全 文 ：书苜蓿假盘菌与苜蓿叶片亲和性互作的超微结构特征
史娟１，２，王华荣１，钟少林１
（１．宁夏大学农学院，宁夏 银川７５００２１；２．西部土地退化与生态恢复国家重点实验室培育基地，宁夏 银川７５００２１）
摘要：从细胞角度揭示苜蓿假盘菌与苜蓿叶片亲和性互作机制。以两者亲和性互作系统为研究材料，利用透射电
子显微镜技术研究了苜蓿假盘菌与苜蓿叶片亲和性互作的超微结构特征。结果表明，病菌侵入寄主组织后，菌丝
直接穿透寄主细胞壁进入寄主细胞形成胞内菌丝，以胞内生长并向相邻细胞扩展。病菌菌丝穿透寄主细胞壁时，
菌丝中的液泡给予了较大的压力帮助其穿透。进入寄主细胞内的病菌菌丝，被内陷的寄主原生质膜包裹，菌丝与
质膜始终是隔离的，寄主原生质膜和细胞壁之间沉积电子致密度深的物质。病菌菌丝不断地在寄主原生质膜区域
扩展，伴随菌丝体在寄主细胞内的不断扩大，周围的原生质膜也相应扩大其面积，但始终将寄主原生质与菌丝体隔
开，而脱离质膜的菌丝形成菌丝鞘包裹。随侵染程度的增加，未被穿透的寄主原生质膜区域逐步被降解。病菌侵
染叶绿体等细胞器时，首先是菌丝鞘与叶绿体等细胞器膜相连，然后降解其基粒片层结构，被降解的细胞器组织沿
菌丝和胞壁周围沉积。侵染后期，菌丝胞内和胞外扩展，但处在细胞降解物中的菌丝显示较厚的细胞壁，寄主细胞
内充满了大量的黑色物质和结晶状的颗粒物。
关键词：苜蓿；苜蓿假盘菌；亲和性互作；超微结构
中图分类号：Ｓ８１６；Ｓ５５１＋．７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１２）０５０１２２０６
植物病原真菌引起寄主植物生病进而表现出症状，首先必须侵入寄主组织并在其体内生长，才能完成其侵染
过程。因此，病原菌为了成功侵入发展了一系列的入侵及最大限度生长、繁殖及主动入侵的机制［１］。伴随寄主病
原互作过程的发生，寄主和病原菌相应的生理、生化、细胞及分子生物学过程随之发生［２，３］。研究病原寄主两者
亲和性互作的细胞学特征，从细胞角度阐明两者互作机制，为进一步研究病菌致病的分子机理、信号识别等具有
重要的理论意义。
苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）作为一种优质饲草，是我国栽培面积最大的牧草之一［４］。因其特殊的固氮能力、较
强的适应性，国内外学者从形态、细胞和分子生物学等方面进行了系统而深入的研究［５８］。苜蓿褐斑病（普通叶斑
病）是由苜蓿假盘菌（犘狊犲狌犱狅狆犲狕犻狕犪犿犲犱犻犮犪犵犻狀犻狊）引致的叶部病害，广泛分布于世界各主要苜蓿产区，是苜蓿生
产中危害严重的叶部病害之一［９，１０］。不仅造成牧草产量的损失，而且降低干草产品的品质。病菌侵染叶片形成
平均直径约２ｍｍ的褐色圆形略突起的点状病斑，导致苜蓿叶片香豆雌酚等植物雌激素样物质大量增加，常使得
家禽采食后引起流产、不育等疾病［１１，１２］。有关该病害的研究，最近的研究涉及细胞和分子生物学领域，不仅阐明
了苜蓿褐斑病菌的侵染过程［１３，１４］，而且获得了一个与抗褐斑病基因相关的标记—Ｍ３Ｅ３Ｒ１６９［１５］。标志着苜蓿褐
斑病的研究进入分子领域［１６１８］。这些研究结果为苜蓿的抗病育种奠定了坚实的基础。在苜蓿—苜蓿假盘菌互作
系统中，作者应用细胞学方法研究了苜蓿假盘菌侵染苜蓿叶片的侵染过程［１３］，但两者亲和性互作的超微结构特
征未见系统报道。本研究从病菌侵染以及感病寄主组织的细胞学反应２个方面阐述两者亲和性互作的关系，为
进一步阐明病菌侵入的分子机制提供新思路。
１ 材料与方法
１．１ 供试菌种、苜蓿品种及其培养、繁殖
苜蓿假盘菌由宁夏大学草业科学研究所提供。挑取平板上培养的苜蓿假盘菌菌落，制成菌落悬浮液，移入
２０％Ｖ８ 汁ＣａＣＯ３ 培养基上扩繁。
１２２－１２７
２０１２年１０月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２１卷 第５期
Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．５
收稿日期：２０１１０８３１；改回日期：２０１１１２０６
基金项目：国家自然科学基金（３０７６０００７）资助。
作者简介：史娟（１９６４），女，山东菏泽人，教授，博士。Ｅｍａｉｌ：ｓｈｉ＿ｊ＠ｎｘｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
供试感病苜蓿品种为德国大叶（犕．狊犪狋犻狏犪）由宁夏大学草业科学研究所提供，按常规方法种植于直径为３０
ｃｍ的花盆内，待二茬苜蓿生长至３周左右，避开!叶和老叶，选取生长一致的功能叶片，用灭菌水冲洗２遍后，置
于底部铺有保湿滤纸的培养皿内待用。
１．２ 接种
每皿放入１０个苜蓿叶片，采用逆向产孢培养法进行接种。将Ｖ８ 培养基上成熟的苜蓿假盘菌菌落挑出，移
至底部铺有湿润滤纸的培养皿盖上，于２０℃黑暗条件下保湿４～６ｈ，取出置于离体苜蓿叶片的正上方，利用子囊
自然弹射进行接种，接种２～４ｈ后将接种菌落移出。重复３次。为了保证离体叶片上有足够的游离水，不定期
的用灭菌水对接种后的离体叶片进行喷雾。
１．３ 透射电镜（ＴＥＭ）样品的制备与观察
分别于接种后２４ｈ、４８ｈ、５ｄ（症状初显）、１０ｄ（中显）和１５ｄ（病斑突破寄主表皮产生子囊盘）取样，并将样品
切成０．３～０．５ｃｍ２ 的小块，按康振生［１９］的方法制备样品。叶样经抽真空后于４％戊二醛（磷酸缓冲液，ｐＨ６．８，
０．２５ｍｏｌ／Ｌ）中前固定１６ｈ（４℃），缓冲液反复冲洗，于１％饿酸（磷酸缓冲液，ｐＨ６．８，０．２５ｍｏｌ／Ｌ）中后固定２
ｈ。系列丙酮脱水，Ｅｐｏｎ８１２环氧树脂包埋，在４０和６０℃下分别聚合２４和４８ｈ。样块进行修整后，超薄切片经
醋酸双氧铀—柠檬酸铅双重染色，于ＪＥＭ１２３０型透射电镜下观察、拍照。
２ 结果与分析
２．１ 病菌侵入寄主的超微结构特征
电镜观察发现，苜蓿假盘菌侵入寄主组织后，病菌菌丝在结构和功能上发生了一系列的变化。接种２４～３６
ｈ，菌丝直接进入寄主细胞，以胞内方式生长，并向相邻的细胞扩展（图１１，２）。进入寄主胞内的病菌菌丝有着较
厚的外壁，且周围沉积电子致密度高的物质形成似菌丝鞘状结构将菌丝包裹，菌丝中可见占据面积较大的液泡，
多个菌丝的菌丝鞘可相互连接，且随菌丝的扩展而延伸（图１４，５），菌丝分隔处明显观察到菌丝细胞液在流动
（图１２）。扩展的胞间菌丝细胞壁比胞内菌丝明显加厚（图１３）。菌丝在穿透临近细胞时，菌丝外壁的某一个部
位与寄主细胞壁紧密接触，接触点颜色加深，液泡移向接触点似乎形成了较大的压力帮助其穿过胞壁组织（图２
７）。同时还观察到，侵入寄主细胞内的菌丝并不立即穿透寄主质膜，而是利用质膜将其包围，质膜突起部分沉积
电子致密度高的物质，该区域随菌丝的扩展而延伸（图２９，１０，１２）。胞内菌丝侵染叶绿体等细胞器时，菌丝鞘首
先与叶绿体等细胞器膜相连（图２８，１１），然后破坏和瓦解基粒片层结构，被瓦解的细胞器结构沿菌丝和胞壁周
围沉积（图３１４，１５）。随着菌丝的扩展，菌丝鞘和包裹菌丝的质膜区域被降解（图３１７），而不再具有完整性。
２．２ 寄主细胞病理变化的超微结构特征
超微结构发现，伴随病菌成功侵入、定殖和扩展，寄主细胞出现了一系列的病理变化特征。首先病菌侵入寄
主细胞并在细胞内扩展发育，寄主原生质膜向内凹陷并形成突起，将侵入到寄主细胞内的菌丝包裹，菌丝与质膜
始终是隔离的，寄主原生质膜和细胞壁之间沉积电子致密度深的物质，形成一个将病菌菌丝和寄主原生质膜隔开
的界面层（图１２，图２１０，１１），这一现象表明寄主细胞膜的完整性遭到了攻击，但病菌并未对寄主细胞质膜产生
直接的破坏作用，从而使病原菌不断地在原生质膜区域扩展。其次是菌丝体在寄主细胞内的不断扩大，周围的原
生质膜也相应扩大其面积，始终将寄主原生质与菌丝体隔开。由于苜蓿褐斑病菌大部分的菌丝都是在寄主细胞
内活动，因此，病菌和寄主细胞发生的一系列的营养、生物学及信号识别等都有可能发生在这一区域。当病菌菌
丝扩展至质膜部位时，与其相邻细胞细胞壁内侧的质膜沉积电子致密度高的物质（图３１３）。进一步观察发现，
沿交界面的外层排列了多个不等的液泡状物，有些是直接嵌入在界面层的组织内（图３１６）。随着侵染时间的延
长，寄主细胞内叶绿体是最先被降解的细胞器，随后才是质膜的降解，多个细胞器被降解，降解物沉积在细胞壁和
菌丝壁边缘（图３１９），在降解严重的寄主细胞内，形成一些结晶状的颗粒物（图３２０），随着病菌菌丝的不断扩
展，大量胞内菌丝向胞外扩展，寄主完整的细胞结构消失，被病菌菌丝充满（图３２１）。
３ 结论与讨论
本研究利用电子显微技术，研究了苜蓿假盘菌与苜蓿亲和性互作过程的超微结构特征，首次从细胞角度揭示
了两者互作细胞学机制。为从分子生物学角度对其进行更深入的研究奠定了基础。
３２１第２１卷第５期 草业学报２０１２年
图１ 侵入寄主细胞中的病菌菌丝的超微结构特征
犉犻犵．１ 犜犺犲狌犾狋狉犪狊狋狉狌犮狋狌狉犲狅犳犺狔狆犺犪犾狋狅犻狀狏犪犱犲狋犺犲犺狅狊狋犮犲犾狊
１～２：侵入到寄主细胞中的病菌菌丝胞内生长，并向相邻细胞扩展；３：胞间菌丝；４～５：胞内菌丝形成菌丝鞘，且多个菌丝鞘相互连接；６：菌丝中流
动的细胞液（标尺＝１μｍ）。Ｖ：液泡，ＨＣ：菌丝，ＨＷ：细胞壁，ＣＷ：菌丝细胞壁。１－２：Ｈｙｐｈａｅｉｎｖａｄｅｔｏｔｈｅｈｏｓｔｃｅｌｔｈｅｎｇｒｏｗｔｈｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ，ａｎｄ
ｅｘｔｅｎｓｉｏｎｔｏｔｈｅａｄｊａｃｅｎｔｃｅｌ；３：Ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒｈｙｐｈａｅ；４－５：Ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｈｙｐｈａｅｆｏｒｍｈｙｐｈａｌｓｈｅａｔｈ，ａｎｄｍａｎｙｏｆｔｈｅｍｃｏｎｎｅｃｔｅｄｅａｃｈｏｔｈｅｒ；６：Ｃｅｌ
ｆｌｕｉｄｆｌｏｗｉｎｔｈｅｈｙｐｈａｅ（ｂａｒ＝１μｍ）．Ｖ：Ｖａｃｕｏｌｅ，ＨＣ：Ｈｏｓｔｃｅｌｗａｌ，ＨＷ：Ｃｅｌｗａｌ，ＣＷ：Ｍｙｃｅｌｉｕｍｗａｌ．
图２ 病菌菌丝在寄主细胞中的扩展以及对寄主质膜影响的超微结构特征
犉犻犵．２ 犕狔犮犲犾犻犪犾犲狓狆犪狀狊犻狅狀犻狀犺狅狊狋犮犲犾狊犪狀犱狋犺犲犲犳犳犲犮狋狊狌犾狋狉犪狊狋狉狌犮狋狌狉犲狅犳犺狅狊狋狆犾犪狊犿犪犿犲犿犫狉犪狀犲
７：病菌菌丝穿透寄主细胞壁；８，１１，１２：菌丝鞘与叶绿体膜相连；９～１０：侵入到寄主细胞中的病菌菌丝被寄主细胞质膜包围，形成一界面基质，随菌
丝扩展而增大其相应的面积（标尺＝１μｍ）。７：Ｍｙｃｅｌｉａｌｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎｏｆｈｏｓｔｃｅｌｗａｌ；８，１１，１２：Ｈｙｐｈａｌｓｈｅａｔｈｃｏｎｎｅｃｔｔｏｔｈｅｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｍｅｍｂｒａｎｅ；
９－１０：Ｆｕｎｇａｌｈｙｐｈａｅｉｎｖａｄｅｔｏｈｏｓｔｃｅｌｓｓｕｒｒｏｕｎｄｅｄｂｙｈｏｓｔｃｅｌｍｅｍｂｒａｎｅ，ｆｏｒｍｉｎｇａｍａｔｒｉｘｉｎｔｅｒｆａｃｅ，ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｏｆｍｙｃｅｌｉ
ａｌｅｘｔｅｎｓｉｏｎｉｔｓａｒｅａ（ｂａｒ＝１μｍ）．
４２１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．５
图３ 病菌侵染过程中寄主细胞表现出超微结构特征
犉犻犵．３ 犝犾狋狉犪狊狋狉狌犮狋狌狉犪犾犳犲犪狋狌狉犲狊狊犺狅狑犱狌狉犻狀犵狆犪狋犺狅犵犲狀犻狀犳犲犮狋狅犳犺狅狊狋犮犲犾狊
１３：病菌菌丝扩展到质膜部位与其相邻细胞细胞壁内侧沉积电子致密度高的物质；１４．病菌侵染叶绿体，其菌丝鞘与叶绿体膜相连；１５：被降解的叶
绿体等细胞器沉积在菌丝周围；１６：界面层外侧嵌入的液泡状物；１７：界面层被降解；１８：寄主细胞充满黑色物质；１９～２０：处在降解物下的菌丝及形成
的颗粒状物；２１：病菌菌丝大量繁殖并聚集（标尺＝１μｍ）。１３：Ｈｙｐｈａｅｘｐａｎｄｅｄｔｏｎｅｉｇｈｂｏｕｒｉｎｇｐａｒｔｓｏｆｍｅｍｂｒａｎｅａｎｄｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎｈｉｇｈｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ
ｄｅｎｓｉｔｙｍａｔｅｒｉａｌｉｎｓｉｄｅｔｈｅｃｅｌｗａｌ；１４：Ｇｅｒｍｓｉｎｆｅｃｔｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ，ｉｔｓｈｙｐｈａｅｓｈｅａｔｈｌｉｎｋｅｄｗｉｔｈｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｍｅｍｂｒａｎｅｓ；１５：Ｔｈｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｒｇａｎ
ｅｌｅｓｓｕｃｈａｓｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｄｅｐｏｓｉｔｓａｒｏｕｎｄｔｈｅｈｙｐｈａｅ；１６：Ｖａｃｕｏｌｅｅｍｂｅｄｏｕｔｓｉｄｅｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒｆａｃｅｌａｙｅｒ；１７：Ｉｎｔｅｒｆａｃｅｌａｙｅｒｉｓｄｅｇｒａｄｅｄ；１８：Ｈｏｓｔｃｅｌｓ
ｆｉｌｅｄｗｉｔｈｂｌａｃｋｍａｔｅｒｉａｌ；１９－２０：Ｔｈｅｍｙｃｅｌｉｕｍｕｎｄｅｒｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｇｒａｎｕｌａｒｍａｔｅｒｉａｌｓｆｏｒｍｅｄ；２１：Ａｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｍｙｃｅｌｉａｌｍｕｌｔｉｐｌｙ
ａｎｄｇａｔｈｅｒ（ｂａｒ＝１μｍ）．
在褐斑病菌侵入寄主细胞以及进一步的发育过程中，病菌菌丝穿透寄主细胞壁进入到寄主细胞内，在其发
育和扩展的过程中，被内陷的寄主原生质膜所包围，于是病菌菌丝与寄主质膜之间形成了一个较大的交界面，
这一界面将病菌菌丝与原生质隔开，但这一界面，并不是自始至终都是存在的。在侵染早期，这一界面将菌丝包
围，并随病菌菌丝的扩展而相应的也在扩大其面积，且多个菌丝的界面可以相互连接，且菌丝在扩展和侵染叶绿
体等细胞器时，菌丝鞘首先与质膜和细胞器膜相连形成界面层。初步分析，病菌获取营养物质、与寄主的相互识
别、信息物质的交流等都有可能发生在这一界面。随着侵染强度的增加，这一界面被降解。笔者认为，这一现象
可以说明，病菌为了达到侵入且在胞内定殖的目的，避免寄主细胞抵御病原侵染产生的防御反应，或快速的细胞
死亡，利用寄主原生质膜形成交界面，将菌丝与寄主原生质隔开，这一层界面基质可能是苜蓿褐斑病菌侵入寄主
细胞存在的一个活体营养阶段。由于白粉菌和霜霉菌等活体营养型真菌形成吸器进入寄主细胞，在吸器外膜和
寄主细胞膜的界面之间形成界面基质将其分开，因此，界面基质的形成是大多数活体营养型真菌与寄主形成的一
种共有现象［２０］。而在炭疽菌的研究中，由于炭疽菌与寄主互作界面存在界面基质的现象，且与活体营养型真菌
５２１第２１卷第５期 草业学报２０１２年
的界面基质相似，因此，菜豆炭疽菌（犆狅犾犾犲狋狅狋狉犻犮犺狌犿犾犻狀犱犲犿狌狋犺犻犪狀狌犿）被认为是具有活体和死体２个营养型阶
段的植物病原菌［２１］。苜蓿假盘菌在侵入寄主后也具有和寄主原生质膜形成界面基质的阶段，笔者根据电镜观察
结果：苜蓿假盘菌在其侵染过程中，由于出现了一个类似与活体营养型真菌的界面基质阶段，这一阶段与菜豆炭
疽病菌形成的界面基质也较类似，因此，初步认为苜蓿假盘菌的营养类型为半活体营养型真菌。
定殖在寄主细胞内的病菌菌丝，首先破坏的细胞器是叶绿体，这与ｒｏｂáｒｏｖá［１４］报道的结果一致。随后是膜
的降解，伴随质膜的降解，寄主细胞逐渐被瓦解。这一结果从细胞学角度解释了为什么感染褐斑病的苜蓿叶片光
合速率下降的原因之一。南志标等［２２］研究了苜蓿褐斑病对牧草质量和光合速率影响，褐斑病使苜蓿病叶中粗蛋
白含量显著降低，与健叶相比，其含量减少２５％，叶片光合速率随病害严重度的增加而降低。
病菌早期形成界面层，说明界面层中的电子致密度物质可能与病菌的致病性有关。其次，随病菌侵染强度增
加，界面层外侧排列了多个液泡状物，并可见有的液泡状物与界面层嵌合。初步分析它们可能与界面层的降解有
关。这些沉积物及液泡状物是受病菌诱导的还是寄主细胞早期的反应，有待于深入研究。
致谢：本论文中的研究内容在西北农林科技大学陕西省农业分子生物学重点实验室完成，在此谨表谢意。
参考文献：
［１］ 张彩霞，李壮，陈莹，等．植物与病原互作机制研究进展［Ｊ］．西北植物学报，２０１０，３０（３）：０６２６０６３０．
［２］ 康振生．我国植物真菌病害的研究现状及发展策略［Ｊ］．植物保护，２０１０，３６（３）：９１２．
［３］ 左豫虎，史洁，韩青梅，等．茄链格孢菌侵染马铃薯叶片过程的细胞学［Ｊ］．中国蔬菜，２０１１，（１４）：３５４０．
［４］ 刘志鹏，张吉宇，王彦荣．紫花苜蓿配子体发育遗传调控的研究进展［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（４）：２７０２７８．
［５］ 姜健，杨宝灵，夏彤，等．紫花苜蓿耐盐种质资源的遗传多样性分析［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（５）：１１９１２５．
［６］ 韩明鹏，王彦华，高永革，等．高温胁迫下紫花苜蓿抑制消减文库的构建［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（５）：１２６１３２．
［７］ 蒋世翠，王义，孙春玉，等．ａＦＧＦ植物表达载体构建及转化紫花苜蓿的初步研究［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（４）：１８０１８６．
［８］ 江腾，林勇祥，刘雪，等．苜蓿全基因组 ＷＲＫＹ转录因子基因的分析［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（３）：２１１２１８．
［９］ ＴｕｃｋｅｒＳＬ，ＴａｌｂｏｔＮＪ．Ｓｕｒｆａｃｅａｔｔａｃｈｍｅｎｔａｎｄｐｒｅｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎｓｔａｇｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｂｙｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅ
ｖｉｅｗｏｆＰｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００１，３９：３８５４１７．
［１０］ 袁庆华，李向林，张文淑．苜蓿假盘菌及其生物学特性研究［Ｊ］．植物保护，２００１，２７（１）：８１２
［１１］ ＳｕｍｍｅｒｓＣＧ，ＭｃｃｌｅｌａｎＷＤ．ＥｆｆｅｃｔｏｆｃｏｍｍｏｎｌｅａｆｓｐｏｔｏｎｙｉｅｌｄａｎｄｑｕａｌｉｔｙｏｆａｌｆａｌｆａｉｎｔｈｅｓａｎＪｏａｑｕｉｎｖａｌｅｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ［Ｊ］．
ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅＲｅｐｏｒｔｅｒ，１９７５，５９：５０４５０６．
［１２］ ＷｅｎｏｄｙＣ，Ｍｏｒｇａｎ，ＰａｒｂｅｒｙＤＧ．ＤｅｐｒｅｓｓｅｄｆｏｄｄｅｒｑｕａｌｉｔｙａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｏｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＬｕｃｅｒｎｅｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈ犘狊犲
犱狅狆犲狕犻狕犪犿犲犱犻犮犪犵犻狀犻狊［Ｊ］．ＡｕｓｔｒａｌｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，１９８０，３１：１１０３１１１０．
［１３］ 史娟，韩青梅，张宏昌，等．苜蓿假盘菌侵染苜蓿叶片的细胞学研究［Ｊ］．菌物学报，２００８，２７（２）：１８３１９２．
［１４］ ｒｏｂáｒｏｖáＡ．Ｔｈｅｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｈｏｓｔａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｔｈｅａｌｆａｌｆａｌｅａｆｉｎｆｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｆｕｎｇｕｓ犘狊犲狌犱狅狆犲狕犻狕犪犿犲犱犻犮犪犵犻狀犻狊
（Ｌｉｂ．）Ｓａｃｃ［Ｊ］．Ｂｉｏｌｏｇｌａ，１９８３，３８：７１２．
［１５］ 王瑜，袁庆华，李向林，等．与苜蓿褐斑病（ＣＬＳ）抗性基因连锁的ＳＲＡＰ标记研究［Ｊ］．中国农业科学，２０１０，４３（２）：４３８
４４２．
［１６］ 袁庆华，张君艳．苜蓿假盘菌ＩＳＳＲ反应体系优化及指纹图谱构建［Ｊ］．草地学报，２００８，１６（１）：１１７２２．
［１７］ 毕波，王瑜，袁庆华．苜蓿褐斑病抗性相关分子标记验证［Ｊ］．草地学报，２０１１，１９（４）：６６３６６７．
［１８］ 孟芳，袁庆华，苏德荣．苜蓿抗褐斑病基因ＩＳＳＲ标记的筛选及验证［Ｊ］．植物保护，２００８，３４（４）：４６４９．
［１９］ 康振生．植物病原菌超微结构［Ｍ］．北京：中国科学技术出版社，１９９６．
［２０］ 张宏昌，王晨芳，韩青梅，等．小麦新抗源一例葡抗条锈病的组织学和超微结构研究［Ｊ］．植物病理学报２００８，３８（２）：１１３
１１９．
［２１］ 张敬泽，徐同．柿树炭疽菌侵染不同柿树种、品种和部位的细胞学研究［Ｊ］．菌物系统，２００５，２４（１）：１１６１１２．
［２２］ 南志标，李春杰．苜蓿褐斑病对牧草质量光合速率的影响及田间抗病性［Ｊ］．草业学报，２００１，１０（１）：２６３４．
６２１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．５
犝犾狋狉犪狊狋狉狌犮狋狌狉犪犾犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犮狅犿狆犪狋犻犫犾犲犘狊犲狌犱狅狆犲狕犻狕犪犿犲犱犻犮犪犵犻狀犻狊犻狀狋犲狉犪犮狋犻狅狀狑犻狋犺犪犾犳犪犾犳犪犾犲犪犳
ＳＨＩＪｕａｎ１，２，ＷＡＮＧＨｕａｒｏｎｇ１，ＺＨＯＮＧＳｈａｏｌｉｎ１
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＮｉｎｇｘｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ７５００２１，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，
ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ７５００２１，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎ犘狊犲狌犱狅狆犲狕犻狕犪犿犲犱犻犮犪犵犻狀犻狊ａｎｄ
ａｌｆａｌｆａｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｕｓｉｎｇｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（ＴＥＭ）．Ｗｈｅｎ犘．犿犲犱犻犮犪犵犻狀犻狊ｉｎｖａｄｅｄｈｏｓｔｔｉｓｓｕｅ，
ｔｈｅｈｙｐｈａｅｄｉｒｅｃｔｌｙｐｅｎｅｔｒａｔｅｄｔｈｅｈｏｓｔｃｅｌｗａｌａｎｄｆｏｒｍｅｄｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｈｙｐｈａｅｗｉｔｈｇｒｏｗｔｈｉｎｔｈｅｃｅｌａｎｄｅｘ
ｐａｎｓｉｏｎｉｎｔｏｔｈｅａｄｊａｃｅｎｔｃｅｌ．Ｈｙｐｈａｌｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎｏｆｈｏｓｔｃｅｌｗａｌｓｗａｓａｓｓｉｓｔｅｄｂｙｇｒｅａｔｅｒｖａｃｕｏｌｅｐｒｅｓｓｕｒｅ．
Ｈｙｐｈａｅｗｉｔｈｉｎｈｏｓｔｃｅｌｓｗｅｒｅｗｒａｐｐｅｄｂｙｉｎｖａｇｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｏｓｔｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅａｎｄｍｙｃｅｌｉｕｍａｎｄｐｌａｓｍａ
ｍｅｍｂｒａｎｅｗｅｒｅａｌｗａｙｓｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｅｌｅｃｔｒｏｎｄｅｎｓｅ，ｄａｒｋｍａｔｅｒｉａｌｂｅｔｗｅｅｎｈｏｓｔｐｌａｓｍａ
ｍｅｍｂｒａｎｅａｎｄｃｅｌｗａｌ．Ｐａｔｈｏｇｅｎｈｙｐｈａｅｃｏｎｔｉｎｕｅｄｔｏｅｘｐａｎｄｉｎｔｈｅｈｏｓｔｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｒｅｇｉｏｎｗｉｔｈａｃｏｒ
ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｅｘｐａｎｓｉｏｎｉｎｔｈｅｈｏｓｔｃｅｌ’ｓ，ｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｓｗｈｉｃｈｓｅｐａｒａｔｅｄｔｈｅｈｏｓｔｐｒｏｔｏｐｌａｓｔａｎｄｆｒｏｍｔｈｅ
ｍｙｃｅｌｉｕｍ．Ｔｈｅｈｙｐｈａｅｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｔｏｆｏｒｍａｈｙｐｈａｌｓｈｅａｔｈ．Ｗｉｔｈａｎｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｔｈｅ
ａｍｏｕｎｔｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｒｅｇｉｏｎｏｆｈｏｓｔｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｔｈａｔｗａｓｎｏｔｐｅｎｅｔｒａｔｅｄｗａｓｇｒａｄｕａｌｙｄｅｇｒａｄｅｄａｓ犘．
犿犲犱犻犮犪犵犻狀犻狊ｉｎｆｅｃｔｅｄｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓａｎｄｏｔｈｅｒｏｒｇａｎｅｌｅｓ．Ｆｉｒｓｔ，ｔｈｅｍｙｃｅｌｉａｌｓｈｅａｔｈｃｏｎｎｅｃｔｅｄｔｏｔｈｅｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ
ａｎｄｏｔｈｅｒｏｒｇａｎｅｌｅｍｅｍｂｒａｎｅｓ，ｔｈｅｎｔｈｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｇｒａｎａｌａｍｅｌａｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｄｅｇｒａｄｅｄｏｒｇａｎｅｌｅｔｉｓｓｕｅｓ
ｗｅｒｅｄｅｐｏｓｉｔｅｄａｌｏｎｇｔｈｅｍｙｃｅｌｉｕｍａｎｄａｒｏｕｎｄｔｈｅｃｅｌ ｗａｌ．Ａｔａｌａｔｅｒｓｔａｇｅｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｍｙｃｅｌｉｕｍｅｘ
ｐａｎｄｅｄｂｏｔｈｉｎｔｒａａｎｄｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｌｙ，ｂｕｔｔｈｅｈｙｐｈａｅｉｎｄｅｇｒａｄｅｄｃｅｌｓｈａｄｔｈｉｃｋｃｅｌｗａｌｓａｎｄｔｈｅｈｏｓｔｃｅｌｓ
ｆｉｌｅｄｗｉｔｈａｌｏｔｏｆｂｌａｃｋｍａｔｅｒｉａｌａｎｄｃｒｙｓｔａｌｉｎｅｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｍａｔｔｅｒ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ａｌｆａｌｆａ；犘狊犲狌犱狅狆犲狕犻狕犪犿犲犱犻犮犪犵犻狀犻狊；ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ；ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
７２１第２１卷第５期 草业学报２０１２年