全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿袁圆远渊猿冤院猿圆园 猿圆缘云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤园猿鄄园猿圆园鄄园远
中国水仙花器官愈伤组织诱导尧分化及组织学观察
张晓晴袁 高摇 健鄢袁 彭镇华鄢
渊国际竹藤中心袁北京摇 员园园员园圆冤
收稿日期院 圆园员圆鄄园猿鄄圆员
基金项目院 国家林业局野怨源愿冶项目院花卉良种扩繁和精准栽培技术引进与创新渊圆园园远鄄源鄄悦园苑冤
作者简介院 张晓晴渊员怨愿员要冤袁博士研究生袁主要研究方向院花卉品种改良援 耘皂葬蚤造院扎澡葬灶早曾蚤葬燥择蚤灶早猿员员圆圆缘怨岳 员圆远援 糟燥皂
鄢 通迅作者院彭镇华袁博士袁教授袁主要研究方向院竹藤品种改良援 高摇 健袁博士袁研究员袁主要研究方向院林木遗传育种援 耘皂葬蚤造院早葬燥躁蚤葬灶岳
蚤糟遭则援 葬糟援 糟灶
摘要院为了建立中国水仙遗传转化体系袁为转基因分子育种提供良好受体袁以中国水仙耶金盏银台爷品种的不同花器
官为实验材料袁以 酝杂为基本培养基袁研究了花药尧花梗尧子房尧花柄愈伤组织诱导情况遥 对愈伤组织诱导效果较好
的花梗和花药培养基中添加不同浓度 远鄄苄基腺嘌呤渊远鄄月粤冤尧硫酸腺嘌呤渊粤凿冤尧萘乙酸渊晕粤粤冤和 圆袁源鄄二氯苯氧乙酸
渊圆袁源鄄阅冤袁筛选出愈伤组织诱导及鳞茎芽再生的最适培养基配方遥 结果表明院花梗愈伤组织诱导及鳞茎芽分化的最
佳培养基为 酝杂 垣员 早窑蕴 原员 晕葬匀圆孕韵源 垣 园郾 园园猿 早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园郾 园园员 早窑蕴 原员 晕粤粤 垣 园郾 圆 早窑蕴 原员 粤凿 垣 猿园 早窑蕴 原员蔗糖袁
花药愈伤组织诱导及鳞茎芽分化的最佳培养基为酝杂 垣园郾 园园圆 早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园郾 园园员 早窑蕴 原员 晕粤粤 垣 猿园 早窑蕴 原员蔗糖曰花
梗愈伤组织诱导到鳞茎芽分化的时间需要 猿园 猿缘 凿袁而花药这一过程为 愿园 怨园 凿遥 对花梗愈伤组织诱导及鳞茎
芽分化过程进行组织学观察表明院本研究中产生的小鳞茎是由愈伤组织再分化得来的袁表明花梗更有利于作为转基
因受体袁从而解决了转基因研究过程的一个瓶颈问题遥
关键词院中国水仙曰愈伤组织曰组织学观察
中图分类号院杂远愿圆郾 圆 文献标识码院粤
悦葬造造怎泽 陨灶凿怎糟贼蚤燥灶袁 阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 匀蚤泽贼燥造燥早蚤糟葬造 韵遭泽藻则增葬贼蚤燥灶 燥枣
晕葬则糟蚤泽泽怎泽 贼葬扎藻贼贼葬 增葬则援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 云造燥则葬造 韵则早葬灶泽
在匀粤晕郧 载蚤葬燥鄄择蚤灶早袁 郧粤韵 允蚤葬灶袁 孕耘晕郧 在澡藻灶鄄澡怎葬
渊陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 悦藻灶贼藻则 枣燥则 月葬皂遭燥燥 葬灶凿 砸葬贼贼葬灶袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园员园圆袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 泽藻造藻糟贼 贼澡藻 澡蚤早澡鄄藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 蚤灶 增蚤贼则燥 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 葬责责则燥葬糟澡藻泽 枣燥则 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则藻糟藻责贼燥则 泽赠泽贼藻皂袁 贼澡藻
枣造燥则葬造 燥则早葬灶泽 燥枣 晕葬则糟蚤泽泽怎泽 贼葬扎藻贼贼葬 增葬则援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 耶允蚤灶扎澡葬灶赠蚤灶贼葬蚤爷 增葬则蚤藻贼赠 憎葬泽 泽藻则增藻凿 葬泽 藻曾责造葬灶贼泽 葬灶凿 糟怎造贼怎则藻凿 蚤灶 贼澡藻 酝杂
遭葬泽蚤糟 皂藻凿蚤怎皂援 栽澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 责造葬灶贼 早则燥憎贼澡 则藻早怎造葬贼燥则泽 燥灶 藻曾责造葬灶贼泽 贼赠责藻袁 泽怎糟澡 葬泽 葬灶贼澡藻则袁 责藻凿怎灶糟造藻袁 燥增葬则赠 葬灶凿 责藻凿蚤鄄
糟造藻 憎藻则藻 泽贼怎凿蚤藻凿援 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 远鄄月粤袁 粤凿袁 晕粤粤袁 圆袁源鄄阅 葬灶凿 贼澡藻蚤则 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶泽 燥灶 糟葬造鄄
造怎泽 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 葬灶凿 泽澡燥燥贼泽 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 枣则燥皂 葬灶贼澡藻则泽 葬灶凿 责藻凿怎灶糟造藻泽 憎藻则藻 贼藻泽贼藻凿 遭赠 蚤灶 增蚤贼则燥 糟怎造贼怎则藻援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿
贼澡葬贼 贼澡藻 泽怎蚤贼葬遭造藻 皂藻凿蚤葬 枣燥则 糟葬造造怎泽 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 葬灶凿 泽澡燥燥贼泽 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 枣则燥皂 责藻凿怎灶糟造藻泽 憎藻则藻 酝杂 垣 猿园 早窑蕴 原员 泽怎糟则燥泽藻
憎蚤贼澡 员 早窑蕴 原员 晕葬匀圆孕韵源 垣 园郾 园园猿 早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣园郾 园园员 早窑蕴 原员 晕粤粤 垣园郾 圆 早窑蕴 原员 粤凿袁 葬灶凿 贼澡葬贼 枣则燥皂 葬灶贼澡藻则泽 憎藻则藻
酝杂 垣猿园 早窑蕴 原员 憎蚤贼澡 园郾 园园圆 早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣园郾 园园员 早窑蕴 原员 晕粤粤援 栽澡藻 责则燥糟藻泽泽 燥枣 糟葬造造怎泽 枣则燥皂 责藻凿怎灶糟造藻泽 葬灶凿 凿蚤枣枣藻则藻灶鄄
贼蚤葬贼蚤燥灶 造葬泽贼藻凿 枣燥则 猿园 猿缘 凿葬赠泽 葬灶凿 贼澡藻 责则燥糟藻泽泽 燥枣 糟葬造造怎泽 枣则燥皂 葬灶贼澡藻则泽 葬灶凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 造葬泽贼藻凿 枣燥则 愿园 怨园 凿葬赠泽援
杂澡燥燥贼泽 憎藻则藻 则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 遭赠 责藻凿怎灶糟造藻泽 糟葬造造怎泽 枣燥则 澡蚤泽贼燥造燥早蚤糟葬造 藻曾葬皂蚤灶葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 责则燥糟藻泽泽 燥枣 糟葬造造怎泽 枣则燥皂 责藻凿怎灶糟造藻泽 葬灶凿
凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院 晕葬则糟蚤泽泽怎泽 贼葬扎藻贼贼葬 增葬则援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽曰 糟葬造造怎泽曰 澡蚤泽贼燥造燥早蚤糟葬造 燥遭泽藻则增葬贼蚤燥灶
第 猿 期 张晓晴等院中国水仙花器官愈伤组织诱导尧分化及组织学观察
中国水仙渊晕葬则糟蚤泽泽怎泽 贼葬扎藻贼贼葬 增葬则援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽冤是我
国的传统十大名花之一袁其花色素雅袁叶片浓绿袁花
姿秀美袁花香馥郁袁具有很高的观赏价值遥 以漳州水
仙最为著名袁是中国传统花卉出口中的佼佼者袁在国
内观赏植物出口创汇中占举足轻重的地位咱员暂 遥 目
前袁虽然我国的水仙种植面积和产量都在迅速上升袁
但是拥有自主知识产权的品种很少袁不能满足花卉
产业对花卉品种新尧奇尧特尧异尧美的要求遥 中国水仙
虽栽植历史悠久袁但少有品种创新袁只有耶金盏银
台爷袁耶玉玲珑爷等少数几个品种咱圆 原 远暂 遥 由于中国水
仙是三倍体植株袁不结实袁传统的杂交育种无法进
行袁因此限制了中国水仙的发展遥 为满足产业发展
需求袁中国水仙育种技术急需新的突破遥 转基因技
术能有效克服传统杂交育种的弊端袁为中国水仙品
种创新提供新的途径遥
一个成熟尧适应性强的转基因系统袁依赖于高
效尧稳定且再生能力强的植株受体再生体系的建立遥
中国水仙转基因受体多集中在带部分鳞茎盘的双鳞
片上咱苑 原 怨暂 遥 该方法再生体系的建立已经比较成熟袁
但其作为转基因受体材料袁存在着一些重要的缺陷袁
如院与土壤直接接触的鳞茎盘灭菌复杂袁不能采用常
规灭菌法袁污染率很高咱苑袁 员园暂 曰转基因效率低咱员员暂 遥 因
此袁筛选出通过愈伤组织诱导并能高效分化的外植
体是提高中国水仙转基因效率的最重要前提之一遥
目前袁国内有一些关于中国水仙不同组织器官愈伤
组织诱导的研究报道袁但问题是愈伤组织继代困难袁
通过愈伤组织诱导小鳞茎再生时间较长袁而且并没
有证据证明小鳞茎的诱导途径遥 本研究旨在通过对
不同花器官进行愈伤组织诱导研究袁筛选出愈伤组
织诱导尧继代容易袁愈伤分化能力强袁再生效率高的
外植体及培养基配方袁并对小鳞茎再生途径进行组
织切片检测袁以建立中国水仙遗传转化体系的技术
方法袁为转基因分子育种提供有效受体材料遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
于 圆园员园 年 员圆 月要圆园员员 年 源 月袁以福建漳州
猿 年生中国水仙耶金盏银台爷商品球为供试材料袁其
花器官发育完全袁均为未经水培的种球遥
员郾 圆摇 外植体灭菌
剥去种球鳞片袁取出带花梗的花苞袁自来水冲洗
园郾 缘 澡遥 无菌条件下用 苑缘豫的酒精灭菌 猿园 泽袁园郾 缘豫
的次氯酸钠溶液灭菌 员缘 员愿 皂蚤灶袁无菌水冲洗 源
缘 次遥 无菌滤纸吸干后袁分别切取花梗和花柄袁剥出
花药和子房袁接种到已准备好的培养基上遥
员郾 猿摇 培养条件筛选
员援 猿援 员摇 不同外植体愈伤组织的诱导 摇 花梗切段长
为 圆 猿 皂皂袁按照生长极性的方向接种于培养基
上曰花柄切段长为 缘 皂皂袁横向平放于培养基上曰将花
药的花丝朝下接种在培养基上袁此时花药壁颜色为
白色到浅黄色曰取出子房切去柱头平放在培养基上遥
愈伤组织诱导培养基为 酝杂 垣 员郾 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣
园郾 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤 垣园郾 缘 皂早窑蕴 原员圆袁源鄄阅 垣 猿园 早窑蕴 原员
蔗糖 垣远 早窑蕴 原员琼脂遥
员援 猿援 圆 摇 不同浓度 远鄄苄基腺嘌呤 渊远鄄月粤冤尧萘乙酸
渊晕粤粤冤和 圆袁源鄄二氯苯氧乙酸渊圆袁源鄄阅冤对花药愈伤组
织诱导及分化的影响摇 取生长时期类似袁花药壁均
为浅黄色的花药接种到不同培养基上遥 诱导培养基
为 酝杂 垣猿园 早窑蕴 原员蔗糖 垣远 早窑蕴 原员琼脂袁分别添加不
同浓度的 远鄄月粤尧圆袁源鄄阅 和 晕粤粤袁共 员愿 种培养基渊表
员冤遥
表 员摇 花药愈伤诱导培养基配方
培养基编号 培养基配方
酝泽鄄员 酝杂 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄圆 酝杂 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄猿 酝杂 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄源 酝杂 垣 圆援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄缘 酝杂 垣 源援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄远 酝杂 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄苑 酝杂 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄愿 酝杂 垣 圆援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄怨 酝杂 垣 源援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 圆袁源鄄阅
酝泽鄄员园 酝杂 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝泽鄄员员 酝杂 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝泽鄄员圆 酝杂 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝泽鄄员猿 酝杂 垣 圆援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝泽鄄员源 酝杂 垣 源援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝泽鄄员缘 酝杂 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝泽鄄员远 酝杂 垣 员援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝泽鄄员苑 酝杂 垣 圆援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝泽鄄员愿 酝杂 垣 源援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 园援 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
员援 猿援 猿 摇 不同浓度 远鄄月粤 尧晕粤粤 和硫酸腺嘌呤渊粤凿冤
对花梗愈伤组织诱导及分化的影响摇 选取由花梗基
部向上到花苞以下的部分为外植体遥 切段长为 圆
猿 皂皂袁按极性方向接种于不同培养基上袁培养基为
酝杂 垣员 早窑蕴 原员晕葬匀圆孕韵源 垣 猿园 早窑蕴 原员蔗糖 垣远 早窑蕴 原员
琼脂袁分别添加不同浓度的 远鄄月粤 尧晕粤粤 和 粤凿袁共 员苑
种培养基渊表 圆冤遥
员圆猿
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
表 圆摇 花梗鳞茎芽诱导培养基配方
培养基
编号 培养基配方
酝鄄员 酝杂 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣园援 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄圆 酝杂 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄猿 酝杂 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣圆援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄源 酝杂 垣圆援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣园援 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄缘 酝杂 垣圆援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄远 酝杂 垣圆援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣圆援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄苑 酝杂 垣猿援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣园援 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄愿 酝杂 垣猿援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄怨 酝杂 垣猿援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣圆援 园 皂早窑蕴 原员晕粤粤
酝鄄员园 酝杂 垣源援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣园援 缘 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄员员 酝杂 垣源援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员晕粤粤
酝鄄员圆 酝杂 垣源援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣圆援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤
酝鄄员猿 酝杂 垣猿援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤 垣圆园园 皂早窑蕴 原员粤凿
酝鄄员源 酝杂 垣猿援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤 垣圆缘园 皂早窑蕴 原员 粤凿
酝鄄员缘 酝杂 垣猿援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤 垣猿园园 皂早窑蕴 原员 粤凿
酝鄄员远 酝杂 垣猿援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤 垣猿缘园 皂早窑蕴 原员 粤凿
酝鄄员苑 酝杂 垣猿援 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员援 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤 垣源园园 皂早窑蕴 原员 粤凿
员援 猿援 源摇 培养条件与愈伤诱导率及鳞茎芽再生率的
统计摇 外植体接种后袁于渊圆缘 依 圆冤益的黑暗条件下
进行愈伤组织诱导袁待愈伤组织分化出明显的芽点
后转到光照强度 员 远园园 员 愿园园 造曾 圆源 澡光照下培养遥
愈伤组织诱导率的计算方法为院能够诱导出致密且
能继续增殖的愈伤组织数与接种的总外植体数的比
值遥 鳞茎芽再生率为院能够诱导鳞茎芽的愈伤组织
与接种的总外植体数的比值遥
员援 源摇 组织学观察
选取培养不同时期的花梗外植体袁进行组织切
片观察遥 样品用 云粤粤固定液固定 圆源 澡以上袁苑园豫乙
醇冲洗袁经过一系列脱水尧透明尧渗蜡尧包埋后袁制作
成石蜡切片遥 用番红鄄固绿法染色袁中性树胶封固袁
在光学显微镜下观察拍照遥
员援 缘摇 数据处理
每组 实 验 重 复 猿 次遥 所 有 实 验 数 据 用
杂孕杂杂员猿郾 园 软件进行统计分析遥 耘载悦耘蕴圆园园猿 作图遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 不同外植体愈伤组织的诱导
对花药尧花梗尧子房尧花柄进行愈伤组织诱导实
验袁员缘 凿 观察统计愈伤组织分化与形态特征遥 结果
表明院花药和花梗愈伤诱导均有肉眼可见的愈伤组
织产生遥 其花药愈伤组织颜色为米黄色尧致密袁无水
渍状遥 花梗愈伤组织为白色尧致密袁并在外围处产生
瘤状突起遥 花柄愈伤组织为水渍状袁无分化能力遥
子房膨大袁没有明显的愈伤组织出现遥
圆援 圆摇 花药愈伤组织诱导与分化培养基的筛选
花药在添加 圆袁源鄄阅的培养基上接种袁员园 凿后在
花丝连接处可见白色愈伤组织 渊图 员鄄葬冤遥 添加
晕粤粤培养基则晚 员 周左右袁需培养 员远 员愿 凿 可见
愈伤组织遥 花药接种 圆园 凿 愈伤组织的分化与诱导
率结果渊图 圆冤表明院添加 晕粤粤 的培养基愈伤组织
诱导率是 酝泽鄄员猿 最高袁为 缘远郾 苑怨豫 袁而添加 圆袁源鄄阅
的培 养 基 愈 伤 组 织 诱 导 率 是 酝泽鄄缘 最 高袁为
源愿郾 苑远豫 袁明显低于添加 晕粤粤 的培养基遥 因此袁得
到最优培养基配方为院酝杂 垣 圆郾 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣
员郾 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤遥 将诱导的愈伤组织在原培养
基上继续做愈伤分化培养袁在培养 怨园 凿 时袁其表现
为 远鄄月粤浓度低于 园郾 缘 皂早窑蕴 原员时袁培养基中诱导
分化出根状组织多渊图 员鄄凿冤遥 随着 远鄄月粤 浓度的增
加袁其根状组织减少袁开始芽的分化遥 当 远鄄月粤 浓
度继续升高到 员郾 园 皂早窑蕴 原员时袁分化出来的组织表
现为类似叶或鳞片等不规则形态袁但不形成球状鳞
茎芽渊图 员鄄藻冤遥 远鄄月粤 浓度高于 圆郾 园 皂早窑蕴 原员的条
件下袁降低 晕粤粤 浓度时分化不规则组织的现象更
加明显袁说明愈伤组织的分化可能与 远鄄月粤 和 晕粤粤
的比值存在关系遥 因此袁确定最佳芽诱导培养基仍
为 酝杂 垣 圆郾 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣 员郾 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤袁该
培养基中鳞茎芽再生率为 圆园郾 远豫 渊表 猿冤遥 花药的
愈伤组织诱导及再分化出鳞茎芽的时间大约需要
愿园 怨园 凿遥 渊图 员鄄葬尧遭尧糟冤
葬 培养 员园 凿的花药的愈伤组织曰遭 花药培养 员缘 凿愈伤组织的体积曰
糟 花药分化的小鳞茎芽渊怨园 凿冤曰凿 花药诱导出的根状组织曰藻 花药诱
导的不规则鳞片状组织
图 员摇 花药愈伤诱导及鳞茎再生
圆圆猿
第 猿 期 张晓晴等院中国水仙花器官愈伤组织诱导尧分化及组织学观察
图 圆摇 不同培养基上花药愈伤组织诱导率的差异
表 猿摇 不同 远鄄月粤与 晕粤粤浓度对花药愈伤组织诱导
鳞茎再生率的影响
培养基编号 浓度 辕 渊皂早窑蕴 原员 冤远鄄月粤 晕粤粤 鳞茎芽再生率 辕 豫
酝泽鄄员园 园援 园 员援 园 园援 远圆葬
酝泽鄄员员 园援 缘 员援 园 猿援 员园遭
酝泽鄄员圆 员援 园 员援 园 远援 圆园糟
酝泽鄄员猿 圆援 园 员援 园 圆园援 远园藻
酝泽鄄员源 源援 园 员援 园 园援 园园葬
酝泽鄄员缘 园援 缘 园援 缘 员园援 员园凿
酝泽鄄员远 员援 园 园援 缘 园援 园园葬
酝泽鄄员苑 圆援 园 园援 缘 园援 远猿葬
酝泽鄄员愿 源援 园 园援 缘 园援 缘愿葬
摇 摇 注院同列中不同字母表示处理间差异显著渊孕 约 园郾 园缘冤遥
圆援 猿摇 花梗愈伤组织诱导及分化培养基筛选情况
花梗外植体培养 圆园 凿袁基部与培养基接触部位
便形成黄色愈伤组织袁且外围出现明显的白色瘤状
突起 渊图 猿鄄葬冤遥 表 源 表明院在添加 远鄄月粤 和 晕粤粤 的
不同培养基中袁愈伤组织诱导率最高为 员远郾 园缘豫 袁猿缘
凿后统计鳞茎再生率为 员猿郾 缘愿豫 袁但培养过程中发现
远鄄月粤浓度稍高时有利于花梗愈伤组织的形成曰因此
在 猿郾 园 皂早窑蕴 原员 远鄄月粤 垣员郾 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤的培养基
的基础上加入 粤凿和 员 早窑蕴 原员 晕葬匀圆孕韵源遥 表 缘 表明院
加入 粤凿 后诱导率达 源猿郾 猿猿豫 袁诱导率提高了近 猿
倍遥 各个外植体在原激素浓度培养基中继续培养至
猿缘 凿袁结果表明院粤凿 浓度过高不利于鳞茎芽的分化袁
粤凿浓度高于 圆缘园 皂早窑蕴 原员时会导致外植体褐变数增
加遥 因此袁筛选出花梗最佳愈伤组织诱导及分化的
培养基为 酝杂 垣员 早窑蕴 原员 晕葬匀圆孕韵源 垣 猿郾 园 皂早窑蕴 原员 远鄄
月粤 垣员郾 园 皂早窑蕴 原员 晕粤粤 垣 圆园园 皂早窑蕴 原员 粤凿遥 花梗愈
伤组织诱导到鳞茎芽分化的过程大约需要 猿园 猿缘
凿袁比花药缩短近 远园 凿 渊图 猿鄄葬尧遭尧糟冤遥
表 源摇 不同浓度 远鄄月粤尧 晕粤粤对花梗愈伤组织诱导率及
鳞茎再生率的影响
培养基
编号
浓度 辕 渊皂早窑蕴 原员 冤
远鄄月粤 晕粤粤
愈伤组织诱导率
辕 豫
鳞茎再生率
辕 豫
酝鄄员 员援 园 园援 缘 缘援 缘远 葬遭 员援 员员 葬遭
酝鄄圆 员援 园 员援 园 园援 园园 葬 园援 园园 葬
酝鄄猿 员援 园 圆援 园 园援 园园 葬 园援 园园 葬
酝鄄源 圆援 园 园援 缘 园援 园园 葬 园援 园园 葬
酝鄄缘 圆援 园 员援 园 怨援 缘圆 遭糟 缘援 怨缘 遭糟
酝鄄远 圆援 园 圆援 园 员远援 园缘 凿 员猿援 缘愿 凿
酝鄄苑 猿援 园 园援 缘 猿援 猿猿 葬 员援 员员 葬遭
酝鄄愿 猿援 园 员援 园 员圆援 缘园 糟凿 怨援 苑圆 糟凿
酝鄄怨 猿援 园 圆援 园 缘援 缘远 葬遭 猿援 猿猿 葬遭
酝鄄员园 源援 园 园援 缘 源援 远园 葬遭 圆援 猿园 葬遭
酝鄄员员 源援 园 员援 园 源援 苑远 葬遭 园援 园园 葬
酝鄄员圆 源援 园 圆援 园 员员援 缘源 糟凿 源援 猿缘 葬遭
摇 摇 注院同列中不同字母表示处理间差异显著渊孕 约 园郾 园缘冤曰鳞茎再生
率为 猿缘 凿后的统计结果遥
葬 培养 员缘 凿的花梗形成愈伤组织渊白色瘤状凸起冤曰遭 培养 猿缘 凿的花梗诱导出的小鳞茎芽曰糟 再生的小鳞茎
图 猿摇 花梗愈伤诱导及鳞茎再生
猿圆猿
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
表 缘摇 不同浓度硫酸腺嘌呤渊粤凿冤对花梗愈伤组织
诱导率和鳞茎再生率的影响
培养基
编号 粤凿浓度 辕 渊皂早窑蕴 原员 冤 愈伤组织诱导率 辕 豫 鳞茎再生率 辕 豫
酝鄄员猿 圆园园 源猿援 猿猿遭 源猿援 猿猿糟
酝鄄员源 圆缘园 圆圆援 怨圆葬 圆圆援 怨圆遭
酝鄄员缘 猿园园 圆源援 圆源葬 怨援 园怨葬遭
酝鄄员远 猿缘园 源员援 远苑遭 园援 园园葬
酝鄄员苑 源园园 员苑援 缘源葬 园援 园园葬
摇 摇 注院同列中不同字母表示处理间差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥
圆援 源摇 花梗愈伤组织诱导过程中组织细胞学的动态
变化特征
花梗诱导愈伤组织过程中袁对培养不同时期的
组织结构切片进行观察袁以了解组织与细胞的形态
特征遥 培养 员园 凿袁外植体与培养基接触部位细胞开
始迅速分裂袁形成了愈伤组织渊图 源鄄葬尧遭尧糟冤曰培养 圆园
凿袁靠近花梗外表皮部位的愈伤组织细胞继续分裂袁
形成可视突起渊图 源鄄凿冤曰培养 猿园 凿袁可见球状鳞茎芽
再生体渊图 源鄄藻冤袁形成的鳞茎芽基部细胞体积小袁细
胞核大而浓袁说明仍在继续分裂以形成完整的鳞茎
组织渊图 源鄄枣冤遥 没有与培养基接触的部位细胞体积
变大袁细胞核消失袁没有继续发育的迹象袁这可能是
它们为愈伤组织诱导及愈伤组织分化提供营养后死
亡渊图 源鄄凿冤遥
葬 培养 员园 凿的花梗诱导产生愈伤组织曰遭 处于分化状态的愈伤组织细胞曰糟 形成瘤状凸起曰
凿 培养 圆园 凿形成小鳞芽曰藻 培养 猿园 凿已形成鳞茎球曰枣 小鳞茎基部旺盛分裂的细胞渊圆圈内冤
渊放大倍数院葬尧凿尧藻袁 伊 源曰遭尧糟尧枣袁 伊 员园冤
图 源摇 花梗愈伤组织诱导及分化
猿摇 结论与讨论
中国水仙的离体培养袁多是直接从外植体诱导
不定芽咱猿袁但作为转基因的受体袁最适宜的途径还是
愈伤组织诱导遥 本研究结果显示院花药和花梗均可
以诱导愈伤组织并进行鳞茎芽的分化袁且每块愈伤
组织分化芽数量为 猿 缘 个遥 在理论上这 圆 种外植
体均可用作转基因的受体袁但花药愈伤组织诱导到
鳞茎芽再生需要的时间较长袁其间鳞茎芽的分化必
须经过相当长的时间进行愈伤增殖袁即需要一定的
营养积累咱员圆暂 遥 只有当愈伤组织生长到直径约 员郾 缘
圆郾 园 糟皂时才有鳞茎芽的分化曰并且花药愈伤组织
继代困难袁造成分化率较低曰而花梗却不需要愈伤增
殖的过程袁将花梗切段按极性方向接种在适宜的培
养基上袁分化率可达 源猿郾 猿猿豫 袁再生率完全达到转基
因受体的要求遥 其愈伤组织诱导到鳞茎球的分化一
共需要 猿缘 凿 左右袁基本解决了愈伤继代的问题袁并
且缩短了小鳞茎再生的时间袁提高了小鳞茎的再生
效率遥 这与前人关于花梗的研究报道相比是一个重
大突破咱员猿 原 员源暂 遥
本研究中花梗具有很强的愈伤组织诱导及再生
能力袁是因为培养基中添加了 粤凿遥 秦凡等咱员缘暂 尧崔广
荣等咱员远暂对蝴蝶兰的快繁研究中添加了 粤凿 后效果很
好袁发现 远鄄月粤在促进蝴蝶兰体细胞胚胎发生过程中
起着决定作用袁且 远鄄月粤在较高浓度下与 粤凿尧晕粤粤相
互配合使用时可以获得高效的胚状体诱导体系遥 另
外袁崔广荣等咱员苑暂发现袁远鄄月粤 和 粤凿 的配合使用对文
心兰原球茎的诱导尧增殖和对丛芽的诱导尧增殖都有
较强的野加性效应冶遥 本研究采用了相似配比袁得到
了相似的结论袁从而可以证明 远鄄月粤 与 粤凿 的合理组
源圆猿
第 猿 期 张晓晴等院中国水仙花器官愈伤组织诱导尧分化及组织学观察
合对中国水仙花梗愈伤组织诱导尧鳞茎芽的分化也
有很好的促进及增殖效应遥
花梗组织中蕴含更多外植体发育所需要的营养
物质袁不需要靠愈伤组织增值来提供遥 这与花药再
生情况相比十分优越曰并且花梗愈伤组织分化率很
高袁在适合的培养基中愈伤组织分化率几乎达到
员园园豫 遥 这与前人对洋葱渊粤造造蚤怎皂 藻责葬 蕴援 冤 咱员愿暂和孤挺
花渊粤皂葬则赠造造蚤泽 遭藻造造葬凿燥灶葬渊粤蚤贼援 冤 匀藻则遭冤 咱员怨暂的研究结果
类似遥 因为植物在开花前小花都是由花梗部位发育
来的袁所以花梗具有很强的分化能力袁且花梗取材容
易袁材料量较本研究中的其他花器官大遥 本研究中袁
花梗愈伤组织诱导分化的组织学分析表明了鳞茎芽
的发育过程袁即从愈伤组织诱导到愈伤组织分化为
鳞茎芽是一个连续的过程袁证实了小鳞茎的真正来
源袁确定了花梗作为遗传转化研究受体的重要意义曰
而且一块愈伤组织可诱导出约 缘 个鳞茎芽袁诱导效
率很高遥 本文的研究结果表明院花梗更有利于作为
转基因受体袁从而解决了中国水仙转基因研究过程
中的一个瓶颈问题遥
参考文献院
咱员暂 张清国袁黄敏玲袁叶秀仙援 中国水仙花药培养及植株再生体系建
立咱允暂 援 分子植物育种袁 圆园员园袁 愿渊圆冤院猿怨怨 原 源园源
咱圆暂 陈林姣袁 缪摇 颖袁 陈德海袁 等援中国水仙种质资源的遗传多样性
分析咱允暂 援 厦门大学学报院自然科学版袁 圆园园圆袁 源员渊远冤院愿员园 原 愿员源
咱猿暂 栾爱业袁 徐海峰袁 曾黎辉援 中国水仙生物技术研究进展咱 允暂 援 生
物技术袁 圆园园远袁 员远渊远冤院苑苑 原 愿园
咱源暂 黄双龙袁 赖钟雄援 水仙花生物技术研究进展咱 允暂 援 亚热带植物
学袁 圆园园苑袁 猿远渊猿冤院苑源 原 苑怨
咱缘暂 王摇 瑞袁 张亚楠袁 王雅英袁 等援中国水仙六倍体的诱导和染色体
数目的变异咱允暂 援 分子细胞生物学报袁 圆园园苑袁 源园渊猿冤院圆远猿 原 圆苑园
咱远暂 陈段芬袁 高摇 健袁 彭镇华援水仙属植物研究进展咱允暂 援 林业科学袁
圆园园愿袁 源源渊猿冤院员源园 原 员源远
咱苑暂 庄晓英援 中国水仙遗传转化及离体诱变的研究咱阅暂援杭州院浙江
大学袁圆园园缘
咱愿暂 蔡文燕援 根癌农杆菌介导人乳铁蛋白基因转化中国水仙的初步
研究咱阅暂援福州院 福建师范大学袁圆园园缘
咱怨暂 邹清成袁 庄晓英袁 卢摇 钢袁 等援反义 孕杂再 基因植物表达载体的构
建及其对中国水仙的转化咱 允暂 援 浙江林业科技袁 圆园园远袁 圆远渊猿冤院
圆缘 原 猿园
咱员园暂 谢嘉华袁 袁建军援中国水仙渊晕葬则糟蚤泽泽怎泽 贼葬扎藻贼贼葬 增葬则援 悦澡蚤灶藻灶泽蚤泽冤的组
织培养咱允暂 援 生物学杂志袁 圆园园圆袁 员怨渊猿冤院猿园 原 猿远
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咱员猿暂 洪维廉袁沈明山袁郭摇 洁袁 等援中国水仙花梗组织培养及脱分化
的电镜观察咱允暂 援 厦门大学学报院自然科学版袁 员怨怨猿袁 猿圆渊增刊
员冤院 员员苑 原 员圆圆
咱员源暂 栾爱业援 中国水仙不同花器官离体培养和鳞茎盘 耘酝杂 离体诱
变的研究咱阅暂援福州院福建农林大学袁圆园园愿
咱员缘暂 秦摇 凡袁 周吉源援 不同生长调节剂对蝴蝶兰快速繁殖的影响
咱允暂 援 武汉植物学研究袁 圆园园猿袁 圆员 渊缘冤院源缘圆 原 源缘远
咱员远暂 崔广荣袁 侯喜林袁 张子学袁 等援蝴蝶兰叶片离体培养胚状体的
发生及组织学观察咱允暂 援 园艺学报袁 圆园园苑袁 猿源 渊圆冤院 源猿员 原 源猿远
咱员苑暂 崔广荣袁 刘士勋袁 何玉华袁 等援 文心兰试管苗丛生芽高效增殖
体系的建立咱允暂 援 西北植物学报袁 圆园园缘袁 圆缘 渊猿冤院 缘远圆 原 缘远苑
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