全 文 ：书甘肃省嘉峪关市洋葱鳞茎软腐病病原鉴定
吕和平１，２，魏晖１，３，漆永红２，张彦梅１，曹素芳２，杨发荣２，李敏权２，沈慧敏１
（１．甘肃农业大学草业学院，甘肃 兰州７３００７０；２．甘肃省农业科学院植物保护研究所，甘肃 兰州７３００７０；
３．天水市农业高新技术示范区，甘肃 天水７４１０３０）
摘要：结合形态学与分子生物学特征对甘肃省嘉峪关市洋葱鳞茎软腐病病原种类进行了鉴定，在ＫＢ培养基上对两
株典型菌株的菌落形态和培养特征进行了观察和描述，１６ＳｒＤＮＡ序列测定和同源性比对结果表明两菌株的１６Ｓ
ｒＤＮＡ序列分别与ＧｅｎＢａｎｋ数据库已知胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种和格氏沙雷氏菌的序列同源性均达９９％，
其片段大小分别为１３８６ｂｐ和１３７９ｂｐ。致病性测定结果表明，２种菌均能引起洋葱鳞茎软腐病，且洋葱基部的发
病程度高于顶部，其中胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种的致病力强于格氏沙雷氏菌。按柯赫氏法则初步确定甘肃
省嘉峪关市洋葱鳞茎软腐病病原种类为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种和格氏沙雷氏菌２种，由格氏沙雷氏菌引
起的洋葱鳞茎软腐病属首次报道。本研究将为洋葱软腐病的防治提供理论依据。
关键词：鳞茎软腐病；洋葱；致病性测定；形态鉴定；１６ＳｒＤＮＡ鉴定
中图分类号：Ｓ６３３．２０８；Ｓ４３６．３３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１３）０４０１５３０７
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１３０４１９
洋葱（犃犾犾犻狌犿犮犲狆犪）是百合科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞茎的草本植物。原产于中亚和地
中海，由于其良好的经济效益以及广泛的栽培适应性，在我国南北各地均有种植。嘉峪关市地处甘肃省西北部的
河西走廊中部，光照充足，昼夜温差大，土壤肥沃，具有得天独厚种植洋葱的自然生态条件，现已发展成为甘肃省
最大的优质洋葱生产和繁种基地，洋葱生产已成为本地区的主导产业［１］。近年来，由于种植面积扩大，连作重茬
种植，洋葱鳞茎软腐病发生日趋严重，严重影响了洋葱的产量与品质。软腐病是甘肃省地膜栽培洋葱生产上常发
生的细菌性病害，主要发生在７月中上旬，期间由于天气连阴、雨水增多、田间郁闭、湿度大，又恰逢洋葱鳞茎膨大
期，极容易造成病害发生。一般田间发病率５％～１０％，严重地块达４０％～５０％，减产轻者１０％～２０％，重者达
３０％以上。
细菌分类鉴定除传统的形态特征、培养特性、生理生化特征和免疫学反应等方法外，１６ＳｒＤＮＡ技术已被用
于细菌的快速分子诊断和分类鉴定［２］。国内外的学者利用１６ＳｒＤＮＡ方法对一些细菌进行了研究，Ｔａｇｈａｖｉ
等［３］利用１６ＳｒＤＮＡ对香蕉（犕狌狊犪狀犪狀犪）细菌性病害进行了研究。刘长远等［４］采用１６ＳｒＤＮＡ方法鉴定出了黄
瓜（犆狌犮狌犿犻狊狊犪狋犻狏狌狊）细菌性白枯病病原菌为绿黄假单胞菌（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪）。杨瑞先［５］利用１６ＳｒＤ
ＮＡ序列分析鉴定了油菜（犅狉犪狊狊犻犮犪犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊）内生细菌病原菌为成团泛菌和蜡状芽孢杆菌等。邓刚等［６］采用
１６ＳｒＤＮＡ鉴定了甘肃番茄（犛狅犾犪狀狌犿犾狔犮狅狆犲狉狊犻犮狌犿）细菌性斑点病病原菌为丁香假单胞杆菌番茄致病变种
（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ）。王霞等［７］通过１６ＳｒＤＮＡ技术研究了长期稻草还田对水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻
狏犪）土壤细菌多样性的影响。本试验从病原细菌形态学和１６ＳｒＤＮＡ序列测定及序列分析入手，对嘉峪关洋葱鳞
茎软腐病病原种类进行研究，旨在为深入开展该病害的发生发展规律、综合防治以及洋葱的抗病育种等提供理论
依据。
１ 材料与方法
１．１ 病样采集和病原菌分离及回接
２００９－２０１１年在甘肃省嘉峪关市新城镇中沟六队洋葱收获季节，采集洋葱鳞茎软腐病病样，描述症状、拍照
第２２卷 第４期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
１５３－１５９
２０１３年８月
收稿日期：２０１２０７０３；改回日期：２０１２０９１４
基金项目：嘉峪关洋葱根腐病研究与防治示范项目（０３６０３６０３４）资助。
作者简介：吕和平（１９６５），男，山东莱西人，研究员，在读博士。Ｅｍａｉｌ：Ｌｈｅｐｉｎｇ＠ｑｑ．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｎｄｓｈｍ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ，ｌｍｑ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
并及时分离。采用划线法分离病样细菌［８］，接种于金氏Ｂ（ＫＢ）培养基上后置２８℃培养箱培养２～３ｄ，挑取各菌
落进行纯化获得２株典型菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２。通过柯赫氏法则，回接于健康洋葱品种“牧童”，发病后再次分
离和纯化病原菌，保存菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２备用。
１．２ 病原菌鉴定
１．２．１ 形态鉴定 将各菌株在ＫＢ平板上培养２４ｈ观察菌落形态，并采用结晶紫草酸胺染色法进行革兰氏染
色后，在ＯｌｙｍｐｕｓＢＨ２光学显微镜下观察个体形态，并拍照［９］。
１．２．２ １６ＳｒＤＮＡ分子鉴定 病原菌的培养及基因组ＤＮＡ提取：在ＫＢ培养基上活化菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２，分
别挑取单菌落接种于２０ｍＬＫＢ培养液中，２８℃振荡培养３６ｈ，１３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃去上清液，收集菌体
沉淀重悬于１．０ｍＬ的０．８５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ中，１３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。采用十六烷基三甲基溴化铵 （ＣＴＡＢ）法
提取细菌基因组ＤＮＡ［１０］。
ＰＣＲ扩增：选择细菌１６ＳｒＤＮＡ通用引物Ｐｒｉｍｅｒ１和Ｐｒｉｍｅｒ２（由上海英骏生物技术公司合成），其序列分别为：
５′ＣＣＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＡＴＧＧＣＴＣＡＧＣＡ３′和５′ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ
３′。ＰＣＲ扩增采用５０μＬ反应体系，其中１０×ＰＣＲＢｕｆｆｅｒ５μＬ，２５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２８μＬ，１０ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ４
μＬ，１０ｎｍｏｌ／ＬＰｒｉｍｅｒ１和Ｐｒｉｍｅｒ２各１μＬ，１．５ＵＴａｑ酶０．５μＬ，ＤＮＡ模板２μＬ，加ｄｄＨ２Ｏ至５０μＬ。ＰＣＲ扩
增条件为：９４℃ 预变性５ｍｉｎ；然后９４℃变性３０ｓ，５７℃退火４０ｓ，７２℃延伸２ｍｉｎ，反应共３０个循环；最后７２℃
延伸１０ｍｉｎ。４℃保存备用。ＰＣＲ产物采用１．５％的琼脂糖凝胶１２０Ｖ电泳３０ｍｉｎ后进行检测，用１×ＴＢＥ作
为电泳缓冲液，并在紫外灯下观测照相。
ＰＣＲ产物的回收及序列测定：ＰＣＲ产物采用ＴＩＡＮＧＥＮ公司的琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收纯化，具体
操作步骤参照试剂盒操作说明。将回收后的产物送北京生物工程有限公司进行序列测定。
序列分析及同源性比较：将待测菌株的基因序列与ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸数据库中的基因序列进行同源性比较，
采用 ＭＥＧＡ软件对所测菌株的基因序列与ＧｅｎＢａｎｋ中的同源性最高的菌种基因序列进行聚类分析，构建同源
性树。
１．３ 致病性测定
将菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２在２８℃条件下培养２４ｈ，配成含菌量为３×１０８ＣＦＵ／ｍＬ的菌悬液，采用针刺法接
种到当地常规洋葱品种“牧童”的健康鳞茎上，接菌后置于２０℃培养箱，７ｄ后观察洋葱鳞茎的发病情况，统计发
病率和病情指数。以接种灭菌蒸馏水作为空白对照。根据接菌后洋葱鳞茎病斑大小分为５级，０级：无病斑（不
感病）；１级：发病面积小于洋葱鳞茎表面积的１０％以下；２级：发病面积占洋葱鳞茎表面积的１０％～３０％；３级：
发病面积占洋葱鳞茎表面积的３０％～５０％；４级：发病面积大于洋葱鳞茎表面积的５０％以上。
发病率（％）＝（发病株数／总株数）×１００
病情指数＝［∑（各级病株数×相对级数值）／（总株数×５）］×１００
２ 结果与分析
２．１ 洋葱鳞茎软腐病发病症状
２００９－２０１１年调查发现，鳞茎膨大期，在１～２片外叶的下部产生半透明灰白色斑，叶鞘基部软化腐败，导致
外叶倒折，病斑向下扩展，田间发病严重时会出现叶片状倒伏枯死。鳞茎部染病初呈水浸状，后内部开始腐烂，有
白色或黄褐色汁液溢出，散发出恶臭味，直至中空（图１）。健康洋葱鳞茎见图２。
２．２ 菌落形态及培养特征
菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２在ＫＢ培养基上培养２４ｈ，均形成圆形或近圆形菌落，乳白色，不透明，中心有白色凸
起，有光泽，边缘整齐。
菌株 ＷＱ１６为直杆状，直径０．５～０．８μｍ，长０．９～２．０μｍ，端圆，兼性厌氧，革兰氏染色阴性，２０～３０℃生长
良好。菌株 ＷＱ３２为直杆状，０．５～１．０μｍ×１．０～３．０μｍ，兼性厌氧，革兰氏染色阴性，２８℃生长良好（图３）。
２．３ 菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２基因组ＤＮＡ提取
菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２基因组ＤＮＡ电泳图谱见图４，从图可以看出，电泳条带呈线形，谱带整齐，无拖尾，表
４５１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
明ＤＮＡ结构较完整。紫外分光光度计检测结果表明，ＤＮＡ样品的 ＯＤ２６０／２８０值在１．６～１．９之间，表明提取的
ＤＮＡ较为纯净。浓度介于４０～６５ｎｇ／μＬ，平均浓度为５０ｎｇ／μＬ，说明获得浓度较高并且纯度较好的基因组
ＤＮＡ，可以满足细菌分子生物学的试验需要。
图１ 洋葱鳞茎软腐病症状
犉犻犵．１ 犛狅犳狋狉狅狋狅犳狅狀犻狅狀犫狌犾犫
图２ 健康洋葱鳞茎
犉犻犵．２ 犅狌犾犫狅犳犺犲犪犾狋犺狔狅狀犻狅狀
图３ 菌株 犠犙１６和 犠犙３２形态特征及革兰氏染色结果
犉犻犵．３ 犕狅狉狆犺狅犾狅犵犻犮犪犾犮犺犪狉犪犮狋犲狉犪狀犱犵狉犪犿狊狋犪犻狀犻狀犵狅犳犠犙１６犪狀犱犠犙３２狊狋狉犪犻狀
２．４ 菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２１６ＳｒＤＮＡ－ＰＣＲ电泳检测结果
基因组ＤＮＡ中扩增出１６ＳｒＤＮＡ核苷酸片断，用琼脂糖凝胶电泳检测在１３７１～１９２９ｂｐ之间有一明亮的
条带，无其他非特异性条带（图５），表明获得的目的ＤＮＡ片断产量高，纯度好。
图４ 两菌株基因组犇犖犃
犉犻犵．４ 犌犲狀狅犿犻犮犇犖犃狅犳狋狑狅狊狋狉犪犻狀狊
图５ 犘犆犚电泳图
犉犻犵．５ 犈犾犲犮狋狉狅狆犺狅狉犲狊犻狊犻犿犪犵犲狅犳犘犆犚犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀
图４和图５中的 Ｍ分别表示ＤＮＡ标准分子量ＳＭ０３０１和ＳＭ０１１１。ＭｍｅａｎｓＤＮＡＭａｒｋｅｒＳＭ０３０１ｉｎＦｉｇ．４ａｎｄＳＭ０１１１ｉｎＦｉｇ．５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
５５１第２２卷第４期 草业学报２０１３年
２．５ 菌株 ＷＱ１６和 ＷＱ３２１６ＳｒＤＮＡ序列测定及同源性比较结果
对 ＷＱ１６和 ＷＱ３２菌株进行１６ＳｒＤＮＡ序列测定，结果表明，ＷＱ１６菌株的片段大小为１３７９ｂｐ，ＷＱ３２菌
株的片段大小为１３８６ｂｐ。经测序后，将两菌株的１６ＳｒＤＮＡ区域序列与ＧｅｎＢａｎｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．
ｎｉｈ．ｇｏｖ）数据库进行 ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅＢｌａｓｔ序列比对，结果表明，菌株 ＷＱ１６与 ＧｅｎＢａｎｋ已报道的 ＡＹ７８９４６０、
ＦＪ４６９９８１的序列同源性达９９％，初步将菌株 ＷＱ１６定为格氏沙雷氏菌（犛犲狉狉犪狋犻犪犵狉犻犿犲狊犻犻）。菌株 ＷＱ３２与
ＧｅｎＢａｎｋ已报道的ＧＵ９３６９９６、ＧＵ３６２０８０的序列同源性达１００％，初步将菌株 ＷＱ３２定为胡萝卜软腐果胶杆菌
胡萝卜亚种（犘犲犮狋狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿）。
用 ＭＥＧＡ软件包中的聚类分析法（ＵＰＧＭＡ）对测序结果与ＧｅｎＢａｎｋ中已报道的序列进行聚类分析，结果
见图６。从图可以看出，菌株ＷＱ３２与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿）的
同源性高，位于聚类图的同一分支，聚为一类，与其他胡萝卜软腐果胶杆菌的同源性较低，而菌株 ＷＱ１６与格氏
沙雷氏菌（犛．犵狉犻犿犲狊犻犻）的同源性高，表明引起嘉峪关市洋葱鳞茎软腐病病原菌为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚
种（犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿）和格氏沙雷氏菌（犛．犵狉犻犿犲狊犻犻）２种。
图６ 菌株 犠犙１６和 犠犙３２的１６犛狉犇犖犃序列聚类分析树状图
犉犻犵．６ 犜犺犲犮犾狌狊狋犲狉犻狀犵犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳１６犛狉犇犖犃狅犳狋狑狅狊狋狉犪犻狀狊
２．６ 菌株 ＷＱ１６格氏沙雷氏菌和 ＷＱ３２胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种的致病性测定结果
将菌株 ＷＱ１６格氏沙雷氏菌（犛．犵狉犻犿犲狊犻犻）、ＷＱ３２胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂ
ｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿）和对照灭菌蒸馏水分别接种于当地常规洋葱品种“牧童”的鳞茎基部和顶部，结果表明（图７），
与接种灭菌蒸馏水的对照相比，两菌株均对洋葱“牧童”品种的鳞茎有致病性。两菌株的致病力不同，其中菌株
ＷＱ３２胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿）的致病力最强，而菌株 ＷＱ１６格
氏沙雷氏菌（犛．犵狉犻犿犲狊犻犻）的致病力较弱，两者相比差异显著（表１）。另外，洋葱不同部位发病程度不同，两菌株
均对洋葱基部的致病力强于顶部，这可能是由于洋葱的不同部位对病原细菌产生的趋化物质不同，或者不同部位
的组织结构不同影响了细菌的侵入。
３ 讨论
细菌是土壤微生物的主要类群之一，在植物根系的微生态环境中对物质和能量的转化起重要作用［１１１３］。细
菌病原菌的分类和鉴定是病害研究的基础，明确病害的病原菌是制定有效防治措施的重要前提。１６ＳｒＤＮＡ技
术已被广泛应用于细菌种属鉴定，这是由于１６ＳｒＤＮＡ基因存在于原核生物中，由保守区和可变区组成，保守区
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为所有细菌所共有，细菌间没有差别，可变区在不同细菌之间存在不同程度的差异，具有属或种的特异性［１４］。目
前已报道的洋葱细菌性病害有洋葱鳞茎细菌性软腐病，由胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（犈狉狑犻狀犻犪犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪
ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪）引起；洋葱滑皮病，由唐菖蒲假单胞菌葱生致病变种（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犵犾犪犱犻狅犾犻ｐｖ．犪犾犾犻犻犮狅犾犪）引
起［１５］；洋葱酸皮病，由洋葱假单胞菌（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犮犲狆犪犮犻犪）引起［１６］；洋葱细菌性条斑和球茎腐烂病，病原为绿黄
假单胞菌（犘．狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪）［１７］；洋葱黄单胞叶枯病，病原为黄单胞菌（犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪狊犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊）［１８］。本试验通过
形态学和１６ＳｒＤＮＡ分子生物学鉴定出了甘肃省嘉峪关市洋葱鳞茎软腐病病原种类为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝
卜亚种（犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿）和格氏沙雷氏菌（犛．犵狉犻犿犲狊犻犻）２种，其中胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝
卜亚种与国内外报道的引起洋葱软腐病的病原一致［１９，２０］，同时本研究首次报道了格氏沙雷氏菌也是洋葱鳞茎软
腐病的病原菌。致病性测定结果表明，胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种对洋葱的致病力强于格氏沙雷氏菌。
图７ 接种２种细菌和灭菌蒸馏水
犉犻犵．７ 犐狀狅犮狌犾犪狋犻狅狀犫犪犮狋犲狉犻犪狊狋狉犪犻狀狊犪狀犱狊狋犲狉犻犾犻狕犲犱犱犻狊狋犻犾犲犱狑犪狋犲狉
ａ：接种 ＷＱ３２胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种，ｂ：接种 ＷＱ１６格氏沙雷氏菌，ｃ：接种灭菌蒸馏水 （ＣＫ）。ａ：ＩｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｓｔｒａｉｎＷＱ３２；ｂ：Ｉｎｏｃｕｌａ
ｔｉｏｎｓｔｒａｉｎＷＱ１６；ｃ：Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｄｉｓｔｉｌｅｄｗａｔｅｒ．
表１ 菌株 犠犙１６格氏沙雷氏菌和 犠犙３２胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种对“牧童”洋葱品种的致病性
犜犪犫犾犲１ 犘犪狋犺狅犵犲狀犻犮狋犲狊狋犻狀犵狅犳犠犙１６犪狀犱犠犙３２狊狋狉犪犻狀狊狅狀犕狌狋狅狀犵狅狀犻狅狀狏犪狉犻犲狋狔
接种类别
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
ｔｙｐｅｓ
接种顶部Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｔｏｐ
接种数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
发病数
Ｄｉｓｅａｓｅｄ
ａｍｏｕｎｔ
发病率
Ｄｉｓｅａｓｅ
ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ（％）
病情指数
Ｄｉｓｅａｓｅ
ｉｎｄｅｘ
接种基部Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｒｏｏｔ
接种数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
发病数
Ｄｉｓｅａｓｅｄ
ａｍｏｕｎｔ
发病率
Ｄｉｓｅａｓｅ
ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ（％）
病情指数
Ｄｉｓｅａｓｅ
ｉｎｄｅｘ
格氏沙雷氏菌犛．犵狉犻犿犲狊犻犻 ９．００ ５．８３ ６４．８２ ４０．０５ｂＡ ９．００ ７．５８ ８４．２６ ５６．２５ｂＢ
胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种
犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿
９．００ ５．５８ ６２．０４ ４４．９１ａＡ ９．００ ８．０８ ８９．８２ ６９．９９ａＡ
灭菌蒸馏水（ＣＫ）Ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｄｉｓｔｉｌｅｄｗａｔｅｒ ９．００ ０．００ ０．００ ０．００ｃＢ ９．００ ０．００ ０．００ ０．００ｃＣ
注：表中数据为平均值，同列数据后不同大、小写字母表示经Ｄｕｎｃａｎ氏新复极差法检验差异显著（犘＜０．０１，犘＜０．０５）。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅｄａｔａｉｎｔｈｅｆｉｇｕｒｅａｒｅｍｅａｎ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｅｒａｎｄｕｐｐｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎｓｈｏｗｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓａｔ犘＜０．０５ａｎｄ
犘＜０．０１ｌｅｖｅｌｓｂｙＤｕｎｃａｎ’ｓｎｅｗｍｕｌｔｉｐｌｅｒａｎｇｅｔｅｓｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
欧文氏杆菌（犈狉狑犻狀犻犪）是很多植物的病原菌，植物致病欧文氏杆菌常引起植物器官和组织的软腐［２１］，主要有
胡萝卜软腐欧文氏杆菌胡萝卜亚种（犈．犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪，Ｅｃｃ＝犘犲犮狋狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪ｓｕｂｓｐ．犮犪
狉狅狋狅狏狅狉犪）、胡萝卜软腐欧文氏杆菌黑胫亚种（犈．犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪ｓｕｂｓｐ．犪狋狉狅狊犲狆狋犻犮犪，Ｅｃａ＝犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪ｓｕｂｓｐ．犪狋狉狅
狊犲狆狋犻犮犪）和菊欧文氏杆菌（犈．犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻，Ｅｃｈ＝犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪ｓｕｂｓｐ．犮犺狉狔狊犪狀狋犺犲犿犻）。胡萝卜软腐欧文氏杆菌
（犈．犮犪狉狅狋狅狏狅狉犪）可以危害胡萝卜（犇犪狌犮狌狊犮犪狉狅狋犪ｖａｒ．狊犪狋犻狏犪）、烟草（犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿）、黄瓜、茄子（犛狅犾犪狀狌犿
７５１第２２卷第４期 草业学报２０１３年
犿犲犾狅狀犵犲狀犪）、番茄、辣椒（犆犪狆狊犻犮狌犿犳狉狌狋犲狊犮犲狀狊）、大白菜（犅狉犪狊狊犻犮犪狆犲犽犻狀犲狀狊犻狊）、甘蓝（犅狉犪狊狊犻犮犪狅犾犲狉犪犮犲犪ｖａｒ．犮犪狆犻
狋犪狋犪）、马铃薯（犛狅犾犪狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿）等，同时引起贮藏期蔬菜腐烂。国内的一些学者对胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝
卜亚种的危害已有报道，王敏等［２２］试验表明，云南省马蹄莲细菌性软腐病原菌为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚
种；罗炎华等［２３］报道了该病菌可以引起魔芋软腐病；何煜波［２４］通过试验得出，该病菌可以引起三叶草半夏软腐
病。赵玲等［２５］从马铃薯根围分离到４株胡萝卜软腐欧文氏杆菌胡萝卜亚种４个新菌株。本试验得出，胡萝卜软
腐果胶杆菌胡萝卜亚种能引起洋葱鳞茎软腐病，这与国内报道的一致［２０］。另外，沙雷氏菌在土壤和其他作物上
的分布和危害也有报道。廖咏梅等［２６］从甘蔗（犛犪犮犮犺犪狉狌犿狊犻狀犲狀狊犲）根际土壤及甘蔗的茎、芽等不同组织内分离到
沙雷氏菌；马迎新等［２７］从油菜根际分离到普城沙雷氏菌（犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪），且该菌具有生防功能；张敏
等［２８］报道了沙雷氏菌在内蒙古鄂尔多斯市发生，并且主要分布于甘草（犌犾狔犮狔狉狉犺犻狕犪狌狉犪犾犲狀狊犻狊）的茎和叶内。本
研究首次明确了格氏沙雷氏菌可以引起洋葱鳞茎软腐病，同时致病性测定结果表明，该菌均能对洋葱的基部和顶
部造成为害，但基部的发病程度高于顶部。
Ｗｅｌｅｒ［２９］报道，从作物根际土壤分离出的沙雷氏菌属、假单胞菌属和欧文氏菌属，这些细菌对土传病害的防
治有很大的潜力，其中一些种已经作为生物防治因子对植物病害进行防治。２０世纪８０年代，已报道了普城沙雷
氏菌（犛．狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪）和粘质沙雷氏菌 （犛犲狉狉犪狋犻犪犿犪狉犮犲狊犮犲狀狊）可防治多种土传和气传病害，并诱导烟草、黄瓜等
植物产生对多种真菌、细菌和病毒病害的抗性［３０，３１］。马迎新等［２７］通过温室盆栽试验得出，用普城沙雷氏菌悬液
对番茄进行浸种和灌根处理，该菌在番茄植株根际能大量定殖，４周后根表和根际土壤中的菌量仍稳定在１．０×
１０６ＣＦＵ／ｇ水平。同时在温室条件下，普城沙雷氏菌可有效防治黄瓜猝倒病，防治效果达４９．５７％；还能诱导番
茄叶片对灰霉病的系统抗性，诱抗效果达４４．４５％，但有关沙雷氏菌属中的格氏沙雷氏菌对其他作物上的土传和
气传病害的防治效果和系统抗性有待于进一步研究。
参考文献：
［１］ 唐成顺．对嘉峪关市洋葱产业发展的思考［Ｊ］．蔬菜栽培，２００７，８：１３．
［２］ ＶａｎｄａｍｍｅＰ，ＰｏｔＢ，ＧｉｌｉｓＭ，犲狋犪犾．Ｐｏｌｙｐｈａｓｉｃｔａｘｏｎｏｍｙ，ａｃｏｎｓｅｎｓｕｓａｐｐｒｏａｃｈｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｒｅｖｉｅｗｓ，１９９６，６０：４０７４３８．
［３］ ＴａｇｈａｖｉＭ，ＨａｙｗａｒｄＣ，ＳｌｙＬＩ，犲狋犪犾．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｏｆｓｔｒａｉｎｓｏｆ犅狌狉犽犺狅犾犱犲狉犻犪狊狅犾犪狀犪犮犲犪狉狌犿，
犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狕狔犵犻犻，ａｎｄｔｈｅｂｌｏｏｄｄｉｓｅａｓｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｏｆｂａｎａｎａｂａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ
ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｄｌｏｇｙ，１９９６，４６：１０１５．
［４］ 刘长远，赵奎华，傅俊范，等．黄瓜细菌性白枯病ＣＵＰＶ０７菌株鉴定及１６ＳｒＤＮＡ序列分析［Ｊ］．沈阳农业大学学报，２００８，
３９（６）：６８２６８５．
［５］ 杨瑞先．利用１６ＳｒＤＮＡ序列分析鉴定油菜内生细菌研究［Ｄ］．杨凌：西北农林科技大学，２００５．
［６］ 邓刚，屈星，陈秀蓉，等．甘肃番茄细菌性斑点病病原菌鉴定［Ｊ］．植物保护，２００８，３４（５）：４７５１．
［７］ 王霞，陈哲，袁红朝，等．应用１６ＳｒＤＮＡ克隆文库技术研究长期稻草还田对水稻土细菌多样性的影响［Ｊ］．生态学报，
２０１０，３０（１４）：３８６５３８７４．
［８］ 方中达．植病研究方法（第３版）［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９６．
［９］ 东秀珠，蔡妙英．常见细菌系统鉴定手册［Ｍ］．北京：科学出版社，２００１：３９９４１７．
［１０］ 奥斯伯Ｆ．精编分子生物学指南［Ｍ］．颜子颖，王海林，译．北京：科学出版社，２００１：３９．
［１１］ 王旭，曾昭海，朱波，等．燕麦与箭薚豌豆不同混作模式对根际土壤微生物数量的影响［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（６）：１５１
１５７．
［１２］ 赵有翼，蔡立群，王静，等．不同保护性耕作措施对三种土壤微生物氮素类群数量及其分布的影响［Ｊ］．草业学报，２００９，
１８（４）：１２５１３０．
［１３］ 荣丽，李贤伟，朱天辉，等．光皮桦细根与扁穗牛鞭草草根分解的土壤微生物数量及优势类群［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（４）：
１１７１２４．
［１４］ ＯｌｓｅｎＧＪ，ＬａｒｓｅｎＮ，ＷｏｅｓｅＣＲ．Ｔｈｅｒｉｂｏｓｏｍａｌｄａｔａｂａｓｅｐｒｏｊｅｃｔ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５：１０９１１０．
８５１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
［１５］ ＲｏｂｅｒｔｓＰ．Ａｓｏｆｔｒｏｔｏｆｉｍｐｏｒｔｅｄｏｎｉｏｎｓｃａｕｓｅｄｂｙ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犵犾犪犱犻狅犾犻［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，１９７３，１２（４）：２２９８．
［１６］ ＢａｚｚｉＣ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犮犲狆犪犮犻犪ｏｎｏｎｉｏｎｂｕｌｂｓｉｎＩｔａｌｙ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９７９，９５：２５４２５８．
［１７］ ＧｉｔａｉｔｉｓＲＤ，ＢａｉｒｄＲＥ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌｂｌｉｇｈｔｏｆｓｗｅｅｔｏｎｉｏｎｃａｕｓｅｄｂｙ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狏犻狉犻犱犻犳犾犪狏犪［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ，１９９１，７５：
１１８０１１８２．
［１８］ ＡｌｖａｒｅｚＡＭ，ＢｕｄｄｅｎｈａｇｅｎＩＷ，ＢｕｄｄｅｎｈａｇｅｎＥＳ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌｂｌｉｇｈｔｏｆｏｎｉｏｎ，ａｎｅｗｄｉｓｅａｓｅｃａｕｓｅｄｂｙ犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪狊犮犪犿狆犲狊
狋狉犻狊［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９７８，６８：１１３２１１３６．
［１９］ ＳｃｈｗａｒｔｚＨＦ，ＭｏｈａｎＳＫ．ＣｏｍｐｅｎｄｉｕｍｏｆＯｎｉｏｎａｎｄＧａｒｌｉｃＤｉｓｅａｓｅ［Ｍ］．Ａｍｅｒｉｃａｎ：ｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＰｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＳｏｃｉ
ｅｔｙＰｒｅｓｓ，１９９６：３２．
［２０］ 任欣正．植物病原细菌的分类和鉴定［Ｍ］．北京：农业出版社，１９９４：１２４０．
［２１］ 贾云鹤，张俊华，崔崇士．软腐欧文氏菌致病性的研究进展［Ｊ］．东北农业大学学报，２００７，３８（１）：１１３１１８．
［２２］ 王敏，姬广海，修建华，等．云南省马蹄莲细菌性软腐病原鉴定［Ｊ］．西南大学学报，２００７，２９（８）：７９８２．
［２３］ 罗炎华，鲁红学，黄萍．魔芋软腐病研究进展［Ｊ］．农村经济与科技，２００８，１９（５）：８９９０．
［２４］ 何煜波．三叶半夏病毒病和细菌病的鉴定，检测和侵染特性及脱毒组培研究［Ｄ］．长沙：湖南农业大学，２００６．
［２５］ 赵玲，柴兆祥，李金华，等．四株胡萝卜软腐欧文氏杆菌胡萝卜亚种新菌株的分离鉴定［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（４）：２４４
２５１．
［２６］ 廖咏梅，张桂英，黄定安，等．甘蔗黑穗病菌拮抗细菌的筛选及鉴定［Ｊ］．广西农业科学，２００４，２３（３）：１９７２０１．
［２７］ 马迎新，刘晓光，高克祥，等．根际细菌犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪的生防作用初探［Ｊ］．云南大学学报，２００７，２２（１）：４９５３．
［２８］ 张敏，沈德龙，饶小莉，等．甘草内生细菌多样性研究［Ｊ］．微生物学通报，２００８，３５（４）：５２４５２８．
［２９］ ＷｅｌｅｒＤＭ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｔｒｏｌｏｆｓｏｉｌｂｏｒｎｅｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎｔｈｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｗｉｔｈｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｈｙｔｏｐａ
ｔｈｏｌｏｇｙ，１９８８，２６：３７９４０７．
［３０］ ＰｒｅｓｓＣＭ，ＷｏｌｏｎＭ，ＴｕｚｕｍＳ，犲狋犪犾．Ｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ犛犲狉狉犪狋犻犪犿犪狉犮犲狊犮犲狀狊９０１６６ｉｓｎｏｔｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ
ｏｆｉｎｄｕｃｅｄｓｙｓｔｅｍｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｃｕｃｕｍｂｅｒｏｒｔｏｂａｃｏｏ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＭｉｃｒｏｂｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，１９９７，１０：７６１７６８．
［３１］ ＫａｍｅｎｓｋＹＭ，ＯｖａｄｉＳＭ，Ｃｈｅｔｉ，犲狋犪犾．ＳｏｉｌｂｏｒｎｅｓｔｒａｉｎＩＣ１４ｏｆ犛犲狉狉犪狋犻犪狆犾狔犿狌狋犺犻犮犪ｗｉｔｈｍｕｌｔｉｐｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｎｔｉ
ｆｕｎｇａｌａｃｔｉｖｉｔｙｐｒｏｖｉｄｅｓｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌｏｆ犅狅狋狉狔狋犻狊犮犻狀犲狉犲犪ａｎｄ犛犮犾犲狉狅狋犻狀犻犪狊犮犾犲狉狅狋犻狅狉狌犿ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＳｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
２００３，３５：３２３３３１．
犘犪狋犺狅犵犲狀犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犳狉狅犿狊狅犳狋狉狅狋犱犻狊犲犪狊犲狅犳狅狀犻狅狀犫狌犾犫狊犻狀犑犻犪狔狌犵狌犪狀，犌犪狀狊狌狆狉狅狏犻狀犮犲
ＬＶＨｅｐｉｎｇ１，２，ＷＥＩＨｕｉ１，３，ＱＩＹｏｎｇｈｏｎｇ２，ＺＨＡＮＧＹａｎｍｅｉ１，ＣＡＯＳｕｆａｎｇ２，
ＹＡＮＧＦａｒｏｎｇ２，ＬＩＭｉｎｑｕａｎ２，ＳＨＥＮＨｕｉｍｉｎ１
（１．ＧｒａｓｓｌａｎｄＣｏｌｅｇｅ，ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｎｔ
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＧａｎｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ；３．ＴｉａｎｓｈｕｉＰｉｌｏｔ
ＡｒｅａｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＩｎｎｏｖａｔｉｖｅａｎｄＨｉｇｈＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｓｈｕｉ７４１０３０，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ａｓｅｖｅｒｅｓｏｆｔｒｏｔｄｉｓｅａｓｅｏｆｏｎｉｏｎ（犃犾犾犻狌犿犮犲狆犪）ｂｕｌｂｓｏｃｃｕｒｒｅｄｉｎＪｉａｙｕｇｕａｎ，Ｇａｎｓｕｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｔｈｅ
ｃａｕｓａｌａｇｅｎｔｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂａｓｅｄｏｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｗｏｓｔｒａｉｎｓｏｎＫＢｃｕｌｔｕｒｅｍｅ
ｄｉｕｍａｎｄｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｓ．Ｔｈｅ１６ＳｒＤＮＡｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅｔｗｏｓｔｒａｉｎｓｈａｄｈｏｍｏｅｏｌｏｇｙｗｉｔｈｔｈｅｋｎｏｗｎ
ｓｐｅｃｉｅｓ犛犲狉狉犪狋犻犪犵狉犻犿犲狊犻犻ａｎｄ犘犲犮狋狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｆｒｏｍｔｈｅＧｅｎＢａｎｋｄａｔａｂａｓｅ．
Ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｌｅｎｇｔｈｓｗｅｒｅ１３７９ｂｐａｎｄ１３８６ｂｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｗｉｔｈａｍａｘｉｍｕｍｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｏｆ９９％ａｎｄ１００％．
Ｂｏｔｈｓｔｒａｉｎｓｃａｕｓｅｄｓｏｆｔｒｏｔｄｉｓｅａｓｅｏｎｏｎｉｏｎｂｕｌｂｓｉｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｔｅｓｔｓ．Ｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｉｎｄｅｘｆｒｏｍｒｏｏｔｓｗａｓ
ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｆｒｏｍｔｈｅｔｏｐｓａｎｄ犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｗａｓｍｏｒｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｔｈａｎ犛．犵狉犻犿犲狊犻犻．
ＴｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｓｃａｕｓｉｎｇｓｏｆｔｒｏｔｄｉｓｅａｓｅｏｎｏｎｉｏｎｂｕｌｂｓｉｎＪｉａｙｕｇｕａｎ，Ｇａｎｓｕｐｒｏｖｉｎｃｅｗｅｒｅ犘．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ｓｕｂ
ｓｐ．犮犪狉狅狋狅狏狅狉狌犿ａｎｄ犛．犵狉犻犿犲狊犻犻．Ｔｈｉｓｉｓｔｈｅｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆ犛．犵狉犻犿犲狊犻犻ｃａｕｓｉｎｇｓｏｆｔｒｏｔｄｉｓｅａｓｅｏｎｏｎｉｏｎｂｕｌｂｓ
ａｎｄｔｈｉｓｓｔｕｄｙｓｈｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｉｎｇｔｈｉｓｄｉｓｅａｓｅ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｓｏｆｔｒｏｔｄｉｓｅａｓｅ；ｏｎｉｏｎ；ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｔｅｓｔｉｎｇ；ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；１６ＳｒＤＮＡ
９５１第２２卷第４期 草业学报２０１３年