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Screening, Identification and Security Test of Camellia oleifera Rhizosphere Phosphate-Solubilizing Bacteria

油茶根际高效溶磷细菌的筛选、鉴定及其安全性测试



全 文 :林业科学研究!"#$%!"&""#$$:: $*"
!"#$%&$%$(#)*
!!文章编号!$##$($)&""#$%##"(#$::(#*
油茶根际高效溶磷细菌的筛选$鉴定及
其安全性测试
王!舒! 张林平!! 郝菲菲! 张!扬! 胡冬南
"江西农业大学园林与艺术学院!江西 南昌!VV##%#
收稿日期$ "#$(#*(V#
基金项目$ 国家自然科学基金项目"V$":#$)#%江西农业大学博士启动经费"#)##$%%#
作者简介$ 王!舒"$)&)*#!女!甘肃张掖人!在读硕士生!主要从事植物有益微生物研究
!
通讯作者$ 博士!主要从事大型真菌多样性和森林病理学研究!/(01,2$32Q,56:$)9$:V.;70
摘要!本研究利用溶磷圈法和钼锑抗比色法!从油茶根际分离出 "# 株高效溶无机磷细菌!并对其溶磷能力进行定性
和定量测试!结果发现!P_H与溶磷细菌的有效磷含量之间没有显著的相关性!而培养液 Qj与有效磷含量之间存在
极显著的负相关性关系"Fr#.#$#) 并采用形态特征%生理生化%M,7276系统和 $:>BPc?序列分析对一株溶磷效果
最好的菌株cG"&% 进行菌株鉴定!确定其为G()4:9%(#7(S*(&(4) 通过苜蓿植物模型和)S:-毒力基因测定对该菌株
进行安全性检测!结果发现!该菌株未检测到)S:-基因!对洋葱和苜蓿安全无致病性) 本研究对溶磷细菌的安全应
用及提高油茶土壤磷素利用效率具有重要意义)
关键词!油茶+溶磷细菌+溶磷能力+安全性测试
中图分类号!>*)h 文献标识码!?
690##))(! H.#)2+912*)1).6#9I02< /#&2*+3(04%*( "%4*54/( C8P*&G8#0#
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R1A1A,65,-,;15D5@61D,N@;7B@21D,75 K@DR@@5 D4@Q47AQ41D@A72R4@B@1AD4@B@R1A57A<;4 Q47AQ41D@A72276,;12! Q4FA,7276,;1215H K,7;4@0,;12;41B1;D@B,AD,;A! M,7276AFAD@015H $:>BPc?6@5@A@8<@5;@1512FA,A.L4@
4,64 @-@;D,N@Q47AQ41D@(A72cG"&% R1AD@AD@H 75 -:49C)$P( 15H A$Q4)(1"%(&4R( A@@H2,56A! 15H D4@)S:-N,B<2@5;@6@5@A.c7)S:-6@5@R1A
H@D@;D@H 75 cG"&% ,5 D4@D@AD! A7D4,AADB1,5 ,AA1-@-7B-E)$P( 15H AE%(&4R(E
;#< $*0.$I(C$:4( ":$4T$#(+ Q47AQ41D@(A72油茶"I(C$:4( ":$4T$#( ?K@2.#是我国南方特有
的重要木本食用油料!被称为是东方橄榄油(!与
油橄榄%油棕%椰子并称世界四大木本油料植
物,$ WV- ) 磷是促进植物生长和提高农作物产量不可
缺少的元素,- !主要来源于土壤!而磷素在土壤中通
常以难溶物的形式存在!导致土壤中有效磷含量不
足 %=!很难满足植物生长,%- ) 为提高油茶产量!对
其合理施磷肥是增产的关键措施,: W*- !而施入的磷
第 " 期 王!舒等$油茶根际高效溶磷细菌的筛选%鉴定及其安全性测试
肥在当季仅有 %= $#=被植物吸收利用!绝大部
分磷迅速以 ?2(U%G1(U%E@(U的形式转化为难溶性
磷酸盐!或被雨水冲洗随水土流失至水体!造成水体
污染,& W$$- )
大量研究表明!植物根际土壤存在大量溶磷菌!
能够通过自身代谢!将土壤中植物难以吸收的难溶
性磷转化为可吸收利用的形态!增加植物对磷素的
吸收!进而提高作物产量,$" W$V- ) 不同种类的溶磷
菌!其溶磷能力也存在着巨大的差异!而且溶磷机理
也不尽相同) 有些溶磷菌的溶磷作用主要是因为分
泌大量有机酸!降低了培养液 Qj!进而把难溶性磷
酸盐中的磷酸根溶解出来,$ W$%- !而培养液 Qj与溶
磷菌溶磷能力之间是否存在相关性!研究结果不一)
随着微生物肥料新品种的不断扩大!筛选的菌种也
越来越多!其安全性已成为人们研究功能菌的热点)
李煜,$:- %李晶,$*-在对芽孢杆菌属进行安全性评价
时!以小白鼠为试验对象) 这种利用动物模型检测
菌株安全性的方法精确可靠!但其存在试验周期长%
耗资高%操作复杂等缺点) 而 >,27(><4 等利用苜蓿
和老鼠对人体条件致病菌进行了毒力试验!观察得
到!在老鼠身上产生的毒力作用可同样在苜蓿上表
现出相关的毒力结果,$&- ) 目前!有关油茶根际溶磷
细菌的相关系统鲜有报道) 因此!本研究在对油茶
根际溶磷细菌筛选%鉴定的基础上!采用苜蓿模型简
单快捷的对菌株 cG"&%"芽孢杆菌#进行安全性检
测!为油茶高效生物肥料研究提供优良菌种资源和
安全性理论依据!对促进油茶产业可持续发展具有
重要意义)
$!材料与方法
=.=>培养基
JM液体培养基$胰蛋白胨 $# 6!酵母浸粉 % 6!
c1G2$# 6!蒸馏水 $ ### 0J!Qj*.# *.)
JM固体培养基$在液体 JM培养基中加琼脂
$: 6)
溶无机磷细菌筛选培养基"cM+CU# ,$)- $葡萄糖
$# 6!G1
V
"Uk

#
"
% 6!e6G2
"
% 6!IG2#." 6!e6>k

/
*j
"
k#."% 6!"cj

#
"
>k

#.$ 6!蒸馏水 $ ### 0J!
Qj*.#)
溶磷能力测定培养基"cM+C(MUM# ,$)- $配方同
cM+CU"添加 #.#"% 6/JW$的溴酚蓝#)
$=水琼脂培养基$琼脂粉 $# 6!蒸馏水 $ ###
0J!自然 Qj)
=.?>供试植物材料及菌株!
新鲜健康洋葱"-:49C)$P(#$购自江西农大菜
市场+
紫花苜蓿"A$Q4)(1"%(&4R(#种子$购自北京禾木
青科技有限责任公司+
标准菌株JeT$"""$由南京林业大学森林资源
与环境学院叶建仁教授赠送)
=.A>溶磷细菌的分离
采用三点取样法从江西省林业科学院和赣州市
南康区唐江镇油茶基地采集 $# $% ;0土层油茶
根际土壤!用平板梯度稀释培养法制作成系列悬浮
液!取 #.$ 0J涂布于 cM+CU平板上!"&d!培养 V
H!挑取透明圈明显的细菌!纯化至少 V 次!确定其为
纯培养物后!挑取单菌落转接到 JM斜面培养 " V
H!并置于 d冰箱保存)
=.B>溶磷能力测定
$..$!定性测定!采用溶磷圈法和 e@4D1和 c1<(
D,F12
,"#-的方法"稍作修改#对溶磷菌的溶磷能力进
行定性测试) 将分离获得的纯菌株分别点接种于
cM+CU培养基上!置于 "&d培养箱中培养 % H 时观
察!观察有无溶磷圈!并根据溶磷圈直径"P#与菌落
直径"H#的比值"P_H#初步确定菌株溶磷能力) 再
将P_H 值较大的菌落接种到装有 "# 0JcM+C(MUM
培养液的 %# 0J三角瓶中!"&d!$&# B/0,5W$培养
V H!将发酵液离心 $# 0,5"d!$# ### B/0,5W$#)
:## 50下测定上清液的吸光度!并进行溶磷能力分
级,"$- ) 分级标准为$OB
:##
%
W$$溶磷能力强" ` `
#`+W$ rOB
:##
%
W#.%$较强" ` #`+ W#.% r
OB
:##
%
W#.$$弱" #`) 同时以未接种作为对照!每
处理重复 V 次)
$.."!定量测定!利用钼锑抗比色法对溶磷菌的
溶磷能力进行定量测试) 选取 OB
:##
负值大的菌株
活化后分别接种于JM液体培养基中!"&d!$&# B/
0,5
W$培养 $& " 4!制成种子液!并按 $=的接种
量接种于含 "# 0JcM+C(MUM培养液的 %# 0J三角
瓶中!"&d!$&# B/0,5W$振荡培养 V H!将发酵液离
心 $# 0,5"d!$# ### B/0,5W$#!采用钼锑抗比色
法测定上清液中可溶性磷的含量,""- !并按以下计算
溶磷率,"V- ) 同时以未接种作为对照!每个处理 V 个
重复)
溶磷率 Y"发酵液有效磷含量 W对照溶液磷含
量# Z溶液体积_磷酸三钙中含磷总量Z$##=
=.@>菌株cG?Q@ 鉴定
$.%.$!生理生化特征!参考 2伯杰系统鉴定手
*:$
林!业!科!学!研!究 第 "& 卷
册3 ,"-中推荐的部分培养基和方法)
$.%."!系统发育树分析!参照文献,"%-方法提取细
菌的基因组 Pc?!采用细菌通用引物 " "*E$ %b(
?T?TLLLT?LGGLTTGLG?T(Vb! $)"+$ %b(L?GT(
TGL?GGLLTLL?GT?GLL(Vb#对基因组 Pc?进行
$:>BPc?片段扩增+V#
"
JUG+反应体系$0,X$%
"
J%引物各 "
"
J%模板 "
"
J%HHj
"
k补足 V#
"
J+
UG+反应条件$ )%d 0,5+)%dV# A!%dV# A!*"d
)# A!V# 个循环+ *"d延伸 * 0,5) UG+产物于 $=
琼脂糖凝胶中电泳!送上海生工测序) 所得序列与
T@5M15g数据库中序列进行 MJ?>L比对分析!以相
似性达 )&= 以上的标准选择参考菌株!采用
e/T?%.# 软件!用c@,64K7B(i7,5,56法构建系统进化
树"M77DADB1Q Y$####!分析菌株的系统发育学特征)
同时向T@5M15g提交序列并获得登陆号)
=KO>"7?Q@ 在苜蓿模型上的安全性测试
$.:.$!供试菌株的准备!活化高效溶磷细菌
cG"&% 和标准菌株 JeT$"""!"&d!$&# B/0,5W$!
培养 " 4) 将得到的发酵液离心 $# 0,5"$# ### B/
0,5
W$
#!弃上清!加入无菌水混匀!并重复 V % 次!
目的是将细菌代谢产物去除!得到纯菌悬液!调节菌
体浓度在 $ Z$#&;-$.:."!对洋葱致病性的测定!挑取新鲜健康大小
一致的洋葱放入装满自来水的瓶口!让洋葱根系接
触水面!V H换一次水!培养 $% H左右!待洋葱长
出叶子!剥掉外层老化的表皮!参照文献,":-的方法
进行洋葱接种!无菌注射器分别取准备好的高效溶
磷细菌cG"&%%标准菌株JeT$""" 纯菌悬液和无菌
水在洋葱鳞茎上两点对称注射"深度为 $ " ;0#!
以标准菌株JeT$""" 作为阳性对照!无菌水作为阴
性对照) 每点注射量 $ 0J!每处理 V 个重复!置于
"%d室温培养!% H后观察结果)
$.:.V!对苜蓿幼苗生长的影响!参照张立新,"*-的
方法进行接种!将苜蓿种子用 )&=的浓硫酸浸泡 V#
0,5"约 $# 0J浸 V## 颗种子#!无菌水清洗 % : 次
后将种子放于 :# 0J无菌水中!V#d!$%# B/0,5W$
浸种 & 4!清洗 V 次!同等条件下震荡培养过夜) 次
日!用无菌水清洗 V 次!无菌操作将均匀一致的发芽
苜蓿种子摆放到 $=的水琼脂平板上!每皿摆放 $#
颗种子) V#d!)#=相对湿度!光照黑暗交替"光照%
黑暗各 $" 4#培养 & *" 4!直至子叶展开)
取 "#
"
J准备好的 cG"&%%JeT$""" 菌悬液和
无菌水点在苜蓿幼苗上!其中致病菌株作为阳性对
照!无菌水作为阴性对照) 每个处理 % 个重复!每重
复 $# 颗种子) 接种后的种子放在 V#d%)#=相对湿
度%定时光照"光照%黑暗各 $" 4#条件的人工气候
培养箱!* H后观察苜蓿发病情况)
=KR>-6%,毒力基因检测
)S:-基因的检测采用 UG+特异性扩增技术进
行) 特异性引物为 ;K2?$ "%b(GG???TT?GL??G(
GG?(Vb#和 ;K2?" "%b(?GTGT?LTLGG?LG?G?(Vb#!
V#
"
JUG+反应体系$e,X$%
"
J%引物各 "
"
J%模板
"
"
J% HHj
"
k补足 V#
"
J) UG+反应条件$)dV
0,5+)d$ 0,5!:#d$ 0,5!*"d$ 0,5!V% 个循环!
*"d延伸 $# 0,5) 扩增产物进行 $=琼脂糖凝胶电
泳检测)
=.Q>数据分析
采用 >U>> n$V.# 软件对试验数据进行统计分
析!并采用/X;@2"#$# 软件作图)
"!结果与分析
?.=>菌株的分离$筛选
从江西省林业科学院茶园和赣州市南康区唐江
镇油茶基地油茶根际分离得到能产生溶磷圈的溶无
机磷细菌 VV# 株"图 $#) 利用溶磷圈法对 VV# 株溶
无机磷细菌进行定性和半定量溶磷能力的测定!结
果表明各溶磷细菌所产生的溶磷圈外径与菌落生长
的直径比值"P_H#都大于 V.V#"表 $#!其中 Tm#)"
比值最大 "%.)"#!次之为 cG"&% "%.&& #%Tm#:&
"%h*)#)
图 $!溶磷细菌菌株在cM+CU平板上形成的溶磷圈
溴酚蓝"MUM#作为一种酸碱指示剂!会随着介
质 Qj降低而变色!利用发酵液褪色程度的不同可
以定性和半定量地反应细菌溶磷能力的大小) 本研
究中与对照相比!"# 株溶磷细菌发酵液 Qj
&
,.$:
W%.*-!这说明 "# 株溶磷细菌分泌了大量有机酸
&:$
第 " 期 王!舒等$油茶根际高效溶磷细菌的筛选%鉴定及其安全性测试
降低了培养介质 Qj值而使MUM褪色)
图 "!溶磷细菌 P_H与有效磷含量的相关性
?.?>溶磷细菌溶磷能力的测定
本研究利用碳酸钙作为唯一无机磷源!来测定
菌株分溶无机磷能力的大小) "# 株溶磷细菌在数
量相同的情况下!可以看出!各处理发酵液中有效磷
含量均显著高于 GI"%.VV 06/JW$#!说明各菌株
对碳酸钙均有一定得溶解作用!且各处理间差异显
著"表 $#) 与 GI相比!有效磷含量增幅为 GI的
&h* $.* 倍) 其中 cG"&% 在发酵液中的有效磷
含量最高"*).*& 06/JW$#!溶磷率为 $).*%=!将
其选择为进一步研究的菌株)
?.A>溶磷细菌溶磷能力指标的相关性分析
本实验对 "# 株溶无机磷菌株的 P_H 和溶磷量
的相关分析表明!P_H 与溶无机磷细菌的溶磷量之
间没有显著的相关性"图 "#) 如菌株Tm#&* 的P_H
最大!为 %.)"!但其溶磷率仅为 $$.&*="表 $#!故
P_H的大小作为溶磷能力的恒定指标有待商榷)
表 =>?S 株溶无机磷细菌的溶磷能力测定
编号 P_H Qj
有效磷含量_
"06/J
W$
#
溶磷率_
"=#
cG#"& ."$ .:: v#.#1 :#*.% v:.:V@-6 $.*%
cG#)& V.V& .)* v#.#$K;H %%".%& vV.";H@ $V.")
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Gg W *.#: v#.V:@ %.VV v.V1 WW
与未接种的GI培养液 Qj"*.#:#相比!接种后
的各发酵液 Qj均有不同程度的下降!其 Qj在 .$:
%.* 之间!说明在培养过程中!细菌能够分泌一
些酸性物质!导致 Qj下降!由图 V 可知!Qj与溶无
机磷细菌的溶磷量之间存在极显著的负相关性关系
"Fr#.#$#) 因此!培养液 Qj可作为衡量溶无机磷
菌溶磷能力强弱的指标)
图 V!溶磷细菌 Qj与有效磷含量的相关性
?.B>菌株鉴定
"..$!培养特征和形态特征观察!菌株 cG"&% 在
JM培养基上生长较好!培养 & 4 后!菌落呈白色不
透明圆形!边缘整齐!表面褶皱!好氧"图 #)
图 !菌株cG"&% 的形态特征
".."!生理生化特征!菌株 cG"&% 革兰氏阳性!
有芽孢!接触酶%甲基红试验%伏普试验%淀粉水解反
应为阳性+能利用柠檬酸!可使明胶液化+不能使硝
酸盐还原!也不水解纤维素+可利用葡萄糖%蔗糖和
甘露醇"表 "#)
"..V!分子鉴定!菌株 cG"&% 在 M,7276鉴定板上
培养 $: " 4 的数据进行鉴定!其读数相似值
">Ce#均大于 #.%!可视为系统确定的种属鉴定结
果!菌株cG"&% 鉴定为芽孢杆菌属"G()4:9%AQ.#)
菌株 cG"&% 基因片段序列"$ :# KQ#在 T@5(
M15g及/3L1X75近缘种序列进行比对分析!结果显
):$
林!业!科!学!研!究 第 "& 卷
表 ?>菌株"7?Q@ 的主要生理生化特征
实验项目 cG"&% 实验项目 cG"&%
革兰氏染色 ` 接触酶试验 `
芽孢染色 ` 甲基红试验 `
淀粉水解试验 ` 伏普试验 `
明胶液化试验 ` 葡萄糖 `
硝酸盐还原试验 W 蔗糖 W
纤维素水解试验 W 麦芽糖 `
柠檬酸盐试验 ` 甘露醇 `
示相似性在 )*=以上的均为G()4:9%属!其中与G(2
)4:9%(#7(S*(&(4相似性最高!相似性达 ))=) 选择
相似性在 )&=以上的同属和同种菌株序列!以 K()2
&"S()4:9%J$($为外群!采用 c@,64K7Bi7,5,56法构建
系统发育树"图 %#可以看出!菌株cG"&% 与G()4:9%
(#7(S*(&(4同一分支中!亲缘关系最近)
综合以上形态特征%生理生化特性%M,7276鉴定
及系统发育结果!最终确定该菌株为 G()4:9%(#7(S2
*(&(4) 向 T@5M15g 提交序列并获得登陆号为
Ie"*V&)
图 %!基于 $:> Pc?序列构建的 % 株溶磷细菌系统发育树
?K@>"7?Q@ 在洋葱上的毒力症状
洋葱鳞茎接种试验结果如图 : 所示!阳性对照
标准菌株 JeT$""" 接种 " H 后!洋葱鳞茎表皮开始
出现黄色病斑!% H后病斑不断扩大!直接达到 " V
;0!切开发现!鳞茎内部和根部严重腐烂!呈黄褐
色!并带有浓烈的恶臭味) 接种的 cG"&% 菌株 % H
不产生病斑!仅在接种点表皮产生很小的坏死斑点!
继续培养!斑点没有扩大现象!切开后!内部没有异
常变化!与阴性无菌水对照症状相同) 由此推断!该
菌株不是洋葱致病菌!说明 cG"&% 对洋葱没有致
病性)
?KO>"7?Q@ 在苜蓿幼苗上的毒力症状
苜蓿幼苗接种 * H 后结果如图 * 所示!接种
?无菌水!McG"&%!GJeT$"""
图 :!cG"&% 接种洋葱结果
JeT$""" 标准菌株!):=苜蓿幼苗表现出接种点周
围坏死%黄化和根部短小的症状!对苜蓿生长产生显
明的抑制作用) 接种 cG"&% 菌株和无菌水的苜蓿
幼苗表现一致!生长正常!成活率分别为 :"=%
::=) 由此可以推断高效溶磷菌株 cG"&% 对苜蓿
无致病性!安全性比较高)
?无菌水!McG"&%!GJeT$"""
图 *!cG"&% 接种苜蓿结果
?KR>毒力基因-6%,的D7C检测
)S:-基因被认为是特定的毒力基因!且在大多
数流行致病菌株中存在,"&- !为更加准确的确定该菌
株有无致命性!本实验利用 )S:-基因对菌株 cG"&%
进行毒力基因的检测!结果未检测到这该毒力基因)
这与苜蓿模型试验结果一致) 最终可得出!菌株
cG"&%"G()4:9%(#7(S*(&(4#无致病性!安全可靠)
V!结论与讨论
"$#随着溶磷细菌的重要性被人们逐渐认识!
研究者们从不同林木植物根际土壤分离%筛选并鉴
定出各种溶磷细菌) 已报道的溶磷细菌主要有芽孢
杆菌"G()4:9%#%假单胞菌"F%$9Q"C"0(%#%欧文氏菌
"H#[404(#%土壤杆菌"-1#"S()&$#49C#%伯克霍尔德菌
属 "G9#D*":Q$#4( %PE#% 黄 杆 菌 " !:(R"S()&$#49C#
等,")- ) 韩烁等,V#-研究毛竹根部溶磷细菌多样性中
分离得到芽孢杆菌属和伯克霍尔德氏菌属溶磷菌
株) 王岳坤等,V$-在对海南生态区的主要经济林"包
括橡胶树%桉树%台湾相思树%毛竹%香蕉%红树林等
"$ 种植物#研究中发现!在其根际土壤中分离筛选
#*$
第 " 期 王!舒等$油茶根际高效溶磷细菌的筛选%鉴定及其安全性测试
出不动杆菌属%假单胞菌属%沙雷氏菌属%肠杆菌属)
?BN,5H等,V"-从喜马拉雅山脉高寒地区的沙棘根际
土壤中!同样也筛选一株假单胞菌属的溶磷细菌)
目前!鲜有关于G()4:9%(#7(S*(&(4作为溶磷菌株的
系统研究报道!为微生物肥料提供优质的菌种资源)
""#有关溶磷细菌的溶磷机制较为复杂!最为
常见的一种观点认为是由于溶磷细菌可分泌大量低
分子量有机酸!这些有机酸既能降低 Qj!又可与土
壤中的G1"`%E@"`%?2V`等离子结合!使难溶性磷酸
盐在酸性条件下被溶解!致使发酵液中的有效磷含
量不断增加,VV- !表明了溶磷细菌的溶磷量与培养液
Qj之间呈显著或极显著负相关性关系!即 Qj是菌
株在溶磷过程的主要影响因素!本研究结果与贺梦
醒,V- %任嘉红,"$- %白文娟,V%-等研究结果一致)
"V#从溶磷能力上看!本研究筛选的高效溶磷
细菌cG"&% 的有效磷含量高达 *).*& 06/JW$!溶
磷率为 $).*%=) 就近几年的研究相比!白文娟
等,V%-测得玉米根际溶磷细菌对无机磷溶解能力最
大为 $#&.V$ 06/JW$!有效磷含量仅为本研究的 $_
*) 朱培淼,)-等在对石灰性土壤中生长良好的野生
植物根际溶磷细菌中研究中筛选出一株溶磷率高达
$".&%=的菌株!略小于本实验的溶磷率) 而在任嘉
红,"$-等研究得出的溶磷细菌 GJf$* "FET:9"#$%2
)$0%#%iEfV "G()4:9%)$#$9%# 的有效磷含量高达
:*.:* 06/J
W$和 :V%."$ 06/JW$!说明本试验分
离得到的溶磷细菌 cG"&% 具有较高的商业价值和
应用价值)
"#溶磷细菌是近几年来研究的热点!对溶磷
细菌的分离筛选有一套比较完整的研究系统!也筛
选出了很多高效的菌株!但在其应用上研究比较匮
乏!筛选出的高效溶磷菌!其安全问题大多被忽略)
关于芽孢杆菌属安全性检测研究颇多!但大多数都
使用动物模型试验!而国内外针对 G()4:9%(#7(S*(&2
&(4菌株的安全性研究较少) 植物模型被认为是一
种有效的研究动物致病细菌的分子致病机制的手
段!近年来研究表明!苜蓿可以作为医院呼吸道感染
细菌的毒力测定植物模型) M@B5,@B等,V:-利用苜蓿
模型可以简单快捷的检测出菌株对哺乳动物是否具
有致病性) 本研究在此基础上!利用苜蓿模型来对
筛选出的高效溶磷菌株 cG"&% 进行简捷有效的毒
性测定!发现cG"&% 无致病性!安全性较高!这与李
煜,$:- %李晶,$*-等以动物模型研究芽孢杆菌属安全
性结果一致) 通过对该高效溶磷菌株安全性的检
测!为其今后的应用提供理论依据)
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