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Establishment of Cell Suspension Culture and Growth Characteristics of Wild Nitraria tangutorum

野生唐古特白刺悬浮细胞系的建立及生长特性



全 文 :林业科学研究!"#$%!"&"$#$) &#
!"#$%&$%$(#)*
!!文章编号!$##$($)*&""#$%##$(##)(#
野生唐古特白刺悬浮细胞系的
建立及生长特性
倪建伟$!"! 魏!琦"! 杨秀艳"! 许秀玉,!
武海雯"! 张华新"!! 刘!涛"
"$+中国林业科学研究院林业研究所!北京!$###*$% "+国家林业局盐碱地研究中心!北京!$###*$%
,+广东省林业科学研究院!广东 广州!%$#%"##
收稿日期$ "#$)(#&("-
基金项目$ 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目"P.?aLL"#$"##*%P.?aLL"#$$##% [%#
作者简介$ 倪建伟!河北邢台人!从事耐盐碱植物资源利用等方面研究+
!
通讯作者$研究员!博士生导师!从事耐盐碱植物遗传育种方面的研究+
摘要!以野生唐古特白刺的茎段,叶片为外植体!研究了]1P3Y对外植体的消毒效果和激素 "!)(^,]..和 -(L.对
愈伤组织诱导及愈伤组织形态的影响!并利用疏松型愈伤组织建立了白刺悬浮细胞系!对其生长特征进行了分析)
结果表明$对茎段和叶片用 "d的]1P3Y消毒 $# 027最适宜!时间过长或过短均会影响成活率%, 种激素对愈伤组
织的相对生长量和形态均有影响!其中!"!)(^是主要影响因子!且茎段诱导出的愈伤组织相对生长量比叶片的高%
根据愈伤组织的生长速度和形态!适宜用浅黄色疏松型愈伤组织构建唐古特白刺悬浮细胞系!最佳试验组合为 ZD
h"!)(^ $+% 0M-H
[$
h]..#+" 0M-H
[$
h-(L.#+) 0M-H
[$
!最佳继代接种量为 +% 0H母液!生长曲线呈&D
型!培养第 天细胞分裂指数达最大值"%+$d#!培养第 , 天细胞活力最强"吸光值为 #+-*#!存活率在细胞生长延
迟期和稳定期较对数期下降略快!但均保持在 &)d *,d间)
关键词!唐古特白刺%愈伤组织%悬浮细胞%细胞培养%生长特性
中图分类号!D""+, h 文献标识码!.
$(.5/-("2#*)%N#/CO(,#*(-)*NO/O1#.*831)4"N".1.-(-&()%
Z-/8F+"()(+) ")2<6"-(6:
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]1P3Y:7 <9FK:>"!)(^! ]..17E -(L.:7 9136K27E69F2:7 17E 0:IW;:3:M5+J;<9136K0:I(
W;:3:M5V1K17135SF29KVE2K27><9F2:7 :>3:7M<9FK:7 I<31F2T0:IW;:3:M5:>9136K17E F;<"!)(^ V1K101=:I>19F:I! F;9136K>I:0KF<0V1K;2M;F;1F:>3<1T2I09:7F12727M"!)(^ $+% 0M-H
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F2:7 >:IF;<:[&(6A?&"#?@K6KW<7K2:7 9<332717E F;<@第 $ 期 倪建伟等$野生唐古特白刺悬浮细胞系的建立及生长特性
J;<9<302F:F2927E%+$d 1FF;963F6IM:FF;W;1K1KF6#7 4)18($ :2&#(#2( &(6A?&"#?@+% 9136K% K6KW<7K2:7 9<3K% 9<3963F6I<% MI:VF; 9;1I19F白刺属":2&#(#2( H+#植物隶属于蒺藜科"j5M:(
W;5319<1<#!是多分枝,耐盐碱,抗风蚀,耐沙埋的旱
生型低矮灌木!是荒漠,半荒漠和盐渍化土地上的重
要建群种或优势种) 许多研究者已从系统学,解剖
学,生态防护,快繁优育,营养利用等方面对白刺属
植物进行了研究*$ [)+ !做出了突出的贡献) 唐古特
白刺 ":2&#(#2( &(6A?&"#?@L:@I+#是我国特有白刺
种!具有很强的耐盐抗旱能力!其枝条,叶片和浆果
中富含多种氨基酸,矿物元素和其他活性物质!具有
较高的药用价值!是耐抗性研究的良好材料!对其资
源开发利用具有广阔的前景*,! % [*+ )
在组织培养方面!何正伦*$#+在早期就研究了唐
古特白刺离体培养技术!王尚德等*$$+ ,张红晓等*$"+
对唐古特白刺的愈伤诱导和腋芽增殖进行了研究!
发现其植株再生困难!李代丽*$,+利用唐古特白刺组
培苗研究了诱导愈伤组织过程中外源激素对内源激
素含量的影响!a17M等*$)+研究了 ]1P3胁迫对唐古
特白刺愈伤组织的生理影响) 纵观前人的研究发
现!不同激素对不同来源"大田或温室植株#及不同
组织"根,茎,叶,胚等#外植体愈伤组织的生长和形
态诱导均有影响!因此!要根据对愈伤组织的利用目
的!筛选出适宜的诱导条件!培养特定形态的愈伤组
织) 近年来!除利用愈伤组织获得再生植株外!构建
良好的悬浮细胞系已备受关注) 悬浮细胞因其分散
性好!生长速度快!重复性好!易于控制而被广泛应
用于植物生理生化,遗传发育,次生代谢等研究中!
目前已在红豆杉"K(Y?%)*26$6%2%" 2`3M银杏";263A"721"7( H277+#,人参"H(6(YA26%$6A P+
.+Z<5&*(#(6&*?%#"%$?%"H277+# B+^ :7#等多种植物*$% [$*+
中实现了悬浮体系的构建!为活性物质的合成,代谢
途径的转变,耐抗性的机理等研究提供了优良的材
料%而对白刺属植物悬浮细胞体系的建立及生长特
性研究尚未见报道) 因此!利用白刺愈伤组织建立
稳定的悬浮细胞系!并进一步研究悬浮细胞的生长
特性!对研究白刺的遗传转化,体细胞胚胎发生和利
用细胞培养产生次生代谢物等提供了优良的试验材
料!对后续研究将有明显的促进作用*"#+ )
本研究以野生唐古特白刺的茎段和叶片为试验
材料!以次氯酸钠"]1P3Y#为消毒剂!以 "!)(二氯苯
氧乙酸""!)(^#,萘乙酸"]..#和 -(苄基腺嘌呤"-(
L.#作为外源激素!对白刺愈伤组织的相对生长量
和形态进行测定和观察!同时筛选适宜的愈伤组织
和初始接种量!构建稳定,快速生长的白刺悬浮细胞
系!并对细胞生长曲线,细胞分裂指数和细胞活力等
生长特性进行测定和分析!为今后利用白刺悬浮细
胞系开展细胞,分子等水平的研究提供试验材料和
科学依据)
$!材料与方法
9+9:试验材料
本实验所用材料均为野生唐古特白刺!于 "#$"
年 * 月 ",("% 日午后"$,$##($$###采自甘肃省
张掖市高台县碱洼滩地区",*o,,i]!**o%%i/#) 当
地为大陆沙漠干旱型气候!年均降水量 $#, 00%采
集地为沙地!形成白刺沙包%生境植物有细枝盐爪爪
"h(12F2?@ A#()21$?<7S3#, 碱 篷 " I?($F( A1(?)$
L67M<#,补血草"/2@"62?@%26$6%$"B2I1IE# G67FS<#
等) 随机选取不少于 $# 株,生长旺盛的唐古特白
刺!剪取具有当年新生生长旺盛的枝条及完全展开
的功能叶片为材料!置于自封袋内!标注采集信息!
置于冰袋箱中低温保存)
9+;:试验方法
$+"+$!外植体的消毒!将白刺嫩枝条剪成约 % -
90长的小段!用洗涤液振荡 % 027!自来水冲洗 )%
027!#d酒精浸泡 ,# K!再用现配的 "d的次氯酸钠
"]1P3Y#分别消毒处理 &,$#,$",$% 027!之后用无
菌水清洗 , % 次) 将叶片和枝条"剪成约 $ 90左
右#均用无菌手术刀划伤!横向平放于含 ZD 固体培
养基"ZD固体培养基的蔗糖含量 ,# M-H[$!琼脂
-+% M-H
[$
!WQ值 %+&#的培养皿上!每个培养皿接
种 ) 个外植体!% 个培养皿为 $ 组!每组 ) 次重复!"%
f培养 $# E) 每天及时观察!出现污染个体迅速转
移未污染个体到新培养皿中继续培养) 以外植体端
口或划伤处有膨大现象,颜色为绿或浅绿色的个体
判为成活个体!未见膨大,颜色发黑或褐色为未成活
%
林!业!科!学!研!究 第 "& 卷
个体) 观察外植体的污染及成活个数!计算污染率
和成活率)
污染率c污染个数b接种总数q$##d
成活率c成活个数b接种总数q$##d
$+"+"!愈伤组织的诱导!选无污染茎段,叶片为试
验材料!以ZD为基本培养基"蔗糖含量 ,# M-H[$!
琼脂 -+% M-H[$!WQ值 %+&!温度 "% f#!以 "!)(^,
-(L.,]..为外源激素!采用正交试验设计 H
$-
")
%
#
"表 $#!其中!每个培养皿接种 - 个外植体!每组 -
次重复!共计 ,- 个%不添加外源激素为对照!以观察
其自然长势!,# E 后统计愈伤组织的相对生长量)
愈伤诱导前称量外植体的质量为U$!培养后愈伤组
织的鲜质量为 U"!愈伤组织相对生长量计算公式
如下$
愈伤组织相对生长量 c"U" [U$ #bU$
q$##d
表 9:正交试验因素及水平W
9@
"=
?
#
水平
因素"外源激素浓度#b"0M-H[$#
"!)(^ ].. -(L.
$ #+% #+# #+#
" $+# #+" #+"
, $+% #+) #+)
) "+# #+- #+-
9+<:白刺细胞悬浮体系的建立
$+,+$!白刺悬浮细胞体系的初步建立!根据不同
激素诱导的愈伤组织的生长和形态状态!选取生长
良好且质地松散的愈伤组织约 % M!接种于含 ,# 0H
ZD液体培养基"激素与诱导该愈伤组织的相同#的
$## 0H锥形瓶中!置于摇床上黑暗培养!转速 $"# I
-027
[$
!温度 "- "& f) 每 $) E 继代 $ 次!并用
过滤筛去除颗粒状愈伤组织!继代 , 次后得到白刺
悬浮细胞培养系!用倒置显微镜"_^ ("#"#观察细胞
形态)
$+,+"!初始接种量的筛选!分别吸取 "+%,%,+%,
$# 0H上述待继代悬浮细胞液!接种到含有 ,# 0H
ZD液体培养基的 $## 0H锥形瓶中!置于摇床上黑
暗培养!转速 $"# I-027[$!温度 "- "& f) 接种
后每天取样 $ 次!每次 , 个重复!测定悬浮细胞液中
细胞鲜质量"尼龙网抽滤后称质量#) $) E 后绘制
细胞生长曲线)
$+,+,!细胞活力的测定!采用 JJP法测定细胞活
力*"$+ ) 选取 $+,+" 结果中最佳接种量继代培养!每
天取样 $ 次!平行 , 组试验!连续取 $) 次) 将悬浮
细胞液抽虑!每个试管分别加入 %## 0M"鲜质量#悬
浮细胞!加 "+% 0H#+-d的JJP溶液和 "+% 0H磷酸
缓冲液"WQ值 +" +)#混匀!"% f下黑暗处理 $&
"# ;) 除去上清液并用蒸馏水洗涤细胞 , 次!加
入 % 0H*%d的乙醇溶液!-# f水浴下反应 ,# 027!
室温下洗至细胞无色) 取上清液在分光光度计上测
定 )&% 70下的吸光值".@K#!吸光值和细胞的活力
成正比)
$+,+)!细胞分裂指数的测定!采用醋酸洋红染色
法测定细胞分裂指数) 细胞继代培养过程中!每天
取样 $ 次!平行 , 组试验!连续取 $) 次!每次计数
,## 个以上细胞!镜检处于分裂期的细胞数量!计算
分裂指数!并绘制分裂指数曲线)
分裂指数c分裂期细胞数b细胞总数q$##d
$+,+%!细胞存活率的测定!采用中性红染色法测
定细胞存活率) 细胞继代培养过程中!每天取样 $
次!平行 , 组试验!连续取 $) 次!每次计数 ,## 个以
上细胞!镜检存活细胞!其中!活细胞仅液泡呈淡红
色!死细胞细胞核被染成红色!计算细胞存活率)
存活率c活细胞数b细胞总数q$##d
9+=:数据处理与分析
利用/A9<3"#$# 和 D D`D $*+# 进行数据处理,图
形绘制和统计分析!采用 6^7917法进行多重比较)
"!结果与分析
;+9:]1P3Y对茎段和叶片的消毒效果
表 "表明$随着消毒时间的增加!外植体污染率
降低!对茎段和叶片消毒 $# 027 的效果均最好!成活
率分别达 -%+##d和 -,+%d) 消毒时间继续增加!成
活率反而降低!表明消毒液对外植体伤害也逐步增
大) 消毒 $% 027时!部分外植体颜色变褐且无膨大趋
势!茎和叶的成活率仅为,$+"%d和",+%d) 消毒时
间过短!消毒不彻底!污染个数增多%消毒时间过长!
植物材料受损!成活率降低!宜选用消毒 $# 027)
表 ;:外植体消毒试验结果
外植体 处理时间b027 污染率bd 成活率bd
茎段 & -%+##1 ,%+##@9
$# ,%+##@ -%+##1
$" ,#+##@9 %&+%1
$% $"+%#E ,$+"%@9
叶片 & %-+"%1 ),+%@
$# ,-+"%@ -,+%1
$" "%+##@9 %&+%1
$% "#+##9E ",+%9
!!注$同列中相同外植体的不同字母表示在 #+#% 水平差异显著"H
m#+#%#)
-
第 $ 期 倪建伟等$野生唐古特白刺悬浮细胞系的建立及生长特性
;+;:不同外源激素对茎段和叶片愈伤组织诱导的
影响
!!不同配比的外源激素对白刺茎段和叶片愈伤组
织的诱导有明显的差异!对照"不加任何外源激素#
的茎段和叶片呈吸水膨大状态!并在划伤处有少许
愈伤组织出现!但不会继续生长%而添加激素诱导的
外植体形态变化明显!茎段和叶片的愈伤组织快速
生长) 由表 , 可知$, 种不同激素对白刺外植体愈
伤组织的相对生长量均有影响) 由极差"值#分析
结果"表 )#可知$茎段和叶片愈伤组织相对生长量
的值均为 "!)(^处理的最大!分别为 "$+,$%+#!
是主要影响因子%其次是 ]..!值分别为 -+",
e#%-(L.的最小!值分别为 ,+#,-+#) 由 3值确
定茎段愈伤组织诱导外源激素浓度的最佳组合为$
"!)(^ $+% 0M-H
[$
h]..#+) 0M-H
[$
h-(L.
"#+" #+-# 0M-H
[$
%叶片愈伤组织诱导最佳外源
激素浓度组合为$"!)(^ $+% 0M-H[$ h]..#+- 0M
-H
[$
h-(L.#+- 0M-H
[$
) 由表 ,,) 可知$"!)(^,
]..对茎段和叶片愈伤组织相对生长量的影响均
达显著水平"Hm#+#%#!且在相同外源激素处理下!
茎段愈伤组织的相对生长量大于叶片!即茎段诱导
愈伤组织的生长速度较快)
表 <:外源激素对不同外植体愈伤组织诱导试验结果
处理
外源激素b"0M-H[$#
"+)(^ ].. -(L.
茎愈伤组织
相对生长量bd
叶愈伤组织
相对生长量bd
$ #+% #+# #+# ,"; ,#M
" #+% #+" #+" ,%M; ,)M
, #+% #+) #+) ,>M ,%>M
) #+% #+- #+- )$>M )#<>
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$% "+# #+) #+- %@9 %$1@
$- "+# #+- #+) %%9E %#1@9
!!注$同列中不同字母表示在 #+#% 水平上差异显著)
表 =:正交试验极差分析结果
项目
茎段愈伤相对生长量bd
"!)(^ ].. -(L.
叶片愈伤相对生长量bd
"!)(^ ].. -(L.
3$ ,-+, ))+& )+, ,)+& )#+, )"+%
3" )&[% )*[& %#[, )&[% )-[& ),[,
3, %&[# %$[# %#[# )*[& )%[, )%[,
3) %,+# )+, %#+, )-+% )+, )&+%
"极差# "$+ -+" ,+# $%+# +# -+#
;+<:唐古特白刺愈伤组织的形态分析
不同激素组合诱导出多种形态的愈伤组织) 培
养 $ 周后!在激素的刺激下!茎段和叶片自划伤处开
始明显膨大!诱导出愈伤组织!并逐步延伸至其他部
位"图 $.,L#) 继续培养!愈伤组织不断增大!继代
培养 , 次"每次培养 ,# E#!愈伤组织形态发生明显
变化) 按照愈伤组织的结构形态基本可以分为结构
致密型和疏松型两大类型*"%+ !其中!结构致密型表
面呈颗粒状且松脆!镊子一夹即碎!有的色泽较亮!
呈浅绿色!生长速度较快!具有良好的分化潜力"图
$P#!处理 -,* 多见此形态%有的色泽暗淡!黄褐色!
生长速度较慢!具有褐化的倾向"图 $ #^!处理 ),&
多见此形态) 结构疏松型!其表面松软!色泽亮丽!
有的浅黄色!生长速度快!宜用于悬浮培养"图 $/#!
处理 $#,$% 多见此形态%有的呈乳白色!水渍状!生
长缓慢"图 $?#!处理 ,$) 多见此形态)
.$茎段诱导愈伤组织%L$叶片诱导愈伤组织%P$浅绿色致密型%
$^黄褐色致密型%/$浅黄色疏松型%?$乳白色疏松型
图 $!唐古特白刺愈伤组织的形态观察
;+=:唐古特白刺悬浮细胞培养中的生长特性
综合考虑愈伤组织生长速度及形态结构!选取
枝条产生的浅黄色疏松型愈伤组织"图 $ /#进行细
胞培养!ZD液体培养基"蔗糖 ,# M-H[$!琼脂 # M-
H
[$
#为基本培养基!激素为 "!)(^ $+% 0M-H[$ h
]..#+" 0M-H
[$
h-(L.#+) 0M-H
[$
!WQ值 %+&!
温度 "% f!黑暗培养!培养过程中松散状愈伤组织
在摇晃中逐渐形成单细胞或小细胞团!多次继代后
形成白刺悬浮细胞系"图 "#)
"+)+$!唐古特白刺悬浮细胞培养中接种量对细胞
生长的影响!图 , 表明$白刺悬浮细胞的生长曲线
基本呈&D形!且接种量不同曲线弯曲程度不同!其
中!接种母液量为 $# 0H时!细胞自第 , 天快速进入
对数生长期!自第 天开始进入稳定期!$$ E 后悬浮
细胞液细胞量达到 #+) 0M-0H[$!和初始接种母

林!业!科!学!研!究 第 "& 卷
图 "!白刺悬浮细胞系及细胞形态
液浓度"#+, 0M-0H[$#相当%接种量为 +% 0H母
液时!细胞自第 % 天进入对数生长期!第 $# 天进入
稳定期%接种量为 %+# 0H时!细胞自第 - 天进入对
数生长期!第 $$ 天进入稳定期%接种量为 "+% 0H!
细胞增殖速度明显变慢!基本处于停滞状态) 由此
表明!适量的接种量对悬浮细胞的增殖有很大的影
响) 当接种量较大时!易形成细胞团!分散性降低!
悬浮液浑浊!接种量较低又不利用细胞生长) 综合
考虑!宜采用 e% 0H的母液量来继代培养)
图 ,!唐古特白刺悬浮细胞的接种量对细胞生长的影响
"+)+"!唐古特白刺悬浮细胞培养中细胞分裂指数
的变化!采用接种量为 +% 0H母液继代培养!白刺
悬浮细胞的分裂指数随培养时间的变化结果"图 )#
表明$分裂指数随培养时间呈先增加后降低的趋势%
在接种后第 " 天出现细胞分裂!之后细胞分裂指数
迅速增高!并在第 天达到最高值"%+$d#!随后细
胞分裂指数迅速下降!从第 $# 天开始下降速度减
慢!细胞分裂指数趋于平衡)
"+)+,!唐古特白刺悬浮细胞培养中细胞活力与存
活率的变化!白刺悬浮细胞吸光值随培养时间的变
化结果"图 %#表明$白刺细胞接种 $ E 后!吸光值迅
速增加!并在第 , 天达到最大值"#+-*#!之后吸光值
逐渐降低!并趋于平衡!表明白刺悬浮细胞的细胞活
力随培养时间呈先增加后降低的趋势) 细胞接种初
图 )!唐古特白刺悬浮细胞分裂指数随培养时间的变化
期处于生长延迟期!为细胞分裂做准备!如合成
]^.等物质!因此!细胞活力迅速增强%而在指数生
长期和稳定期细胞活力逐渐减弱) 在整个培养期
间!白刺悬浮细胞的存活率保持在 &)d *,d"图
-#) 与对数生长期细胞相比!在细胞生长延迟期和
稳定期!细胞的存活率下降略快!可能与细胞或因适
应新环境或因细胞数量较多营养物质相对缺少有
关!有待进一步研究)
图 %!唐古特白刺悬浮细胞吸光值随培养时间的变化
,!结论与讨论
本文研究了野生唐古特白刺外植体的消毒,愈
伤组织的诱导和悬浮细胞系的构建过程!并对悬浮
细胞系在培养周期中的生长特征进行了分析) 对外
植体的消毒结果表明!野外采集的外植体消毒效果
远低于温室材料*""+ !这与野外环境菌种复杂!且白
刺茎,叶部位长有细小的绒毛增加消毒难度有关)
消毒时间短!除菌效果差%消毒时间长!对材料有损
&
第 $ 期 倪建伟等$野生唐古特白刺悬浮细胞系的建立及生长特性
图 -!唐古特白刺悬浮细胞存活率随培养时间的变化
伤) 本研究采用 "d的 ]1P3Y消毒!对茎段和叶片
的消毒时间以 $# 027 为宜!成活率分别为 -%+##d
和 -,+%d) 与王尚德*$$+ ,范小峰等*",+对白刺外植
体消毒效果对比可知!不同的消毒剂,浓度和消毒时
间对消毒效果均有影响) 对白刺愈伤组织诱导的研
究发现!"!)(^,]..和 -(L., 种激素对其相对生长
量均有显著的影响"Hm#+#%#!其中!"!)(^ 影响最
明显"值最大#%同时发现茎段较叶片更容易产生
愈伤!且相对生长速度更快!这和王尚德*$$+ ,李代丽
等*$,+的研究一致) 白刺茎段中的维管束远比叶片
中的丰富!而愈伤组织的诱导是从维管束开始启动
的*$$+ ) 王海波等*")+认为!在继代培养过程中!可适
度变换 "!)(^的浓度以调节愈伤组织的状态) ]..
对愈伤组织的诱导效果不及 "!)(^!但它与 -(L.在
一定程度上影响着愈伤组织的形态和质量*"%+ ) 形
成的愈伤组织按其形态可分为结构致密型和结构疏
松型!致密型愈伤组织更容易分化!适宜建立再生体
系%疏松型愈伤组织是构建悬浮细胞体系的最佳
材料*"%+ )
本研究选取疏松型生长速度快的愈伤组织构建
了稳定,快速生长的唐古特白刺细胞悬浮系!在继代
过程中其生长曲线呈&D型!且有明显的延迟期,对
数生长期和稳定期!这和文冠果"=(6&*")$#(%%"#72T"0
12( L67M<+#,西洋参"H(6(Yb?26b?$T"12?%H277+#,红
豆杉等多种植物*"- ["+悬浮细胞的生长曲线基本一
致) 白刺细胞生长周期与初始接种量有关!接种量
大!细胞进入对数期早!可缩短继代周期!本研究中
宜选取 +% 0H母液加入 ,# 0HZD液体培养基继代
培养) 悬浮细胞的生长具有群聚效应!适量的细胞
密度是细胞生长所需的生理环境!接种量过大或过
低都会影响细胞的细胞分散性或生长速度) 白刺悬
浮细胞的活力和分裂指数均呈先增加后减少的趋
势!在延迟期阶段!细胞需要适应新的培养基!并且
细胞进行着 ]^.,N].的复制和有关蛋白质的合
成*"&+ !细胞活力较大!在第 , 天达到最高值!做原生
质体研究时宜在此时取样) 之后白刺悬浮细胞分裂
指数增加!细胞数量快速增加!在第 天细胞分裂指
数达到最高值 %+$d!即细胞分裂比较旺盛时期!认
为对细胞分裂方面的研究宜在培养 E 时取材!这
较桑树"B"#?%(17( H277+# *"*+ ,文冠果*"-+等时间提
前!可能与白刺细胞自身生长特性有关) 在细胞进
入稳定期之初!培养基中的细胞量趋于平衡!此时宜
进行继代培养!白刺接种量在 +% 0H时!宜在第 *
天进行继代培养) 与文冠果*"-+ ,红豆杉*,#+ ,西洋
参*"+ ,桑树*"*+等相比!各生长周期,分裂指数,细胞
活力等均有差异!这除与植物本身增殖快慢有关外!
可能还与其培养基组成,接种量,培养环境等因素
有关)
从试验中可以得出!在激素为 "!)(^ $+% 0M-
H
[$
,]..#+" 0M-H
[$
,-(L.#+) 0M-H
[$的ZD 液
体培养基中按接种量为 +% 0H,培养 * E 的继代培
养!可得到稳定,快速生长的唐古特白刺悬浮细胞
系) 前人在对愈伤组织诱导和细胞培养影响的研究
中!吲哚乙酸"O..#,吲哚丁酸"OL.#,激动素"GJ#
也常作为诱导因子!而各激素间及外源激素与细胞
内源激素的相互影响均会影响细胞的分裂或分化!
在今后的研究中有必要继续探索其他激素对细胞生
长的影响)
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