
32
。
1~ 3 6
。
0
2 6
。
7~ 3 3
。
2
2 7
。
3~ 3 0
。
0
3 1
。
2~ 3 4
。
6
2 7
。
8~ 3 4
。
5
2 9
。
0~ 3 0
。
5
9曰nJù匕口」
}
_
一适 _
果豆油可牛可
脂肪酸组成的气相色谱分析标准物月桂酸 、 肉豆栽酸 、 软脂酸 、 十七烷酸 、 硬脂酸 、 油
酸 、 亚油酸 、 亚麻酸 、 花生酸及山芋酸等十种脂肪酸的纯度为 90 ~ 9 % 。
水解用的胰脂酶是本实验室 自己制备的 , 酶的活力为 9 5 0 0 单位 /克 (经科学院北京 微 生
物研究所鉴定 )
硅胶 G ( A . R 。 ) 、 中性氧化铝 ( A o R . ) 、 硝酸银 ( A o R 。 ) 、 2, 、 7, — 二氯萤光素 ( A o R . ) 、无水硫酸钠 ( A . R· ) 、 无水碳酸氢钠 ( A · R· ) 、 氯化钠 ( A · R . ) 、 氨水 ( A · R . ) 、 浓硫酸 ( A · R· ) 、
乙醇( A · R , 95 % ) 、 正已烷 ( C · .P ) 乙醚 ( A · I之· ) 、 甲醇 ( A · R · ) 、 酷酸 ( A · R · ) 一石油醚 ( A · R · ) 、
氯仿 ( A o R · )都是国产试剂 。
实 验 程 序
全部实验程序见图解一
脂肪酸甲酉旨
杏
} 甲酉旨化
{一—
气相色谱分析
样 品 脂 肪
}氧化铝柱层析杏
廿 油 三 脂 混 合 物
银化硅胶薄层层析分离制备杏
各 i普带 甘 油 三 酉旨
,’5 % H CI 一甲醇 ” 甲月日七杏
T G 的脂肪酸 甲醋
}气相色谱
L一一。 日 ,r G人I G 的脂肪酸组成
胰脂酶催化水解
咨
水 解 产 物 (混 合 物 )
T G + D G 十 M G + F F A
}硅胶薄层层析分离制备杏
日一 M G
}
“ 5% H C I一甲醇 ” 甲脂化杏
日一 M G 的脂肪酸甲酉旨
1…一里马色谱
计 算吝
一计 油 三 醋 组 成
图解一 甘油三醋结构组成分析过程
M G
: 甘油一酉旨
T G
: 甘油三酉旨
D G
:
一日油二酉旨
F F A
: 游离脂肪酸
1
、 月旨肪酸分析
包括油脂的脂肪的分析以及分离出的甘油醋中的与游离脂肪酸的分析 , 使用的气相色谱
法基本条件是一样的 。
油脂与甘油醋转变成甲醋采用 5% H 。卜 甲醇法 嘟 l , 以微量法醋化甘油三醋和游离脂 肪
酸。 在安瓶瓶中加入样品 5~ 20 m g , 干苯 l m l , 干燥的 5% H CI 一甲醇试剂 2一 3 m l , 氮气杆
去空气后封闭瓶口 。 在水浴中沸煮 2小时 , 冷却开瓶 , 加 3 m l 蒸馏水 , 充分混合后 离 心 分
离 , 取苯层用无水硫酸钠— 无水碳酸氢钠 ( 4 : IW /W ) 干燥 。脂肪酸甲醋的气相色谱分析用沪分仪厂 1 0 型气相色谱仪 , F ID 检测器 , 固定相为 15 %
P D E G S
, 涂于 G a s C h r o m Q ( 6 0一 8 0 目 ) 、 Zm x 中4 m m 的 U 型不锈钢柱 。 汽 化 、 层析 、
检测温度分别为 2 2 0℃ 2 7 5士 0 。 5℃ 2 0 0 oC , N Z , H : , O : 的流速分别 是 4 1。 5 , 凌3 与 4 5 0 m l /分 。
用 已知的混合脂肪酸甲酸定性 。 定量用的内标为 C 17 : O甲醋 , 峰高 x 半峰宽得 面 积 , 操 作
程序同 IU P A C郎 l法 。 牛油果脂 , 可可脂与代可可脂 F a n d o m 20 0 的脂肪酸组份见 表 二 。
表二 牛油果脂 , 可可脂与代可可脂 F a n d o m 20 0
的脂肪酸组份 (克分子% )
饱 和 脂 肪 酸
1 4
: 0 1 6 : 0 1 8 : 0 2 0 ` 0 2 2 : 0 总计 1 8 : 1 1 8 : 2 1 8 : 3
牛 油 果 脂 0。 2 理. 9 1 4 2 . 4 0。 7 { 4 8 。 2 一 4 一 4 0。 2可 可 脂 微量 2 5 · 7 一3 6 · 2 0。 3 微量 6 2 。 3 4 7 。 2 1 2 。 5 微量代 可 可 脂 0 。 4 ` 5· 5 …3` · ` 4一 4 微量 5 7 。 4 3 5 · 2 1 2 。 0 0 。 2
F a n d o m 2 0 0 ` o · 4 」
按照 IU P A C[ 26] 法的介绍 , 气相色谱固定液浓度在 15 %时的层析温度宜在 18 5℃ 左右 ,
保由时l司〔分脚)
图 1 十种脂肪酸 甲醋混合物的 G L C 图
条件 : 1 5% P D E G S一 G a s C h r o m Q ( 6 0 ~
5 0 目 ) , Z m x 4 m m U 型不锈钢柱 , 层析温
度 1 7 5士。 。 s c , 载气 ( N Z ) 4 2 。 s m l /分 (平均
流速 ) , F I D 检出 , 纸速 1 0 m m /分 。
层析柱内径 4 m m 时载气流 速宜 在 40 ~
6 o m l/ 分 。 我们以 4 1 。 5 m l/ 分的载 气 流
速 , 层析温度为 1 8 5℃ , C , 2 : o 和 C , 4 : o
靠得很扰 , 且 C , : : 2和 C Z。 : 0的分离效果
较差 。 温度在 17 5士 0。 5℃时 , 既可以使
C : 2 : o
、
C ; 4 : 0明显分开 , 也可使 C ,。 : 2和
C Z。 : 0 较好地分离 , 并 可避 免 C : 。 : 3 和
C
Z: : 0峰形增宽过大 。 从 C , : : 0 、 C : 4 : o 、
C
; 4 : 0
、
C
,。 : 0 、 C , : : 0 、 C l : : 0 、 C , , : 1 、
C ,: , 2
、
C : : , 3
、
C 2 0 : o
、
C 2 2
: o的甲醋 混合物
的色谱图 (图 1) 看出 ,本试验条件对这十
种脂肪酸甲醋混合物的分离效果良好 。
十种脂肪酸甲醋的保留时间列于表三 ,
死时间的计算 按 照 P o t e r s o n 和 H a f e r
K a m p 等人提出的 方 法 48[ ` 。 以校 正 保
留时间的对数为纵坐标 , 碳原子数为横
坐标作图 , 得到一条直线 (图 2 ) , 表明
G E C操作条件是稳定的 。 定量方面 , 由
于待测样品中的脂肪酸既无短碳链酸存
在 , 也无取代酚存在 , 故无需作校正因
子的测定。 按 “ 峰面积 二 `峰高火半峰宽 ”
用归一化法计算图组成酸的百分数。
表三 脂 肪 酸 甲 脂 的 保 留 时 间
月旨 肪 脂
C
工2 :0
1
, 5 0 ,’
C
1 4 : 0
2 , 2 0 扩
C
2 6 : O
4 , 1 7 l’
C
x: : O
5 , 2 9 1,
酸
C
l , : 0
甲
C
x s : 1 C Z:
: 0
7 , 4 l’
一 Z t n )
6 , 2 4 1,
8 , 2 1 l’
C
l s : 2
1 0 , 4 2 ,’ 2 0 , 2 9 1,
二 ( t 。 + ; x t : 1 _ ; 一 t 。 2 ) / ( t
。 十 ; X t
n _ ;
1 , 10 ,’ 1 , 4 0 , 3 , 3 7 1, 4 , 4 9 ,
二 4 O l’ n = 1 6 ,
t
, R 7 , 4 1 , 1 0 , 0 2 ,
C
1 5 : 3 C Z o
: 0
1 1 , 5 0 1, 13 , 4 8 ,
二 4 1
1 1 , 10 ,’ 1 3 , 0 8 ,
RM
小L今
1 9 , 4 9 1,
表中 t R一保留时间 , t M一死时间 , t, l:一校正保留时间
/
.
/
K7.z
儿t .1。劝口
/
/
O口奋才卜.o
口’`
}
,
+.0 } /
2 0 之么糕坎
阁2 .脂助酸甲瀚 函时}勿的棘万彻玲环
畔畔而仍喃月才螂欲却
图 3 牛油果脂的脂肪 酸 (甲醋 )气相 色谱图
有 C ; 4: 0, C , 6 : o , C ; : : 0 (内标 ) 、 C : : : 0 , C ; , : i , C : , : 2 , C Z。 : 0 , C : 。 : 3。
1 9
图 3、 4分别是木试验条件下测得的牛油果脂和可可脂的脂肪酸甲酮气相 色谱图 。 从图 3
得知牛油果脂有 C, 、 : o 、 C : 。 : o 、 C l , : o 、 C 工 , : 1 、 C ;。 : 2 、 C , , : 3 、 C : 。 : o 一匕种 )j旨jJ旨酸 。 了可一 ,“丁脂 ( I至} 4 )
有 C , ; , o 、 C ,。 : 0 、 C : s : o 、 C l , : o 、 C , 8 : 1 、 c , , : 2 、 e , , : 3 、 e : 。 : o 不日 c : : : 。 八种脂肪酸数据歹IJ于表二 。
自: ’ 口
图 4 可可脂肪酸 ( 甲醋 ) 气相 色谱图
有 C , ; : 0 , C , 。 : O , C , ? : o , ( l匀标 ) 、 C , , : o , C ,。 : i , C , , : 2 , C Z。 : o , C : , : 3 , C 2 2 : o 。
2
、 一甘油三醋结构分析
甘油三醋结构分析过程如图解一所示 。 用氯仿稀释经氧化铝柱层析纯化了的廿油三酪混
合物 , 薄层层析后 , 喷以显色剂 , 在 U V 灯下显出的各谱 带 分 别 刮 下 , 用 乙 醚— 甲 醇( 9 5 : 5) 混合溶剂萃取 。 加 2一 4 1n l0 。 SM 的氨水到萃取液 , 混合后分离 , 再用 3 x 1 0 m l 蒸馏水
洗三次 , 最后用无水硫酸钠干燥 。 将此萃取物一部分甲醋化 , 测定其脂肪酸组成 , 另一部分
加入一定数量的胰脂酶进行酶催化水解 。 水解产物用硅胶薄层分离 , 将其中的甘油一酷谱带
直接刮入安瓶瓶中甲醋化 。 测定甘油一醋的脂肪酸组成均以十七烷酸作为内标物 。
甘油三醋结构的确定 , 首先根据各谱带甘油三醋总的脂肪酸组成 (从饱和度不同分为饱
和 ( s ) 、 一烯 ( M ) 、 二烯 ( D ) 、 三烯 ( )T 四类 )并按各类甘油三醋在银化硅胶薄层上的洗脱顺
序 〔川 , 确定每谱带可能存在的甘油三醋 , 用 lB a n k 等人 〔’ ” 〕的计算方法 , 由各谱带甘油三醋及
水解得到的日一甘油一醋的脂肪酸组成奋分别计算出各谱带中存在的各廿油三醋的含量 。
银化硅胶薄层层析分离甘油三醋采用 lB a n k 等人 t ` ” 1的方法 。 用 5 % 的硝酸银水溶液将
硅胶 G 调成 45 % 浓 度的浆状物 , , 涂于 20 又 2 0c m 的玻璃板上 , 凉干后 , 80 ℃ 烘 1小时 , 在
在 12 0℃ 下活化 1 小时 , 薄层厚度约 0。 4 m m 。
以线状点样法将 10 %甘油三醋的氯仿溶液点于薄板上 , 在容闭层析缸内 , 用正已烷—乙醚一一甲醇— 醋酸 ( 7 9 : 20 : 1 : 0 . 0 5v / v) 混合溶剂上行法展开 80 分钟 , 展开的薄 层 用氮气吹干 , 喷以 O。 2 %的 2产、 7产— 二氯萤光素的乙醇 ( 95 % ) 溶液 , U V 灯下检出各谱带 。胰脂酶催化水解甘油三酷采用 I U P A C畔 l 的水解条件 , 在 5m l的离心试营中加入约 20 m g
月油三醋 , 4 m g 胰脂酶 , i m l l . 刀M 的 N H 4C I/ N H ` O H ( p H S。 0 ) 缓冲 溶 液 , o 。 o s m l2 2% 的
C a 1C
2 水溶液 、 O。 l m lo 。 1% 的胆酸钠水溶液 。 放入 40 ℃ 水浴中温热一分 钟 , 快速振荡 1 分
30 秒 , 加 0 . 5 , n l6 N 的盐酸和 Zm l 乙醚 , 激烈振荡约 1分钟 , 离心分离 , 吸出上层乙醚萃取
液 , 供层析分离甘油一醋用 。
一i 硅胶薄层层析分离水解产物的甘油一醋采用 Ld ud y等人 川 ]的 方法 ` 样品 浓 度 为 5%
水产物的氯仿溶液 。 在厚约 o .m 4m的硅胶 G薄层上 , 以后油醚— 乙醚— 醋酸 (6 。 : 40 : 1。 6
v/ v) 作展开剂 , 操作同甘油三醋的薄层分离 。
水解反应时间 , 酶 /底物比的确定。 水解反应时间的确定 , 是翔良物与酶的量固定 , 分别测出不同反应时间得到的游离脂肪酸含量 , 测定酶 /底物比时 , 固定甘油三醋的量和水解
时向, 分别测定不同酶用量情况下水解得到的游离脂肪酸含量 。
水解度 (%卜 ~ 2哪释怨爵纂瞥娜一 1。。%其他操作条件按 L u d d了 的方法 。
结 果 与 讨 论
l
、 银化硅胶薄层层析分离甘油三醋
为选择薄层层析的展开剂对 B ar r o t 等人 〔’ “ 1和 B。 : ar d 等人 3zI ]的实验条件作了比较 ,
观察到后者的溶剂体系在分离效果 (可得到六个斑点 ) 和展层时间 (约 80 分钟 ) 方面 均 优于
前者 。 于是 , 本试验选择了 B cz ar d 3z[ l 的正已烷— 乙醚— 甲醇— 醋酸 ( 7 9 : 20 : 1 : 0 . 05v / v ) 体系 。 表四 不同 .、 样量 。石层析谱 带 ,匕较
八U一工`!卞.未.
:
ō一ó J土..卞上4t weT.1卫nU一十.下丰· tó性月一二.卜牛注月止.` J Jé J
在分离制备薄层 色谱中 , 为了提高制备
能力 , 除了对吸附剂的有效吸附表面积 , 薄
层涂布的均匀性有较严格的要求外 , 还要考
虑点样形式及点样量 。 我们分别 对 5 、 1 0 、
15
、
2 0
、
2 5
、
3 0
、
4 0
、
5 0 , n g点样量作了 比
较 , 结果见表四 。 试 .验表明 , 一由于样品中高
含量组份与低含量组份的百分含量差别太悬
殊 , 增加点样量 , 出现的谱带数虽然有所增
加 , 但高含量组份之间 , 分辩率 却 显 著 下
降 , 甚至完全无法分辩 。 为此 , 我们采取了
点
1 0 1 1 5
样 量 ( n i g )
2 。 一: 5 一3 (二J
谱带
十+-H+
一万 ` …’ … 一{万万一}“
{
十 …十 , : 十 十 十十 !
3
; 十
}
十 , 十 一卜 , 十+ {
兰 } ` } 十 1 十 …+ …“ … 一 + 一_一 6 { { } { {
图 5
条件 :
2 0~ 2 2℃ ,
2 0 m g 点杆重的 色谱图 图 6 3 0 m g 点样量 的色谱 图
1 0% A g N O 3 /
5 11左e a g o 1 G ,正巳烷一乙醚只甲醇一醋酸 ( 79 : · 2 0 、 1。 : 0 . 0 5 , / v ) ,
上行法展层 80 分钟 。 , I L 一
2 0m g和 3 0m g两种点样量 , 见谱图 5 和图 6 , 以前者测定第 2 、 3 两条谱带 , 以后者测定 1 、
4
、
5
、
6 四条谱带 。
从分离谱带硅胶上洗脱类脂我们对通常采用的三种方法 [` ” ’ “ “ ’ 301 作了比较 , 见表五 , 吸
取各法之优点 , 由于氯仿比量大于水 , 水洗分离操作麻烦 , 而且萃取物损失 的 几 率 大 。 乙
醚— 甲醇的溶剂强度大于 乙醚 , 有利于不饱和醋的洗脱 。净化萃取物除去硅胶与萤光显色剂用氨水比水更有效 , 操作也比柱层析法简便 。 为此 , 本试验采取了乙醚— 甲醇 ( 9 5 : 5 )作萃取剂 , o 。 SM 氨水为净化剂从硅胶上回收甘油三醋 。
表五 几种从硅胶吸附 剂上回收甘 油三酮 的方法比较鲜 〔3 0〕 〔1 9 ) [ 2 0〕 本 实 验献文法\项 目 一 \ 戈 …
萃 取 溶 剂
有 机 相 比 重
净 化剂与操作
氯仿一甲醇 (2 : l)
> 水
o
.
SM 氨水 ,水洗
乙 醚 乙醚一甲醇 ( 95 : 5) }乙醚一甲醇 ( 95 : 5)
< 水 < 水
水洗 , 柱层析 水 洗
< 水
0
。
SM 氨水 ,水洗
2
、 酶促水解及水解产物的分离
胰脂酶催化水解甘油三醋的 a( a, )脂肪酸有专一性 , 而不同于其它脂肪酶 , 综合 M at st o n
和 B e e k [’ “ 、 B r o e k e r h o f f [34 1、 M a t t s o n T35 1及 S a v a r y 等人 t36 ]的研究结果 , 胰 脂 酶 催 化水
解甘油三醋的基本反应过程可概括如图解二 。 他们的试验还证明 , 水解产物中少 量的 a( a 尸)
— 甘油一醋和 a 、 a, — 甘油二醋 , 是 日位置的脂肪酸向 a ( a 尹 ) 位置转移的结果 。
「 一 一 一 一 一 一 二 一 一 一一 门
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图解二 、 胰脂酶水解甘油三醋的步骤
(说明 : 主要反应步骤和产物在虚线矩形内。 a 、 a, 、 日分别代表相应位置上的
脂肪酸。 脂解出的游离脂肪酸来表示出来 。 )
由于 D u t t o n 及 Iv e r s o n 等人 ( 3了一 40 ),研究表明可可脂中的甘油三醋 7 5%是 P O P 、 P O S 和
5 0 5
, 于是 , 我们便以银化硅胶薄层分离可可脂时谱带 2 (见表七 ) 的甘油三醋作为验证胰脂
酶位置专一性的底物 。 水解后 , 分别测定水解产物甘油一醋的脂肪酸和水解下的 游 离 脂 肪
酸 。 试验结果表明 , 水解之前 ( 图 7一 a) , 甘油三醋的脂肪酸有软脂酸 (峰 l ) 、 硬脂酸 (峰 3 )
和油酸 (峰 4 ) , 水解产物甘油一醋的脂肪酸 (图 7一b) 只有油酸 (峰 4 ) ; 而水解下的游离脂
肪酸 (图 7一 c) 只有软脂酸 (峰 1 ) 和硬脂酸 (峰 3 ) 图中峰 2 是加入的内标物 1C 7 : 。 酸 。 由此可
见 , 我们使用的方法充分体现了水解 a ( a 尸 )脂肪酸的专一性 。
c
, 解翩砷啊绷 , 娜 一喊淤砷体解询傅肪朋滩司
: , 甘琦二葫嘛砌
崎痛筋暇
图 7 底物水解前后 的 G L C 图
a 。 SM S 含量达 94 % 以 上的甘油三醋 (水解前 ) 的脂肪酸 G L C 图 ;
b
。 水解产物甘 油一醋 (M G )的醋肪酸 G L C 图 ,
c 。 水解产物游离脂肪酸 ( F F A )的 G L C 图 。
为了使 日一脂肪酸转移到 a 位降至最低限度使产物日一甘油一醋的含量达到最高 ,除了反
应体系的电解质浓度 、 钙离子浓度 , 胆盐浓度 、 p H 值和温度控制在适宜的条件之 外 , 水 解
反应时间以及酶 /底物比是很重要的二个因素 。 本试验用酶活为 95 0 单位 /克胰脂酶 丙 酮粉
催化水解甘油三醋时 , 测得对于 5 ~ 20 m g 重量的底物最适酶用量约为底物的 20 % 。 其 最 适
水解时间约 1分 20 秒至 l 分 30 秒 , 以减少 日一甘油一醋异构 a一 甘油一醋同时观察到酶 /底
物比在 5一 2 0%范围内对水解度影响非常大 , 超过 25 % 则影响比较小 。
胰脂酶水解后的液体中除含甘油一醋外还有甘油二醋与未反应的 , 不论脂肪酸碳链长短
及不饱和程度差别的大小 , 均可在硅胶吸附剂上按甘油醋分子中的经基数目不同而被层析分
离 件` 一魂5 1。 虽然水解产物中的甘油一醋有 a ( a 尹)一甘油一醋和 日一甘油一醋两种异 构 体 , 但
从水解历程可知 , a( a, )一异构体是 由 日一异构体异构化而产生的 。 因此 , 分离水解产物时 ,
无需将 a ( a 尹 ) 和 日一甘油一醋异构体分开 。 我们采用 L u d d尹 2魂1的方法 ,层析油脂结果 (图 8 )
与 L u d d y[ “ d l 和 lB a n k[ ` ” ] 的结果一致 。 对照空 白试验 (图 9 ) 以及酶水解纯甘油三醋层析的
图谱 (图 10 ) , 得知图 8 的七条谱带 。 虽然本试验无标准甘油二醋和甘油一醋去验证第五 、 六
两条谱带 , 但根据 B l a n k t ’ 。 ] 和 L u d d y I2 4 ]指出 R , 值 是 按 T G > F F A ) D G > M G 递减的 ,
图 8 酶促水解产物的分离 C T L圈
1一溶剂前沿 , 2一 T G ; ` 3一污染伽 4一 F F A , 5一 D G
6一 M G , 7一原点。
图 9 晦水解空白试验的 T七好 图
1一溶剂前沿 ;
2一污染物 ,
3一原点 ,
图 10 . 酶水解纯甘油三酣 的 T L C 图
1一溶剂前沿 ; 2一 T G ; 3一污染物 ;
吐一 F F A , 5一 D G , 6一 M G ; 7一原点 。
一图 8~ 10 、 胰脂酶催化水解甘油三酣声物的硅胶薄层色谱图条件 : 石油醚
( 3 0一 6 0 0 )二乙醚一醋酸 ( 6 0 、` 。 : 1. 6) , 时间 4 0~ 5 0分钟。
“ 卜 一 ` { ’
本试验条件与他们相同口 G 和 F歼 的洗脱顺序也和上述顺序吻 合 , 同 时 , “饭G 比 DG 多一个游离经基 , 虽然 M G 与硅胶的吸附作用要比 D G 大 。 因此可推断出第五条是甘油二 醋 :,
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第六条是甘油一醋 。 本试验测定了相同条件下的六块色谱图上各水解产物的 R, 值 ,结果见表
六 。 各平行试验的标准偏差均小于 o 。 02 。
3
、 各谱带甘油三醋的定性
牛油果醋的甘油三醋在银化硅胶薄层上分离成六条谱带 , 同样条件下 , 可可脂 、 代可可
脂 F a n d o m 2 0 分别分离成五和六条谱带 。 我们采用 B c z ar d[ 231 介绍的内标物用甲醋 ( C ;。 : 。
酸甲醋 ) 比用甘油三醋 (三癸酸甘油醋 ) 给出甘油三醋含量要准确的方法 , 测出各谱带上甘油
三醋的百分含量 , 见表七 。
表弋 各谱带义 甘油 二喃的百方言量
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3 3 3 (这里的 0 、 1 、 2 、 3 、 分别表示脂肪酸是饱和酸 、 油酸 、 亚油酸和亚麻酸 ) 。 B l a n k
20[ ]和 B e z a r dt 31z 用不同的展层溶剂体系 , 证实了这一洗脱顺序 。 这些研究表明 , 廿油三醋
在银化硅胶薄层上的洗脱顺序并非简单地由甘油三醋分子总的不饱和度所决定 , 而与双键在
脂肪酸分子中的数目及其分布关系密切 。
根据 B l a n k [ , ” ’ “ 0 ] 、 B e 乙 a r d l , 3 1、 C o l e m e n 等人 [` 。 l的方法 , 本试验把饱和酸 、 油酸 、 亚
油酸 、 亚麻酸分别以 S 、 M 、 D 、 T 表示 , 将每一谱带的甘油三醋按二元~ 四元游合物处理 ,
因各谱带之间轻度的相互重叠 , 以及在 U V 下有时不能十分清晰而准确地描出靠得很拢的锯
齿形谱带 , 以使图谱带之间会有不同程度的相互污染 。 一般是一条谱带上常有一种甘油三酷
含量较高 ( 50 ~ 80 % ) , 因此 , 按 G u sn fo ne 等人 〔” 1的方法 , 根据各谱带上高含量的甘油三
醋的脂肪酸组成 , 确定出该甘油三醋的类别 。 主要类别确定之后 , 次要的则由该谱带 含量较
低的脂肪酸组成 , 同时参考其前后谱带情况而确定 。 表八 、 九 , 十 、 分别是牛油果脂 , 可可
脂 、 代可可脂 F a n d o m 20 0 在各谱带上甘油三醋与甘油一醋的脂肪酸组成 , 以及由这 些 数
据确定出的甘油三醋类别 。
表八 牛油果脂在各谱带上的脂肪酸组 成
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2 3
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5 0 8
。
0 3
6 4
。
0 5 6 5
。
2 6
1 1
。
4 2 2 5
。
Z e
1
。
0 3 1
。
13
甘油三酉旨类另吐
0 0 2
1 1 1
0 1 2
3 7
。
3 3 2 7
。
4
`
3
3 1
。
7 5 3 2
。
7 4
2 2
。
92 2 1
。
2 4
8
。
0 0 18
。
5 9
0 12
1 12
0 0 3
3 0
。
3 E t r
1 2
。
6 6 32
。
3 J
3 9
。
2 4 3 5
。
3 0
17
。
7 2 3 2
。
3 5
0 0 3
02 2
1 2 2
2 8
4
、 一片一油三醋组份的定量计算
确定出各谱带甘油三醋类另l J后 , 根据该谱带甘油三醋 与水解产物 日一甘油一脂 的脂肪组
成 , 技 lB a , l lt[ ` ” l 的计算方法算出其甘油三醋的结构组成 。 计算过程以牛油果脂的第 六 条谱
带为例叙述如下 :
表十 一
T G
牛油果脂第六 条谱师 的脂肪酸组成 ` (摩尔百 分数 )
M G
微克分子数 c 占
日位的
%
e
、
微克分子数 `
叮能类别的合计 T G
1 1 2
M M D
M D M
6 2 2
S D D
j ) S D
0 0 3
S S T
S T S
1 2 2
M D D
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.…0,目9é八U6尸O二J八09口11只à,曰八U.…1.ǔō了ùQUno Jl应9自, .ùOJ八noù片UQ六b].…Jg口一a八b,1OJ月任八O产0nDQénoQ口OLJ月任n一协了.…9é月口八曰ēU0,工11
1八Dg自尸a0%.5…2一óJ乃0工bl卜」,19自一óJ5MD
丁,
合 计
a . 取自表八 ;
b
。 甘油三醋的脂肪酸的摩尔百分数 ;
c 。甘油三醋的脂肪酸的微克分子数 ;
d
. 甘油一醋的脂肪酸摩尔百分数 ;
d
3 义 h
X 10 0
二 e X C
由表十 一中 日位置的三烯酸 ( ` r) 可 知
S T S 二
6
。
1 8
5
。
2 8 X 3
X O
。
9 9 件 In 0 1 二 0 . 3 9
贝11 5 5 ` r 二 0 . 9 9 卜 ,。 0 1一 S S T 二 O。 9 9 一 0 . 3 9 二 0 。 6 0 件 , 11 0 1
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二 2 。 9 3 一 ( 2 x o 。 6 0 + 2 x o 。 3 9 + 0 。 3 2 ) 二 0 。 0 6 3 卜m o l
由 T G 中的 M 得 : ZM Z D + M D : 二 4 。 35 卜 m ol · · · · · · · , · · · · · · · · · , · · · · · · … … ( 1)
由 ’ r G 中的 D 得 : M Z D + ZM D : + 2 51 ) : 曰10 。 46 卜n l 〔) 1
贝IJ M : D 十 Z M D : = 1 0 。 4 6 一 2 S D Z
= 1 0
。
4 6 一 2 ( 0 。 3 2 + 0 。 6 3 ) = 8 。 5 6 冬t m o l · · · · · · · · · · · · … … ( 2 )
由 ( 1) 式得 : M D : = 4 。 35 一 ZM : D … ,’ · · · · · . · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · … … ( 3)
将 ( 3 )式代入 ( 2 )式得 : M Z D 。 、 8 . 7 0一 4M ZD = 8 . 5 6 仁: n l o l
即 M ZD 二 8
。
7 0一 8。 5 6
3
= 0
。
0 4 7 仁Lm o l
因为 M ZD 含量 极少
(
0
。
0诊 7
6
。
2 4
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,
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3 O
低于最终结果表示的有效数字 , 可略去 , 于是 由 (3 ) 得 : M D D 十 D M D 二 4 . 35 . 件m ol 这里 ,
仅有 D M D 日位有 M , 由表十一中 p位的 M 得 : D M D = 2 . 0 5 卜二 0 11 .
于是 : M D D = 4 。 3 5 一 D M D = 4 。 3 5 一 2 。 0 8 = 2 。 2 7 卜m o l
由表七可知 , 该谱带总的甘油三醋含量是 1 . 06 % , 于是 :
% S D D 二 〔o 。 6 3 / ( + 0 。 6 3 + 0 . 3 2 + 0 。 6 0 + 0 . 3 9 + 2。 2 7 + 2 . 0 8 ) 〕
X l
。
0 6 % = 0
。
1 1%
% D S D = 〔0。 3 2 / ( 0 。 6 3 + 0。 3 2 + 0。 6 0 + o 。 3 9 + 2 。 2 7 + 2 . 0 8 ) 〕
X l
。
0 6% = 0
。
0 5%
,
% S S T = 〔0 。 6 0 / ( 0 6 3 + 0 。 3 2 + 0 . 6 0 + 0 。 3 9 + 2 。 2 7 + 2 . 0 8 )」
X 1
.
0 6% = 0
。
0 1%
,
% S T S = 〔0。 3 9 / ( 0 . 6 3 + 0 。 3 2 + 0 。 6 0 + 0 . 3 9 + 2 。 2 7 + 2 。 0 8 ) 〕
x l
。
0 6 二 0 。 0 7% ,
% M D D 二 〔2 。 2 7 / ( 0 。 6 3 + 0 。 3 2 + 0 。 6 0 + 0 。 3 9 + 2 。 2 7 + 2。 0 8 ) 〕
X l
。
0 6% = 0
。
3 8%
% D M D = 〔2 。 0 8 / ( 0 。 6 3 + 0 。 3 2 + o 。 6 0 + 0 。 3 9 + 2 。 2 7 + 2 。 0 8 ) 〕
X I
。
0 6% 二 O
。
3 5%
其他各谱带的甘油三脂组成均同理计算 。 表十二列出了 由此方法算得的牛油果脂 、 “抽 J
脂和代可可脂 F a n d o m 2 0 在各谱带的甘油三脂组成。 牛油果脂有十六种 , 可可脂有 十 一
种 , 代可可脂 F a n d o m 有十五种 。 它们最主要的甘油三醋都是 SM S 。
牛油果脂与可可脂及代可可脂 F a n d o m 2 0 的比较 。
以可可脂为基准 ( 1 。 0 ) 用 “ 牛油果脂 /可可脂 /代可可脂 F a n d o m 2 0 0” 的比值来表示 ,
从表二数据得知 , 它们的主要组成酸 C , 6 : 。 是 0 . 1 9 / i 。 0 0 / 0 . 6 0 , C ; , : 。 是 1 . 1 7八 . 0 0八 . 0 2 ,
lC
, : : 是 1 . 34 八 . 0 l/ . 15 ; 决定可可脂特性的主要甘油三醋 s M s 自表得知比值是 0 . 5 3八 . 0
/ 0
。
8 6 , 此外 S M M 是 4 。 9 4 / 1 . 0 0 / 2 。 2 4 。 可见在脂肪酸组成方面 , 代可可脂 F a n d o m 2 0 0 与
可可脂比较接近 , 而牛油果脂与可可脂却有一定差别 。 在甘油醋组成上也存在类似情况 。 兹
将本文所得的可可脂及牛油脂甘油三醋主要组成与 H i ld ic ht 等 (5 ’ ) 的数据列表于下 。
表十三 可可脂与牛油果脂的甘 油三醋组成 (摩尔% )
H i l d i t e h
5
。
7
4
。
1 0
4 9
。
0
4
。
3
本 文
4
。
9
4 2
。
4
0
。
7
4 7
。
2
4
。
4
0
。
2
文7235量
ùó八Où01汽Jg曰
木23脂肪 微酸重量 ( % ) H i l d i t e h
2 4
。
4
3 5
。
4
3 8
。
1
2
。
1
酸脂生油麻软花硬油亚
( 续 ) 表十 三
谨。 7 2 。 3
Q自八 U
:
O U,曰gJ月怪
、
I
J
月,ó匕`.1门J`任,土
甘油三醋 (摩尔% )
S 3
S M S P O S
P O P
S
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、
0 0
P O O
2
。
5
5 2
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。
5
1 8
。
4
l 2
8
。
4
7 4
。
6
9
。
9
U 3 3
.
0 5 6
.
5 2
本文还检出少量的 S : D , S M D , S D M , S D Z等来列入表中 。 牛油果脂的 S M S 从两个不
同数据都表明比可可脂的少得多 , 牛油果脂的 S M S 在 40 %以下 , 可可脂皆在 75 %左右 , 由于
牛油果脂中软脂酸比可可脂的少得很多 , 只有可可脂的万而硬醋酸却比可可脂多 , 因此 H i -
ld it
。 h 数据中牛油果脂的 s M s 完全为 S , O S t , 同样情况亦存在我们的数据中。 而可可脂 中
S
,
O S
t任为 P O S 。 的 1 8 。 4 / 5 2。 三者的熔点 S 。O S t > P O S t> P O P 。 但牛油果 脂 中 S M : 是 可
可脂的 2 。 5至 4 倍 , 因此牛油果脂熔点仍与可可脂相近 , 但由于甘油三醋组份相差很大 , 用
于巧克力上性质与可可脂不能相比 , 显得不适当 , 因此直接用牛油果脂于巧克仅任可代替很
少一部份可可脂 , 尚若经过加工改变甘油醋组成 , 增加一些 P O S t , 与 P O P , 减少一些 S ot
tS SM : 则可能制出品质较高的代可可脂 。 F a n d o m 20 0 组成可资参考 。
木研究中得到上海食品工业研究所陈芳烈工程师提供牛油果 、 代可可脂和部份有关资料 ,
无锡植物油厂提供可可脂 。 本院蒋雄图付教授 , 王荣民 、 沈若荃 、 裘爱咏讲师与姚金凤老师
等的支特与协助 , 深致谢忱 。
主 要 参 考 文 献
压1 1 口1 11飞d 1t e }i , ’ r . 1一 , 。 , 。 仁 a l . , J . C ! z e 「1: , S o e . , ( 19 7 2 ) 3 ] 0 6 。
仁2 〕 K a r t h : 、 , 人 . R 。 S 。 J入 O C S , 30 : 3 2 6 ( 1 9 5 3 ) 。
〔 3 〕 D u t t o n , I丁. j 。 , e t a l . , J A O C S . , 2 7 : 2 5 ( 1 9 5 0) .
仁 ,1 〕 B a k e r , C . A . , e t a l . , J . C h e r、 1 , S o e 。 ( L o n d o n ) 。 , 19 5 6 : 2 3 5 2 。
〔 5 ] M a g n u s s o n , J . l ) . , e t a l , , J A O C S , 3 6 : 3 3 9 ( 19 5 9 ) 。
〔 G 〕 I矛 u e a s , 工于. J . e t a l . , J . A m e r . C h e m . S 0 e . , 5 6 , 4 6 0 ) 1 9 3 4 ) .
〔 7 〕 E b e r z , W 。 F 。 e t a l 。 , i b i d 。 , 5 9 : 4 5 ( 1 9 3 7 ) 。
〔 8 〕 W 1 a s t e l n , g 。 , 。 t a ] 。 , i b i d 。 , 6 0 : 8 3 6 ( 19 3 8 ) 。
[ 9 〕 N 1e l i o l s , P 。 I廿 。 , i b i d 。 , 7 4 : 1 0 9 1 ( 1 9 5 2 ) 。
仁10 ] D u t t o n , !一 { 。 J。 , e t a l 。 , C l一e m 。 & I n d 。 , ( L o n d o n ) . ] 9 6 1 : 1 8 7 4 。
[ 1 1〕 d e V r i e s , l〕。 , i b i d 。 , 1 9 6 2 : 10 4 9 -
〔1 2〕 M o r r i : , I J 。 J 。 , i b i d 。 , 1 9 6 2 : 1 2 3 8 .
仁13 〕 B a r r e t t , C 。 B 。 , e t a l 。 , J人Q C S , 4 0 : 5 8 0 ( 19 6 3 ) .
[ 1 4〕 M a t t , o n , I犷。 于I 。 , e t a l 。 , J 。 N [一 t r i t i o , 4 8 : 3 3 5 ( 1 9 5 2 ) 。
〔1 5〕 S a v a r y , P 。 , e 十 a l . , B i o e h i , 12 , B i o p l一丁5 . 入 e t a 。 , 2 1 : 3 4 9 ( 1 9 5 6 ) ;
( 3 1
: 2 6 ( 1 9 5 6 ) ; 5 0
: 3 1 9 ( 1 9 GI
.
)
[ 1 6〕 M a t t s on , 「犷 . 11。 , e t a l . , J . B i o l 。 C h e l们 , 2 1吐: 1 1 5 ( 1 9 5 5 ) ; 2 19 , 7 3 5 ( ] 9 5 G ) .
〔 } 7〕 G u n s t o n e , 上’ . D . e t a l 。 , J A O C S , 4 2 : 9 5 7 ( 19 6 5 ) .
〔1 8〕 G u n s t o n e , F’ , D . , e t a l 。 , i b i d 。 , 4 2 : 96 1 ( 1 9 6 5 ) 。
〔1 9〕 B l a b k , M 。 L 。 , e t a l 。 , J 。 l) a i r y S e i , 4 7 , 4 8 1 ( 1 9 6 4 ) 。
仁2 0〕 B l a n k , M 。 L 。 , e t a l 。 , J A O C S , 4 2 : 8 7 ( 1 9 6 5 。
〔2 1〕 M o r l e y , N 。 H 。 , e t a l 。 , L IP i d s , 9 : 4 8 1 ( 1 9 7 5 ) 。
〔2 2 ) IU P A C : ,’ S t a n d a r d M e t h o d s f o r t h e A n a l y s i s o f 0 11 , F a t s a n d D e r i v -
a t i v e s , , 6 t h e d
。
2
。
2 1 0 ( 19 7 9 )
.
〔2 3〕 B e z a r d , e t a l . , J 。 C h r o m a t g 。 , 1 0 : 4 5 1 ( 1 9 7 2 ) 。
〔2 4 ] L u d d y , F 。 E . , e t a l 。 , JA O C S , 4 1 : 6 9 3 ( 1 9 6 4 ) 。
〔2 5〕 S t o f f e l , W 。 , e t a l 。 , A n a l 。 C h e n l 。 , 3 1 : 3 0 7 ( 19 5 9 ) 。
〔2 6〕 IU P A C : a s t a n d a r d M e t h o d s f o f t h e A n a l y s i s o f 0 11 , F a t s a n d D e r i v -
a t i v e s , , 6 t h e d
。
2
。
3 0 2 ( 19 7 6 )
.
〔2 7〕 IU P A C : a s t a n d a r d M e t h o d s f o r t h e A n a l y s i s o f 0 11, F a t s a n d D e r i v -
a t i v e s , , 6 t h e d
.
1
。
1 2 2 ( 19 7 9 )
.
〔2 8 ] K u k s i s , A 。 a F a t t y A e id s & G l y e e r i d e s , ( 19 7 9 ) P . 3 6 3 。
〔2 9〕 W i l l i a m H o r w i t z , O f f i e a l M e t s o d s o f A n a i y s i s o f t h e A s s o e i a t i o n o f
o f f i e a l A n a l y s i s e h e m i s t s
。 , , 2 0 t h e d
。
2 8
。
0 1 1 ( 19 7 5 )
。
〔3 0 ] R e e h , 1 , J。 N 。 e t a l 。 , I I P i d s , 5 : 3 5 3 ( 19 7 0 ) 。
〔3 1」 S a m P u g n a , J . e t a l 。 , i b i d . , 3 : 5 1 9 ( 1 9 6 9 ) 。
仁3 2 〕 M o r l e y , N . H 。 , i b i d 。 , 9 ( 7 ) 4 8 1 ( 1 9 7 5 ) 。
〔3 3〕 N o m a , A 。 , e t a l 。 , B i o e h i m 。 B i o P h y s A e t s , 2 2 7 : 1 0 6 ( 1 9 7 1 ) 。
〔3 4〕 B r o e k e r h o f f , H 。 , B i o e h i n , . B i o P h y s A e t a , 1 9 5 ( 2 ) : 2 9 6 ( 1 9 6 8 ) 。
[ 3 5〕 M a t t s o n , c t a l 。 , J . I J IP i d R e s . , 9 ( 1 ) : 7 9 ( 1 9 6 8 ) 。
〔3 6〕 S a v a r 手一 , P 。 & D e s n u e l l e , P 。 , B i o e h e m 。 B i o P h y s i e a A e t a , 2 1 : 3 4 9 ( 1 9 5 6 ) 。
〔3 7〕 D u t t o n , H 。 J。 , e t a l 。 , J A O C S , 3 8 : 9 6 ( 1 9 6 1 ) 。
〔3 8〕 B r o e k e r h o f f , } 一1 . , e t a l 。 , J . L i p i d R e s . , 6 : 6 2 ( 1 9 6 6 ) 。
巨3 9〕 I v e r s o n , J 。 L 。 e t a l 。 , J 。 八S S O C 。 o f f A n a l 。 C h e m 。 , 5 2 : 6 8 5 ( 1 9 6 9 ) 。
仁4 0 ] S a m P u g n a , J . , e t a l 。 , L I P i d s , 4 : 4 4 4 ( 1 9 6 9 ) 。
〔4 1〕 I交a u f m a n 。 H 。 P 。 e t a l 。 , I了e t t e , S e i f e n , A n s t r i e h m i t t e l , 6 2 : 10 1 4 ( 1 9 6 0 ) 。
〔4 2〕 M a l i n s , D 。 C 。 e t a l 。 , J A O C S , 3 7 : 5 7 6 ( 19 6 0 ) 。
〔4 3〕 M a n g o ld , H 。 K 。 , i b i d . , 3 8 : 7 0 8 ( 1 9 6 1 ) .
[ 4 4」 B 1a n k , M 。 L 。 e t a l 。 , i b i d 。 , 4 1 : 3 7 1 ( 1 9 6 4 ) 。
〔4 5〕 P r i v e t t , O 。 5 . , e t a l 。 , 丁b i d . , 3 8 : 3 1 2 ( 1 9 6 1 ) .
〔4 6」 I{ u k s i s , A 。 , a F a t t y A e id s a n d G l y e e r i d e s ” , ( 1 9 7 8 ) 。 P 。 4 .
〔4 7〕 韩广旬等人编 《 有机制备化学手册 》 上卷 ( 1 9 7 7) P . 2 6 9 。
〔4 8〕 吉林化学工业公司研究所编 《 气相色谱实用手册 》 1 9 8 0) P 3 7 4 。
〔4 9〕 C o l e m a n , M 。 H 。 , J A O C S , 3 8 : 6 8 5 ( 19 6 1 ) 。
「5 0〕 P o l l o e k , J . R 。 A . , e t a l 。 , a D i e e t i o n a r y o f O r g a n i e C o m P o u n ( l , , ( 1 9 6 5 ) 。
[ 5 1二 B a i l e y s I n d : z s t r i a l 0 11 a n d F a t P r o d u e t s , V o l . 1 , 魂t h e d 。 1 9 7 9 , P . 32 3。
3 3
T h e De tr em i n a ti o n o fC o m p o n en tT ri gl y
er eid e so f
C hi n e e sS h a eB
u t tr e
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T h e fa t ty a 。 id o s fth e tri gl y e erid e sa n d 日一 m o n gl er eid e sw r e。 d e t。 rm i n ed b y
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e o e o a b u t t e r q u a n t i t a t i v e l y a s w e l l a s q u a l i t a t i v e ly m a y b e u s e d a s a p a r t i a l
s u b s t i t u t e o f e o e o a b u t t e r o r a s a s u b s t i t u t i v e o f e o e o a b u t t e r P r o v id e d t h a t
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