全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿袁圆远渊缘冤院缘远圆 缘苑园云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤园缘鄄园缘远圆鄄园怨
杨树类锌指基因 在云蕴的功能分析
赵学彩袁 郑唐春袁 臧丽娜袁 曲冠证鄢
渊东北林业大学 林木遗传育种国家重点实验室袁黑龙江 哈尔滨摇 员缘园园源园冤
收稿日期院 圆园员圆鄄员园鄄员园
基金项目院 国家自然科学基金项目渊猿员园苑园缘怨缘冤资助遥
作者简介院 赵学彩渊员怨愿苑要冤袁女袁山东临沂人袁在读硕士研究生袁主要从事林木遗传育种研究援
鄢责任作者院 主要从事林木遗传育种研究袁副教授袁耘鄄皂葬蚤造院择怎早怎葬灶扎澡藻灶早岳 赠葬澡燥燥援 糟燥皂援
摘要院以毛果杨叶片 糟阅晕粤为模板袁采用 孕悦砸技术分离出杨树 在云蕴基因袁序列分析结果表明该基因序列开放读码框
猿员缘 遭责袁共编码 员园源 个氨基酸袁推导的蛋白质分子量为 员员援 圆园圆 噪阅葬袁理论等电点 怨援 愿猿袁命名为 孕贼则在云蕴遥 对 在云蕴基因进
行实时荧光定量 孕悦砸表达分析袁结果表明院甘露醇尧晕葬悦造尧匀圆韵圆尧粤月粤尧低温胁迫都能诱导 孕贼则在云蕴 基因的表达袁且
孕贼则在云蕴表达量在 粤月粤处理 猿 澡时达到最高袁然后随处理时间延长而逐渐降低曰低温渊源益冤胁迫在 远 澡后能显著诱导
孕贼则在云蕴基因表达袁并随着低温处理能一直保持较高水平的表达遥 根据毛果杨基因组信息设计引物袁获得了 孕贼则在云蕴
基因上游 员 园园园 遭责的启动子序列袁序列分析结果表明该启动子包含有多个与胁迫相关的元件袁如抗冻尧缺水尧抗寒尧
脱落酸响应元件 粤月砸耘尧酝再月 和 宰砸运再遥 郧哉杂活性检测发现袁该启动子在转基因拟南芥整株中都有表达袁但在根部
和成熟叶片中表达较强袁其他位置表达微弱遥
关键词院杨树曰孕贼则在云蕴曰匝砸栽鄄孕悦砸曰启动子曰 胁迫
中图分类号院匝苑愿远摇 杂苑员愿郾 源苑 文献标识码院粤
云怎灶糟贼蚤燥灶葬造 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 在蚤灶糟鄄枣蚤灶早藻则鄄造蚤噪藻 郧藻灶藻
枣则燥皂 孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬
在匀粤韵 载怎藻鄄糟葬蚤袁 在匀耘晕郧 栽葬灶早鄄糟澡怎灶袁 在粤晕郧 蕴蚤鄄灶葬袁 匝哉 郧怎葬灶鄄扎澡藻灶早
渊杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 栽则藻藻 郧藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 月则藻藻凿蚤灶早袁 晕燥则贼澡藻葬泽贼 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬则遭蚤灶摇 员缘园园源园袁 匀藻蚤造燥灶早躁蚤葬灶早袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 贼澡藻 责则藻泽藻灶贼 泽贼怎凿赠袁 葬 扎蚤灶糟鄄枣蚤灶早藻则鄄造蚤噪藻 糟阅晕粤 渊在云蕴冤 憎葬泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 糟阅晕粤 燥枣 孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬
造藻葬增藻泽袁 灶葬皂藻凿 孕贼则在云蕴援 栽澡藻 燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 渊韵砸云冤 燥枣 贼澡藻 早藻灶藻 蚤泽 猿员缘 遭责 蚤灶 造藻灶早贼澡 葬灶凿 藻灶糟燥凿藻泽 葬 责则藻凿蚤糟葬贼藻凿
责燥造赠责藻责贼蚤凿藻 燥枣 员园源 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽 憎蚤贼澡 葬 皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼 燥枣 葬遭燥怎贼 员员援 圆园圆 噪阅葬袁 葬灶凿 贼澡藻 贼澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 蚤泽燥藻造藻糟贼则蚤糟 责燥蚤灶贼 燥枣
憎澡蚤糟澡 蚤泽 怨援 愿猿援 栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 孕贼则在云蕴 蚤灶 孕援 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 葬遭蚤燥贼蚤糟 泽贼则藻泽泽 憎葬泽 泽贼怎凿蚤藻凿 遭赠 匝砸栽鄄孕悦砸袁
贼澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 孕贼则在云蕴 憎葬泽 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 燥枣 皂葬灶灶蚤贼燥造袁 晕葬悦造袁 匀圆韵圆袁 粤月粤 葬灶凿 糟燥造凿 渊源益冤援栽澡藻 孕贼则在云蕴 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造 憎葬泽 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 猿 澡燥怎则泽 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼藻凿 遭赠 粤月粤 葬灶凿 贼澡藻灶 凿藻糟则藻葬泽藻凿援 栽澡藻 孕贼则在云蕴 憎葬泽 则葬责鄄
蚤凿造赠 葬灶凿 澡蚤早澡造赠 蚤灶凿怎糟藻凿 葬贼 贼澡藻 远贼澡 澡燥怎则 憎澡藻灶 藻曾责燥泽藻凿 贼燥 造燥憎 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥枣 源益 葬灶凿 噪藻责贼 澡蚤早澡 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造 憎蚤贼澡
贼澡藻 糟燥灶贼蚤灶怎蚤灶早 贼则藻葬贼皂藻灶贼援 粤 员园园园 遭责 泽藻择怎藻灶糟藻 怎责泽贼则藻葬皂 燥枣 孕贼则在云蕴 早藻灶藻 憎葬泽 糟造燥灶藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 燥枣 孕援
贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 遭赠 孕悦砸 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 责燥责造葬则 早藻灶燥皂藻 泽藻择怎藻灶糟藻援 杂藻择怎藻灶糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 责则燥皂燥贼藻则 燥枣 贼澡藻 孕贼则在鄄
云蕴 早藻灶藻 糟燥灶贼葬蚤灶藻凿 泽贼则藻泽泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿 糟蚤泽鄄葬糟贼蚤灶早 藻造藻皂藻灶贼泽 渊蚤灶糟造怎凿蚤灶早 糟燥造凿袁 凿藻澡赠凿则葬贼蚤燥灶袁 枣则燥扎藻灶 葬灶凿 粤月粤 则藻泽责燥灶泽蚤增藻 藻造藻鄄
皂藻灶贼泽 粤月砸耘袁 酝再月 葬灶凿 宰砸运再冤援 栽澡藻 郧哉杂 葬糟贼蚤增蚤贼赠 憎葬泽 葬造皂燥泽贼 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 憎澡燥造藻 责造葬灶贼 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽袁
泽怎早早藻泽贼蚤灶早 贼澡葬贼 贼澡蚤泽 责则燥皂燥贼藻则 糟燥怎造凿 糟燥灶贼则燥造 贼澡藻 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 憎澡燥造藻 责造葬灶贼援 酝燥则藻燥增藻则袁 泽贼则燥灶早 葬糟贼蚤增蚤贼赠 憎葬泽 凿藻鄄
贼藻糟贼藻凿 蚤灶 则燥燥贼泽 葬灶凿 皂葬贼怎则藻 造藻葬增藻泽袁 葬灶凿 燥灶造赠 憎藻葬噪 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 糟燥怎造凿 遭藻 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 燥贼澡藻则 燥则早葬灶泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院 责燥责造葬则曰 孕贼则在云蕴曰 匝砸栽鄄孕悦砸曰 责则燥皂燥贼藻则曰 泽贼则藻泽泽
第 缘 期 赵学彩等院杨树类锌指基因 在云蕴的功能分析
目前发现的锌指蛋白类型主要有 悦圆匀圆袁
悦圆匀悦袁悦圆悦圆袁悦圆匀悦悦圆悦圆袁悦猿匀悦袁悦圆悦圆悦圆悦圆袁其中
悦圆匀圆 型是真核生物基因组中最大量的锌指蛋
白咱员 原 圆暂 遥 研究表明袁大量植物锌指蛋白参与植物的
冷冻尧干旱尧渗透尧强光等非生物胁迫遥 例如在辣
椒渊悦葬责泽蚤糟怎皂 葬灶灶怎怎皂 蕴援 冤中克隆到一个对氧化物尧
甲基紫精尧过氧化氢和脱落酸等产生胁迫应答反应
的新基因渊悦葬粤遭泽蚤员冤袁该基因可能在植物创伤和非
生物胁迫产生的多基因应答中发挥重要的作
用咱猿暂 曰研究人员还从菊花渊阅藻灶凿则葬灶贼澡藻皂葬 早则葬灶凿蚤枣造燥鄄
则怎皂 渊砸葬皂葬贼援 冤 运蚤贼葬皂怎则葬冤中分离到一个 悦圆匀圆 锌指
蛋白基因 渊阅早在云孕冤袁该基因在种子时受 晕葬悦造尧干
旱尧冷冻处理和微弱的 粤月粤 诱导袁且 阅早在云孕 的过
表达能增强转基因烟草的耐盐性咱源暂 曰杂葬噪葬皂燥贼燥 等
将拟南芥渊粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬渊蕴援 冤 匀藻赠灶澡援 冤 锌指
基因 粤在云员尧粤在云圆尧粤在云猿 和 杂栽在 与绿色荧光基因形
成融合基因袁进行定位分析袁结果显示这些基因都
定位于细胞核袁同时 晕燥则贼澡藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早 显示这些基
因在干旱尧高盐尧冷冻和外源 粤月粤 的诱导下表达量
都有所增高咱缘暂 遥 类锌指基因渊在云蕴冤在柽柳渊栽葬皂葬则鄄
蚤曾 澡蚤泽责蚤凿葬 宰蚤造造凿援 冤尧烟草渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂 蕴援 冤中
的同源基因已经被克隆出来袁亚细胞定位于细胞
壁袁过表达植株对 晕葬悦造尧甘露醇等非生物胁迫具有
抗性咱远 原 愿暂 遥
杨树渊孕燥责怎造怎泽 泽责责援 冤是世界上分布最广尧适应性
较强的树种袁同时也是非常重要的用材树种袁 具有
无性繁殖容易尧生长速度快尧生产周期短等优点袁发
展杨树人工林是解决木材短缺的重要途径之一咱怨暂 遥
毛果杨渊孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 栽燥则则援 驭 郧则葬赠冤是从美国
引进的树种袁属杨属青杨派袁它的基因组序列已于
圆园园远 年测出并公布袁被作为木本转基因植物中的模
式植物袁是目前林木树种遗传转化研究中的典型代
表种咱员园暂 遥 因此袁逆境胁迫相关功能基因的开发对杨
树基因工程研究与应用具有重要意义遥 目前对杨树
在云蕴基因的克隆尚无报道袁本研究从杨树叶片总
砸晕粤 中分离出 在云蕴基因袁研究了该基因在不同非生
物胁迫下的表达特性袁并进行了生物信息学分析袁旨
在为逆境胁迫下的应答机制尧优良基因挖掘及分子
育种提供基础信息遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 实验材料
本实验用材料为毛果杨 渊 孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬
栽燥则则援 驭 郧则葬赠 冤袁由中国科学院上海生命科学研究院
李来庚研究员赠予遥 拟南芥为 悦燥造怎皂遭蚤葬鄄园 型曰质粒
提取尧胶回收试剂盒购自 韵酝耘郧粤 公司渊美国冤曰孕悦砸
相关试剂尧阅晕粤 皂葬则噪藻则尧责酝阅员愿鄄栽 载体尧限制性内切
酶尧栽源 阅晕粤 造蚤早葬泽藻尧购自 栽葬运葬砸葬公司渊日本冤曰其他实
验试剂为进口或国产分析纯遥
员援 圆摇 杨树 在云蕴基因的克隆及序列分析
根据 晕悦月陨网站上公布的毛果杨 孕贼则在云蕴基因的
皂砸晕粤渊耘云员源苑远缘源援 员冤序列袁设计引物渊见表 员冤袁以毛
果杨叶片 糟阅晕粤为模版袁克隆 孕贼则在云蕴 基因遥 孕悦砸 反
应参数为院预变性 怨源益 源 皂蚤灶曰变性 怨源益 猿园 泽袁退火
缘愿益 猿园 泽袁延伸 苑圆益 猿园 泽袁猿缘 个循环曰苑圆益再延伸 苑
皂蚤灶 后中止反应遥 将 孕悦砸 产物胶回收后连接
责酝阅员愿鄄栽载体袁送北京华大六合公司测序遥
表 员摇 孕悦砸反应引物汇总
引物名称 引物碱基序列 引物用途
在云蕴鄄云 粤栽郧粤悦粤郧郧郧粤粤郧郧悦栽粤粤郧悦悦 在云蕴基因克隆
在云蕴鄄砸 栽悦粤悦栽栽悦栽栽郧栽郧郧悦栽栽悦悦栽栽栽粤粤悦
在云蕴鄄砸栽鄄云 悦粤粤粤郧郧粤郧粤栽悦郧悦栽郧悦粤粤粤粤郧 荧光定量检测 在云蕴表达水平
在云蕴鄄砸栽鄄砸 粤粤郧郧郧粤郧栽栽栽栽郧郧郧栽郧栽悦郧
粤糟贼蚤灶鄄云 粤粤栽粤悦悦悦悦粤栽栽郧粤郧悦粤悦郧郧 定量内参
粤糟贼蚤灶鄄砸 粤悦栽悦粤悦粤悦悦粤栽悦粤悦悦粤郧粤粤栽悦
在云蕴鄄孕鄄云 粤栽悦郧粤粤栽栽悦悦粤粤郧郧粤栽郧粤粤粤栽栽郧粤粤粤粤郧粤粤粤栽 在云蕴启动子克隆
在云蕴鄄孕鄄砸 粤栽悦悦悦粤栽郧郧粤粤栽栽郧悦栽栽悦郧悦栽栽栽郧粤栽栽栽粤栽栽郧郧
渊下划线为 耘糟燥砸陨尧晕糟燥陨
限制性内切酶位点冤
孕员 悦悦粤粤栽粤粤粤栽悦粤粤粤郧悦郧粤粤郧悦粤粤栽栽 转基因拟南芥检测
孕圆 悦郧粤粤粤栽粤栽栽悦悦悦郧栽郧悦粤悦栽栽
用 晕悦月陨 的 韵砸云 查找程序 渊 澡贼贼责 辕 辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援
灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕 早燥则枣 辕 早燥则枣援 澡贼皂蕴冤 寻找其开放读码框遥
利用 耘曾责葬泽赠 渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 贼燥燥造泽冤 网站计
算蛋白质的分子量及等电点遥 用 月造葬泽贼 渊 澡贼贼责院 辕 辕
憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕 月蕴粤杂栽 辕 冤进行同源性搜索袁
选取与毛果杨 孕贼则在云蕴基因相近的 员源 个物种的氨基
酸序列袁用 悦造怎泽贼葬造载渊员援 愿猿冤多序列比较程序渊阅燥糟燥皂鄄
责造藻贼藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼冤进行多序列比较遥 用 酝耘郧粤 增藻则鄄
泽蚤燥灶源咱员员暂进行系统发育树分析遥
员援 猿 摇 杨树 孕贼则在云蕴 基因在不同胁迫下的表达水平
检测
毛果杨组培苗生根后袁转入土壤中生长 源缘 凿
后袁分别进行如下处理院猿园园 皂皂燥造窑蕴 原员甘露醇袁员缘园
皂皂燥造窑蕴 原员 晕葬悦造袁员园 皂皂燥造窑蕴 原员 匀圆韵圆袁员园园 滋皂燥造窑
蕴 原员 粤月粤溶液进行浇灌处理及低温渊源益冤处理袁分别
猿远缘
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
处理 园尧员尧猿尧远尧员圆尧圆源 澡 后袁取适量叶片用液氮冷冻
处理并存放在 原 愿园益遥 用 耘葬泽赠孕怎则藻 孕造葬灶贼 砸晕粤 运蚤贼
试剂盒提取植株的总 砸晕粤袁检测纯度和浓度后袁以
园援 缘 滋早 总 砸晕粤 为起始材料袁采用 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼 栽酝
砸栽 则藻葬早藻灶贼 运蚤贼试剂盒进行 糟阅晕粤合成遥 将合成的第
一链 糟阅晕粤 加去离子水稀释 员园 倍袁用于定量 砸栽鄄
孕悦砸 反应模板遥 反应体系为院 员园 滋蕴 圆 伊 杂再月砸
责则藻皂蚤曾 耘曾 栽葬择袁引物 在云蕴鄄砸栽鄄云渊员园 滋皂燥造窑蕴 原员冤尧在云蕴鄄
砸栽鄄砸渊员园 滋皂燥造窑蕴 原员 冤各 员 滋蕴袁圆 滋蕴 稀释的样品的
模板袁加去离子水补足 圆园 滋蕴遥 孕悦砸反应在 韵孕栽陨韵晕
域荧光定量 孕悦砸 仪上完成遥 反应条件为院怨源益预变
性 猿园 泽曰怨源益变性 员缘 泽曰缘苑益退火 猿园 泽曰苑圆益延伸 猿园
泽曰愿园益读板 员 泽袁源缘 次循环遥 用 粤糟贼蚤灶 基因 渊 载酝 赃
园园圆圆怨愿远苑源冤作为内参袁内参引物院粤糟贼蚤灶 原 云 辕 粤糟贼蚤灶 原 砸
渊表 员 冤遥 用 圆 原吟吟悦贼 方法进行基因的相对定量
分析咱 员圆 暂 遥
员援 源摇 孕贼则在云蕴基因启动子的克隆及功能元件分析
利用 悦栽粤月 法提取毛果杨的总 阅晕粤咱员猿暂 遥 以毛
果杨 孕贼则在云蕴 基因渊耘云员源苑远缘源援 员冤袁进行毛果杨基因
组 渊 澡贼贼责院 辕 辕 早藻灶燥皂藻援 躁早蚤 原 责泽枣援 燥则早 辕 孕燥责贼则员 辕 孕燥责贼则员援
澡燥皂藻援 澡贼皂造冤的 月造葬泽贼 搜索袁获取毛果杨 孕贼则在云蕴 启动
子区域序列设计引物渊见表 员冤遥 孕悦砸 反应参数为院
预变性 怨缘益 缘 皂蚤灶曰变性 怨源益 猿园 泽袁退火 缘缘益 猿园 泽袁
延伸 苑圆益 员 皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆益再延伸 苑 皂蚤灶 后中
止反应遥 将 孕悦砸产物胶回收后连接 责酝阅员愿鄄栽载体袁
送北京华大六合公司测序遥 对测序结果进行拼接比
对袁用 孕蕴粤悦耘咱员源 原 员缘暂和 孕造葬灶贼悦粤砸耘咱员远暂分析启动子序
列中的功能元件遥
员援 缘摇 植物表达载体的构建及遗传转化
将含有杨树启动子的重组质粒 责酝阅员愿鄄栽鄄
孕贼则在云蕴 责则燥皂燥贼藻则和植物表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园员袁分
别用限制性内切酶 耘糟燥砸 陨 和 晕糟燥 陨 酶切后袁经胶回
收试剂盒分别回收目的片段袁用 栽源 连接酶过夜连接
后转化大肠杆菌 阅匀缘琢袁经 孕悦砸及酶切检测袁筛选阳
性重组子 责员猿园员鄄孕贼则在云蕴 责则燥皂燥贼藻则院院郧哉杂遥 然后采用
液氮冻融法转入农杆菌 耘匀粤员园缘 菌中袁筛选阳性转
化子袁同时将空载体 责员猿园员 转入农杆菌 耘匀粤员园缘 作
为阳性对照遥 利用浸花法侵染野生型拟南芥袁收获
种子后用潮霉素渊使用浓度为 缘园 皂早窑蕴 原员 冤筛选阳
性幼苗遥
员援 远摇 转基因拟南芥的 孕悦砸 检测及 郧哉杂 组织化学
定位
拟南芥抗性苗生长 员 个月后袁取 园援 员 早左右的叶
片袁用 悦栽粤月法提取叶片中基因组 阅晕粤袁作为模板进
行 孕悦砸扩增遥 以重组载体上的 在云蕴 启动子部分序
列作为上游引物 孕员尧以 郧哉杂基因部分序列作为下游
引物 孕圆渊见表 员冤遥 孕悦砸反应参数为院预变性 怨源益 缘
皂蚤灶曰变性 怨源益 猿园 泽袁退火 缘缘益 猿园 泽袁延伸 苑圆益 猿园 泽袁
猿缘 个循环曰苑圆益延伸 苑 皂蚤灶 后中止反应袁经 员豫琼脂
糖凝胶电泳袁以检测 孕悦砸产物遥
收获 栽圆 代转基因种子后袁在不同时期取材袁放
入 郧哉杂染色液中在 猿苑益染色 员园 澡袁然后用卡诺固定
液渊无水乙醇颐冰醋酸 越 猿颐 员袁 增 辕 增 冤脱色并拍照咱员苑暂 遥
郧哉杂染色液配制如下院员园园 皂皂燥造窑蕴 原员磷酸钠盐缓冲
液 责匀 苑援 园袁 员 皂皂燥造窑蕴 原员 缘鄄溴鄄源 氯鄄猿鄄吲哚葡萄糖
苷袁 园援 缘 皂皂燥造窑蕴 原员铁氰化钾溶液袁 园援 缘 皂皂燥造窑蕴 原员
亚铁氰化钾溶液袁 员园 皂皂燥造窑蕴 原员 晕葬圆耘阅栽粤 和 园援 员豫栽则蚤贼燥灶 载鄄员园园遥
圆摇 结果
圆援 员摇 杨树 孕贼则在云蕴基因的克隆及序列分析
根据方法 员援 圆 中的 孕悦砸 反应程序袁扩增后经电
泳检测有 猿园园 遭责 左右的单一条带渊图 员冤袁与预期片
段大小相近袁克隆至 责酝阅员愿鄄栽 载体袁测序结果显示
克隆到的基因与 晕悦月陨 网站上公布的毛果杨 糟阅晕粤
序列渊耘云员源苑远缘源援 员冤相同遥 对获得的毛果杨 在云蕴 基
因序列进行 月造葬泽贼 载 分析袁结果显示袁其与拟南芥中
被命 名 为 悦圆匀圆 型 锌 指 蛋 白 渊 粤栽缘郧员远源苑园袁
酝 院 阅蕴圆园园园 阅晕粤 酝葬则噪藻则曰
员院 孕贼则在云蕴基因 孕悦砸结果曰 圆院阴性对照
图 员摇 毛果杨 孕贼则在云蕴基因的克隆
粤栽猿郧园圆苑怨园袁栽粤陨砸冤的同源基因具有较高的相似性
渊氨基酸序列相似性约为 苑缘豫 冤袁悦圆匀圆 型锌指蛋白
是一个转录因子家族袁通常具有 悦载圆 原 源 云载缘 原 愿 载猿 原 缘 匀
型氨基酸保守序列咱员愿暂 袁但通过对 耘曾孕粤杂赠 进行 孕枣葬皂
表明袁以上基因都不具备锌指蛋白氨基酸序列的保
源远缘
第 缘 期 赵学彩等院杨树类锌指基因 在云蕴的功能分析
守区域袁这说明此类基因并不属于锌指类基因袁而是
一种新基因袁暂时命名该基因为 孕贼则在云蕴 渊孕燥责怎造怎泽 贼则蚤鄄
糟澡燥糟葬则责葬 在蚤灶糟 枣蚤灶早藻则 造蚤噪藻 早藻灶藻冤遥 根据 晕悦月陨 提供的
毛果杨 糟阅晕粤 序列袁预测该基因 糟阅晕粤 全长为 缘怨缘
遭责袁其开放阅读区全长为 猿员缘 遭责渊如图 圆冤袁共编码
员园源 个氨基酸遥 通过 耘曾孕粤杂再网站在线分析袁推测该
基因编码蛋白的分子量大约为 员员援 圆园圆 噪阅葬袁等电点
为 怨援 愿猿遥
利用 晕悦月陨数据库中的 月造葬泽贼责 程序发现此基因
与多种植物中的同源基因具有高度的相似性袁其中
与蓖麻相似性最高袁达到 愿怨豫 袁而且与低等植物苔
藓也有较高的相似性渊苑源豫 冤渊图 猿冤遥 从系统发育树
图上可以看出袁毛果杨 孕贼则在云蕴 基因与蓖麻的亲缘性
最近渊图 源冤袁与同属于双子叶纲的葡萄聚到一起曰员
年生单子叶的草本植物玉米尧高粱尧水稻位于一个分
图 圆摇 毛果杨 孕贼则在云蕴基因的开放阅读框渊韵砸云冤
支袁进化程度比杨树更高一些曰同为双子叶植物的柽
柳尧马铃薯尧烟草等再另一个分枝袁与杨树亲缘关系
较远曰另一个分类簇中曰 杨树与双子叶植物拟南芥
的亲缘关系最远遥
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 渊拟南芥 晕孕赃缘远远员愿圆袁苑远豫 尧粤粤韵圆源缘怨愿袁苑缘豫 冤曰酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬渊苜蓿 粤悦允愿远园源圆袁苑怨豫 冤曰孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬渊毛果杨冤曰
砸蚤糟蚤灶怎泽 糟燥皂皂怎灶蚤泽渊蓖麻 载孕赃园园圆缘员源愿缘源袁愿怨豫 冤曰灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬渊葡萄 悦月陨员苑远源园袁愿缘豫 冤曰在藻葬 皂葬赠泽渊玉米 晕孕赃园园员员猿员圆缘源袁苑源豫 冤曰杂燥则早澡怎皂 遭蚤糟燥造燥则
渊高粱 载孕赃园园圆源猿苑缘远愿袁苑园豫 冤曰韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬渊水稻 耘粤在园圆猿员源袁苑源豫 冤曰孕澡赠泽糟燥皂蚤贼则藻造造葬 责葬贼藻灶泽渊苔藓 载孕赃园园员苑远苑员远圆袁苑猿豫 冤曰杂燥造葬灶怎皂 贼怎遭藻则燥泽怎皂渊马
铃薯 粤月月圆怨怨猿园袁 苑苑豫 冤曰 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂 渊烟 草 云郧远圆苑苑园怨袁 苑苑豫 冤曰 栽葬皂葬则蚤曾 澡蚤泽责蚤凿葬 渊 柽 柳 耘郧怨苑员源远圆袁 愿员豫 冤曰 孕蚤糟藻葬 葬遭蚤藻泽 渊 云 杉
粤粤载怨圆远愿园袁苑员豫 冤
图 猿摇 毛果杨 孕贼则在云蕴氨基酸序列与其他 员源 种物种氨基酸保守序列
缘远缘
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
图 源摇 毛果杨 孕贼则在云蕴氨基酸序列与其他氨基酸序列的系统进化树
圆援 圆摇 毛果杨 孕贼则在云蕴基因在不同胁迫下的表达模式
为了研究杨树 在云蕴 基因在非生物胁迫处理下
的表达模式袁作者进行了 匝砸栽鄄孕悦砸 表达分析遥 结果
表明袁甘露醇尧晕葬悦造尧匀圆韵圆尧粤月粤尧低温胁迫都能诱导
孕贼则在云蕴基因的表达渊图 缘冤遥 其中袁匀圆韵圆 能显著诱导
孕贼则在云蕴表达袁并于 员圆 澡达到最高袁说明 孕贼则在云蕴 受氧
化胁迫诱导遥 粤月粤同样能极显著诱导 孕贼则在云蕴 表达袁
于 猿 澡 达到最高袁并随处理时间延长而逐渐降低遥
结果也显示低温渊源益冤胁迫在 远 澡 后能显著诱导
孕贼则在云蕴基因表达袁并随着低温处理能一直保持较高
水平的表达袁同时一定浓度的甘露醇与 晕葬悦造 也能在
一定程度上促进 孕贼则在云蕴 的表达遥 以上数据表明袁
孕贼则在云蕴基因的表达受逆境胁迫诱导遥
图 缘摇 毛果杨 孕贼则在云蕴基因在不同胁迫及不同时间下的表达模式
圆援 猿摇 毛果杨 孕贼则在云蕴基因启动子的克隆及序列分析
根据方法 员援 源 的 孕悦砸 反应程序袁扩增后通过电
泳分离出 员 园园园 遭责 左右条带渊图 远冤袁与预期片段大
小相近袁克隆至 责酝阅员愿鄄栽 载体袁菌液 孕悦砸检测后袁用
责酝阅员愿鄄栽载体的通用引物 砸灾鄄酝尧酝员猿鄄源苑 测序袁将测
序结果用 月蚤燥藻凿蚤贼软件将序列拼接后袁获得 员 园园园 遭责
的毛果杨 孕贼则在云蕴的启动子序列渊图 苑冤遥
酝院 阅蕴 缘园园园 阅晕粤 酝葬则噪藻则曰 员院 毛果杨 在云蕴基因启动子 孕悦砸产物曰
圆院 阴性对照
图 远摇 毛果杨 在云蕴基因启动子的克隆
利用 孕蕴粤悦耘和 孕造葬灶贼悦粤砸耘数据库袁对获得的毛
果杨 孕贼则在云蕴启动子序列进行分析渊图 苑冤遥 毛果杨
孕贼则在云蕴 启动子含有以下元件院渊员冤 栽粤栽粤鄄遭燥曾袁砸晕粤
聚合酶域结合的位点袁是核心的启动子元件曰
渊圆冤悦粤粤栽鄄遭燥曾袁可能与转录的起始频率有关袁有增强
基因转录的作用袁是真核生物基因启动子典型元件
之一曰渊猿冤 粤月砸耘 元件院脱落酸应答顺式作用元件曰
渊源冤悦郧栽悦粤鄄皂燥贼蚤枣和 栽郧粤悦郧鄄皂燥贼蚤枣院序列中含有 源 个袁
这两种元件与茉莉酸渊酝藻允粤冤诱导相关曰渊缘冤宰砸运再
苑员韵杂院赤霉素信号通路中的转录阻碍物曰渊远冤匀杂耘 元
件院序列中含有 员 个 匀杂耘渊澡藻葬贼 泽贼则藻泽泽 藻造藻皂藻灶贼冤元件袁
与热反应相关曰渊苑冤 郧粤栽粤鄄遭燥曾尧郧栽员鄄皂燥贼蚤枣院都是和光
作用的顺式元件曰渊愿冤悦悦郧栽悦悦鄄遭燥曾院分生组织特异性
激活的顺式调控元件曰渊怨冤粤砸耘 和 粤悦郧栽鄄皂燥贼蚤枣院都和
脱水化作用有关渊表 圆冤遥
圆援 源摇 植物表达载体的构建及转基因拟南芥的检测
植物表达载体 责员猿园员 含有 悦葬酝灾猿缘杂院院郧哉杂 融
合系统渊图 愿冤袁本实验中将克隆到的毛果杨启动子
取代植物表达载体 责员猿园员 上的 悦葬酝灾猿缘杂袁构建表达
载体 责员猿园员鄄孕贼则在云蕴 责则燥皂燥贼藻则院院郧哉杂遥 采用液氮冻融
法转化农杆菌 耘匀粤员园缘 后袁利用浸花法侵染拟南芥袁
用潮霉素筛选收获的种子袁获得 苑 株抗潮霉素的幼
苗遥 提取抗性苗的 阅晕粤 作为模版进行 孕悦砸 检测袁
电泳结果显示袁在其中均检测出 源园园 遭责 左右的目的
条带袁说明 苑 株抗性苗全部为转基因植株渊图 怨冤遥
远远缘
第 缘 期 赵学彩等院杨树类锌指基因 在云蕴的功能分析
图 苑摇 毛果杨 孕贼则在云蕴基因启动子序列及其结构分析
表 圆摇 毛果杨 孕贼则在云蕴基因启动子部分顺式作用元件的生物学功能分析
启动子元件 位置 正反方向 序列 功能粤粤郧粤粤鄄皂燥贼蚤枣 渊 原 苑源怨袁 原 苑源缘袁 原 苑猿员袁 原 猿猿怨冤 垣 郧粤粤粤郧粤粤 未知粤月砸耘 渊 原 圆猿源冤 垣 悦粤悦郧栽郧 脱落酸应答顺式作用元件粤悦郧栽鄄皂燥贼蚤枣 渊 原 远源怨袁圆猿愿袁圆猿猿冤 垣 粤悦郧栽 早期响应脱水化作用粤砸耘 渊 原 缘远猿冤 垣 栽郧郧栽栽栽 厌氧诱导响应顺式调控元件粤栽鄄则蚤糟澡 藻造藻皂藻灶贼 渊 原 怨源苑袁 原 愿愿缘冤 垣 粤栽粤郧粤粤粤栽悦粤粤 富含 粤栽的 阅晕粤结合蛋白粤栽员鄄皂燥贼蚤枣 渊 原 愿远园冤 原 粤粤栽栽粤栽栽栽栽栽栽粤栽栽 光反应元件粤栽悦栽鄄皂燥贼蚤枣 渊 原 缘员苑冤 垣 粤粤栽悦栽粤粤栽悦悦 光反应元件月燥曾 源 渊 原 源员愿袁 原 源员源冤 垣 粤栽栽粤粤栽 光反应元件月燥曾 陨 渊 原 圆员圆冤 原 栽栽栽悦粤粤粤 胚乳表达模式的顺式作用元件
悦粤粤栽鄄遭燥曾 渊 原 愿怨缘袁 原 愿苑园袁 原 愿远圆袁 原 愿园源袁 原 缘源猿袁 原 缘园源袁原 圆怨猿袁 原 圆园员袁 原 圆源冤 垣 悦粤粤粤栽 启动子或增强子中的顺式作用元件悦悦粤粤栽 遭燥曾 渊 原 缘源猿袁 原 圆园员冤 垣 悦悦粤粤栽 和 匀杂耘互作袁增强热激启动子的活性悦悦郧栽悦悦鄄遭燥曾 渊 原 缘怨缘冤 垣 悦悦郧栽悦悦 分生组织特异性激活的顺式调控元件悦郧栽悦粤鄄皂燥贼蚤枣 渊 原 远源愿袁 原 圆猿苑冤 垣 悦郧栽悦粤 茉莉酸甲酯应答的顺式作用元件元件郧鄄月燥曾 渊 原 圆猿源袁 原 远缘园袁 原 圆猿源冤 垣 悦粤悦郧栽郧 光反应元件郧粤栽粤 遭燥曾 渊 原 怨苑园袁 原 愿源缘袁 原 愿员缘袁 原 远远员袁 原 远园愿袁 原 猿员远冤 垣 郧粤栽粤 和光调控相关郧悦晕源赃皂燥贼蚤枣 渊 原 圆愿冤 垣 悦粤粤郧悦悦粤 胚乳表达模式的顺式作用元件郧栽员鄄皂燥贼蚤枣 渊 原 怨圆苑冤 垣 郧郧栽栽粤粤 光反应元件匀杂耘 渊 原 圆圆愿冤 垣 粤粤粤粤粤粤栽栽栽悦 热激应答的顺式作用元件酝再月 渊 原 远愿员冤 垣 宰粤粤悦悦粤 和脱水化作用相关孕鄄遭燥曾 渊 原 缘怨园冤 原 悦悦栽栽栽栽郧 赤霉素应答元件杂噪灶鄄员赃皂燥贼蚤枣 渊 原 愿怨怨袁 原 源园源冤 原 郧栽悦粤栽 胚乳表达模式的顺式作用元件杂责员 渊 原 远猿怨冤 垣 悦悦渊郧 辕 粤冤悦悦悦 光反应元件栽鄄月燥曾 渊 原 圆苑圆冤 垣 栽栽宰栽宰栽栽宰栽栽 和细胞骨架相关栽粤栽粤鄄遭燥曾 渊 原 员员苑冤 垣 栽粤栽粤粤粤栽 启动子的核心区域栽郧粤悦郧鄄皂燥贼蚤枣 渊 原 远源愿袁 原 圆猿苑冤 原 栽郧粤悦郧 茉莉酸甲酯应答的顺式作用元件元件栽郧郧鄄皂燥贼蚤枣 渊 原 远怨猿冤 垣 栽郧郧栽郧郧悦栽粤 光反应元件宰砸运再苑员韵杂 渊 原 愿怨愿袁 原 源园猿冤 垣 栽郧粤悦 赤霉素信号通路中的转录阻碍物哉灶灶葬皂藻凿赃赃圆 渊 原 员园愿冤 垣 悦悦悦悦郧郧 未知哉灶灶葬皂藻凿赃赃源 渊 原 缘苑袁 原 苑园苑袁 原 缘源袁 原 远源员冤 垣 悦栽悦悦 未知遭燥曾 杂 渊 原 远怨圆冤 原 粤郧悦悦粤悦悦 未知糟蚤则糟葬凿蚤葬灶 渊 原 怨怨苑冤 原 悦粤粤晕晕晕晕粤栽悦 生理控制的顺式作用元件元件
苑远缘
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
图 愿摇 植物表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园员 图谱
酝院 阅蕴 圆园园园 阅晕粤 酝葬则噪藻则曰 员院 阳性对照质粒 孕悦砸产物曰
圆 愿院 潮霉素抗性幼苗的 阅晕粤 孕悦砸产物
图 怨摇 转基因拟南芥的 孕悦砸检测
圆援 缘摇 启动子的 郧哉杂组织化学定位
为了验证所克隆启动子的功能袁 对 孕贼则在云蕴 启
动子转化株的种子尧幼苗尧幼叶尧老叶尧花序等分别进
行 郧哉杂 染色遥 以转 责员猿园员 原 猿缘杂院院郧哉杂 空载体植株
做阳性对照渊图 员园 原 粤 郧冤袁郧哉杂染色结果显示院种
子状态下袁未检测到 郧哉杂 表达渊图 员园 原 匀冤曰在幼苗
期袁在植株的根部成熟区尧根尖部分显色最明显袁在
两片子叶位置也有稍许显色渊图 员园 原 陨袁 郧冤曰花器官
的部分组织中也有少量显色袁但是不明显渊图 员园 原
酝冤曰全株染色后发现袁根部仍然显色最深袁说明在整
个生长期 孕贼则在云蕴基因都有在根部表达袁并且表达量
最强袁在幼叶尧老叶尧茎生叶中均有表达渊图 员园 原 运袁
蕴袁 酝袁 晕冤袁但是老叶中的表达量很低袁多呈现斑点
状分布渊图 员园 原 晕冤遥 根据对幼叶 原成熟叶 原老叶的
郧哉杂染色袁染色结果是按浅 原深 原浅的变化过程袁推
测 孕贼则在云蕴基因在叶片中的表达跟叶片的生理活动
强度相一致遥
猿摇 结论与讨论
植物锌指蛋白是一类广泛研究的抗逆性蛋白遥
本研究从杨树叶片 糟阅晕粤中首次克隆出一个新的类
锌指基因渊孕贼则在云蕴冤袁通过进一步分析 孕贼则在云蕴 基因的
氨基酸序列发现该基因在多种植物中存在高度相似
的同源基因袁且 孕贼则在云蕴 蛋白和其他的同源蛋白都不
含有 悦圆匀圆 的保守区域袁晕悦月陨 数据显示这些基因的
功能暂时都是未知的咱员怨暂 遥 杨树 孕贼则在云蕴 基因在柽柳
和烟草中的同源基因的研究结果显示 在云蕴鄄郧云孕 融
合蛋白定位于细胞壁袁说明该基因在植物的细胞壁
愿远缘
第 缘 期 赵学彩等院杨树类锌指基因 在云蕴的功能分析
粤 郧 阳性对照 猿缘杂院院郧哉杂转基因拟南芥 郧哉杂染色
粤 种子曰月 萌发的种子曰悦 幼苗曰阅 第一片真叶曰耘 幼叶曰云 花序曰郧 老叶
匀 晕 孕贼则在云蕴 责则燥皂燥贼藻则院院郧哉杂转基因拟南芥 郧哉杂染色
匀 种子曰陨 萌发的种子曰允 幼苗曰运 第一片真叶曰蕴 幼叶曰酝 花序曰晕 老叶
图 员园摇 转基因拟南芥的 郧哉杂组织化学染色
中发挥作用咱远 原 苑暂 遥 在酵母双杂交的实验中发现柽柳
栽澡在云蕴基因不能单独激活报告基因表达袁这和已知
的锌指基因具有转录活性是相矛盾的袁推测 栽澡在云蕴
基因不是转录因子咱圆园暂 遥
杨树苗在甘露醇尧晕葬悦造尧匀圆韵圆尧粤月粤尧低温渊源益冤
等非生物胁迫下袁孕贼则在云蕴 基因的表达水平都有一定
程度的上调渊图 缘冤遥 其中 粤月粤和低温渊源益冤能极显
著诱导 孕贼则在云蕴 基因表达袁这和柽柳 栽澡在云蕴 基因在
粤月粤诱导下的结果是一致的咱远暂 遥 粤月粤 通常在与植
物的抗逆性相关的基因中起重要作用袁上述结果推
测 孕贼则在云蕴基因具有 粤月粤应答效应遥 柽柳 栽澡在云蕴 在
转基因酵母和转基因烟草中袁表现出对盐和渗透胁
迫具有一定的耐性咱远袁愿暂 遥 通过对杨树 孕贼则在云蕴 基因上
游的启动子功能元件分析袁结果显示含有多个茉莉
酸甲酯尧赤霉素尧脱落酸等应答元件袁如 粤月砸耘尧孕鄄
遭燥曾尧悦郧栽悦粤鄄皂燥贼蚤枣尧栽郧粤悦郧鄄皂燥贼蚤枣等袁粤月砸耘是 粤月粤反
应元件袁粤月粤对冷诱导基因 糟燥则 具有正向调节作用袁
进而提高了植物的耐冻性咱圆员暂 曰同时脱落酸和茉莉酸
甲酯在植物的生长发育和逆境响应中具有重要作
用遥 启动子序列中还含有一个 酝再月 和 宰砸运再 元
件袁酝再月 元件与受干旱尧高盐和 粤月粤 诱导的 酝再月
类转录因子的启动子区域相互作用曰宰砸运再 蛋白专
一识别 宰鄄遭燥曾 序列袁是一类在植物中起特异作用的
转录调控因子袁植物 宰砸运再 转录因子在生物和非生
物胁迫中起重要作用咱圆圆暂 遥 上述结果说明袁杨树
孕贼则在云蕴基因可能对非生物胁迫具有应答反应遥
杨树是重要的造林绿化树种和工业用材树种袁
进行杨树功能基因的挖掘尧克隆和功能的研究袁是当
前杨树基因组学的首要任务之一咱圆猿暂 遥 本研究表明
杨树 孕贼则在云蕴基因可能在杨树对非生物胁迫的应答
中起重要作用袁这不仅对进一步理解植物对非生物
胁迫的耐性机制提供适当的参考袁同时对研究类锌
指蛋白的功能提供一定的指导遥
参考文献院
咱员暂 黄摇 骥袁 张红生援 栽云芋粤型锌指蛋白及在提高植物耐逆性中的
作用咱允暂 援 遗传袁 圆园园苑袁 圆怨 渊愿冤 院 怨员缘 原 怨圆圆
咱圆暂 黄摇 骥袁 王建飞袁 张红生援 植物 悦圆匀圆 型锌指蛋白结构和功能
咱允暂 援 遗传袁 圆园园源袁 圆远 渊猿冤 院 源员源 原 源员愿
咱猿暂 杂藻燥灶早 耘 杂袁 宰葬灶早 酝 匀援 粤 灶燥增藻造 悦葬粤遭泽蚤员 早藻灶藻 蚤灶凿怎糟藻凿 遭赠 藻葬则造赠鄄葬遭蚤鄄
燥贼蚤糟 泽贼则藻泽泽藻泽 蚤灶 责藻责责藻则 咱 允暂援 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 葬灶凿 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁
圆园园愿袁 源员 渊员冤 院 愿远 原 怨员
咱源暂 蕴蚤怎 匝 蕴袁 载怎 运 阅袁 酝葬 晕袁 藻贼 葬造援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则鄄
蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 阅早在云孕院 葬 早藻灶藻 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 悦赠泽圆 辕 匀蚤泽圆鄄贼赠责藻 扎蚤灶糟 枣蚤灶早藻则
责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 糟澡则赠泽葬灶贼澡藻皂怎皂咱允暂 援 允葬责葬灶藻泽藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤责责造蚤藻凿 孕澡赠泽蚤糟泽袁
圆园员园袁 猿苑 渊圆冤 院员员猿苑 原 员员源圆
咱缘暂 杂葬噪葬皂燥贼燥 匀袁 酝葬则怎赠葬皂葬 运袁 杂葬噪怎皂葬 再袁 藻贼 葬造援 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 悦赠泽圆 辕
匀蚤泽圆鄄栽赠责藻 在蚤灶糟鄄云蚤灶早藻则 孕则燥贼藻蚤灶泽 云怎灶糟贼蚤燥灶 葬泽 栽则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 砸藻责则藻泽泽燥则泽
怎灶凿藻则 阅则燥怎早澡贼袁 悦燥造凿袁 葬灶凿 匀蚤早澡鄄杂葬造蚤灶蚤贼赠 杂贼则藻泽泽 悦燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽咱允暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园源袁 员猿远 渊员冤 院 圆苑猿源 原 圆苑源远
咱远暂 再葬灶 粤灶袁 再怎糟澡藻灶早 宰葬灶早袁 蕴蚤灶早造蚤灶早 蕴燥怎袁 藻贼 葬造援 粤 灶燥增藻造 在蚤灶糟鄄枣蚤灶早藻则鄄
造蚤噪藻 早藻灶藻 枣则燥皂 栽葬皂葬则蚤曾 澡蚤泽责蚤凿葬 蚤泽 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 泽葬造贼 葬灶凿 燥泽皂燥贼蚤糟 贼燥造藻则鄄
葬灶糟藻咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼 砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园员员袁 员圆源 渊远冤院 远愿怨 原 远怨苑
咱苑暂 曲冠证袁郑唐春袁 邵龙婷袁 等援 烟草类锌指基因 晕贼在云蕴基因的功
能分析咱允暂 援 植物研究袁 圆园员圆袁 猿圆 渊源冤院 源猿园 原 源猿远
咱愿暂 曲冠证袁 郑唐春袁杜兆伟袁 等援 柽柳类锌指基因 栽澡在云蕴的功能分
怨远缘
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
析咱允暂援 东北林业大学学报袁 圆园员圆袁源园 渊苑冤院远 原 员园袁苑园
咱怨暂 卢孟柱袁胡建军援 我国转基因杨树的研究及应用现状咱允暂 援 林业
科技开发袁 圆园园远袁 圆园 渊远冤 院 员 原 源
咱员园暂 张红梅袁 夏新莉袁 尹伟伦援 毛果杨的组织培养与快速繁殖咱 允暂 援
植物生理学通讯袁 圆园园怨袁 源缘 渊员冤院 缘猿
咱员员暂 栽葬皂怎则葬 运袁 阅怎凿造藻赠 允袁 晕藻蚤 酝袁 藻贼 葬造援 酝耘郧粤源院 酝燥造藻糟怎造葬则 耘增燥造怎贼蚤燥灶鄄
葬则赠 郧藻灶藻贼蚤糟泽 粤灶葬造赠泽蚤泽 渊酝耘郧粤冤 泽燥枣贼憎葬则藻 增藻则泽蚤燥灶 源援 园咱允暂援 酝燥造 月蚤燥造
耘增燥造袁 圆园园苑袁 圆源 渊愿冤 院员缘怨远 原 员缘怨怨
咱员圆暂 蕴蚤增葬噪 运 允袁 杂糟澡皂蚤贼贼早藻灶 栽 阅援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 则藻造葬贼蚤增藻 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 凿葬鄄
贼葬 怎泽蚤灶早 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸 葬灶凿 贼澡藻 圆 原 驻驻悦栽 皂藻贼澡燥凿 咱 允暂 援
酝藻贼澡燥凿泽袁 圆园园员袁 圆缘院 源园圆 原 源园愿
咱员猿暂 阅燥赠造藻 允 允袁 阅燥赠造藻 允 蕴援 粤 则葬责蚤凿 阅晕粤 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 责则燥糟藻凿怎则藻 枣燥则 泽皂葬造造
择怎葬灶贼蚤贼蚤藻泽 燥枣 枣则藻泽澡 造藻葬枣 贼蚤泽泽怎藻咱 允暂 援 孕澡赠贼燥糟澡藻皂 月怎造造袁 员怨愿苑袁 员怨院 员员
原 员缘
咱员源暂 匀蚤早燥 运袁 哉早葬憎葬 再袁 陨憎葬皂燥贼燥 酝袁 藻贼 葬造援 孕造葬灶贼 糟蚤泽鄄葬糟贼蚤灶早 则藻早怎造葬贼燥则赠
阅晕粤 藻造藻皂藻灶贼泽 渊孕蕴粤悦耘冤 凿葬贼葬遭葬泽藻咱允暂 援 晕怎糟造藻蚤糟 粤糟蚤凿泽 砸藻泽藻葬则糟澡 袁
员怨怨怨袁 圆苑 渊员冤 院 圆怨苑 原 猿园园
咱员缘暂 孕则藻泽贼则蚤凿早藻 阅 杂援 杂陨郧晕粤蕴 杂悦粤晕院粤 糟燥皂责怎贼藻则 责则燥早则葬皂 贼澡葬贼 泽糟葬灶泽
阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻泽 枣燥则 藻怎噪葬则赠燥贼蚤糟 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造 藻造藻皂藻灶贼泽 咱 允 暂 援
悦粤月陨韵杂袁 员怨怨员袁 苑 渊圆冤 院 圆园猿 原 圆园远
咱员远暂 蕴藻泽糟燥贼 酝袁 阅藻澡葬蚤泽 孕袁 酝燥则藻葬怎 再袁 藻贼 葬造援 孕造葬灶贼悦粤砸耘院 葬 凿葬贼葬遭葬泽藻 燥枣
责造葬灶贼 糟蚤泽 原 葬糟贼蚤灶早 则藻早怎造葬贼燥则赠 藻造藻皂藻灶贼泽 葬灶凿 葬 责燥则贼葬造 贼燥 贼燥燥造泽 枣燥则 蚤灶 泽蚤造蚤鄄
糟燥 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责则燥皂燥贼藻则 泽藻择怎藻灶糟藻泽咱允暂 援 晕怎糟造藻蚤糟 粤糟蚤凿泽 砸藻泽 阅葬贼葬遭葬泽藻
陨泽泽怎藻袁 圆园园圆袁 猿园 渊员冤 院 猿圆缘 原 猿圆苑
咱员苑暂 允藻枣枣藻则泽燥灶 砸 粤袁 运葬增葬灶葬早澡 栽 粤袁 月藻增葬灶 酝 宰援 郧哉杂 枣怎泽蚤燥灶泽院茁鄄早造怎糟怎鄄
则燥灶蚤凿葬泽藻 葬泽 葬 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 葬灶凿 增藻则泽葬贼蚤造藻 早藻灶藻 枣怎泽蚤燥灶 皂葬则噪藻则 蚤灶 澡蚤早澡藻则
责造葬灶贼泽咱允暂 援 耘酝月韵 允袁 员怨愿苑袁远 渊员猿冤 院 猿怨园员 原 猿怨园苑
咱员愿暂 栽葬噪葬贼泽怎躁蚤 匀援 在蚤灶糟鄄枣蚤灶早藻则 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则泽 蚤灶 责造葬灶贼泽咱 允暂 援 悦藻造造
酝燥造 蕴蚤枣藻 杂糟蚤袁 员怨怨愿袁 缘源 渊远冤 院 缘愿圆 原 缘怨远
咱员怨暂 郑唐春袁 施晓文袁 臧丽娜袁 等援 拟南芥类锌指基因 粤栽猿郧园圆苑怨园 辕
粤栽缘郧员远源苑园 纯合双突变的筛选及其表型分析咱允暂援 东北林业大
学学报袁 圆园员圆袁 源园 渊怨冤 院 员园员 原 员园远
咱圆园暂 郑唐春袁 臧丽娜袁 曲冠证袁 等援柽柳类锌指基因 栽澡在云蕴 酵母诱
饵表达载体的构建及其表达验证咱 允暂 援 东北林业大学学报袁
圆园员员袁猿怨 渊员圆冤 院 源 原 愿袁员缘
咱圆员暂 郧蚤造皂燥怎则 杂 允袁 粤则贼怎泽 晕 晕袁 栽澡燥皂葬泽澡燥憎 酝 云援 糟阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶葬造赠鄄
泽蚤泽 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼憎燥 糟燥造凿鄄则藻早怎造葬贼藻凿 早藻灶藻泽 燥枣 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤鄄
葬灶葬咱允暂援 孕造葬灶贼 酝燥造 月蚤燥造袁 员怨怨圆袁 员愿 渊员冤 院 员猿 原 圆员
咱圆圆暂 郭晋艳袁 郑晓瑜袁 邹翠霞袁 等援 植物非生物胁迫诱导启动子顺
式元件及转录因子研究进展咱 允暂援 生物技术通报袁 圆园员员袁 圆愿
渊源冤 院 员远 原 圆园袁猿园
咱圆猿暂 林元震袁 张志毅袁 林善枝袁 等援 运用基因组和 耘杂栽 数据库进行
电子克隆分离杨树功能基因的策略咱允暂 援 分子植物育种袁 圆园园苑袁
缘 渊源冤 院 缘愿猿 原 缘愿苑
园苑缘