全 文 ：书蓝天堂黑麦草的犖犪犖３诱变及其犚犃犘犇分析
李杰勤１，王丽华１，詹秋文１，董海峰１，刘井良２，李万祥２
（１．安徽科技学院植物科学学院，安徽 凤阳２３３１００；２．安徽金沱湖蟹业有限责任公司，安徽 五河２３３３００）
摘要：本研究利用叠氮化钠（ＮａＮ３）对黑麦草品种蓝天堂进行诱变处理。经过 Ｍ２ 筛选和 Ｍ３ 鉴定，得到农艺性状
发生明显变异的突变体６０株，并从中选择了２个穗部突变体进行分子鉴定。结果表明，在 Ｍ２ 代株系中，共有６０
株具有稳定的变异性状，其中穗部性状发生变异的植株最多，共２１株。在 Ｍ３ 代株系中，比较２个穗部突变体与对
照的表型发现：对照只有１个顶端穗，但经诱变剂处理后，有２个突变体出现多个顶端穗，其中１个突变体有５个二
级分枝。对照和２个突变体在１００个引物中有４５个引物能扩增出带，其中３个引物能够区分对照与突变体１和
２。因此，对照蓝天堂黑麦草和２个 Ｍ３ 突变体之间在ＤＮＡ水平上存在差异。
关键词：黑麦草；化学诱变；突变体；ＲＡＰＤ
中图分类号：Ｓ５４３＋．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１３）０１０２７６０６
多花黑麦草（犔狅犾犻狌犿犿狌犾狋犻犳犾狅狉狌犿）原产地为地中海沿岸，分布于欧洲南部、非洲北部及亚洲西南部［１，２］。目
前，江苏、浙江、江西、湖北、湖南、四川、贵州、安徽等省均有较大面积的栽培。随着多花黑麦草栽培面积的增加，
迫切需要培育出适应我国气候和土壤条件的黑麦草品种。突变作为种质资源创新和功能基因组研究的有效手
段，已被广泛用于育种和功能基因研究中。利用诱变的方法可以构建突变体库，既是进行功能基因研究的基础，
又是创造新种质、培育新品种的途径［３，４］。化学诱变是通过化学试剂造成生物ＤＮＡ的损伤和错误修复，产生突
变体［５］。化学诱变的突变是以点突变为主，并且一些化学试剂具有某些相对较高的突变频率和有较为稳定的突
变谱。化学诱变由于具有操作简单、突变率高、能在短时间内获得大量突变体等优点［６］，因而成为应用最广泛的
诱变技术之一。目前化学诱变中应用较多的诱变剂是叠氮化钠（ＮａＮ３）和甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）。叠氮化钠呈中
性，易透过细胞膜进入细胞，以碱基替换的方式影响ＤＮＡ的正常合成，从而导致突变的发生［７］。目前，叠氮化钠
已经被广泛应用于大豆（犌犾狔犮犻狀犲犿犪狓）、小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）、水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）等作物的诱变育种［８１０］。
随机扩增多态性ＤＮＡ（ｒａｎｄｏｍｌｙａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ，ＲＡＰＤ）技术是重要的ＤＮＡ 分子标记技术
之一。该技术具备模板ＤＮＡ量少、无污染或少污染、费用较低、实验设备相对简单、技术简便、周期短，无需预先
了解ＤＮＡ模板序列信息等特点［１１１３］。虽然ＲＡＰＤ存在重复性和稳定性差的缺点，但ＲＡＰＤ技术简单与操作方
便的优势是其他ＤＮＡ分子标记不具备的。因而，对于标记较少而且全基因组未测序的物种，ＲＡＰＤ是一种理想
的分子标记。
本研究采用多花黑麦草“蓝天堂”进行诱变，从中筛选和鉴定突变体，并用ＲＡＰＤ标记对蓝天堂黑麦草及其
后代突变体进行分子鉴定，可为黑麦草育种提供基础材料。
１ 材料与方法
１．１ 材料
诱变品种为多花黑麦草“蓝天堂”，由百绿公司提供。
１．２ 方法
蓝天堂黑麦草进行诱变处理：２００６年１０月，取４０００粒蓝天堂黑麦草种子，用０．２％的叠氮化钠进行诱变，
２７６－２８１
２０１３年２月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２２卷 第１期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．１
收稿日期：２０１２０８０２；改回日期：２０１２１０１０
基金项目：安徽科技学院青年基金 （ＺＲＣ２０１１２８０），安徽高等学校省级自然科学研究项目 （Ｎｏ．ＫＪ２０１１Ｚ０７５），国家星火计划 （Ｎｏ：
２０１２ＧＡ７１００７６），国家自然科学基金（Ｎｏ：３１０７１４７０），安徽省“１１５”产业创新团队（皖人才办［２００９］２号）和科技部“十二五”农村领域
国家科技计划课题（Ｎｏ：２０１１ＢＡＤ１７Ｂ０３）资助。
作者简介：李杰勤（１９８０），男，四川宜宾人，硕士，讲师。Ｅｍａｉｌ：ｗｌｈｌｊｑ＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。
诱变１ｈ后，将诱变剂倒出，清水冲洗１ｈ以除去残留的诱变剂，试验设２次重复。
２００６年１０月，将用诱变剂处理过的种子用镊子在安徽科技学院种植科技园田间进行点播。种植时在小区
两边各种植２行未处理的蓝天堂黑麦草作为对照。当代（Ｍ１）材料混播，２００７年５月份抽穗后用自交袋套袋自
交，成熟后按单株收获得 Ｍ２ 种子。２００７年１０月按家系播 Ｍ２ 种子，观察变异表型，在变异单株开花前套袋自
交，成熟后收获 Ｍ３ 种子。２００８年１０月种植 Ｍ３ 代，２００９年５月观察表型并测定农艺性状。２００９年１０月种植
Ｍ４ 继续观察表型。
１．３ ＲＡＰＤ分析
１．３．１ ＤＮＡ的提取 ＤＮＡ的提取材料是 Ｍ３ 代黑麦草叶片，采用的是ＳＤＳ法［１４］对植物新鲜幼嫩的叶片进行
总ＤＮＡ提取。提取方法：取嫩叶２ｇ，加少量石英砂和５００μＬ经６５℃预热的提取液研磨成匀浆，转入１．５ｍＬ
ＥＰ管中，摇匀，放在６５℃的水浴锅中温浴３０ｍｉｎ；然后加入２００μＬ预冷的５ｍｏｌ／ＬＫＡＣ溶液，混匀后冰浴２０
ｍｉｎ（禁止摇动）；加入体积比为２４∶１的氯仿∶异戊醇溶液至１．５ｍＬ，盖上盖子后，摇匀５～７ｍｉｎ，１００００ｒ／ｍｉｎ
离心１０ｍｉｎ；取上清液于另一离心管中，加入预冷却２倍体积的无水乙醇沉淀ＤＮＡ；用移液枪吸取上清液至新的
标号的ＥＰ管中，加入无水乙醇，１５ｍｉｎ１００００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ后倒掉上清，吹干；加入２００μＬ超纯水溶解。
１．３．２ 生物学试剂 ＴａｑＤＮＡ聚合酶，ｄＮＴＰ，１０×Ｂｕｆｆｅｒ、Ｍｇ２＋以及ＤＮＡ标准分子量（ＤＮＡＬａｄｄｅｒｍａｒｋｅｒ）
均购自北京天根生化科技有限公司。１００对ＲＡＰＤ引物由上海赛百盛生物技术有限公司合成。
１．３．３ ＰＣＲ反应 ＰＣＲ反应体系为２０μＬ：１０×ｂｕｆｆｅｒ２．０μＬ，２５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２２．０μＬ，２５ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ
２．０μＬ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶１Ｕ，引物２．０μＬ总ＤＮＡ１００ｎｇ和ｄｄＨ２Ｏ９．８μＬ。
ＰＣＲ扩增反应程序：９５℃预变性５ｍｉｎ，然后进入循环，每个循环为９４℃变性１ｍｉｎ，３６℃退火２ｍｉｎ，７２℃
延伸１ｍｉｎ，共４５个循环，最后再延伸１０ｍｉｎ，４℃保存。
１．３．４ 电泳检测 扩增产物在０．５×ＴＢＥ缓冲液系统中，稳压１００Ｖ，时间２．５ｈ，用含有ＥＢ的１．２％的琼脂糖
凝胶电泳分离，同时以１００～２０００ｂｐＤＮＡ作为分子量标记，ＢＩＯＲＡＤＧｅｌＤｏｃ２０００凝胶成像系统观察并拍
照。
２ 结果与分析
２．１ 突变体的类型及其数量
播种的４０００粒黑麦草 Ｍ１ 种子中，共有４０２株
Ｍ１ 植株存活，最后获得３９６个 Ｍ２ 株系。经过连续２
年的套袋自交和观察比较，有６０个植株具有稳定的变
异性状（表１）。
在６０个具有变异性状的植株中，有１１个性状的
变异，这１１种变异类型包括：穗部畸形、分蘖增多、株
型散开、紫花、叶茎变红、植株矮化、早熟、茎秆增粗、紫
红色茎节、无分蘖、叶增宽，图１中展示了部分突变体
的表型。在这些突变体类型中，穗部性状的变异植株
数量最多，有２１株，占３５．０％；其次是与分蘖相关的
性状（主要是多分蘖和无分蘖）共有１２株，占２０．０％；
最少的是叶茎颜色性状的变异，叶茎突变为红色的植
株只有１株，占１．７％（表１）。
表１ ６０个突变体的田间鉴定结果
犜犪犫犾犲１ 犜犺犲狆犺犲狀狅狋狔狆犲狅犳狋犺犲６０犿狌狋犪狀狋狊犻狀狋犺犲犳犻犾犲犱
编号
Ｎｏ．
变异类型
Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ
数量
Ｎｕｍｂｅｒ
比率
Ｒａｔｉｏ（％）
１ 穗部畸形Ａｂｅｒｒａｎｔｓｐｉｋｅｌｅｔ ２１ ３５．０
２ 分蘖多 Ｈｉｇｈｔｉｌｅｒｉｎｇ ９ １５．０
３ 株型散开Ｌｏｏｓｅｄｐｌａｎｔｔｙｐｅ ５ ８．３
４ 紫花Ｐｕｒｐｌｅｆｌｏｗｅｒ ４ ６．７
５ 叶茎为红色Ｒｅｄｌｅａｖｅｓａｎｄｓｔｅｍ １ １．７
６ 植株矮小Ｐｌａｎｔｄｗａｒｆ ３ ５．０
７ 早熟Ｅａｒｌｙｍａｔｕｒｉｎｇ ２ ３．３
８ 茎秆增粗Ｓｔｅｍａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ５ ８．３
９ 紫红色茎节Ｐｕｒｐｌｅｉｎｔｅｒｎｏｄｅ ３ ５．０
１０ 无分蘖Ｓｉｎｇｌｅｓｔｅｍ ３ ５．０
１１ 叶增宽 Ｗｉｄｅｒｌｅａｖｅｓ ４ ６．７
总Ｔｏｔａｌ ６０ １００．０
由此可知，诱变剂处理后，发生突变的基因可能主要是控制穗部和分蘖２个方面性状的基因。在调查结果的
过程中还发现，植株的矮化性状总与分蘖性状伴随在一起出现，突变的基因也可能与控制这２个性状的基因相
关。
７７２第２２卷第１期 草业学报２０１３年
图１ 部分突变体的表型
犉犻犵．１ 犜犺犲狆犺犲狀狅狋狔狆犲狅犳犿狌狋犪狀狋狊
Ａ：株型散开；Ｂ：穗分枝增加；Ｃ：茎杆红色；Ｄ：小穗散开；Ｅ：穗变小；Ｆ：叶片红色；Ｇ：植株矮小 （Ｄ和Ｅ图左为对照，右为突变体）。Ａ：Ｌｏｏｓｅｄｐｌａｎｔ
ｔｙｐｅｍｕｔａｎｔ；Ｂ：Ｍａｎｉｆｏｌｄｓｅｃｏｎｄａｒｙｂｒａｎｃｈｍｕｔａｎｔ；Ｃ：Ｒｅｄｓｔｅｍｍｕｔａｎｔ；Ｄ：Ｌｏｏｓｅｄｂｒａｎｃｈｍｕｔａｎｔ；Ｅ：Ｓｍａｌｐａｎｉｃｌｅｍｕｔａｎｔ；Ｆ：Ｒｅｄｌｅａｖｅｓ；Ｇ：
Ｐｌａｎｔｄｗａｒｆ（ＬｅｆｔｐａｎｉｃｌｅａｎｄｒｉｇｈｔｐａｎｉｃｌｅｉｓＣＫａｎｄｍｕｔａｎｔｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎＦｉｇｕｒｅＤａｎｄＥ）．
２．２ ２个穗部突变体的表型鉴定
从６０个具有稳定变异性状的植株中选取２个穗部变异的突变体进行进一步的鉴定分析。２个穗部突变体
Ｍ３ 种子播种后，在生育期内进一步调查其田间农艺性状（表２）。
对突变体１、突变体２和对照的方差测验表明：化学诱变剂诱变后，Ｍ３ 株系的植株高度虽然均低于对照，但
差异不显著；从叶长性状看，突变体１和２均长于对照，但突变体２要比对照显著增长，表现出较为优良的性状；
突变体２的穗长没有变化，但是突变体１穗长比对照降低了２６．０％，差异显著；对照只有１个顶端小穗，突变体
顶端小穗数都增加，突变体１为２个，突变体２为５个；突变体２和对照穗部均无二级分枝，但突变体１的二级分
枝有５个（表２和图２）。
８７２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．１
表２ 对照和２个穗部突变体的农艺性状比较
犜犪犫犾犲２ 犆狅犿狆犪狉犻狊狅狀狅犳犪犵狉狅狀狅犿犻犮狋狉犪犻狋狊犫犲狋狑犲犲狀犆犓犪狀犱狋犺犲２狆犪狀犻犮犾犲犿狌狋犪狀狋狊
材料
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
植株高度
Ｐｌａｎｔｈｅｉｇｈｔ
（ｃｍ）
叶长
Ｌｅａｆｌｅｎｇｔｈ
（ｃｍ）
穗长
Ｐａｎｉｃｌｅｌｅｎｇｔｈ
（ｃｍ）
顶端小穗
Ｔｏｐｓｐｉｋｅｌｅｔｓ
（个Ｎｏ．）
二级分枝
Ｓｅｃｏｎｄａｒｙｂｒａｎｃｈｎｕｍｂｅｒ
ｐｅｒｐａｎｉｃｌｅ（个 Ｎｏ．）
对照ＣＫ ７６．１ ２１．０ｂ ３５．４ａ １ ０
突变体１ＭｕｔａｎｔＮｏ．１ ７２．８ ２３．０ａ ２６．２ｂ ２ ５
突变体２ＭｕｔａｎｔＮｏ．２ ７４．３ ２４．０ａ ３５．４ａ ５ ０
表中不同字母表示在０．０５水平上差异显著。
Ｖａｌｕｅｓｆｏｌｏｗｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔ０．０５ｌｅｖｅｌ．
图２ 对照和２个突变体的穗部表型比较
犉犻犵．２ 犜犺犲狆犪狀犻犮犾犲狆犺犲狀狅狋狔狆犲狅犳犆犓犪狀犱狋犺犲２犿狌狋犪狀狋狊
图３ 对照与２个突变体的犚犃犘犇电泳图
犉犻犵．３ 犚犃犘犇狉犲狊狌犾狋狊狅犳犆犓犪狀犱狋犺犲２狆犪狀犻犮犾犲犿狌狋犪狀狋狊
Ｍ为 Ｍａｒｋｅｒ；白色箭头表示差异带；１～３，４～６，７～９分别表示引物
Ｃ０７、Ｅ０４、Ｄ１４在对照与２个突变体扩增结果（其中１，４，７为对照；２，５，
８为突变体１；３，６，９为突变体２）。Ｍ：Ｍａｒｋｅｒ．Ｗｈｉｔｅａｒｒｏｗｓｍｅａｎｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｂａｎｄｓ．１－３，４－６，７－９ｄｅｎｏｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＣ０７，
Ｅ０４，Ｄ１４ｐｒｉｍｅｒｓｂｅｔｗｅｅｎＣＫａｎｄ２ｍｕｔａｎｔｓ（１，４，７：ＣＫ；２，５，８：ｍｕ
ｔａｎｔＮｏ．１；３，６，９：ｍｕｔａｎｔＮｏ．２）．
２．３ ２个穗部突变体的ＲＡＰＤ分析
采用１００个引物对这２个突变体和对照进行筛
选，共有４５对引物在这３个材料间都能扩增出条带，
这些条带在２５０～２０００ｂｐ都有分布，但主要集中在
５００～２０００ｂｐ。在这４５对引物中筛选出３个引物在
突变体与对照之间有差异。其中引物Ｃ０７在对照有１
条特征带，能区分出对照、突变体１和突变体２。在突
变体２中，引物Ｅ０４有１条特异带，而对照和突变体１
没有这条带。引物Ｄ１４在突变体１和２中都有这条
带而对照没有（图３）。因此，这３个引物应当与穗部
变异表型连锁。这可为进一步对突变的穗部性状的基
因定位奠定一定的基础。
３ 讨论
化学诱变育种是目前一种迅速发展的作物育种技
术，具有使用方便、特异性较强和诱变后代较易稳定遗
传等特点［１５］。目前研究表明在不同作物中诱变率存
在较大的差别，而且在相同的作物中诱变率也存在较
大的差异。张晓勤等［１６］利用 ＥＭＳ处理大麦（犎狅狉
犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲）品种获得了各种农艺性状的突变体，突
变群体的表型变异率为７．４６％，Ｍ１ 代的成苗率为
４６．７％。张凤启等［１７］用ＥＭＳ处理甘蓝型油菜（犅狉犪狊
狊犻犮犪犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊）ＮＪ７９８２种子，突变群体的表型变异率
为１８．５１％，Ｍ１ 代的成功率则为２７．９％，而同样用
ＥＭＳ诱变甘蓝型油菜，孙加焱等［１８］诱变率则为
１２．６７％。本实验中，通过化学诱变剂ＮａＮ３ 对黑麦草
种子进行诱变处理，得到了一些具有不同性状的突变
体，而且其中一些突变体具有优良的农艺性状，如穗部
形状、分蘖数的变异等。在实验中，诱变的种子共有
３１２０粒存活，存活率为７８％，致死率为２２％；获得３９６
个 Ｍ２ 代株系，共６０份突变体材料，占突变体群体总
数的１５．２％。其中突变表型最多的是穗部性状，占
９７２第２２卷第１期 草业学报２０１３年
３５％。相比于大麦ＥＭＳ诱变来说，本研究的突变率较高［１６］。但对于甘蓝型油菜的ＥＭＳ诱变来说，本研究的诱
变率并不高，而成苗率较高［１７］。这说明诱变剂的浓度与成苗率成反比，而与诱变率成正比。因此，在进行化学诱
变时，如何设定诱变剂的浓度很重要。本研究中采用了０．２％的诱变率取得较好的成苗率和诱变率，这为种子较
小的饲用作物的诱变率提供了参考。通过化学诱变的变异性状类型丰富，产生了穗部畸形、分蘖多、株型散开等
具有众多变异性状的突变体，这些突变体有一些可以直接作为育种材料，如叶长增加的突变则可以用于改良茎叶
比，而分蘖增加其他性状又未改变的突变体单株则直接增加了单株鲜重和干重，因而可以直接在生产上应用。
随着现代分子生物技术的发展，分子标记被应用于系谱分析、基因定位、遗传作图和诱变检测等［１９］。殷冬梅
等［２０］利用ＲＡＰＤ标记检测了ＥＭＳ诱变后代，检测结果表明变异后代的 ＲＡＰＤ谱带已经发生了变异。陈洋
等［２１］利用ＰＣＲ标记检测了１８个感黄矮病突变体，结果发现这些突变体在１～４个分子标记位点发生了变异。
崔广荣等［２２］利用ＲＡＰＤ标记检测了ＥＭＳ诱变的蝴蝶兰（犘犺犪犾犪犲狀狅狆狊犻狊），部分诱变再生苗ＲＡＰＤ谱带发生了改
变。本研究利用ＲＡＰＤ标记对２个穗部突变体和对照进行了分子鉴定，其中引物Ｃ０７能够将对照和突变体１和
２都区分开，而且这条特征带具有可重复性。因此，这个引物应当是和突变体的穗部变异基因有关。但由于黑麦
草全基因组未测序，因此如何将此基因鉴定出来还有大量的工作要做。本研究为进一步对
!
部变异相关基因的
定位和克隆奠定了良好的基础。
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犐狀狏犻狋狉狅犿狌狋犪狋犻狅狀犻狀犱狌犮狋犻狅狀犫狔犖犪犖３犻狀狉狔犲犵狉犪狊狊狏犪狉犻犲狋狔“犅犾狌犲犎犲犪狏犲狀”犪狀犱犚犃犘犇犪狀犪犾狔狊犻狊犳狅狉犻狋狊狏犪狉犻犪狋犻狅狀
ＬＩＪｉｅｑｉｎ１，ＷＡＮＧＬｉｈｕａ１，ＺＨＡＮＱｉｕｗｅｎ１，ＤＯＮＧＨａｉｆｅｎｇ１，ＬＩＵＪｉｎｇｌｉａｎｇ２，ＬＩＷａｎｘｉａｎｇ２
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡｎｈｕｉＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ２３３１００，
Ｃｈｉｎａ；２．ＡｎｈｕｉＧｏｌｄｅｎＴｕｏＬａｋｅＣｒａｂＬｉｍｉｔｅｄＣｏｍｐａｎｙ，Ｗｕｈｅ２３３３００，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅｒｙｅｇｒａｓｓ（犔狅犾犻狌犿犿狌犾狋犻犳犾狅狉狌犿）ｖａｒｉｅｔｙ“ＢｌｕｅＨｅａｖｅｎ”ｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｓｏｄｉｕｍａｚｉｄｅ（ＮａＮ３）．
ＡｆｔｅｒｓｅｌｅｃｔｉｎｇｆｒｏｍＭ２ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭ３ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｗｅｏｂｔａｉｎｅｄ６０ｍｕｔａｎｔｓｗｉｔｈｔｈｅｍｏｓｔ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｖａｒｉａｔｉｏｎｔｒａｉｔｓ．Ｔｗｏｐａｎｉｃｌｅｍｕｔａｎｔｓｗｅｒｅｃｈｏｓｅｎｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｂｙｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓ．１００ＲＡＰＤ
（ｒａｎｄｏｍｌｙａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）ｒａｎｄｏｍｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｃｈｅｃｋ（ＣＫ）ａｎｄ２ｐａｎｉｃｌｅｍｕ
ｔａｎｔｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ６０ｐｌａｎｔｓｗｉｔｈｓｔａｂｌｅｖａｒｉａｔｉｏｎｔｒａｉｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ Ｍ２ ｍｕｔａｎｔｌｉｎｅｓ．２１
ｐａｎｉｃｌｅｍｕｔａｎｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｎｄｉｔｗａｓｔｈｅｍｏｓｔａｍｏｎｇｔｈｅｓｅｍｕｔａｎｔｔｙｐｅｓ．２ｐａｎｉｃｌｅｍｕｔａｎｔｓｗｅｒｅｃｏｍ
ｐａｒｅｄｗｉｔｈＣＫ．ＯｎｌｙｏｎｅｔｏｐｓｐｉｋｅｏｎＣＫ，２ｐａｎｉｃｌｅｍｕｔａｎｔｓｈａｖｅｍｏｒｅｔｏｐｓｐｉｋｅｌｅｔｓ．ＡｎｄｍｕｔａｎｔｓＮｏ．２ａｎｄ
ＣＫｈａｖｅｎｏｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｂｒａｎｃｈｐｅｒｐａｎｉｃｌｅ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｍｕｔａｎｔＮｏ．１ｈａｓ５ｓｅｃｏｎｄａｒｙｐａｎｉｃｌｅｂｒａｃｈｅｓ．４５ＲＡＰＤ
ｐｒｉｍｅｒｓｃａｎｂｅａｍｐｌｉｆｉｅｄａｍｏｎｇｔｈｅｔｈｒｅｅｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｔｈｒｅｅｍａｔｅｒｉａｌｓｃａｎｂｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄｂｙ３
ＲＡＰＤｐｒｉｍｅｒｓ．ＳｏｔｈｅｒｅｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎＣＫａｎｄｔｈｅ２ｐａｎｉｃｌｅｍｕｔａｎｔｓｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅｌ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｒｙｅｇｒａｓｓ（犔狅犾犻狌犿犿狌犾狋犻犳犾狅狉狌犿）；ｃｈｅｍｉｃａｌｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ；ｍｕｔａｎｔ；ＲＡＰＤ
１８２第２２卷第１期 草业学报２０１３年