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Effect of nitrogen on growth and total alkaloids of Sophora flavescens

氮肥对苦参生长和生物总碱的效应



全 文 :书氮肥对苦参生长和生物总碱的效应
纪瑛1,张庆霞1,蔺海明2,蔡伟1
(1.甘肃农业职业技术学院,甘肃 兰州730020;2.甘肃农业大学农学院,甘肃 兰州730070)
摘要:对苦参进行驯化栽培是解决其供需矛盾的主要途径,也是保护生态环境最有效的措施。本试验研究氮肥对
苦参生长、生物总碱含量和生物总碱产量的效应。采用盆栽试验,施纯氮量设0,50,100,150和200mg/kg五个水
平,完全随机设计。结果表明,施用氮肥对苦参生长以及苦参总碱含量均有显著促进效应。各施氮处理根干重均
与对照差异显著,当施纯氮150mg/kg时根干重最高,比对照增加42%;根直径随施氮量提高呈增加趋势,当施纯
氮150mg/kg时根直径最大,比对照增加21.1%;叶绿素总含量在施纯氮100mg/kg时最高,比对照增加33.8%;
苦参总碱含量在施纯氮100mg/kg时最高,比对照增加35.7%;单株苦参总碱产量在施纯氮150mg/kg时最高,较
对照增加90.5%。氮对根干重增加效应主要是由于根直径增加引起根体积增加所致,苦参叶片中叶绿素含量随施
氮量增加有利于苦参总碱含量提高。
关键词:氮肥;苦参;苦参总碱;叶绿素;生长
中图分类号:S567.062;Q946.88  文献标识码:A  文章编号:10045759(2009)03015906
  苦参(犛狅狆犺狅狉犪犳犾犪狏犲狊犮犲狀狊)为豆科槐属植物,是我国传统药用植物[1]。长期以来一直是靠采挖野生资源提供
药源,对苦参进行驯化栽培是解决其供需矛盾的主要途径,也是保护生态环境最有效的措施。施肥能促进植物根
系和地上部生长,是栽培植物提高产量和品质的重要手段[2~6]。植物叶片中叶绿素含量随施氮量增加,在缺氮情
况下叶绿素含量降低[7],叶绿素含量和叶中含氮量呈高度正相关[8]。
增加肥料促进植物生长,同时有增加植物体内生物碱形成的趋势[9]。组织培养和发状根培养研究发现基质
中氮素影响生物碱产量和生物碱合成[10~12]。长春花(犆犪狋犺犪狉犪狀狋犺狌狊狉狅狊犲狌狊)大田栽培研究发现氮肥显著增加其
根和叶中的生物碱含量[13]。苦豆子(犛狅狆犺狅狉犪犪犾狅狆犲犮狌狉犪犻犱犲狊)根茎叶中苦参碱含量随施氮量增加[14]。
提高苦参生物碱含量和苦参碱产量是苦参人工栽培的主要目标,关于施氮对苦参生长和生物碱效应研究迄
今还鲜见报道,本试验通过盆栽试验研究不同施氮水平对苦参生长和根中生物碱含量及苦参碱产量效应的研究,
为规范化栽培苦参,提高苦参产量和生物总碱提供理论依据和技术指导。
1 材料与方法
1.1 试验方法
盆栽试验在甘肃农业职业技术学院(N36°02′44.5″,E103°53′08.5″)进行。试验需要的苦参苗是2006年7
月在校园标本田用苦参种子直播育苗(种子采自甘肃省岷县药材示范园),2007年3月18日盆栽时苦参苗龄大
约200d。盆栽试验的土壤取自校园标本田,土壤含有机质43g/kg、碱解氮34.7mg/kg、速效磷120mg/kg、速
效钾200mg/kg。花盆直径60cm,高50cm,每盆装土9kg。供试肥料用尿素(含N46%)。苦参氮肥用量设5
个纯氮水平,分别是0(对照),50,100,150和200mg/kg。每处理3盆,每盆移栽3株苦参苗。氮肥分3次施完,
每次施总量的1/3,分别在5月10日、6月10日和7月10日施入,肥料溶在水中随浇水施。
1.2 测定项目和方法
于2007年10月31日收获整株,测定生物量、根部性状。根直径在根头下1cm处测定,同时在此处横切后
测定木部直径和皮部厚度(皮部厚度=根直径-木部直径),根体积用排水法测定。样品在60℃下烘干36h,测
定样品干重,干物质向根中分配比值=单株根干重/单株总干重,根干鲜比=单株根干重/单株根鲜重,单株苦参
第18卷 第3期
Vol.18,No.3
草 业 学 报
ACTAPRATACULTURAESINICA   
159-164
2009年6月
 收稿日期:20080715;改回日期:20081114
基金项目:甘肃省科技攻关项目(2GS064A4301908)资助。
作者简介:纪瑛(1963),女,甘肃定西人,副教授,博士。Email:lzjiying2005@163.com
通讯作者。Email:linhm@gsau.edu.cn
总碱产量(g/株)=苦参总碱含量×单株根干重。
叶绿素含量用分光光度法测定[15]。用95%乙醇提取测定叶绿素a与叶绿素b含量,叶绿素总含量=叶绿素
a+叶绿素b。
苦参总碱含量测定用紫外分光光度法[16],测定方法经过改进。仪器用紫外分光光度仪(Agilent8453E)。由
于苦参根中苦参总碱以氧化苦参碱为主[17],因此以氧化苦参碱为标准品制备标准液,氧化苦参碱标准品(批号
110780200405)购自中国药品生物制品鉴定所,精密称取氧化苦参碱0.05g,用2%的乙醇溶液定容至250mL,
制备成原液,分别吸取原液3,5,7,9,11,13,15,17和19mL,用2%乙醇溶液定容至200mL,制成一系列标准溶
液,用紫外分光光度仪全波长扫描吸收高峰,吸收高峰为198nm,在198nm下测定吸收值,以浓度(犆)为因变
量,吸收值(犃)为自变量,建立线性回归方程犆=0.712+27.702犃,相关系数狉=0.99。供试品溶液的制备:采用
《中华人民共和国药典》(2005年版一部)方法[18]。精密量取提取液5mL,用水定容至250mL,在198nm下测
定,用2%的乙醇溶液作空白。
1.3 数据分析与处理
试验数据用SPSS13.0统计软件进行方差分析,各处理效果用LSD法进行多重比较。
2 结果与分析
2.1 氮肥对苦参生物量的效应
氮对苦参株高有显著增加效应(表1),株高随施氮量提高呈增加趋势,施氮各处理均与对照差异达显著水
平,施氮量由低到高株高依次较对照增加39.5%,38.5%,48.0%,43.0%(犘≤0.05),但是施氮各处理之间株高
差异均不显著;氮肥对单株根芽数的增加效应不显著;根是苦参药用部分,单根干重关系到苦参经济产量的高低,
是苦参经济产量的重要指标,氮对根干重有显著增加效应,根干重随施氮量提高呈增加趋势,各施氮处理均与对
照差异显著,施氮量150mg/kg处理最高,较对照增加42.0%(犘≤0.05),与施氮量50和100mg/kg处理差异
显著,而与200mg/kg处理差异不显著;茎叶干重随施氮量提高呈增加趋势,施氮量150和200mg/kg处理与对
照、施氮50和100mg/kg处理差异显著,分别较对照增加28.9%和23.2%(犘≤0.05),其余处理和对照差异不
显著;单株干重包括地上部分和地下部分重量,其大小受茎叶重量和根重量综合影响,单株干重随施氮量提高呈
增加趋势,各施氮处理均和对照差异显著,其中施氮量达150mg/kg时单株干重最高,较对照增加25.4%(犘≤
0.05),其次是200mg/kg,较对照增加20.1%(犘≤0.05),但是这2个处理之间差异不显著,而与施氮50和100
mg/kg处理差异显著;根干鲜比可以反映根的折干率,根干鲜比随施氮量增加呈降低趋势,这是由于根鲜重随施
氮量增加幅度大于根干重增加幅度;单株根干重/单株总干重表示干物质向根中分配比例的大小,是根的收获指
数,单株根干重/单株总干重随施氮量变化趋势不明显,和对照相比,高施氮量下略有降低趋势,说明随施氮量增
加向根部分配的干物质呈减少趋势。以上分析表明,中等施氮量对苦参根、茎叶干重增加效应大,是生产中提高
苦参产量的适宜施肥量,但是增施氮肥引起根干鲜比和根干重/单株总干重降低。
表1 氮对苦参生物量的效应
犜犪犫犾犲1 犈犳犳犲犮狋犲狅犳狀犻狋狉狅犵犲狀狅狀犫犻狅犿犪狊狊狅犳犛.犳犾犪狏犲狊犮犲狀狊
施氮量
Nappliedd
(mg/kg)
株高
Height
(cm)
单株根芽数
Budnumber
单株干重
Plantdryweight
(g/株Plant)
单根干重
Rootdryweight
(g/株Plant)
单株茎叶干重
Aerialdryweight
(g/株Plant)
根干鲜比
Rootdryweight/Root
freshweight
单株根干重/单株总干重
Rootdryweight/Total
plantdryweight
0 26.3b 4.8 22.0c 18.8c 3.9c 0.58 0.86
50 36.7a 5.1 26.4b 22.7b 3.7c 0.56 0.86
100 36.6a 5.6 27.7b 23.6b 4.2bc 0.57 0.85
150 38.9a 5.8 31.7a 26.7a 5.0a 0.56 0.84
200 37.6a 5.8 30.5a 25.6ab 4.8ab 0.55 0.84
 注:表中数值为3次重复的平均值,同列不同字母表示0.05水平上差异显著,下同。
 Note:Valuesaremeansofthreereplicates.Thedifferentlettersinarowindicatethesignificantdifferenceat0.05level,thesamebelow.
061 ACTAPRATACULTURAESINICA(2009) Vol.18,No.3
2.2 氮肥对苦参根部性状的效应
氮肥对根直径有显著增加效应(表2),根直径随施氮量提高呈增加趋势,除施氮量50mg/kg处理以外,其余
处理均和对照差异显著,其中施氮量150mg/kg处理根直径最大,较对照增加21.1%(犘≤0.05),200mg/kg处
理次之,但是这2个处理之间差异不显著;木部直径随施氮量提高呈增加趋势,施氮量150mg/kg处理较对照增
加17.7%(犘≤0.05),其余处理和对照差异不显著;各处理皮部厚度与对照差异不显著,但是有随施氮量提高而
增加的趋势。单株根体积随施氮量提高呈增加趋势,除施氮量50mg/kg处理以外,其余各处理根体积均和对照
差异显著(犘≤0.05),施氮量150mg/kg处理的增加幅度最大,200mg/kg处理次之,但是这2个处理之间差异
不显著。不同施氮水平影响木部与皮部所占比例,木部直径所占比例随施氮量提高呈增加趋势;而皮部所占比例
则随施氮量增加呈降低趋势。说明施氮引起木质部直径增加幅度大于皮部厚度增加幅度,施氮引起根直径增加
主要是由于木部直径增加所致。由此可见,施氮使根直径增加则引起单株根体积增加。以上分析表明,氮肥对根
干重的增加效应是由于增加根直径和根体积引起,根体积增大,扩大了积累物质的“库容”,而有利于积累物质。
2.3 氮肥对苦参叶片中叶绿素含量的效应
叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总含量均随施氮量提高呈增加趋势(表3),各施氮量处理和对照差异均达到显著
水平(犘≤0.05),施氮量由低到高,叶绿素a依次较对照增加21.6.%,22.3%,6.0%,15.5%,叶绿素b依次较对
照增加58.2%,66.8%,66.6%,33.4%,叶绿素总含量依次较对照增加31.0%,33.8%,21.6%,20.1%,可见氮
对叶绿素b的增加效应大于对叶绿素a的增加效应,则有利于聚光色素叶绿素b收集更多的光能,传至反应中心
色素,提高光合效率。叶绿素总含量增加是由于叶绿素a和叶绿素b含量增加的原因。中等施氮量100mg/kg
处理叶绿素a,叶绿素b和叶绿素总含量增加幅度最大,当施氮量超过100mg/kg时,叶绿素a,叶绿素b,叶绿素
总含量增幅减小,施氮量50和100mg/kg处理差异不显著,而这2个处理与施氮量150和200mg/kg处理之间
差异显著。说明叶绿素对氮较敏感,在中低施氮量下就能使其含量提高。
表2 氮对苦参根部性状的效应
犜犪犫犾犲2 犈犳犳犲犮狋狅犳狀犻狋狉狅犵犲狀狅狀狉狅狅狋犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犛.犳犾犪狏犲狊犮犲狀狊
施氮量
Napplied
(mg/kg)
根直径
Rootdiameter
(mm)
木部直径
Xylemdiameter
(mm)
皮部厚度
Rootbarkdepth
(mm)
单株根体积
Rootvolume
(cm3)
木部占根直径比例
Percentageofxylem
diameter(%)
皮部占根直径比例
Percentageofroot
barkdepth(%)
0 16.1c 13.1b 3.9 35.7c 76.8 23.2
50 17.4bc 13.4b 3.9 37.5c 77.2 22.8
100 17.6b 13.6b 4.0 40.0b 77.2 22.8
150 19.5a 15.4a 4.1 45.3a 79.3 20.8
200 18.6ab 14.6b 3.9 44.2ab 78.8 21.3
表3 氮对苦参叶片中叶绿素含量、根中苦参总碱含量和产量的效应
犜犪犫犾犲3 犈犳犳犲犮狋狅犳狀犻狋狉狅犵犲狀狅狀犆犺犾狅狉狅狆犺狔犾(犆犺犾)犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狅犳犾犲犪狏犲狊,
狋狅狋犪犾犪犾犽犪犾狅犻犱狊犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀犪狀犱狋狅狋犪犾犪犾犽犪犾狅犻犱狊狔犻犲犾犱狅犳狉狅狅狋狊
施氮量
Napplied
(mg/kg)
叶绿素a含量
Chlaconcentration
(mg/g)
叶绿素b含量
Chlbconcentration
(mg/g)
叶绿素含量
Chlconcentration
(mg/g)
苦参总碱含量
Totalalkaloidsconcentration
(%)
单株苦参总碱产量
Totalalkaloidsyield
(g/株Plant)
0 1.50b 0.52c 2.02c 3.28d 0.7d
50 1.83a 0.82a 2.67a 4.39b 1.0c
100 1.84a 0.87a 2.70a 4.45a 1.1b
150 1.59b 0.87a 2.46b 4.41ab 1.2a
200 1.73a 0.69b 2.43b 4.25c 1.1b
161第18卷第3期 草业学报2009年
2.4 氮肥对根中苦参总碱含量和单株苦参总碱产量的效应
苦参的有效成分是生物碱,其含量高低反映苦参品质优劣,因此,提高苦参总碱含量是苦参人工栽培的目标。
氮对提高苦参总碱含量有显著增加效应(表3),各施氮水平下苦参总碱含量和对照差异均显著(犘≤0.05),施氮
量由低到高依次较对照增加33.9%,35.7%,34.5%,29.6%,中等施氮量100mg/kg处理增加幅度最大,与施氮
量150mg/kg处理差异不显著,与其他几个处理差异显著。可见中低施氮量有促进合成和积累苦参总碱的效
应。经相关分析,苦参总碱含量与叶绿素含量相关极显著,相关系数达0.819(犘≤0.01),说明叶绿素含量增加有
利于提高苦参总碱含量。
苦参总碱含量是相对含量,不能反映苦参总碱产量高低,单株苦参碱产量(g/株)表示单株苦参根中总生物碱
的绝对积累量。单株苦参总碱产量随施氮量提高呈增加趋势,各施氮水平下苦参总碱产量和对照差异均显著,施
氮量由低到高依次增加43.4%,51.1%,69.8%,56.7%,各施氮处理之间差异显著,当施氮量达150mg/kg时增
幅最大。单株苦参总碱产量决定于单株根干重和苦参总碱含量,单株根干重和苦参总碱含量随施氮量增加,使单
株苦参总碱产量也随之增加,可见氮素营养引起单株苦参总碱产量增加是由于单株根干重和苦参总碱含量增加。
3 讨论
苦参根干重随施氮量增加。施氮量达150mg/kg时单根干重最高,随施氮量继续增加单根干重增加效应降
低,表明增施氮肥是人工栽培苦参提高生物量和产量的一项有效措施。施氮对植物生长的促进效应在其他植物
研究中得到证实,纪瑛等[14]和张守润等[19]在同属植物苦豆子(犛狅狆犺狅狉犪犪犾狅狆犲犮狌狉狅犻犱犲狊)研究中得出施氮促进苦豆
子根茎叶生长。
施氮水平影响木部直径和皮部厚度占根直径的比例。木部直径大约占根直径的77.0%,随施氮量增加呈增
加趋势,皮部约占根直径23.0%,随施氮量增加呈降低趋势,这是由于施氮引起木质部直径增加幅度大于皮部厚
度增加幅度,施氮引起根直径增加主要是由于木部直径增加所致,根直径增加则引起根体积增加,由此可见施氮
引起根干重增加是由于增加根直径和根体积。苦参是多年生灌木植物,进入秋季以后,茎叶中的物质向根中运
输,根成为养分运输的“库”。氮素营养促进苦参根直径和根体积增大,也就增大了物质积累的“库容”,从而引起
根鲜重和根干重增加。虽然氮素营养对根生长表现为正效应,但是高施氮量下根干鲜比呈降低趋势,这可能是由
于根体积增大后对干物质的稀释效应所致。单株根干重/总干重也随施氮量增加呈降低趋势,说明干物质向根中
运输分配随施氮量增加而降低。
叶绿素含量随施氮量提高呈增加趋势,中等施氮量100mg/kg处理,叶绿素含量增加幅度最大。已有试验
证实叶绿素含量随施氮量增加,在缺氮情况下叶绿素含量降低[7],叶绿素含量和叶中含氮量呈高度正相关关
系[8]。叶中氮有50%以上在叶绿体中[20,21],研究认为施氮引起叶中含氮量增加是叶绿素含量提高的主要原因,
叶绿素含量可以作为植物体内氮素营养状态的指标。笔者也认同这种观点,这也是本研究需要进一步深入研究
的问题。
苦参根中苦参总碱含量随施氮量增加,施氮量为100mg/kg时苦参总碱含量最高,施氮量继续增加则呈降
低趋势。生物碱是一类含氮的有机物,其合成前体也大多数是氨基酸和多胺类物质[9],施氮可以为其生物合成提
供氮源。同属植物苦豆子叶、茎、根中苦参碱含量随施氮量增加[14]。Sreevali等[13]在试验中证明,长春花(犆犪
狋犺犪狉犪狀狋犺狌狊狉狅狊犲狌狊)叶和根中生物碱含量随施氮量增加。曼陀罗(犇犪狋狌狉犲狊狋狉犪犿狅狀犻狌犿)生物碱含量也随施氮量增
加[22,23]。这些研究结果证明氮素营养对植物体内生物碱含量的提高有促进效应。苦参根中的生物碱多数属于
四环喹诺里西啶类生物碱[24],已经证实赖氨酸是喹诺里西啶类生物碱生物合成前体,赖氨酸是在叶绿体中形
成[9~11],光合作用强弱直接影响赖氨酸生物合成。叶绿素含量高则光合作用效率高,形成的苦参总碱合成前体
就多,从而提高贮藏在根中的生物碱含量。因此,从理论分析认为,苦参叶片中叶绿素含量随施氮量增加有利于
苦参总碱含量提高。
单株苦参总碱产量随施氮量变化受单株根干重和苦参总碱含量的影响,也随施氮量提高呈增加趋势,当施氮
量达150mg/kg时最高,这主要是由于施氮增加了根中苦参总碱含量和苦参根干重。
261 ACTAPRATACULTURAESINICA(2009) Vol.18,No.3
4 结论
施用氮肥对苦参生长以及苦参总碱含量均有显著促进效应。苦参根干重随施氮量增加是由于主根直径和根
体积增加,叶片中叶绿素含量随施氮量增加有利于苦参总碱含量提高。施氮量150mg/kg时根干重最高,施氮
量100mg/kg时苦参总碱含量最高,综合分析,获得较高的单株苦参总碱产量适宜的施肥量是150mg/kg。
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361第18卷第3期 草业学报2009年
犈犳犳犲犮狋狅犳狀犻狋狉狅犵犲狀狅狀犵狉狅狑狋犺犪狀犱狋狅狋犪犾犪犾犽犪犾狅犻犱狊狅犳犛狅狆犺狅狉犪犳犾犪狏犲狊犮犲狀狊
JIYing1,ZHANGQingxia1,LINHaiming2,CAIWei1
(1.GansuAgriculturalColege,Lanzhou730020,China;2.ColegeofAgronomy,Gansu
AgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Theeffectofnitrogenongrowth,totalalkaloidsconcentrationandtotalalkaloidsyieldof犛狅狆犺狅狉犪
犳犾犪狏犲狊犮犲狀狊wasstudied.FourlevelsofN(50,100,150,200mg/kg)wereappliedusingurea(N46%)inapot
experiment.ThecontrolwasnoN.Plantheight,rootdiameter,rootdryweight,aerialdryweight,Chlcon
centrationandtotalalkaloidsconcentrationincreasedrelativetotheamountofNapplied.Therootdryweight
was26.7g/plantat150mg/kgNapplied,anincreaseof42%comparedwiththecontrol.Rootdryweight/
rootfreshweightandrootdryweight/totalplantdryweightdecreasedwithamountofNapplied.Nitrogen
applicationhadsignificantpositiveeffectonrootdiameter.Therootdiameterwashighestat150mg/kgN
applied,anincreaseof21.1%comparedwiththecontrol.ThepercentageofxylemdiameterincreasedwithN
appliedwhilethepercentageofrootbarkdepthdecreased.Chlconcentrationandtotalalkaloidsconcentration
increasedwithNapplied.Chlconcentrationwashighestat100mg/kgNapplied,anincreaseof33.8%com
paredwiththecontrol.Totalalkaloidsconcentration(4.4%)wasalsohighestat100mg/kgNapplied,an
increaseof35.7%comparedwiththecontrol.TotalalkaloidsconcentrationincreasedbyimprovingChlconcen
tration.Thetotalalkaloidsyieldperplant(1.18g/plant)washighestat150mg/kgNapplied,anincreaseof
90.5%comparedwiththecontrol.
犓犲狔狑狅狉犱狊:nitrogen;犛狅狆犺狅狉犪犳犾犪狏犲狊犮犲狀狊;totalalkaloids;Chl;growth
461 ACTAPRATACULTURAESINICA(2009) Vol.18,No.3