全 文 ：犜犪６犛犉犜基因对油菜的转化及抗旱性分析
李淑洁１，张正英２
（１．甘肃省农业科学院生物技术研究所，甘肃 兰州７３００７０；２．甘肃省农业科学院科研管理处，甘肃 兰州７３００７０）
摘要：为了研究犜犪６犛犉犜 对油菜抗旱的影响，进行了犜犪６犛犉犜 对油菜纯系材料的遗传转化，获得经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈ
ｅｒｎ杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交验证的转基因植株。对７株Ｔ１ 代转基因油菜进行了为期３６ｄ的干旱胁迫，分析干
旱胁迫３６ｄ和复水后２ｄ各植株及野生型对照中的犜犪６犛犉犜 的转录水平表达和果聚糖含量，同时进行同时期丙
二醛含量和相对电导率测定。结果表明，犜犪６犛犉犜 的转录水平表达与转基因植株体内的果聚糖含量、转基因植株
的抗旱性呈正相关，表明犜犪６犛犉犜 在干旱胁迫下的表达增强了转基因植株的抗旱性。
关键词：犜犪６犛犉犜；果聚糖；油菜；干旱胁迫
中图分类号：Ｓ６３４．３０３．４；Ｑ９４３．２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１４）０５０１６１０７
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１４０５１８　　
　　油菜（犅狉犪狊狊犻犮犪狀犪狆狌狊）是我国最重要的油料作物，它不仅是食用油的主要来源，也是解决全球能源短缺的重
要原料作物。油菜是需水作物，尤其是在抽薹以后，对水分需求更加旺盛和敏感。而油菜种植区频繁发生的季节
性干旱对油菜产量造成巨大的影响。通过研究植物抗旱机制，利用基因工程技术选育抗旱的油菜新种质，是现在
和以后油菜生物技术育种的重要组成部分。
果聚糖是一种以蔗糖为底物由果聚糖转移酶基因催化合成的果糖基聚合物，它不仅是一种重要的贮藏性碳
水化合物，也是一种渗透调节物质，其分解产生的单糖能够提高液泡溶质浓度，增强植物对多种不良环境胁迫的
抗性。在细菌中，只有果聚糖蔗糖酶参与果聚糖的合成；在植物中，果聚糖的合成以蔗糖为底物进行合成，主要的
酶有１ＳＳＴ（蔗糖：蔗糖１果糖基转移酶）、１ＦＦＴ（果聚糖：果聚糖１果糖基转移酶）、６ＳＦＴ（蔗糖：果聚糖６果糖
基转移酶），产物主要储存于细胞液泡中。
研究证实，果聚糖代谢是植物抵抗逆境胁迫的途径之一，它的积累可以使植物在干旱、低温等多种胁迫下的
抗逆性增强。枯草芽孢杆菌（犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊）来源的果聚糖蔗糖酶基因（狊犪犮犅）是较早克隆的基因。Ｖａｎｄｅｒ
Ｍｅｅｒｌ等［１］将狊犪犮犅导入非果聚糖积累型的马铃薯（犛狅犾犪狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿）中，转基因植株的叶片和小块茎内均有相
当量的果聚糖积累，改变了马铃薯植株原有的碳分配模式。Ｅｂｓｔｋａｍｐ等［２］将狊犪犮犅 导入烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａ
ｃｕｍ）植株，发现转基因烟草中果聚糖的积累能明显提高植株的抗旱性。植物来源的果糖基转移酶基因相继从大
麦（犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲）［３］、小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）［４５］、菜蓟（犆狔狀犪狉犪狊犮狅犾狔犿狌狊）［６７］、菊芋（犎犲犾犻犪狀狋犺狌狊狋狌犫犲狉狅狊
狌狊）［８９］等物种中分离出来，并在烟草、马铃薯、牵牛花（犘犺犪狉犺犻狉犻狊狀犻犾狇犻犪狀狀犻狌犺狌犪）、菊苣（犆犻犮犺狅狉犻狌犿犻狀狋狔犫狌狊）和甜
菜（犅犲狋犪狏狌犾犵犪狉犻狊）中进行了转化。Ｈｅｌｗｅｇｅ等［７］将来自菜蓟的１犛犛犜 和１犉犉犜 转入马铃薯，在收获的转基因
马铃薯块茎中检测到了聚合度较高的菊糖型果聚糖，果聚糖代谢途径的引入，不仅转基因马铃薯的抗旱性明显提
高，而且植物体内的脯氨酸含量也显著增加。李慧娟等［１０］从莴苣（犔犪犮狋狌犮犪狊犪狋犻狏犪）中克隆１犛犛犜 并导入烟草，抗
旱性试验表明１犛犛犜 提高了烟草转基因植株的抗旱性，同时转１犛犛犜 烟草抗冻性也明显提高。张小芸等［１１］将
从冰草（犃犵狉狅狆狔狉狅狀犮狉犻狊狋犪狋狌犿）中克隆的Ａｃ１犉犉犜 导入黑麦草（犔狅犾犻狌犿狆犲狉犲狀狀犲），转基因黑麦草株系中的可溶
性总糖含量和果聚糖含量明显高于对照植株，耐旱性提高。
果聚糖合成酶基因导入油菜的研究还未见报道。本研究将从抗旱小麦品种扬麦６号中克隆的蔗糖：果聚糖
第２３卷　第５期
Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．５
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
１６１－１６７
２０１４年１０月
收稿日期：２０１４０３２４；改回日期：２０１４０５１５
基金项目：本研究由甘肃省科技支撑计划（１０１１ＮＫＣＡ０７３），甘肃省农业科学院科技创新专项（２００９ＧＡＡＳ１７）资助。
作者简介：李淑洁（１９８０），女，甘肃临夏人，助理研究员，硕士。Ｅｍａｉｌ：ｓｊｌｉ２００５＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：Ｋｅｇｃ８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
６果糖基转移酶基因（犜犪６犛犉犜）导入综合性状优良的甘蓝型油菜自交系材料，通过ｒｄ２９Ａ启动子的调控使
犜犪６犛犉犜 在转基因油菜中逆境诱导型表达，研究犜犪６犛犉犜 在转基因植株正常条件和干旱胁迫下的表达特性，
以及由此引起的转基因植株体内果聚糖含量和相关生理指标变化，分析犜犪６犛犉犜 对转基因油菜抗旱的作用，探
讨通过分子手段培育抗旱性油菜新品种的可行性，为改良油菜品质，提高油菜抗旱性和扩大其栽培范围奠定理论
图１　狆犆犃犕犅犐犃狉犱２９犃６犛犉犜植物表达载体结构简图
犉犻犵．１　犛犽犲狋犮犺狅犳狆犾犪狊犿犻犱狆犆犃犕犅犐犃狉犱２９犃６犛犉犜
　　　ＲＢ：ＴＤＮＡ区的右边界ＲｉｇｈｔｂｏｒｄｅｒｏｆＴＤＮＡ；Ｐｎｏｓ：ｎｏｓ启动子
Ｐｒｏｍｏｔｅｒｏｆｎｏｓｇｅｎｅ；ｂａｒ：ｂａｒ基因Ｂａｒｇｅｎｅ；Ｔｎｏｓ：ｎｏｓ终止子Ｔｅｒ
ｍｉｎａｔｏｒｏｆｎｏｓｇｅｎｅ；Ｐｒｄ２９Ａ：ｒｄ２９Ａ启动子Ｐｒｏｍｏｔｅｒｏｆｒｄ２９Ａｇｅｎｅ；
６ＳＦＴ：犜犪６ＳＦＴ基因犜犪６ＳＦＴｇｅｎｅ；ＬＢ：ＴＤＮＡ 区的左边界 Ｌｅｆｔ
ｂｏｒｄｅｒｏｆＴＤＮＡ．
基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
甘蓝型油菜自交系材料１号、２号、５号为甘肃省
农业科学院作物科学研究所油菜育种组提供。犜犪６
犛犉犜、ｒｄ２９Ａ启动子分别由中国农业科学院作物科学
研究所叶兴国博士和甘肃农业大学生命科学院司怀军
博士惠赠。植物表达载体ｐＣＡＭＢＩＡｒｄ２９Ａ６ＳＦＴ
由课题组构建（图１），大肠杆菌（犈狊犮犺犲狉犻犮犺犻犪犮狅犾犻）菌
株ＤＨ５ａ、根癌农杆菌（犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊）菌
株ＬＢＡ４４０４为甘肃省农业科学院生物技术研究所实
验室保存。
１．２　犜犪６犛犉犜 对油菜的转化
农杆菌的活化、子叶预培养、农杆菌浸染、共培养等实验方法参照李淑洁等［１２］的方法。
将经过共培养的外植体首先用１０ｍｇ／Ｌ草胺膦（以下简称ｐｐｔ）选择培养２～３周后，将分化出的抗性不定芽
和抗性愈伤组织转入附加有ｐｐｔ１５ｍｇ／Ｌ的分化培养基上继续筛选。待不定芽长到１ｃｍ以上时，切下并接入生
根培养基上进行生根培养，２周左右长出不定根。
１．３　转基因工程植株分子检测
提取抗性植株基因组ＤＮＡ，以含犜犪６犛犉犜 质粒ＤＮＡ为阳性对照，未转化植株为阴性对照，用犜犪６犛犉犜
特异引物进行ＰＣＲ扩增以检测抗性植株中目的基因是否整合。ＰＣＲ引物序列为：上游引物５′ＣＴＧＧＡＴＡＴ
ＣＡＴＧＧＧＧＴＣＡＣＡＣＧＧＣＡＡＧＣＣ３′，下游引物５′ＧＧＡＣＴＡＧＴＴＣＡＴＴＧＡＡＣＡＴＡＣＧＡＧＴＧＡＴＣ３′，ＰＣＲ扩
增参数为９４℃，５ｍｉｎ；９４℃，４５ｓ；６８℃，２ｍｉｎ，３５次循环；７２℃，１０ｍｉｎ。ＰＣＲ产物长度为１８５１ｂｐ。
Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交以地高辛标记的犜犪６犛犉犜 全长为ＤＮＡ探针，ＨｉｎｄＩＩＩ酶切ＰＣＲ检测阳性的转基因油菜基
因组ＤＮＡ，参照Ｒｏｃｈｅ公司ＤＩＧＨｉｇｈＰｒｉｍｅＤＮＡＬａｂｅｌｉｎｇａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎｓｔａｒｔｅｒＫｉｔⅠ（货号：１１７４５８３２００１）说
明书操作。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交以犜犪６犛犉犜 全长为ＤＮＡ探针，将Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交呈阳性的转基因植株的总ＲＮＡ
变性后固定在尼龙膜上，杂交、免疫检测等步骤同Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。
１．４　Ｔ１ 代转基因植株的ＰＣＲ检测
收获Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交均呈阳性的转基因植株种子，按株系种植于转基因温室试验田。
等Ｔ１ 代转基因植株长至３～４片真叶时，以２５ｍｇ／Ｌ的ｐｐｔ进行涂抹筛选，提取抗性植株基因组ＤＮＡ，用犜犪６
犛犉犜 特异引物进行ＰＣＲ检测。统计２５ｍｇ／Ｌｐｐｔ作为筛选浓度的阳性率，阳性率＝（ＰＣＲ检测阳性株数／抗性
植株总数）×１００％ 。
１．５　Ｔ１ 代转基因植株的抗旱性分析
转基因植株的抗旱性试验于２０１３年６月在甘肃省农业科学院生物技术研究所转基因专用温室内进行。取
长势一致的ＰＣＲ检测阳性的５７株系的７株Ｔ１ 代转基因植株（编号分别为５７１１，５７１４，５７１５，５７１６，５７
２２，５７２４和５７２６，简写为１１，１４，１５，１６，２２，２４和２６）进行干旱胁迫处理。参试植株生长于同一块试验地内，进
行统一管理。苗期正常浇水，进入抽薹期时停止浇水，开始干旱胁迫，３６ｄ后复水。分析干旱胁迫３６ｄ和复水后
２ｄ各植株中犜犪６犛犉犜的转录水平差异。测定同时期各转基因植株的果聚糖含量、丙二醛含量和细胞质膜透性。
提取干旱胁迫３６ｄ和复水后２ｄ各转基因植株和非转基因对照叶片总ＲＮＡ，参照ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＧｏｌｄＳｃｒｉｐｔ
２６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．５
ｃＤＮＡ合成试剂盒（货号：ｃ８１４０１１９０）合成ｃＤＮＡ第一链。以油菜犪犮狋犻狀为内参基因，采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ分
析犜犪６犛犉犜 在干旱胁迫不同时期的转录水平表达。油菜犪犮狋犻狀基因上游引物５′ＡＴＧＧＣＣＧＡＴＧＧＴＧＡＧＧＡ
ＣＡＴＴＣ３′，下游引物５′ＧＧＴＧＣＧＡＣＣＡＣＣＴＴＧＡＴＣＴＴＣ３′。犜犪６犛犉犜 引物同前。
取干旱胁迫３６ｄ和复水后２ｄ各转基因植株和非转基因对照同一叶位叶片，利用ＧＥＮＭＥＤ植物果聚糖化
学比色法定量检测试剂盒（货号：ＧＭＳ１９０２３．１ｖ．Ａ）测定果聚糖含量，参照《植物生理学实验指导》电导法测定细
胞质膜透性和硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）法测定 ＭＤＡ含量［１３］。每个指标测定做３次重复。
１．６　数据分析
利用 ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ软件绘图，并用ＤＰＳ７．０５软件利用ＳＳＲ法进行多重比较。
图２　转基因油菜植株的犘犆犚检测结果
犉犻犵．２　犘犆犚犱犲狋犲犮狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊
　Ｍ：ＤＮＡ标记 Ｄ２０００，ＤＮＡｍａｒｋｅｒＤ２０００；Ｐ：阳性对照，Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；Ｎ：阴性对照，Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；１～１５：草胺膦抗性植株，Ｇｌｕｆｏｓｉ
ｎａｔｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｌａｎｔｓ．
２　结果与分析
图３　转基因植株的犛狅狌狋犺犲狉狀杂交部分结果
犉犻犵．３　犛狅狌狋犺犲狉狀犫犾狅狋狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊
　　　Ｐ：阳性对照Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；Ｎ：阴性对照Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；其他
泳道为转基因植株Ｔｈｅｏｔｈｅｒｓａｒｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ．
２．１　Ｔ０ 代转基因油菜的分子检测
进行了犜犪６犛犉犜 对油菜５个纯系材料的遗传转
化，获得ＰＣＲ检测的３个纯系的转基因植株２６株，各
品系分别为：１号２株（编号１１，１２），２号１０株（编号
２１，２２，……，２１０），５号１４株（编号５１，５２，……，５
１４）（图２）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了１１份Ｔ０ 代转基因油
菜植株，确定其中８株中犜犪６犛犉犜 已整合进油菜基因
组中（图３），Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交确定其中７株中犜犪６
犛犉犜 得到了转录 （图４）。
２．２　Ｔ１ 代转基因植株的草胺膦抗性筛选和ＰＣＲ检测
以ｐｐｔ２５ｍｇ／Ｌ为涂抹浓度，７个转基因株系筛选
出８９株抗性植株，ＰＣＲ检测有１６株中扩增出１８５１ｂｐ
的犜犪６犛犉犜（图５）目的基因。２５ｍｇ／Ｌｐｐｔ作为筛选
浓度的阳性率为１７．９％。
图４　转基因植株的犖狅狉狋犺犲狉狀斑点杂交
犉犻犵．４　犖狅狉狋犺犲狉狀犱狅狋犫犾狅狋狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊
　Ｐ：阳性对照Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；Ｎ：阴性对照Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；其他泳道为转基因植株Ｔｈｅｏｔｈｅｒｓａｒｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ．
　
２．３　Ｔ１ 代转基因植株的抗旱性分析
２．３．１　干旱胁迫时转基因植株中犜犪６犛犉犜 转录水平的表达分析　干旱胁迫３６ｄ时，犜犪６犛犉犜 在各转基因植
株中的表达水平不一致，其中１１、１５、１６和２６中表达水平高于其他转基因植株，未转基因对照中没有犜犪６犛犉犜
３６１第２３卷第５期 草业学报２０１４年
的表达；复水２ｄ后，各植株中犜犪６犛犉犜 基因的表达基本一致，都是微量表达（图６），这与逆境诱导型的ｒｄ２９Ａ
启动子的功能相一致。
２．３．２　干旱胁迫时转基因植株中果聚糖含量变化　与犜犪６犛犉犜 表达相对应地，在干旱胁迫３６ｄ时，１１、１５、１６
和２６的果聚糖含量高于其他转基因植株和未转基因对照，以１６最高（３３．４ｍｇ／ｇ），其次是１５（２８．８ｍｇ／ｇ）、２６
（２７．９ｍｇ／ｇ）和１１（２７．０ｍｇ／ｇ），１４（１８．０ｍｇ／ｇ）、２２（１９．６ｍｇ／ｇ）和２４（１８．５ｍｇ／ｇ）果聚糖含量相对较低。复水
２ｄ后，各转基因植株中犜犪６犛犉犜 都有微量表达，但果聚糖含量并没有相应地降低却有小幅升高（图７），推测可
能是与果聚糖积累和代谢反应速度有关。不论是干旱胁迫３６ｄ还是复水后２ｄ，各转基因叶片内的果聚糖含量
显著高于非转基因对照，具有极显著差异。
２．３．３　干旱胁迫对转基因植株相对电导率和丙二醛含量的影响　干旱胁迫３６ｄ时各转基因植株的相对电导率
低于对照，其中１５、１６、２６和１１的电导率与对照形成极显著差异，说明这些转基因植株在干旱胁迫下的细胞膜稳
定性较好，膜结构没有受到严重的破坏。这与同时期的果聚糖含量相反，说明干旱胁迫下果聚糖含量高的转基因
植株的细胞膜结构的稳定性相对较好。复水后，各植株包括未转基因对照的相对电导率大幅降低，各转基因植株
的相对电导率仍低于对照（图８）。
图５　犜１ 代转基因油菜植株的犘犆犚分析电泳图
犉犻犵．５　犘犆犚犱犲狋犲犮狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊狅犳犜１犵犲狀犲狉犪狋犻狅狀
　Ｍ：ＤＮＡ标记Ｄ２０００，ＤＮＡｍａｒｋｅｒＤ２０００；Ｐ：阳性对照Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；Ｎ：阴性对照Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；１～１５：抗性植株Ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅｒｅｓｉｓｔａｎｔ
ｐｌａｎｔｓ．
图６　干旱胁迫时转基因油菜半定量犚犜－犘犆犚分析
犉犻犵．６　犛犲犿犻狇狌犪狀狋犻狋犪狋犻狏犲犚犜－犘犆犚狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊
　
图７　干旱胁迫对油菜转基因植株果聚糖含量的影响
犉犻犵．７　犉狉狌犮狋犪狀犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮
狆犾犪狀狋狊狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊　
图８　干旱胁迫对油菜转基因植株相对电导率的影响
犉犻犵．８　犚犲犾犪狋犻狏犲犮狅狀犱狌犮狋犻狏犻狋狔狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊
狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊　
　图中不同大写字母表示犘＜０．０１水平差异显著。下同。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ犘＜０．０１．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
４６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．５
干旱胁迫３６ｄ和复水２ｄ时各转基因植株的丙二
图９　干旱胁迫对油菜转基因植株丙二醛含量的影响
犉犻犵．９　犕犇犃犮狅狀狋犲狀狋狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊
　
醛含量均显著低于对照，具有极显著差异。复水２ｄ
后，各植株包括未转基因对照的丙二醛含量变化出现
两种不同趋势，对照、２２、２４和２６复水后丙二醛含量
持续上升，１１、１４、１５、１６复水后丙二醛含量小幅降低
（图９）。分析原因有可能是与丙二醛对逆境的响应慢
有关。
３　讨论
在果聚糖转基因研究中，无论细菌来源的果聚糖
蔗糖酶基因（狊犪犮犅）还是植物来源的果糖基转移酶基因
（１犛犛犜，１犉犉犜，６犛犉犜，６犌犛犉犜），在转入植物体内
表达后都检测到了很低浓度的果聚糖积累。为了提高
转基因植物体内果聚糖含量，研究者采用了各种方法以增强基因表达水平，如采用翻译增强子Ａ１ＭＶＲＮＡ４与
ＣａＭＶ３５Ｓ启动子串联［１４］，玉米（犣犲犪犿犪狔狊）ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ启动子驱动目的基因［１５］，Ｂ３３块茎特异性启动子［１６］等特异
性启动子，还有在果聚糖合成酶基因前加入各种类型的亚细胞定位序列等，但都没有取得显著效果。Ｃａｉｍｉ等［１７］
曾将果糖基转移酶基因置于化学诱导性启动子控制下，虽然叶片中果聚糖的含量显著提高了，但植物组织结构在
３６ｈ内逐渐破坏。所以，普遍认为，只有低水平表达果聚糖的转基因植株才能存活，高含量的果聚糖对转基因植
株具有致死效应［１８］。推测这可能与果聚糖合成的底物是蔗糖有很大关系。蔗糖是光合作用的重要产物，是多数
植物体内长距离运输碳水化合物的主要形式，是果聚糖合成的唯一底物。如果在植物体内无限制的合成果聚糖，
势必会影响植物体内碳代谢的其他途径。在本研究中，为了发挥果聚糖在植物遭受逆境时的作用而又不造成物
质能量的无为消耗和对受体植物的伤害，犜犪６犛犉犜 被置于逆境诱导型的ｒｄ２９Ａ启动子控制下。干旱胁迫３６ｄ
时，各转基因植株中犜犪６犛犉犜 基因活跃转录，１１、１５、１６和２６的转录水平高于其他转基因植株，未转基因对照中
没有犜犪６犛犉犜 的转录。复水２ｄ后，各转基因植株中犜犪６犛犉犜 基因都有微量表达，这与ｒｄ２９Ａ启动子的转录
特性相一致。本研究中转基因油菜植株中都检测到了果聚糖的积累（最高浓度为３４．４ｍｇ／ｇ），转基因植株形态
和育性正常，未观察到不良性状，说明所选用的载体和启动子能使目的基因在油菜中有效表达，对受体植物没有
产生不利影响。
高翔等［１９］将从扬麦６号小麦品种中克隆出的果聚糖合成酶基因犜犪６犛犉犜 转入烟草，并对转基因植株进行
了抗旱、抗盐和抗低温鉴定，转犜犪６犛犉犜 的烟草植株表现出较强的抗旱、抗盐和抗低温能力。殷桂香等［２０］进一
步讨论了植物中犉犅犈狊（果聚糖合成酶基因）结构特点，分析了小麦中犉犅犈狊的拷贝数、染色体定位及亚细胞定位
等，并对小麦犜犪６犛犉犜 进行了亚细胞定位预测，发现液泡中存在其定位信号。Ｂｉｅ等［２１］将犜犪６犛犉犜、Ｔａ１犛犛犜
和Ｔａ１犉犉犜，共转化烟草，获得转单基因（Ｔａ１犛犛犜、Ｔａ１犉犉犜、犜犪６犛犉犜）、双基因（Ｔａ１犛犛犜＋Ｔａ１犉犉犜、
Ｔａ１犛犛犜＋犜犪６犛犉犜、Ｔａ１犉犉犜＋犜犪６犛犉犜）和三基因（Ｔａ１犛犛犜＋Ｔａ１犉犉犜＋犜犪６犛犉犜）植株，进行抗逆鉴
定和生理指标测定分析，结果证明共表达Ｔａ１犛犛犜＋犜犪６犛犉犜 的转基因烟草中果聚糖含量高于这３个任意一
单个基因或其他任两个或三个基因组合，但转化单个小麦果聚糖合成酶基因与转化多个小麦果聚糖合成酶基因
在提高烟草植株抗旱性方面无明显差异。叶兴国等［２２］研究发现果聚糖的有效积累可提高小麦的抗旱能力，在水
分胁迫处理前１５ｄ内果聚糖积累量较低，水分胁迫２１～２８ｄ果聚糖开始积累，随着复水后干旱胁迫解除，果聚糖
含量下降。李淑洁等［２３］将ｒｄ２９Ａ启动子驱动的犜犪６犛犉犜 的转基因烟草株系和ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动的转基
因株系进行为期１８ｄ的干旱胁迫，分析了干旱胁迫０ｄ和干旱胁迫１８ｄ不同转基因株系中犜犪６犛犉犜 的转录水
平表达差异，果聚糖含量以及抗旱相关生理指标，确定ｒｄ２９Ａ启动子驱动的犜犪６犛犉犜 的转基因烟草株系比
ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动的转基因株系更抗旱。本研究以ｒｄ２９Ａ启动子驱动的犜犪６犛犉犜 进行油菜的转化，获得
的转犜犪６犛犉犜 的Ｔ１ 代转基因油菜植株的果聚糖含量与其抗旱性呈正相关，即果聚糖含量高的植株受到的干旱
５６１第２３卷第５期 草业学报２０１４年
胁迫相对较小，可能植物果聚糖含量在一定浓度范围内（可称之为有效浓度）即可起到减轻干旱胁迫的作用。
在干旱胁迫下，植物代谢发生紊乱，体内活性氧产生与清除的代谢平衡被破坏，植物细胞内积累大量活性氧
并引发膜脂过氧化，造成膜系统的损伤及膜脂过氧化程度的加剧。相对电导率和丙二醛含量常用来判断植物受
胁迫时细胞膜的稳定性和受损伤程度。俞乐等［２４］通过比较干旱胁迫不同时期细叶结缕草（犣狅狔狊犻犪狋犲狀狌犻犳狅犾犻犪）和
日本结缕草（犣狅狔狊犻犪犼犪狆狅狀犻犮犪）的叶片相对含水量、电导率和丙二醛含量变化，得出细叶结缕草在干旱胁迫下叶片
细胞膜受损程度较小，细胞膜结构稳定性相对较强，对干旱胁迫的适应能力较强。贾学静等［２５］研究了干旱胁迫
对金心吊兰（犆犺犾狅狉狅狆犺狔狋狌犿犮犪狆犲狀狊犲ｖａｒ．犿犲犱犻狅狆犻犮狋狌犿）叶片活性氧及其清除系统的影响，发现当金心吊兰体内
活性氧产生与清除系统之间的平衡被破坏后，作为膜脂过氧化产物的 ＭＤＡ含量急剧上升。李州等［１４］研究不同
叶型白三叶（犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊）抗氧化保护及渗透调节生理对干旱胁迫的响应，认为小叶型白三叶比大叶型之所
以具有较好的抗旱性，一方面在于它在干旱胁迫过程中具有良好的清除氧胁迫的能力，另一方面是它能够保持相
对较高的渗透调节作用。本研究中转基因植株１１、１４、１５和２６在干旱胁迫３６ｄ时果聚糖含量高于其他转基因
植株，同时期相对电导率和丙二醛含量也较低，说明果聚糖含量高的转基因植株在干旱胁迫时细胞膜稳定性好，
膜损伤小，推测果聚糖作为渗透调节物质在其响应干旱的过程中发挥了作用。
４　结论
果聚糖是犜犪６犛犉犜 的表达产物，为了发挥果聚糖在植物遭受逆境时的作用而又不造成物质能量的无为消
耗和对受体植物的伤害，本研究进行了ｒｄ２９Ａ启动子驱动的犜犪６犛犉犜 对甘蓝型油菜纯系材料的遗传转化，获得
经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交验证的转基因植株。对７株Ｔ１ 代转基因油菜进行了为期３６ｄ的干
旱胁迫，分析干旱胁迫３６ｄ和复水后２ｄ各植株及野生型对照中的犜犪６犛犉犜 的转录水平表达和果聚糖含量，同
时进行同时期丙二醛含量和细胞质膜透性测定。结果表明，犜犪６犛犉犜 的转录水平表达与转基因植株体内的果
聚糖含量、转基因植株的抗旱性呈正相关，表明犜犪６犛犉犜 在干旱胁迫下的表达增强了转基因植株的抗旱性。
参考文献：
［１］　ＶａｎｄｅｒＭｅｅｒｌＭ，ＥｂｓｋａｍｐＭＪＭ，ＶｉｓｓｅｒＲＧＦ，犲狋犪犾．Ｆｒｕｃｔａｎａｓａｎｅｗｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓｉｎｋｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．
ＰｌａｎｔＣｅｌ，１９９４，６（４）：５６１５７０．
［２］　ＥｂｓｔｋａｍｐＭＪＭ，ＶａｎｄｅｒＭｅｅｒＩＭ，ＳｐｒｏｎｋＢＡ，犲狋犪犾．Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｆｒｕｃｔｏｓｅｐｏｌｙｍｅｒｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．Ｂｉｏ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９４，１２（３）：２７２２７５．
［３］　ＨｅｎｓｏｎＣＡ，ＬｉｖｉｎｇｓｔｏｎＤＰＩＩＩ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｆｒｕｃｔａｎｅｘｏｈｙｄｒｏｌａｓｅｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｂａｒｌｅｙｓｔｅｍｓｔｈａｔｈｙｄｒｏｌｙｚｅｓｍｕｌｔｉ
ｐｌｅｆｒｕｃｔｏｆｕｒａｎｏｓｉｄｉｃｌｉｎｋａｇｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，３６：７１５７２０．
［４］　ＫａｗａｋａｍｉＡ，ＳａｔｏＹ，ＹｏｓｈｉｄａＭ．Ｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｒｉｃｅｃａｐａｂｌｅｏｆｓｙｎｔｈｅｓｉｚｉｎｇｆｒｕｃｔａｎｓａｎｄｅｎｈａｎｃｉｎｇｃｈｉｌｉｎｇｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｏｔａｎｙ，２００８，５９：７９３８０２．
［５］　ＫａｗａｋａｍｉＡ，ＹｏｓｈｉｄａＭ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｕｃｒｏｓｅ：ｓｕｃｒｏｓｅ１ｆｒｕｃｔｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅａｎｄｓｕｃｒｏｓｅ：ｆｒｕｃｔａｎ６ｆｒｕｃｔｏ
ｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｆｒｕｃｔａｎａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｗｉｎｔｅｒｗｈｅａｔｄｕｒｉｎｇｃｏｌｄｈａｒｄｅｎｉｎｇ［Ｊ］．ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，６６（１１）：２２９７２３０５．
［６］　ＨｅｌｗｅｇｅＥＭ，ＧｒｉｔｓｃｈｅｒＤ，ＷｉｌｍｉｔｚｅｒＬ，犲狋犪犾．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｔｕｂｅｒｓａｃｃｕｍｕｌａｔｅｈｉｇｈｌｅｖｅｌｓｏｆ１ｋｅｓｔｏｓｅａｎｄｎｙｓｔｏｓｅ：
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｓｕｃｒｏｓｅｓｕｃｒｏｓｅ１ｆｒｕｃｔｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｏｆａｒｔｉｃｈｏｋｅ犆狔狀犪狉犪狊犮狅犾狔犿狌狊ｂｌｏｓｓｏｍｄｉｓｃｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒ
ｎａｌ，１９９７，１２：１０５７１０６５．
［７］　ＨｅｌｗｅｇｅＥＭ，ＲａａｐＭ，ＧｒｉｔｓｃｈｅｒＤ，犲狋犪犾．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｃｈａｉｎｌｅｎｇｔｈｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｉｎｕｌｉｎｆｒｏｍ犆狔狀犪狉犪狊犮狅犾狔犿狌狊ａｎｄ犎犲
犾犻犪狀狋犺狌狊狋狌犫犲狉狅狊狌狊ａｒｅｒｅｆｌｅｃｔｅｄｉｎａｔｒａｎｓｉｅｎｔｐｌａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｕｓｉｎｇｔｈｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ１犉犉犜ｃＤＮＡｓ［Ｊ］．ＦＥＢＳＬｅｔｔ，
１９９８，４２７：２５２８．
［８］　ＶａｎｄｅｒＭｅｅｒＩＭ，ＫｏｏｐｓＡＪ，ＨａｋｋｅｒｔＪＣ，犲狋犪犾．ＣｌｏｎｉｎｇｏｆｆｒｕｃｔａｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐａｔｈｗａｙｓｏｆＪｅｒｕｓａｌｅｍａｒｔｉｃｈｏｋｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９８，１５：４８９５００．
［９］　ＳéｖｅｎｉｅｒＲ，ＨａｌＲＤ，ＶａｎｄｅｒＭｅｅｒＩＭ，犲狋犪犾．Ｈｉｇｈｌｅｖｅｌｆｒｕｃｔａｎａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓｕｇｕｒｂｅｅｔ［Ｊ］．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，１９９８，１６：８４３８４６．
６６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．５
［１０］　李慧娟，尹海英，张学成，等．转蔗糖：蔗糖１果糖基转移酶基因提高烟草的耐旱性［Ｊ］．山东大学学报（理学版），２００７，
４２（１）：８９９３．
［１１］　张小芸，何近刚，孙学辉．转果聚糖合成关键酶基因多年生黑麦草的获得及抗旱性的提高［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０：１１１
１１８．
［１２］　李淑洁，王红梅，张正英．半夏凝集素基因对油菜的遗传转化及ＲＥＡＬＴＩＭＥＰＣＲ分析［Ｊ］．作物杂志，２０１０，（４）：５２５５．
［１３］　薛应龙．植物生理学实验手册（第１版）［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９８５：６７．
［１４］　李州，彭燕，苏星源．不同叶型白三叶抗氧化保护及渗透调节生理对干旱胁迫的响应［Ｊ］．草业学报，２０１３，２２（４）：２５７
２６３．
［１５］　ＹｅＸＤ，ＷｕＸＬ，ＺｈａｏＨ，犲狋犪犾．Ａｌｔｅｒｅｄｆｒｕｃｔａｎａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ犔狅犾犻狌犿犿狌犾狋犻犳犾狅狉狌犿ｐｌａｎｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇａ犅犪犮犻犾
犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊狊犪犮犅ｇｅｎｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＲｅｐｏｒｔｓ，２００１，２０：２０５２１２．
［１６］　ＣａｉｍｉＰＧ，ＭｃＣｏｌｅＬＭ，ＫｌｅｉｎＴＭ，犲狋犪犾．Ｆｒｕｃｔａｎａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｓｕｃｒｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍａｉｚｅｅｎｄｏｓｐｅｒｍｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｎｇａ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊狊犪犮犅ｇｅｎｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９９６，１１０：３５５３６３．
［１７］　ＣａｉｍｉＰＧ，ＭｃＣｏｌｅＬＭ，ＫｌｅｉｎＴＭ，犲狋犪犾．Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊犛犪犮犅ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｈｉｂｉｔｓｔｉｓ
ｓｕｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏａｎｄｐｏｔａｔｏ［Ｊ］．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，１９９７，１３６：１９２８．
［１８］　ＣａｉｒｎｓＡＪ．Ｆｒｕｃｔａｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｏｔａｎｙ，２００３，５４：５４９５６７．
［１９］　高翔，佘茂云，殷桂香，等．小麦果聚糖合成酶基因６犛犉犜克隆和功能验证［Ｊ］．科技导报，２００９，２３：７０７５．
［２０］　殷桂香，佘茂云，高翔，等．植物果聚糖合成酶基因克隆及特性分析［Ｊ］．中国生物工程杂志，２００９，２９（２）：１２５１３３．
［２１］　ＢｉｅＸＭ，ＷａｎｇＫ，ＳｈｅＭ Ｙ，犲狋犪犾．Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎａｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｗｈｅａｔｇｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇｆｒｕｃｔａｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｅｎ
ｚｙｍｅｓｃｏｎｆｅｒｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｆｒｕｃｔａｎｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｏａｂｉｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓｅｓｉｎｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＲｅｐｏｒｔｓ，２０１２，３１：２２２９
２２３８．
［２２］　叶兴国，高翔，佘茂云，等．小麦中果聚糖合成酶基因与抗旱性关系及其分子生物学研究［Ａ］．全国植物分子育种研讨会摘
要集［Ｃ］．北京：中国作物学会，２００９：５７．
［２３］　李淑洁，李静雯，张正英．犜犪６犛犉犜 在烟草中的逆境诱导型表达及抗旱性分析［Ｊ］．作物学报，２０１４，４０（６）：９９４１００１．
［２４］　俞乐，刘拥海，周丽萍，等．干旱胁迫下结缕草叶片抗坏血酸与相关生理指标变化的品种差异研究［Ｊ］．草业学报，２０１３，
２２（４）：１０６１１５．
［２５］　贾学静，董立花，丁春邦，等．干旱胁迫对金心吊兰叶片活性氧及其清除系统的影响［Ｊ］．草业学报，２０１３，２２（５）：２４８
２５５．
犈狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳狋犺犲犜犪６犛犉犜犵犲狀犲犻狀犅狉犪狊狊犻犮犪狀犪狆狌狊狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊
ＬＩＳｈｕｊｉｅ１，ＺＨＡＮＧＺｈｅｎｇｙｉｎｇ２
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＧａｎｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
ＲｅｓｅａｒｃｈＭａｎａｇｅｍｅｎｔＯｆｆｉｃｅ，ＧａｎｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｆｒｕｃｔａｎｉｓｔｈｏｕｇｈｔｔｏｂｅｏｎｅｏｆｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｏｖａｒｉｏｕｓａｂｉｏｔｉｃ
ｓｔｒｅｓｓｅｓ．ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｔｈｅＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍｇｅｎｅｆｏｒｓｕｃｒｏｓｅ：ｆｒｕｃｔａｎ６ｆｒｕｃｔｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（犜犪６
犛犉犜）ｗａｓｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｉｎｔｏ犅狉犪狊狊犻犮犪狀犪狆狌狊，ｄｒｉｖｅｎｂｙｔｈｅｒｄ２９Ａｐｒｏｍｏｔｅｒａｎｄｍｅｄｉａｔｅｄｂｙ犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狋狌
犿犲犳犪犮犻犲狀狊．Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｕｓｉｎｇＰＣＲ，ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔａｎｄｎｏｒｔｈｅｒｎｄｏｔｂｌｏｔ
ｔｅｓｔｓ．Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｔｅｓｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅ犜犪６犛犉犜ｇｅｎｅｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｕｎｄｅｒｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ，ｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎ
ｉｃｐｌａｎｔｓ（ｃｏｎｔｒｏｌ）ａｎｄ７ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ（Ｔ１ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）ｗｅｒｅｅｘｐｏｓｅｄｔｏ３６ｄａｙｓｏｆｍｏｉｓｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓ．Ｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｏｆ犜犪６犛犉犜 ｗａｓｔｅｓｔｅｄｕｓｉｎｇａｓｅｍｉｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲＴ－ＰＣＲ３６ｄａｙｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄ２ｄａｙｓａｆｔｅｒｒｅ
ｗａｔｅｒｉｎｇ．ＦｒｕｃｔａｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｔｒａｉｔｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔｗｅｒｅ
ａｎａｌｙｚｅｄａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ犜犪６犛犉犜ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｉｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｆｒｕｃｔａｎ
ｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔｔｈｅ犜犪６犛犉犜ｇｅｎｅｃｏｕｌｄｅｎｈａｎｃｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｄｒｏｕｇｈｔ
ｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犜犪６犛犉犜；ｆｒｕｃｔａｎ；犅狉犪狊狊犻犮犪狀犪狆狌狊；ｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ
７６１第２３卷第５期 草业学报２０１４年