全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４４(５): ５５２￣５５５(２０１４)
收稿日期: ２０１４￣０１￣０５ꎻ 修回日期: ２０１４￣０６￣１０
基金项目: 国家公益性行业(农业)科研专项(２０１００３０６４)
通讯作者: 张志宏ꎬ教授ꎬ博士ꎬ主要从事果树生物技术研究ꎻＴｅｌ:０２４￣８８３４２２６１ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｚｈａｎｇ＿ｓａｕ＠１６３.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１４.０５.０１５
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研究简报
利用 ＰＣＲ和 ＲＴ￣ＰＣＲ检测草莓镶脉病毒的比较研究
宋成林ꎬ 官春月ꎬ 代红艳ꎬ 刘月学ꎬ 马 跃ꎬ 李 贺ꎬ 张志宏∗
(沈阳农业大学 园艺学院ꎬ 沈阳 １１０８６６)
Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｖｅｉｎ ｂａｎｄｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ｂｙ ＰＣＲ ａｎｄ
ＲＴ￣ＰＣＲ　 ＳＯＮＧ Ｃｈｅｎｇ￣ｌｉｎꎬ ＧＵＡＮ Ｃｈｕｎ￣ｙｕｅꎬ ＤＡＩ Ｈｏｎｇ￣ｙａｎꎬ ＬＩＵ Ｙｕｅ￣ｘｕｅꎬ ＭＡ Ｙｕｅꎬ ＬＩ ＨｅꎬＺＨＡＮＧ
Ｚｈｉ￣ｈｏｎｇ　 (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０８６６ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｖｅｉｎ ｂａｎｄｉｎｇ ｖｉｒｕｓ (ＳＶＢＶ) ｉｓ ａ ｄｏｕｂｌｅ￣ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ ｖｉｒｕｓ. Ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙꎬ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ
ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ￣ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ (ＲＴ￣ＰＣＲ) ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＳＶＢＶ ｃｏａｔ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ (ｃｐ) ｉｎ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｙｏｕｎｇ ｌｅａｖｅｓꎬ ｏｌｄ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｆｒｕｉｔｓ ａｔ ｆｉｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ. Ｔｈｅ
ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｐ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｅｓｔｅｄ ｏｒｇａｎｓ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｉｔｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ｌｅｖｅｌ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｏｌｄ
ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｌｏｗｅｒ ｉｎ ｙｏｕｎｇ ｌｅａｖｅｓ. Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ＰＣＲ ｗａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＲＴ￣ＰＣＲ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＳＶＢＶ ｉｎ ｏｌｄ
ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ. Ｎｏｎ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｐｌｉｃｏｎｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｈｉｌｅ ｏｎｌｙ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｐｌｉｃｏｎ
ｗａｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｉｎ ＲＴ￣ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ. Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ａｖｏｉｄ ｔｈｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｐｌｉｃｏｎｓ ｉｎ ＰＣＲ
ｐｒｏｄｕｃｔｓꎬ ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ａｎｄ ｈｏｔ￣ｓｔａｒｔ Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ.
Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｎｏｎ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｐｌｉｃｏｎｓ ｉｎ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｈｏｔ￣ｓｔａｒｔ Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅꎬ ａｎｄ ｔｈｅ
ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ａｓｓａｙｓ ｗａｓ ｇｏｏｄ. Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｌａｉｄ ａ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ ＳＶＢＶ ｉｎ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ＤＮＡ ｖｉｒｕｓꎻ ＰＣＲꎻ ＲＴ￣ＰＣＲꎻ ｎｏｎ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｐｌｉｃｏｎ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０５￣０５５２￣０４
　 　 草莓镶脉病毒(Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｖｅｉｎ ｂａｎｄｉｎｇ ｖｉｒｕｓꎬ
ＳＶＢＶ)是一种双链 ＤＮＡ病毒ꎬ属于花椰菜花叶病
毒属ꎬ病毒粒子呈球形ꎬ直径为 ４５ ｎｍ[１]ꎮ ＳＶＢＶ
基因组全长 ７ ８７６ ｂｐꎬ包括 ７ 个开放阅读框ꎬ其编
码的蛋白分子量分别为 ３７. ８、１８. ３、１６. ６、５６. ０、
８１.１、５９.０和 １２.６ ｋＤａ[２]ꎮ ＳＶＢＶ 为半持久性蚜传
病毒ꎬ传毒媒介较多ꎬ有草莓瘤钉毛蚜、桃蚜、托马
斯毛管蚜等ꎮ 美国、加拿大、中国、日本、智利、巴西
以及欧洲的一些国家均有该病毒危害的报道[３]ꎮ
　 　 ＳＶＢＶ是 ＤＮＡ病毒ꎬ国内外学者多采用 ＰＣＲ
技术对 ＳＶＢＶ 进行检测ꎬ但也有以总核酸或总
ＲＮＡ 为模板ꎬ利用 ＲＴ￣ＰＣＲ 对其进行检测的报
道[４ꎬ５]ꎮ ＰＣＲ是植物病毒检测的常规技术ꎬ但是检
测结果易受植物体内病毒粒子浓度及核酸质量等
因素的影响ꎬ利用 ＰＣＲ 检测 ＳＶＢＶ 还存在稳定性
差等问题ꎮ 本研究探讨了 ＳＶＢＶ 外壳蛋白( ｃｏａｔ
ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ＣＰ)基因在草莓不同器官的转录本水平ꎬ
比较了 ＰＣＲ 和 ＲＴ￣ＰＣＲ 检测 ＳＶＢＶ 的效果ꎬ分析
了 Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶种类对检测效果的影响ꎬ以期
为制订 ＳＶＢＶ的分子检测标准提供参考ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 植物材料
　 　 用于病毒检测的植物材料为草莓(Ｆｒａｇａｒｉａ
　
　 ５期 宋成林ꎬ等:利用 ＰＣＲ和 ＲＴ￣ＰＣＲ检测草莓镶脉病毒的比较研究
×ａｎａｎａｓｓａ)品种‘幸香’的田间苗ꎬ保存于沈阳农
业大学草莓试验园ꎬ其中 １株为通过测序证明宿有
ＳＶＢＶ的植株ꎮ
１.２　 试剂
　 　 ＥｘＴａｑ ＤＮＡ 聚合酶、ＥｘＴａｑＨＳ ＤＮＡ 聚合酶、
ｄＮＴＰｓ、ＡＭＶ、ＲＮａｓｅ、Ｐｒｉｍｅ ＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ
均购自 ＴａＫａＲａ 公司ꎬＤＮＡ ｍａｋｅｒ 购自宝信公司ꎬ
ＲｅａｌＭａｓｔｅｒ(ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ)购自天根公司ꎬ其他药品
为国产分析纯ꎮ
１.３　 引物设计及合成
　 　 扩增 ＳＶＢＶ ｃｐ 基因引物:上游引物 Ｉ２:５′￣
ＧＡＡＴＧＧＧＡＣＡＡＴＧＡＡＡＴＧＡＧ￣３′ꎻ 下 游 引 物
ＳＭ２:５′￣ＡＡＣＣＴＧＴＴＴＣＴＡＧＣＴＴＣＴＴＧ￣３′ꎬ扩增片
段大小为 ２７８ ｂｐꎮ 实时定量 ＲＴ￣ＰＣＲ 所用引物为
ＳＶＢＶ ｃｐ基因扩增引物ꎮ 根据草莓肌动蛋白 Ａｃｔｉｎ
(ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ. ＡＢ１１６５６５.１)设计内参引
物:Ｆａ￣２￣Ｆ:５′￣ＴＧＴＧＣＧＡＣＡＡＴＧＧＡＡＣＴ￣３′ꎻＦａ￣２￣
Ｒ:５′￣ＣＡＧＧＡＧＣＡＡＣＡＣＧＡＡＧＣ￣３′ꎮ 以上引物均
由大连 ＴａＫａＲａ公司合成ꎮ
１.４　 核酸的提取
　 　 草莓总 ＤＮＡ、总 ＲＮＡ 的提取均采用改良
ＣＴＡＢ法[５]ꎮ
１.５　 ＰＣＲ反应
　 　 ＥｘＴａｑ酶 ＰＣＲ反应体系:在 ０.２ ｍＬ 离心管中
加入 ２ μＬ １０ ×ＥｘＴａｑ Ｂｕｆｆｅｒꎬ１. ６ μＬ ｄＮＴＰｓ(２. ５
ｍｍｏｌ / Ｌ)ꎬ０.２ μＬ ＥｘＴａｑ(５ Ｕ / μＬ)ꎬ引物 Ｉ２、ＳＭ２
各 ０.５ μＬꎬ １４.２ μＬ 去离子水ꎬ１ μＬ 总 ＤＮＡꎮ 扩
增程序:９４℃ ３ ｍｉｎꎬ９４℃ ３０ ｓꎬ５５℃ １ ｍｉｎꎬ７２℃ ２
ｍｉｎꎬ３５ 次循环ꎻ最后 ７２℃延伸 ５ ｍｉｎꎮ ＥｘＴａｑＨＳ
酶 ＰＣＲ反应体系:２ μＬ １０×ＥｘＴａｑ Ｂｕｆｆｅｒꎬ１.６ μＬ
ｄＮＴＰｓ (２.５ ｍｍｏｌ / Ｌ)ꎬ０.２ μＬ ＥｘＴａｑＨＳ 酶(５ Ｕ /
μＬ)ꎬ引物 Ｉ２、ＳＭ２各 ０.５ μＬꎬ１４.２ μＬ去离子水ꎬ１
μＬ总 ＤＮＡꎮ 扩增程序:９４℃ ３０ ｓꎬ５５℃ ３０ ｓꎬ７２℃
１ ｍｉｎꎬ３５次循环ꎻ最后 ７２℃延伸 ５ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ产物
在 １.５％的琼脂凝胶上电泳检测并照相ꎮ
１.６　 ＲＴ￣ＰＣＲ反应
　 　 在 ０. ２ ｍＬ 离心管中加入 ５ μＬ 总 ＲＮＡ、
０.５ μＬ随机引物 ( ９￣ｍｅｒ)、 ０. ５ μＬ ｏｌｉｇｏｄ ( Ｔ) １８、
１ μＬ ｄＮＴＰｓ(２.５ ｍｍｏｌ / Ｌ)、７ μＬ ＤＥＰＣ 水ꎬ ６５℃
变性 ５ ｍｉｎꎬ立即置于冰上ꎻ再加入 １ μＬ ＲＮａｓｉｎ、４
μＬ ＡＭＶ Ｂｕｆｆｅｒ、１ μＬ ＡＭＶ 反转录酶 ( ２００ Ｕ /
μＬ)ꎬ终体积 ２０ μＬꎬ混匀ꎮ
　 　 反转录程序为 ３７℃ ２.５ ｈꎬ７０℃ １５ ｍｉｎꎬ最后
４℃保温ꎮ 反转录结束后取 １ μＬ 进行 ＰＣＲ 反应ꎬ
反应体系中含 ２ μＬ １０×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ、１.６ μＬ ｄＮＴＰｓ
(２.５ ｍｍｏｌ / Ｌ)、０.２ μＬ ＥｘＴａｑ(５ Ｕ / μＬ)、引物 Ｉ２、
ＳＭ２各 ０.５ μＬꎬ用水补足至 ２０ μＬꎮ
１.７　 实时定量 ＲＴ￣ＰＣＲ
　 　 根据 Ｐｒｉｍｅ ＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ操作说明合
成 ｃＤＮＡꎮ 实时定量 ＲＴ￣ＰＣＲ 按照天根公司的定
量试剂盒操作说明进行ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 ＳＶＢＶ的 ｃｐ基因在草莓各器官的转录本水平
　 　 以测序证明宿有 ＳＶＢＶ 的草莓植株为试材ꎬ
利用实时定量 ＲＴ￣ＰＣＲ分析 ｃｐ基因在草莓各个器
官中的转录水平(图 １)ꎬ在草莓幼叶和老叶以及不
同发育时期(小绿果期、大绿果期、白熟期、转熟
期、红熟期)的果实中均能检测到 ＳＶＢＶ ｃｐ基因的
转录本ꎬｃｐ基因在老叶中的转录本水平较高ꎬ在幼
Ｆｉｇ. １ 　 Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＳＶＢＶ ｃｐ ｇｅｎｅ ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｇａｎｓ ｏｆ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｐｌａｎｔ
ＹＬ: Ｙｏｕｎｇ ｌｅａｆꎻ ＯＬ: Ｏｌｄ ｌｅａｆꎻ ＳＧ: Ｓｍａｌｌ ｇｒｅｅｎ ｆｒｕｉｔꎻ ＬＧ:
Ｌａｒｇｅ ｇｒｅｅｎ ｆｒｕｉｔꎻ Ｗｔ: Ｗｈｉｔｅ ｆｒｕｉｔꎻ ＴＲ: Ｔｕｒｎｉｎｇ￣ｓｔａｇｅ ｆｒｕｉｔꎻ
ＦＲ: Ｆｕｌｌ ｒｅｄ ｆｒｕｉｔ.
３５５
　
植物病理学报 ４４卷
叶中转录本水平较低ꎬ老叶中的 ｃｐ 基因转录本水
平是幼叶的 ４ 倍ꎮ 对于草莓果实的 ５ 个不同发育
时期ꎬ小绿果期 ｃｐ基因的转录本水平最高ꎬ白熟期
ｃｐ基因的转录本水平最低ꎬ但是二者的差异不显
著ꎮ 表明利用 ＲＴ￣ＰＣＲ技术检测 ＳＶＢＶ可行ꎬ叶片
和果实均可以作为样品取材部位ꎮ
２.２　 ＰＣＲ与 ＲＴ￣ＰＣＲ检测 ＳＶＢＶ效果比较
　 　 以测序证明宿有 ＳＶＢＶ 的草莓植株为阳性对
照ꎬ分别利用 ＰＣＲ 和 ＲＴ￣ＰＣＲ 技术分析 ７ 个样品
植株感染 ＳＶＢＶ情况(图 ２)ꎬ７ 个样品中有 １ 个检
测出 ＳＶＢＶꎬＲＴ￣ＰＣＲ 和 ＰＣＲ 检测结果完全一致ꎮ
多数样品的 ＰＣＲ 产物中出现非特异性扩增条带
(图 ２￣Ａꎬ泳道 ５ ~ ７)ꎬ而 ＲＴ￣ＰＣＲ 的扩增产物中未
出现非特异性条带(图 ２￣Ｂ)ꎮ
Ｆｉｇ. ２ 　 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ＰＣＲ ａｎｄ ＲＴ￣ＰＣＲ ｆｏｒ
ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＳＶＢＶ
Ａ: Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＳＶＢＶ ｂｙ ＰＣＲꎻ Ｂ: Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＳＶＢＶ ｂｙ
ＲＴ￣ＰＣＲꎻ Ｍ: １００ ｂｐ ＤＮＡ ｍａｋｅｒꎻ Ｌａｎｅ １:Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｐｌａｎｔꎻ Ｌａｎｅ ２￣８: Ｔｅｓｔｅｄ ｓａｍｐｌｅｓꎻＬａｎｅ ９: Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｐｌａｎｔ.
２.３　 Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶种类对 ＳＶＢＶ 检测效果的
影响
　 　 ＥｘＴａｑ 和 ＥｘＴａｑＨＳ 的 ＰＣＲ 检测结果显示ꎬ
ＥｘＴａｑ的扩增产物出现非特异性条带(图 ３￣Ａꎬ泳
道 ５￣７)ꎬ而 ＥｘＴａｑＨＳ 酶的扩增产物中只有 ＳＶＢＶ
的特异性条带ꎬ没有非特异性条带(图 ３￣Ｂ)ꎮ 因
此ꎬ当以总 ＤＮＡ 作为模板进行 ＰＣＲ 检测时ꎬ
ＥｘＴａｑＨＳ可以避免非特异性条带的产生ꎮ
Ｆｉｇ. ３　 ＰＣＲ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＥｘＴａｑ ａｎｄ
ＥｘＴａｑＨＳ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＳＶＢＶ
Ａ: Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＳＶＢＶ ｂｙ ＰＣＲ ｗｉｔｈ ＥｘＴａｑꎻ Ｂ: Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ＳＶＢＶ ｂｙ ＰＣＲ ｗｉｔｈ ＥｘＴａｑＨＳꎻ Ｍ: １００ ｂｐ ＤＮＡ ｍａｋｅｒꎻ
Ｌａｎｅ１: Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｐｌａｎｔꎻ Ｌａｎｅ ２￣８: Ｔｅｓｔｅｄ ｓａｍｐｌｅｓꎻ
Ｌａｎｅ ９: Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｐｌａｎｔ.
３　 讨论
　 　 ＳＶＢＶ 虽然是 ＤＮＡ 病毒ꎬ但是被侵染的植物
组织中可能存在病毒基因的转录本ꎬ因此可以利用
ＲＴ￣ＰＣＲ 进行 ＳＶＢＶ 的检测ꎮ 本研究通过实时定
量 ＲＴ￣ＰＣＲ分析了 ＳＶＢＶ的 ｃｐ基因在草莓不同器
官的转录本水平ꎬ充分说明其转录本存在于草莓的
不同组织器官中ꎬ这为利用 ＲＴ￣ＰＣＲ检测 ＳＶＢＶ提
供了理论依据ꎮ 实时定量 ＲＴ￣ＰＣＲ数据表明 ｃｐ 基
因的转录本在草莓老叶中的数量较高ꎬ间接表明了
ＳＶＢＶ病毒粒子在老叶部位的含量是比较高的ꎮ
这为选择合适的病毒检测试材提供了一个重要参
考ꎮ
　 　 导致 ＰＣＲ反应中产生非特异性条带的因素很
多ꎬ其中 Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶是最为关键的因素ꎮ 利
用普通 ＥｘＴａｑ酶进行 ＰＣＲ检测往往容易出现非特
异性扩增ꎬ甚至出现假阳性扩增ꎬ大大干扰了
ＳＶＢＶ检测结果的分析判断ꎮ 利用 ＥｘＴａｑＨＳ 酶代
替普通 ＥｘＴａｑ 酶进行 ＰＣＲ 检测 ＳＶＢＶꎬ检测效果
比较理想ꎬ可有效抑制非特异性条带的产生ꎮ 总体
来说ꎬ利用 ＰＣＲ 和 ＲＴ￣ＰＣＲ 检测 ＳＶＢＶ 各有优缺
点ꎮ ＰＣＲ检测以总 ＤＮＡ 为模板ꎬ而 ＤＮＡ 的提取
比较简单快捷且成本不高ꎬ因此ꎬＰＣＲ 检测法比较
省时省力ꎮ 但利用特异性并不是很强的 Ｔａｑ 酶直
接进行 ＰＣＲ检测效果并不是很理想ꎬ必须要借助
４５５
　
　 ５期 宋成林ꎬ等:利用 ＰＣＲ和 ＲＴ￣ＰＣＲ检测草莓镶脉病毒的比较研究
高特异性的 Ｔａｑ酶ꎬ如 ＥｘＴａｑＨＳꎬ才能稳定地检测
ＳＶＢＶꎬ这就加大了检测成本ꎮ 另外ꎬＰＣＲ 检测法
只能用于 ＤＮＡ病毒的检测而不能用于 ＲＮＡ 病毒
的检测ꎬ检测范围有一定的局限性ꎮ 而 ＲＴ￣ＰＣＲ检
测法可以同时用于检测 ＤＮＡ 病毒和 ＲＮＡ 病毒ꎬ
这一优点是 ＰＣＲ 检测法所不能比拟的ꎮ 然而
ＲＴ￣ＰＣＲ必须以高质量的总 ＲＮＡ 为前提ꎬ总 ＲＮＡ
在提取过程中又特别容易降解ꎬ加之反转录成本比
较高ꎬ因此整个检测过程比较费时费力ꎮ 因此ꎬ单
一检测草莓 ＤＮＡ病毒时ꎬ宜采用热启动 Ｔａｑ ＤＮＡ
酶催化的 ＰＣＲꎬ而当同时检测草莓 ＤＮＡ 病毒和
ＲＮＡ病毒时ꎬ宜采用 ＲＴ￣ＰＣＲ技术ꎮ
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ｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ Ｆｒａｇａｒｉａ ｓｐｐ. ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｐｌａｎｔ
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ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ａ ｔｅｍｐｌａｔｅ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏ￣
ｌｏｇｙꎬ ２００７ꎬ １５５(７－８): ４３１－４３６.
责任编辑:于金枝
５５５