作 者 :王舒,张林平,郝菲菲,张扬,胡冬南
期 刊 :林业科学研究 2015年 28卷 2期 页码:166-172
关键词:油茶 ;溶磷细菌 ;溶磷能力 ;安全性测试 ;
Keywords:Camellia oleifera , phosphate-solubilizing bacteria , phosphate-solubilizing capability , security test ,
摘 要 :本研究利用溶磷圈法和钼锑抗比色法,从油茶根际分离出20株高效溶无机磷细菌,并对其溶磷能力进行定性和定量测试,结果发现,D/d与溶磷细菌的有效磷含量之间没有显著的相关性,而培养液pH与有效磷含量之间存在极显著的负相关性关系(P <0.01)。并采用形态特征、生理生化、Biolog系统和16SrDNA 序列分析对一株溶磷效果最好的菌株NC285进行菌株鉴定,确定其为Bacillus aryabhattai 。通过苜蓿植物模型和cblA 毒力基因测定对该菌株进行安全性检测,结果发现,该菌株未检测到cblA 基因,对洋葱和苜蓿安全无致病性。本研究对溶磷细菌的安全应用及提高油茶土壤磷素利用效率具有重要意义。
Abstract:Twenty strains of inorganic phosphate-solubilizing bacteria were isolated from Camellia oleifera rhizosphere using phosphate-solubilizing circle and the molybdenum-anti-spectrophotometric method. The phosphate-solubilizing capacity was investigated from 20 strains based on qualitative and quantitative test. The results showed that there was a significant negative correlation between the phosphate solubilizing capacity and the pH medium(P <0.01), whereas there was no such phosphate solubilizing capacity on D/d. The strain NC285 was identified by its morphological, physiological and biochemical characteristics, Biolog system and 16SrDNA gene sequence analysis. The high effective phosphate-solubilizing bacterium of NC285 was identified as Bacillus aryabhattai. The virulence of NC285 was tested on Allium cepa and Medicago sativa seedlings, and the cblA virulence genes. No cblA gene was detected on NC285 in the test, so this strain is safe for A. cepa and M. sativa.
全 文 :林业科学研究!"#$%!"&""#$$:: $*" !"#$%&$%$(#)* !!文章编号!$##$($)&""#$%##"(#$::(#* 油茶根际高效溶磷细菌的筛选$鉴定及 其安全性测试 王!舒! 张林平!! 郝菲菲! 张!扬! 胡冬南 "江西农业大学园林与艺术学院!江西 南昌!VV##%# 收稿日期$ "#$(#*(V# 基金项目$ 国家自然科学基金项目"V$":#$)#%江西农业大学博士启动经费"#)##$%%# 作者简介$ 王!舒"$)&)*#!女!甘肃张掖人!在读硕士生!主要从事植物有益微生物研究 ! 通讯作者$ 博士!主要从事大型真菌多样性和森林病理学研究!/(01,2$32Q,56:$)9$:V.;70 摘要!本研究利用溶磷圈法和钼锑抗比色法!从油茶根际分离出 "# 株高效溶无机磷细菌!并对其溶磷能力进行定性 和定量测试!结果发现!P_H与溶磷细菌的有效磷含量之间没有显著的相关性!而培养液 Qj与有效磷含量之间存在 极显著的负相关性关系"Fr#.#$#) 并采用形态特征%生理生化%M,7276系统和 $:>BPc?序列分析对一株溶磷效果 最好的菌株cG"&% 进行菌株鉴定!确定其为G()4:9%(#7(S*(&(4) 通过苜蓿植物模型和)S:-毒力基因测定对该菌株 进行安全性检测!结果发现!该菌株未检测到)S:-基因!对洋葱和苜蓿安全无致病性) 本研究对溶磷细菌的安全应 用及提高油茶土壤磷素利用效率具有重要意义) 关键词!油茶+溶磷细菌+溶磷能力+安全性测试 中图分类号!>*)h 文献标识码!? 690##))(! H.#)2+912*)1).6#9I02< /#&2*+3(04%*( "%4*54/( C8P*&G8#0# D8*&G812#J6*-I:-P)( 5192#01 >-./U*9! +,-./K402P401! ,-O!$42T$4! +,-./M(01! ,5B"0120(0 "G72@6@7-J15HA;1Q@15H ?BD!i,156X,?6B,;<2D!:&20192$LR@5DFADB1,5A7-,57B615,;Q47AQ41D@(A72;1Q1;,DFR1A,5N@AD,61D@H -B70"# ADB1,5AK1A@H 75 8<12,D1D,N@15H 8<15D,D1D,N@D@AD.L4@B@A<2DAA47R@H D41DD4@B@ R1A1A,65,-,;15D5@61D,N@;7B@21D,75 K@DR@@5 D4@Q47AQ41D@A72R4@B@1AD4@B@R1A57A<;4 Q47AQ41D@A72276,;12! Q4FA,7276,;1215H K,7;4@0,;12;41B1;D@B,AD,;A! M,7276AFAD@015H $:>BPc?6@5@A@8<@5;@1512FA,A.L4@ 4,64 @-@;D,N@Q47AQ41D@(A72cG"&% R1AD@AD@H 75 -:49C)$P( 15H A$Q4)(1"%(&4R( A@@H2,56A! 15H D4@)S:-N,B<2@5;@6@5@A.c7)S:-6@5@R1A H@D@;D@H 75 cG"&% ,5 D4@D@AD! A7D4,AADB1,5 ,AA1-@-7B-E)$P( 15H AE%(&4R(E ;#< $*0.$I(C$:4( ":$4T$#(+ Q47AQ41D@(A72油茶"I(C$:4( ":$4T$#( ?K@2.#是我国南方特有 的重要木本食用油料!被称为是东方橄榄油(!与 油橄榄%油棕%椰子并称世界四大木本油料植 物,$ WV- ) 磷是促进植物生长和提高农作物产量不可 缺少的元素,- !主要来源于土壤!而磷素在土壤中通 常以难溶物的形式存在!导致土壤中有效磷含量不 足 %=!很难满足植物生长,%- ) 为提高油茶产量!对 其合理施磷肥是增产的关键措施,: W*- !而施入的磷 第 " 期 王!舒等$油茶根际高效溶磷细菌的筛选%鉴定及其安全性测试 肥在当季仅有 %= $#=被植物吸收利用!绝大部 分磷迅速以 ?2(U%G1(U%E@(U的形式转化为难溶性 磷酸盐!或被雨水冲洗随水土流失至水体!造成水体 污染,& W$$- ) 大量研究表明!植物根际土壤存在大量溶磷菌! 能够通过自身代谢!将土壤中植物难以吸收的难溶 性磷转化为可吸收利用的形态!增加植物对磷素的 吸收!进而提高作物产量,$" W$V- ) 不同种类的溶磷 菌!其溶磷能力也存在着巨大的差异!而且溶磷机理 也不尽相同) 有些溶磷菌的溶磷作用主要是因为分 泌大量有机酸!降低了培养液 Qj!进而把难溶性磷 酸盐中的磷酸根溶解出来,$ W$%- !而培养液 Qj与溶 磷菌溶磷能力之间是否存在相关性!研究结果不一) 随着微生物肥料新品种的不断扩大!筛选的菌种也 越来越多!其安全性已成为人们研究功能菌的热点) 李煜,$:- %李晶,$*-在对芽孢杆菌属进行安全性评价 时!以小白鼠为试验对象) 这种利用动物模型检测 菌株安全性的方法精确可靠!但其存在试验周期长% 耗资高%操作复杂等缺点) 而 >,27(><4 等利用苜蓿 和老鼠对人体条件致病菌进行了毒力试验!观察得 到!在老鼠身上产生的毒力作用可同样在苜蓿上表 现出相关的毒力结果,$&- ) 目前!有关油茶根际溶磷 细菌的相关系统鲜有报道) 因此!本研究在对油茶 根际溶磷细菌筛选%鉴定的基础上!采用苜蓿模型简 单快捷的对菌株 cG"&%"芽孢杆菌#进行安全性检 测!为油茶高效生物肥料研究提供优良菌种资源和 安全性理论依据!对促进油茶产业可持续发展具有 重要意义) $!材料与方法 =.=>培养基 JM液体培养基$胰蛋白胨 $# 6!酵母浸粉 % 6! c1G2$# 6!蒸馏水 $ ### 0J!Qj*.# *.) JM固体培养基$在液体 JM培养基中加琼脂 $: 6) 溶无机磷细菌筛选培养基"cM+CU# ,$)- $葡萄糖 $# 6!G1 V "Uk # " % 6!e6G2 " % 6!IG2#." 6!e6>k / *j " k#."% 6!"cj # " >k #.$ 6!蒸馏水 $ ### 0J! Qj*.#) 溶磷能力测定培养基"cM+C(MUM# ,$)- $配方同 cM+CU"添加 #.#"% 6/JW$的溴酚蓝#) $=水琼脂培养基$琼脂粉 $# 6!蒸馏水 $ ### 0J!自然 Qj) =.?>供试植物材料及菌株! 新鲜健康洋葱"-:49C)$P(#$购自江西农大菜 市场+ 紫花苜蓿"A$Q4)(1"%(&4R(#种子$购自北京禾木 青科技有限责任公司+ 标准菌株JeT$"""$由南京林业大学森林资源 与环境学院叶建仁教授赠送) =.A>溶磷细菌的分离 采用三点取样法从江西省林业科学院和赣州市 南康区唐江镇油茶基地采集 $# $% ;0土层油茶 根际土壤!用平板梯度稀释培养法制作成系列悬浮 液!取 #.$ 0J涂布于 cM+CU平板上!"&d!培养 V H!挑取透明圈明显的细菌!纯化至少 V 次!确定其为 纯培养物后!挑取单菌落转接到 JM斜面培养 " V H!并置于 d冰箱保存) =.B>溶磷能力测定 $..$!定性测定!采用溶磷圈法和 e@4D1和 c1<( D,F12 ,"#-的方法"稍作修改#对溶磷菌的溶磷能力进 行定性测试) 将分离获得的纯菌株分别点接种于 cM+CU培养基上!置于 "&d培养箱中培养 % H 时观 察!观察有无溶磷圈!并根据溶磷圈直径"P#与菌落 直径"H#的比值"P_H#初步确定菌株溶磷能力) 再 将P_H 值较大的菌落接种到装有 "# 0JcM+C(MUM 培养液的 %# 0J三角瓶中!"&d!$ B/0,5W$培养 V H!将发酵液离心 $# 0,5"d!$# ### B/0,5W$#) :## 50下测定上清液的吸光度!并进行溶磷能力分 级,"$- ) 分级标准为$OB :## % W$$溶磷能力强" ` ` #`+W$ rOB :## % W#.%$较强" ` #`+ W#.% r OB :## % W#.$$弱" #`) 同时以未接种作为对照!每 处理重复 V 次) $.."!定量测定!利用钼锑抗比色法对溶磷菌的 溶磷能力进行定量测试) 选取 OB :## 负值大的菌株 活化后分别接种于JM液体培养基中!"&d!$ B/ 0,5 W$培养 $& " 4!制成种子液!并按 $=的接种 量接种于含 "# 0JcM+C(MUM培养液的 %# 0J三角 瓶中!"&d!$ B/0,5W$振荡培养 V H!将发酵液离 心 $# 0,5"d!$# ### B/0,5W$#!采用钼锑抗比色 法测定上清液中可溶性磷的含量,""- !并按以下计算 溶磷率,"V- ) 同时以未接种作为对照!每个处理 V 个 重复) 溶磷率 Y"发酵液有效磷含量 W对照溶液磷含 量# Z溶液体积_磷酸三钙中含磷总量Z$##= =.@>菌株cG?Q@ 鉴定 $.%.$!生理生化特征!参考 2伯杰系统鉴定手 *:$ 林!业!科!学!研!究 第 "& 卷 册3 ,"-中推荐的部分培养基和方法) $.%."!系统发育树分析!参照文献,"%-方法提取细 菌的基因组 Pc?!采用细菌通用引物 " "*E$ %b( ?T?TLLLT?LGGLTTGLG?T(Vb! $)"+$ %b(L?GT( TGL?GGLLTLL?GT?GLL(Vb#对基因组 Pc?进行 $:>BPc?片段扩增+V# " JUG+反应体系$0,X$% " J%引物各 " " J%模板 " " J%HHj " k补足 V# " J+ UG+反应条件$ )%d 0,5+)%dV# A!%dV# A!*"d )# A!V# 个循环+ *"d延伸 * 0,5) UG+产物于 $= 琼脂糖凝胶中电泳!送上海生工测序) 所得序列与 T@5M15g数据库中序列进行 MJ?>L比对分析!以相 似性达 )&= 以上的标准选择参考菌株!采用 e/T?%.# 软件!用c@,64K7B(i7,5,56法构建系统进化 树"M77DADB1Q Y$####!分析菌株的系统发育学特征) 同时向T@5M15g提交序列并获得登陆号) =KO>"7?Q@ 在苜蓿模型上的安全性测试 $.:.$!供试菌株的准备!活化高效溶磷细菌 cG"&% 和标准菌株 JeT$"""!"&d!$ B/0,5W$! 培养 " 4) 将得到的发酵液离心 $# 0,5"$# ### B/ 0,5 W$ #!弃上清!加入无菌水混匀!并重复 V % 次! 目的是将细菌代谢产物去除!得到纯菌悬液!调节菌 体浓度在 $ Z$#&;-0JW$左右!用于接种苜蓿) $.:."!对洋葱致病性的测定!挑取新鲜健康大小 一致的洋葱放入装满自来水的瓶口!让洋葱根系接 触水面!V H换一次水!培养 $% H左右!待洋葱长 出叶子!剥掉外层老化的表皮!参照文献,":-的方法 进行洋葱接种!无菌注射器分别取准备好的高效溶 磷细菌cG"&%%标准菌株JeT$""" 纯菌悬液和无菌 水在洋葱鳞茎上两点对称注射"深度为 $ " ;0#! 以标准菌株JeT$""" 作为阳性对照!无菌水作为阴 性对照) 每点注射量 $ 0J!每处理 V 个重复!置于 "%d室温培养!% H后观察结果) $.:.V!对苜蓿幼苗生长的影响!参照张立新,"*-的 方法进行接种!将苜蓿种子用 )&=的浓硫酸浸泡 V# 0,5"约 $# 0J浸 V## 颗种子#!无菌水清洗 % : 次 后将种子放于 :# 0J无菌水中!V#d!$%# B/0,5W$ 浸种 & 4!清洗 V 次!同等条件下震荡培养过夜) 次 日!用无菌水清洗 V 次!无菌操作将均匀一致的发芽 苜蓿种子摆放到 $=的水琼脂平板上!每皿摆放 $# 颗种子) V#d!)#=相对湿度!光照黑暗交替"光照% 黑暗各 $" 4#培养 & *" 4!直至子叶展开) 取 "# " J准备好的 cG"&%%JeT$""" 菌悬液和 无菌水点在苜蓿幼苗上!其中致病菌株作为阳性对 照!无菌水作为阴性对照) 每个处理 % 个重复!每重 复 $# 颗种子) 接种后的种子放在 V#d%)#=相对湿 度%定时光照"光照%黑暗各 $" 4#条件的人工气候 培养箱!* H后观察苜蓿发病情况) =KR>-6%,毒力基因检测 )S:-基因的检测采用 UG+特异性扩增技术进 行) 特异性引物为 ;K2?$ "%b(GG???TT?GL??G( GG?(Vb#和 ;K2?" "%b(?GTGT?LTLGG?LG?G?(Vb#! V# " JUG+反应体系$e,X$% " J%引物各 " " J%模板 " " J% HHj " k补足 V# " J) UG+反应条件$)dV 0,5+)d$ 0,5!:#d$ 0,5!*"d$ 0,5!V% 个循环! *"d延伸 $# 0,5) 扩增产物进行 $=琼脂糖凝胶电 泳检测) =.Q>数据分析 采用 >U>> n$V.# 软件对试验数据进行统计分 析!并采用/X;@2"#$# 软件作图) "!结果与分析 ?.=>菌株的分离$筛选 从江西省林业科学院茶园和赣州市南康区唐江 镇油茶基地油茶根际分离得到能产生溶磷圈的溶无 机磷细菌 VV# 株"图 $#) 利用溶磷圈法对 VV# 株溶 无机磷细菌进行定性和半定量溶磷能力的测定!结 果表明各溶磷细菌所产生的溶磷圈外径与菌落生长 的直径比值"P_H#都大于 V.V#"表 $#!其中 Tm#)" 比值最大 "%.)"#!次之为 cG"&% "%.&& #%Tm#:& "%h*)#) 图 $!溶磷细菌菌株在cM+CU平板上形成的溶磷圈 溴酚蓝"MUM#作为一种酸碱指示剂!会随着介 质 Qj降低而变色!利用发酵液褪色程度的不同可 以定性和半定量地反应细菌溶磷能力的大小) 本研 究中与对照相比!"# 株溶磷细菌发酵液 Qj & ,.$: W%.*-!这说明 "# 株溶磷细菌分泌了大量有机酸 &:$ 第 " 期 王!舒等$油茶根际高效溶磷细菌的筛选%鉴定及其安全性测试 降低了培养介质 Qj值而使MUM褪色) 图 "!溶磷细菌 P_H与有效磷含量的相关性 ?.?>溶磷细菌溶磷能力的测定 本研究利用碳酸钙作为唯一无机磷源!来测定 菌株分溶无机磷能力的大小) "# 株溶磷细菌在数 量相同的情况下!可以看出!各处理发酵液中有效磷 含量均显著高于 GI"%.VV 06/JW$#!说明各菌株 对碳酸钙均有一定得溶解作用!且各处理间差异显 著"表 $#) 与 GI相比!有效磷含量增幅为 GI的 &h* $.* 倍) 其中 cG"&% 在发酵液中的有效磷 含量最高"*).*& 06/JW$#!溶磷率为 $).*%=!将 其选择为进一步研究的菌株) ?.A>溶磷细菌溶磷能力指标的相关性分析 本实验对 "# 株溶无机磷菌株的 P_H 和溶磷量 的相关分析表明!P_H 与溶无机磷细菌的溶磷量之 间没有显著的相关性"图 "#) 如菌株Tm#&* 的P_H 最大!为 %.)"!但其溶磷率仅为 $$.&*="表 $#!故 P_H的大小作为溶磷能力的恒定指标有待商榷) 表 =>?S 株溶无机磷细菌的溶磷能力测定 编号 P_H Qj 有效磷含量_ "06/J W$ # 溶磷率_ "=# cG#"& ."$ .:: v#.#1 :#*.% v:.:V@-6 $.*% cG#)& V.V& .)* v#.#$K;H %%".%& vV.";H@ $V.") cG#)) V.%* .)" v#.#:K;H %#.*) v*."K;H $".#$ cG$## .") .)" v#.#"K;H %"V.:* v.$K;H@ $".%$ cG$#$ .$% ! % v#.#%K;H %$%.*$ vV.*K;H@ $".V cG$%# .#: .&: v#.$$K; )%.:% v."K;H $$.** cG$%$ ."V .&) v#.#K;H %V).V$ v.VK;H@ $".)V cG"&% %.&& .$: v#.$#1K *).*& vV.$O $).*% cG")) ."& .&V v#."#1K; *#."& vV.*K; $$.#) cGV$# V.*V %.* v#."1K &).% vV.%K;H $$.: Tm#V& V.:* .": v#.#1 **%.#$ v%.%, $)."" Tm#V) %.#* .: v#.*#1K *V#.$* vV."4, $&.#" Tm#%$ V.V# %." v#.":1K %#*.$% v".&K;H $".#& Tm#%V %.: .& v#.:*K;H *#$.%: v:.* $*.": Tm#:& %.*) .&$ v#.%*1K *$V.:% v*.%4, $*.%& Tm#*% V.*& .V: v#.::1K *V.% v%.$4, $&.V* Tm#*& ."* ." v#.#*1 :%&.) v:.)-64 $:.$$ Tm# V.% %.#: v#.#H %&%.)" v$V.*H@- $.$& Tm#&* %.)" %.* v#.$#K;H )).& v&.:K;H $$.&* Tm#)" %.&V .*: v#.V1K :)".*$ v$.*64, $*.#" Gg W *.#: v#.V:@ %.VV v.V1 WW 与未接种的GI培养液 Qj"*.#:#相比!接种后 的各发酵液 Qj均有不同程度的下降!其 Qj在 .$: %.* 之间!说明在培养过程中!细菌能够分泌一 些酸性物质!导致 Qj下降!由图 V 可知!Qj与溶无 机磷细菌的溶磷量之间存在极显著的负相关性关系 "Fr#.#$#) 因此!培养液 Qj可作为衡量溶无机磷 菌溶磷能力强弱的指标) 图 V!溶磷细菌 Qj与有效磷含量的相关性 ?.B>菌株鉴定 "..$!培养特征和形态特征观察!菌株 cG"&% 在 JM培养基上生长较好!培养 & 4 后!菌落呈白色不 透明圆形!边缘整齐!表面褶皱!好氧"图 #) 图 !菌株cG"&% 的形态特征 ".."!生理生化特征!菌株 cG"&% 革兰氏阳性! 有芽孢!接触酶%甲基红试验%伏普试验%淀粉水解反 应为阳性+能利用柠檬酸!可使明胶液化+不能使硝 酸盐还原!也不水解纤维素+可利用葡萄糖%蔗糖和 甘露醇"表 "#) "..V!分子鉴定!菌株 cG"&% 在 M,7276鉴定板上 培养 $: " 4 的数据进行鉴定!其读数相似值 ">Ce#均大于 #.%!可视为系统确定的种属鉴定结 果!菌株cG"&% 鉴定为芽孢杆菌属"G()4:9%AQ.#) 菌株 cG"&% 基因片段序列"$ :# KQ#在 T@5( M15g及/3L1X75近缘种序列进行比对分析!结果显 ):$ 林!业!科!学!研!究 第 "& 卷 表 ?>菌株"7?Q@ 的主要生理生化特征 实验项目 cG"&% 实验项目 cG"&% 革兰氏染色 ` 接触酶试验 ` 芽孢染色 ` 甲基红试验 ` 淀粉水解试验 ` 伏普试验 ` 明胶液化试验 ` 葡萄糖 ` 硝酸盐还原试验 W 蔗糖 W 纤维素水解试验 W 麦芽糖 ` 柠檬酸盐试验 ` 甘露醇 ` 示相似性在 )*=以上的均为G()4:9%属!其中与G(2 )4:9%(#7(S*(&(4相似性最高!相似性达 ))=) 选择 相似性在 )&=以上的同属和同种菌株序列!以 K()2 &"S()4:9%J$($为外群!采用 c@,64K7Bi7,5,56法构建 系统发育树"图 %#可以看出!菌株cG"&% 与G()4:9% (#7(S*(&(4同一分支中!亲缘关系最近) 综合以上形态特征%生理生化特性%M,7276鉴定 及系统发育结果!最终确定该菌株为 G()4:9%(#7(S2 *(&(4) 向 T@5M15g 提交序列并获得登陆号为 Ie"*V&) 图 %!基于 $:> Pc?序列构建的 % 株溶磷细菌系统发育树 ?K@>"7?Q@ 在洋葱上的毒力症状 洋葱鳞茎接种试验结果如图 : 所示!阳性对照 标准菌株 JeT$""" 接种 " H 后!洋葱鳞茎表皮开始 出现黄色病斑!% H后病斑不断扩大!直接达到 " V ;0!切开发现!鳞茎内部和根部严重腐烂!呈黄褐 色!并带有浓烈的恶臭味) 接种的 cG"&% 菌株 % H 不产生病斑!仅在接种点表皮产生很小的坏死斑点! 继续培养!斑点没有扩大现象!切开后!内部没有异 常变化!与阴性无菌水对照症状相同) 由此推断!该 菌株不是洋葱致病菌!说明 cG"&% 对洋葱没有致 病性) ?KO>"7?Q@ 在苜蓿幼苗上的毒力症状 苜蓿幼苗接种 * H 后结果如图 * 所示!接种 ?无菌水!McG"&%!GJeT$""" 图 :!cG"&% 接种洋葱结果 JeT$""" 标准菌株!):=苜蓿幼苗表现出接种点周 围坏死%黄化和根部短小的症状!对苜蓿生长产生显 明的抑制作用) 接种 cG"&% 菌株和无菌水的苜蓿 幼苗表现一致!生长正常!成活率分别为 :"=% ::=) 由此可以推断高效溶磷菌株 cG"&% 对苜蓿 无致病性!安全性比较高) ?无菌水!McG"&%!GJeT$""" 图 *!cG"&% 接种苜蓿结果 ?KR>毒力基因-6%,的D7C检测 )S:-基因被认为是特定的毒力基因!且在大多 数流行致病菌株中存在,"&- !为更加准确的确定该菌 株有无致命性!本实验利用 )S:-基因对菌株 cG"&% 进行毒力基因的检测!结果未检测到这该毒力基因) 这与苜蓿模型试验结果一致) 最终可得出!菌株 cG"&%"G()4:9%(#7(S*(&(4#无致病性!安全可靠) V!结论与讨论 "$#随着溶磷细菌的重要性被人们逐渐认识! 研究者们从不同林木植物根际土壤分离%筛选并鉴 定出各种溶磷细菌) 已报道的溶磷细菌主要有芽孢 杆菌"G()4:9%#%假单胞菌"F%$9Q"C"0(%#%欧文氏菌 "H#[404(#%土壤杆菌"-1#"S()&$#49C#%伯克霍尔德菌 属 "G9#D*":Q$#4( %PE#% 黄 杆 菌 " !:(R"S()&$#49C# 等,")- ) 韩烁等,V#-研究毛竹根部溶磷细菌多样性中 分离得到芽孢杆菌属和伯克霍尔德氏菌属溶磷菌 株) 王岳坤等,V$-在对海南生态区的主要经济林"包 括橡胶树%桉树%台湾相思树%毛竹%香蕉%红树林等 "$ 种植物#研究中发现!在其根际土壤中分离筛选 #*$ 第 " 期 王!舒等$油茶根际高效溶磷细菌的筛选%鉴定及其安全性测试 出不动杆菌属%假单胞菌属%沙雷氏菌属%肠杆菌属) ?BN,5H等,V"-从喜马拉雅山脉高寒地区的沙棘根际 土壤中!同样也筛选一株假单胞菌属的溶磷细菌) 目前!鲜有关于G()4:9%(#7(S*(&(4作为溶磷菌株的 系统研究报道!为微生物肥料提供优质的菌种资源) ""#有关溶磷细菌的溶磷机制较为复杂!最为 常见的一种观点认为是由于溶磷细菌可分泌大量低 分子量有机酸!这些有机酸既能降低 Qj!又可与土 壤中的G1"`%E@"`%?2V`等离子结合!使难溶性磷酸 盐在酸性条件下被溶解!致使发酵液中的有效磷含 量不断增加,VV- !表明了溶磷细菌的溶磷量与培养液 Qj之间呈显著或极显著负相关性关系!即 Qj是菌 株在溶磷过程的主要影响因素!本研究结果与贺梦 醒,V- %任嘉红,"$- %白文娟,V%-等研究结果一致) "V#从溶磷能力上看!本研究筛选的高效溶磷 细菌cG"&% 的有效磷含量高达 *).*& 06/JW$!溶 磷率为 $).*%=) 就近几年的研究相比!白文娟 等,V%-测得玉米根际溶磷细菌对无机磷溶解能力最 大为 $#&.V$ 06/JW$!有效磷含量仅为本研究的 $_ *) 朱培淼,)-等在对石灰性土壤中生长良好的野生 植物根际溶磷细菌中研究中筛选出一株溶磷率高达 $".&%=的菌株!略小于本实验的溶磷率) 而在任嘉 红,"$-等研究得出的溶磷细菌 GJf$* "FET:9"#$%2 )$0%#%iEfV "G()4:9%)$#$9%# 的有效磷含量高达 :*.:* 06/J W$和 :V%."$ 06/JW$!说明本试验分 离得到的溶磷细菌 cG"&% 具有较高的商业价值和 应用价值) "#溶磷细菌是近几年来研究的热点!对溶磷 细菌的分离筛选有一套比较完整的研究系统!也筛 选出了很多高效的菌株!但在其应用上研究比较匮 乏!筛选出的高效溶磷菌!其安全问题大多被忽略) 关于芽孢杆菌属安全性检测研究颇多!但大多数都 使用动物模型试验!而国内外针对 G()4:9%(#7(S*(&2 &(4菌株的安全性研究较少) 植物模型被认为是一 种有效的研究动物致病细菌的分子致病机制的手 段!近年来研究表明!苜蓿可以作为医院呼吸道感染 细菌的毒力测定植物模型) M@B5,@B等,V:-利用苜蓿 模型可以简单快捷的检测出菌株对哺乳动物是否具 有致病性) 本研究在此基础上!利用苜蓿模型来对 筛选出的高效溶磷菌株 cG"&% 进行简捷有效的毒 性测定!发现cG"&% 无致病性!安全性较高!这与李 煜,$:- %李晶,$*-等以动物模型研究芽孢杆菌属安全 性结果一致) 通过对该高效溶磷菌株安全性的检 测!为其今后的应用提供理论依据) 参考文献! ,$- 何!方! 何!柏.油茶栽培分布与立地分类的研究,i-.林业科 学! 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