全 文 ：林业科学研究　2006, 19 (5) : 606～611
Forest Research
　　文章编号 : 100121498 (2006) 0520606206
文心兰规模化组培育苗关键技术研究
欧阳彤 , 陈　胜 , 汪凤珍
(中国林业科学研究院亚热带林业研究所 ,浙江 富阳　311400)
摘要 :通过基本培养基 (改良 MS、改良 KC、V&W及自制 ZW系列 )、植物激素 (62BA、KT、NAA、IBA)、培养条件 (香蕉
泥、蛋白胨、酵母提取物、糖、活性炭 )等关键因子对文心兰组培各阶段影响的试验 ,探索了文心兰规模化组培育苗的
关键技术。结果表明 : (1)当 62BA 0. 1～2 mg·L - 1 , NAA 0. 1～110 mg·L - 1时 ,可诱导拟原球茎形成与增殖 ; 62BA
0. 05～0. 1 mg·L - 1或附加 NAA 0. 1 mg·L - 1就可满足拟原球茎的分化 ; 62BA 0. 01 mg·L - 1协同 NAA或 IBA 0. 1mg
·L - 1处理 ,诱导生根快而粗壮 ; (2)添加活性炭 1 000 mg·L - 1和维生素 C 30 mg·L - 1对减轻外植体褐化是必要
的 ;添加 500～1 000 mg·L - 1蛋白胨或酵母提取物可促进诱导拟原球茎 ;香蕉泥 100 g·L - 1有助于拟原球茎分化和
瓶苗健化 ; (3)MS高盐类培养基在每个培养阶段都有较高的致畸率 ,自制中盐 ZW培养基 , N∶P∶K为 3∶1∶219,文
心兰在其中生长健壮 ; (4)文心兰在无糖培养基中自养生长基本正常。
关键词 :文心兰 ;组织培养 ;规模化育苗 ;关键技术
中图分类号 : S72213 文献标识码 : A
收稿日期 : 2005209226
基金项目 : 中国林科院亚热带林业研究所创新基金 (20042C202)
作者简介 : 欧阳彤 (1965—) ,女 ,重庆人 ,副研究员 ;主要从事林木、花卉、珍稀植物组织培养育苗、育种与快繁 1
Key Technology Study on Oncidium Industr ia l Propagation by Tissue Culture
OUYANG Tong, CHEN Sheng, WANG Feng2zhen
(Research Institute of Subtrop ical Forestry, CAF, Fuyang　311400, Zhejiang, China)
Abstract: The key technology of Oncidium’s industrial p ropagation were studied by in situ investigating the effects
of the key factors such as m inimal medium ( imp roved MS, imp roved KC, V&W and self2p repared ZW series,
etc. ) , phytohormone (62BA, NAA, IBA , KT) , additive ( vitam in C, pep tone, mashed banana, active carbon,
sugar, etc. ) , on the mass breeding in every stage during Oncidium ’s industrial p ropagation. The results revealed
that: (1) The p rotocorm like body ( PLB ) could be induce and increase as long as the concentration of 62BA be2
tween 0. 1～2 mg·L - 1 and NAA 0. 1～110 mg·L - 1. A t the revulsive initial stage a concentration of 62BA 2 mg·
L - 1 and with NAA 0. 2 mg·L - 1 was helpful to increase the p ropagation basic number of p rotocorm like body. The
multip ly and differentiation of PLB could take p lace as long as 62BA 0. 05～0. 1 mg·L - 1 or addition of NAA 0. 1
mg·L - 1. The root emerging could be accelerated and the roots become stronger cooperation of addition of low con2
centration 62BA (0. 01～0. 1 mg·L - 1 ) together with NAA or IBA (0. 1 mg·L - 1 ). (2) The low concentration of
auxin (0. 01～0. 1 mg·L - 1 ) and the sort of low concentration of m ineral medium ( such as V&W , KC, etc. )
seemed to benefit the decrease of the malformation during PLB differentiation and seedling growth. (3) In order to
reduce the exp lant browning addition of active carbon 1 000 mg·L - 1 and vitam in C 30 mg·L - 1 was necessary.
Adding pep tone 500～1 000 mg·L - 1 or drawn substance of yeast seemed to p romote the induction of PLB. Mashed
banana 100 g·L - 1 m ight benefit the PLB differentiation and imp rove the quality of test2tube p lantlet. (4)M inimal
medium s had notable effects on every stage of Oncidium tissue culture. The self2p repared ZW medium s with m iddle
第 5期 欧阳彤等 :文心兰规模化组培育苗关键技术研究
concentration of salt were more suitable to Oncidium p ropagation by tissue culture. (5) Oncidium was autotrophic
without sugar in the medium.
Key words:Oncidium; tissue culture; industrial p ropagation; key technology
文心兰 (O ncid ium flexuosum Lodd) , 又名舞女
兰、瘤瓣兰 ,为兰科 (O rch idaceae)瘤瓣兰属 (O ncid i2
um Sw1)植物。原生于中南美洲的墨西哥、巴西、玻
利维亚一带。因其潇洒脱俗的花姿、温文尔雅的气
质、妙趣横生的形态和容易莳养的习性 ,深受广大消
费者的喜爱 ,是世界重要的盆花和切花种类之一。
品质良好的文心兰无论是鲜切花还是盆花品种近年
来在花卉市场上都一直处于供不应求状态 ,用组织
培养工厂化育苗提供文心兰种苗是满足市场需求的
最佳手段。关于文心兰的组织培养研究已有不少文
献报道 [ 1～3 ] ,然而大多局限于实验室的研究阶段 ,将
其结果用于规模化生产时 ,出现了较多问题 ,比如生
长不均衡、瓶苗畸形率高、分化苗参差不齐 ,小苗生
根太多太长 ,不利于后续生产操作等 ,因而无法适应
规模化生产要求。本文结合作者对文心兰组培工厂
化育苗的研究与生产实践 ,对文心兰组织培养规模
化育苗关键技术作一总结 ,为今后大规模生产文心
兰提供借鉴。
1　材料与方法
1. 1　材料
文心兰 (百万金币 )成品苗假鳞茎基部新芽及
无菌试管苗。
1. 2　方法
1. 2. 1　建立无菌体系 　用肥皂水刷洗成熟假鳞茎
基部的新芽 ,剥除叶片 ,露出基部芽体 ,用 5% (体积
分数 )安替福民 (添加 2滴土温 —80) 消毒 10 m in,
无菌水洗 3次 ;再用 1 g·L - 1升汞灭菌 5 m in,无菌
水洗 3次 ,切取生长点约 1～2 mm3 块状 ,接种在诱
导培养基上 ;或分割无菌试管苗假鳞茎、或剥离无菌
苗茎尖 ,放置于诱导培养基上。
1. 2. 2　诱导、增殖、壮苗、生根培养 　约 1～2个月
后 ,芽体或拟原球茎长出 ,再转至增殖培养基中培
养。在初期增殖培养时 ,用含 100 g·L - 1香蕉泥的
液体培养基震荡培养。约 20～45 d可看到显著的
拟原球茎增殖情形 ,再次转入固体培养基中 ,进行健
化培养 ,此后每 4～6周继代培养 ,当达到一定基数
的拟原球茎后 ,根据生长状况及生产需求 ,分别在不
同的培养基中进行增殖、壮苗和生根培养。
1. 2. 3　瓶苗移植
1. 2. 3. 1　练苗 　在移植前 1周 ,将生根瓶苗放置在
覆有塑料薄膜和遮荫网的大棚中 ,于散射的自然光
下 3 d左右 ,然后拔去瓶塞依然保留塑料防尘套或
半打开瓶盖 2 d左右 ,之后彻底敞开瓶口 2 d,使瓶
苗逐渐适应干燥、强光照、大温差的自然环境。
1. 2. 3. 2　介质 　介质以水苔或水苔加椰丝为好。
使用前 ,先用清水浸泡 ,然后用 0. 5 g·L - 1高锰酸钾
消毒 ,甩干水分 ,待用。
1. 2. 3. 3　移植 　取出生根瓶苗 ,洗去培养基 ,用 800
～1 000倍多菌灵浸泡根部 5 m in左右 ,取出晾干水
分。用介质包裹住瓶苗根部置于 1. 5寸育苗钵中 ,
于散射光下培养。移植后前 3 d不浇水 ,之后视情
况少量喷清水或 0. 1 g·L - 1乙酰水杨酸溶液。半月
后新根开始长出 ,逐渐施薄液肥。
1. 3　培养条件
基本培养基分别为 RM、MS、改良 MS、V&W、狩
野 ( SY)、改良 KC[ 4, 5 ]及自制培养基 ZW 系列 (中盐
类 ,总盐为 2 300～2 600 mg·L - 1 , N∶P∶K = 3∶1∶
219)。附加不同浓度和种类的植物激素 (62BA 0. 01
～210 mg·L - 1、KT 0. 05 mg·L - 1、NAA 0. 05～0150
mg·L - 1、IBA 0. 1 mg·L - 1 )、蔗糖 ( 20 ～30 g·
L - 1 )、有机添加物 (香蕉泥 50～100 g·L - 1、蛋白胨
0. 5～1 g·L - 1、酵母提取物 0. 5～110 g·L - 1等 )、
活性碳 (AC, 0. 5～1 g·L - 1 )、维生素 C (Vc, 30 mg
·L - 1 )、琼脂 7 g·L - 1、pH值为 5. 8～6. 0,培养温
度为 25 ℃±2 ℃左右 ,光强为 1 500～2 000 lx,光照
时间为 14 h·d - 1。
2　结果与分析
2. 1　诱导拟原球茎 ( PLB)
2004年 3月 19日至 4月 6日将假鳞茎基部隐
芽、无菌苗茎尖接种在以下培养基上 ,附加糖 30 g·
L - 1 ,琼脂 7 g·L - 1 ,观察外植体形成拟原球茎情况。
2. 1. 1　基本培养基对诱导拟原球茎的影响 　将假
鳞茎基部隐芽、无菌苗茎尖接种在诱导培养基上培
养 ,结果见表 1。
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林 　业 　科 　学 　研 　究 第 19卷
表 1　不同基本培养基对诱导外植体产生拟原球茎的影响
序号 培养基 / (mg·L - 1 ) 接外植体数 /个 外植体的反应 5周后状况
W23 RM + 62BA0. 05 +NAA0. 5 +AC 1 000 30 假鳞茎逐渐变黄绿 假鳞茎基部萌出 0～1枚拟原球茎
W24 MS + 62BA0. 05 +NAA0. 5 30 外植体切口变褐 假鳞茎基部萌出 2～3枚拟原球茎
W25 改良 MS + 62BA0. 05 +NAA0. 5 +AC 1 000 30 从茎尖基部形成 PLB PLB大而厚实 ,分化苗色黄绿
W26 改良 KC + 62BA0. 05 +NAA0. 5 +Vc30 30 茎尖和假鳞茎基部均出
现 PLB
PLB小而圆 ,数量较多 , 5枚以上 ,新苗
生长健壮 ,色绿
通过表 1可知 ,上述处理激素水平一致 ,而基本
培养基不同。W 23处理假鳞茎变黄绿色 ,诱导新芽
少 ;W 24 处理外植体切口变褐色 ; W 25处理诱导的
拟原球茎大而厚实 ,有畸变倾向 ;在 W 26处理中 ,茎
尖和假鳞茎切块均可诱导出拟原球茎 ,数量较多 ,形
态正常 ,且萌发新苗生长状况较好 ,初步推断改良
KC可能比较适宜作文心兰外植体诱导的基本培养
基。比较 4个处理 ,除 W 24处理外植体褐变外 ,其
余都未褐变。可见 ,添加活性炭或维生素 C是避免
外植体褐变的必要条件。
2. 1. 2　植物激素和添加物对诱导拟原球茎的影响
　将无菌假鳞茎切块、茎尖、无根小苗接种在下列附
加不同激素和添加物的培养基上诱导拟原球茎 ,结
果见表 2。
表 2　外植体在附有不同浓度的激素和添加物的培养基上被诱导拟原球茎的情况
序号 培养基 / (mg·L - 1 )
PLB诱导
率 /%
PLB始出
时间 / d
PLB数量
状况
PLB发育状况
W27 改良 MS + KT0. 05 +NAA0. 5
+蛋白胨 1 000 +AC500
88. 0 12 + + + 假鳞茎基部和茎尖萌出拟原球茎 ,且大于 W28处理
中的 ,数量多 , 40 d开始分化 , 2个半月后有些畸形 ,
分化苗叶片厚 ,不展开
W28 改良 MS + 62BA0. 05 +NAA0. 5
+蛋白胨 1 000 +AC500
120. 0 18 + + 无根苗基部形成许多拟原球茎 ,略小于 W27处理中
的 , 40 d尚未分化 , 2个半月后分化苗厚壮 ,少量畸形
W29 改良 KC + 62BA2 +NAA0. 2
+香蕉泥 1 ×105 +Vc30
77. 8 22 + + + 无根苗基部形成许多 PLB,较小 ,分化苗细弱
W30 改良 KC + 62BA0. 1 +NAA1 +
+香蕉泥 1 ×105 +Vc30
80. 0 10 + + 小苗基部形成很多 PLB,大而厚实 ,分化苗根多、苗尖
发黄
W33 改良 KC + 62BA2 +NAA0. 2 + Vc30 +
香蕉泥 5 ×104 +酵母提取物 1 000
89. 0 20 + + + + 平放小苗近根端形成许多 PLB,假鳞茎基部侧芽萌
出 ,分化苗健壮、生根
W34 改良 KC + 62BA0. 2 +NAA0. 2 + Vc30 +
香蕉泥 5 ×104 +酵母提取物 1 000
42. 0 17 + + 小苗基部形成 PLB, PLB分化
W35 改良 KC + KT0. 05 +NAA0. 5 +香蕉泥
5 ×104 + Vc30 +蛋白胨 1 000
35. 8 13 + + + + 平放小苗近根端形成许多 PLB,假鳞茎上端部形成
PLB, PLB大而多 , PLB分化
W36 改良 KC + 62BA0. 05 +NAA0. 5 +香蕉泥
5 ×104 + Vc30 +蛋白胨 1 000
59. 3 16 + + 未切割假鳞茎基部萌侧芽 ,新 PLB小而圆 ,散开
　　注 : +表示可以诱导出拟原球茎 3个 , + +诱导拟原球茎 5～6个 , + + +诱导拟原球茎 8个以上 , + + + +诱导 13个以上。
分析表 2,比较 W 27、W 28与 W 35、W 36两对处
理 ,可知 KT0. 05 mg·L - 1诱导形成拟原球茎速度较
快 ,数量也较多 ,而 62BA0. 05 mg·L - 1诱导速度较
慢 ,数量也略少 ,当 W 28处理中开始诱导出拟原球
茎时 , W 27 处理中拟原球茎已出现了分化。从
W 27、W 35处理可知 KT不仅诱导无根苗形成拟原
球茎 ,还诱导假鳞茎端部形成拟原球茎 ,大而多。
随着培养时间的延续 (2个半月 ) ,W 27、W 28处
理中拟原球茎和分化苗有畸形趋势 ,与 W 35、W 36
比较 ,改良 MS可能有致畸作用 ,形成的拟原球茎大
而厚实 ,分化苗叶片厚实 ,不展开。由此推断 :改良
KC作为诱导拟原球茎的基本培养基比改良 MS更
适合。
比较 W 29 、W 30与 W 33、W 34两对处理 ,当细
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第 5期 欧阳彤等 :文心兰规模化组培育苗关键技术研究
胞分裂素与生长素比值为 10∶1时 ,诱导拟原球茎数
量多于它们的比值为 1∶10和 1∶1时的处理 ,表明诱
导拟原球茎初期 , 62BA2 mg·L - 1协同 NAA0. 2 mg
·L - 1可以加速拟原球茎增殖 ;比较所有激素处理表
明 : 62BA浓度从 0. 01～210 mg·L - 1 , NAA浓度在
015～110 mg·L - 1都可以诱导形成拟原球茎 ;从
W 33、W 35处理可知 ,无根苗平放易形成更多拟原球
茎 ;比较 W 29和 W 33处理 ,添加酵母提取物有助于
PLB增殖和分化苗健化。
从总体上看 ,各处理均可诱导出拟原球茎 ,但诱
导时间和数量有不同 ,时间最短的是 W 30处理 ,只
需 10 d,无根小苗基部就开始形成拟原球茎。诱导
率最高的是 W 28处理 ,可达 120% ,即 30个外植体
从 36处 (假鳞茎基部隐芽和端部 )诱导出 PLB。诱
导率与拟原球茎数量不呈正相关 ,这与外植体取材
不同有关 ,剪去小根的完全分化苗没有诱导出拟原
球茎 ;而综合考量诱导率、诱导数量及拟原球茎质
量 ,W 33是比较好的诱导处理。
2. 2　拟原球茎增殖与分化培养
将诱导出的拟原球茎转移到增殖培养基上培
养 ,附加糖 30 g·L - 1 ,琼脂 7 g·L - 1 ,活性炭 1 g·
L - 1 ,结果见表 3。
表 3　文心兰拟原球茎增殖与分化培养情况
序号 培养基 / (mg·L - 1 ) 增殖倍数 增殖与分化状况
W37 改良 MS + KT0. 05 +NAA0. 25 15～50 20 d后 ,增殖的 PLB较大 , 1～2 mm,界限分明 , 35 d以后 PLB开始分化 , 7
周后有畸形趋势
W38 改良 MS + 62BA0. 1 +NAA0. 5 10～30 20 d后 ,新增 PLB较小 , ≤1 mm,小苗叶片较宽 , , 35 d后 PLB始分化
W39 改良 MS + KT0. 05 +NAA0. 5 25～40 PLB较大 ,多而旺盛 , 35 d后分化 ,根较多
W40 改良 MS + 62BA0. 05 +NAA0. 5 +
香蕉泥 1 ×105
35～55 PLB多而旺 , 30 d后开始分化
W51 ZW1 + KT0. 05 +NAA0. 25 50以上 PLB大 ,分化苗根数略少
W73 ZW1 + 62BA0. 05 +NAA0. 1 80以上 PLB增殖、分化快 ,多而密实 ,分化苗直立 ,根略少
SY 花宝 1号 +苹果汁 1 ×105 30以上 PLB小而密实 ,分化苗浓绿、密实 ,不易分开
ZW1062Ⅰ ZW +香蕉泥 1 ×105 80～100以上 PLB培养 15 d以后 ,边增殖 ,边分化 ,分化苗根少 , 6周可继代 1次
分析表 3: ( 1 )将 W 37、W 39、W 51处理与 W 38
处理比较可推断 ,由 KT诱导的增殖拟原球茎较大 ,
而 62BA诱导的增殖拟原球茎较小 ; W 37处理表明 ,
随着时间的延续 (7周以后 ) , KT诱导拟原球茎出现
畸形趋势。比较 W 37、W 39、W 51和 W 73、ZW 106处
理 ,随着 NAA 浓度降低 (从 0. 50 mg·L - 1到 0. 25
mg·L - 1到 0. 1 mg·L - 1到 0) ,分化苗根数减少 ;所
有使用 62BA的处理 ,低浓度 62BA ( 0. 05～0. 10 mg
·L - 1 )就可以满足拟原球茎的增殖与分化。 (2)比
较 W 39与 W 40,添加香蕉泥 ,拟原球茎提早分化 5
d,可推断香蕉泥有助于提早启动拟原球茎分化。
(3)在 W 73、ZW 1062Ⅰ处理中拟原球茎增殖与分化
速度快 ,增殖倍数高达数十上百 ,生长周期短 ,表明
中盐浓度的矿质营养更适合文心兰拟原球茎增殖与
分化 ; SY处理为狩野培养基 ,其上增殖的拟原球茎
密实 ,分化苗也密实难分开。
2. 3　壮苗培养
2. 3. 1　基本培养基对壮苗培养的影响 　将分化苗
转入壮苗培养基中培养 (附加糖 30 g·L - 1 ,琼脂 7 g
·L - 1 ,香蕉 100 g·L - 1 ,活性炭 1 g·L - 1 ) ,结果见
表 4。
表 4　文心兰在不同基本培养基中壮苗培养情况
序号 培养基 / ( mg·L - 1 ) 生长状况
W31 改良 KC +NAA0. 1 生长 2个月 ,新叶细长 ,植株开张 ,苗高 8 cm以上 ,叶色浓绿
W32 V&W +NAA0. 1 生长 2个月 ,新叶较宽 ,苗高 8 cm以上 ,叶色较浅 ,
W44 改良 MS + 62BA0. 01 +NAA0. 1 生长 2月 ,叶 5～7片 ,多呈一侧对称排列 ,丛生苗很多 ,株形异常
W692Ⅰ ZW1 +香蕉泥 1 ×105 苗色浓绿发亮 ,苗高 8 cm,壮实 ,株形流畅 ,新根粗壮
W72 ZW2 +香蕉泥 1 ×105 生长势头很小 ,叶片扭曲 ,有畸形苗出现 ,苗高一般在 5 cm左右
W692Ⅱ ZW1 +香蕉泥 1 ×105 - 钙盐 苗僵化 ,不生长 ,不增殖
W106 ZW + 62BA0. 01 +NAA0. 1 生长 2月 ,叶宽而直立 ,苗高 8 cm以上 ,叶色浓绿 ,株形流畅
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林 　业 　科 　学 　研 　究 第 19卷
由表 4可知 :在 W 692Ⅰ、W 72处理中 ,不添加任
何植物激素 ,壮苗培养的结果完全不一样 ,其区别就
在 :基本培养基 ZW 1、ZW 2调整为中盐矿质营养 ,
ZW 1比 ZW 2总盐浓度稍高 ,且含有较多的微量元素
Mn和 Zn。与 W 692Ⅰ比较 ,W 692Ⅱ处理只是缺少一
定量的钙盐 ,苗长成了僵化苗。由此可见钙对文心
兰生长是必不可少的。在改良 KC (W 31处理 )中培
养 ,苗色浓绿 ,但叶细长 ,植株开张 ;在改良 MS中
(W 44处理 ) ,易引起株型异常 ;在 V&W (W 32处理 )
中 ,苗色淡绿 ;W 106处理为调整后的基本培养基 ,中
盐类 ,其 N∶P∶K = 3∶1∶2. 9,苗色浓绿 ,生长健壮 ,株
形流畅 ,是比较合适的基本培养基。结果表明基本
培养基对文心兰瓶苗质量影响很大。
2. 3. 2　植物激素及添加物对壮苗培养的影响 　将
分化苗转入以下培养基中培养 (附加活性炭 1 g·
L - 1 ) ,结果见表 5。
表 5　文心兰在不同激素和附加物的培养基上壮苗培养
序号 培养基 / (mg·L - 1 ) 表现
W76 ZW1 + 62BA0. 3 +NAA0. 1 +蛋白胨 1 000 +糖 3 ×104 苗生长健壮 ,大苗基部形成许多 PLB
W78 ZW1 + 62BA0. 1 +NAA0. 05 +香蕉泥 1 ×105 +糖 3 ×104 苗、根都粗壮 ,大苗基部有少量 PLB
W892Ⅰ ZW3 + 62BA0. 1 +酵母提取物 500 +香蕉泥 1 ×105 +糖 2 ×104 叶色较浅 ,生根较多
W892Ⅱ ZW3 + 62BA0. 1 +酵母提取物 500 +香蕉泥 1 ×105 +糖 3 ×104 小苗长势旺盛 ,叶色较浓绿
W90 ZW + 62BA0. 1 +酵母提取物 500 +香蕉泥 1 ×105 +糖 2. 5 ×104 小苗长势旺盛 ,叶色较绿
W92 ZW +酵母提取物 500 +香蕉泥 1 ×105 +糖 0 (无糖 ) 拟原球茎正常增殖与分化 ,苗色较浅 ,叶片较薄 ,但苗高
同上 ,松口培养 60 d无污染
W98 ZW1 +酵母提取物 500 +香蕉泥 1 ×105 +糖 0 (无糖 ) 色较浅 ,叶片较薄 ,苗高同 W99,松口培养 20 d无污染
W99 ZW1 +酵母提取物 500 +香蕉泥 1 ×105 +糖 2. 5 ×104 色较深 ,叶片略厚
ZW1062Ⅱ ZW +酵母提取物 500 +香蕉泥 1 ×105 +糖 2. 5 ×104 叶色浓绿 ,生长健壮 , 2月苗高 8 cm以上
比较 W 76与 W 78, 62BA较高 (0. 3 mg·L - 1 )的
W 76处理增殖力更强些 , W 78处理的根与苗粗壮 ,
适合壮苗培养 ,低浓度植物激素 (62BA0. 1 mg·L - 1
+NAA0. 05 mg·L - 1 )不影响壮苗培养。蛋白胨对
拟原球茎增殖有利 ,酵母提取物和香蕉泥促进分化
与壮苗。比较 W 892Ⅰ、W 892Ⅱ、W 90,糖浓度 20 g·
L - 1时叶片生长欠佳 , 25 g·L - 1时可以满足正常生
长需求 , 30 g·L - 1更有利于培养壮苗。比较 W 92、
W 98、W 99可知 :在合适的培养条件下 ,没有糖 ,文心
兰基本可以正常生长 ,只是叶片较薄 ,证明离体培养
条件下 ,文心兰可以自养生长。无糖培养为降低生
产成本 ,减少污染提供了一个可以探索的途径。
ZW 1062Ⅱ处理的培养基 ,调整总盐为 2 300～2 600
mg·L - 1 , N∶P∶K = 3∶1∶2. 9,在此培养基中 ,苗色浓
绿 ,生长健壮 ,可适用于规模化生产。
2. 4　生根培养
将经过壮苗培养 ,苗高 4 cm以上的苗转至生根
培养基 (附加糖 25 g·L - 1 ,活性炭 1 g·L - 1 ,香蕉泥
100 g·L - 1 ) ,结果见表 6。
表 6　文心兰生根培养情况
序号 培养基 / (mg·L - 1 ) 表现
W31 改良 KC +NAA0. 1 45 d后 ,萌侧芽 ,长新根 ,叶色深绿 ,株形较开张
W32 V&W +NAA0. 1 同上 ,叶色略浅 ,株形流畅 , 2月苗高 8 cm以上 ,形成假鳞茎
W43 改良 MS +NAA0. 3 叶片开张较甚 ,苗高明显不及 W46, 70 d后根多丛生苗多 ,叶片单侧对生 ,畸形率高达 28%
W44 改良 MS +NAA0. 1 + 62BA0. 01 叶片开张较甚 , 70 d后根多 ,丛生苗多 ,挤作一团 ,生长点不明显 ,苗高 6 cm左右 , 畸形率高达 33%
W45 V&W +NAA0. 3 45 d苗高 8 cm,株形流畅 ,根很多 ,缠绕
W46 V&W +NAA0. 1 + 62BA0. 01 株形流畅 , 70 d苗高 12 cm,叶色略浅 ,根多较粗壮 ,假鳞茎较饱满
W79 V&W +NAA0. 1 根较细长 ,植株长势不及 W46, 70 d苗高 6～8 cm
W113 ZW + IBA0. 1 20 d出新根点 ,根粗壮 ,苗长势较好 ,株型较流畅 , 7周后形成假鳞茎
比较 W 43与 W 45,W 44与 W 46,激素种类、水平
都一致 ,不同的只是基本培养基。结果 4个处理生
根培养表现差异极大 ,尤其是 W 43、W 44处理畸形
苗所占比例分别达到 28%和 33%。再次证明 ,基本
016
第 5期 欧阳彤等 :文心兰规模化组培育苗关键技术研究
培养基对文心兰组培育苗影响显著 ,改良 MS致畸
率较高 ,改良 KC叶片比较开张 ,不方便操作 , V&W
培养叶色较浅 ,叶型较细 ;比较 W 46与 W 79,可以推
断 , 62BA与 NAA很可能有协同促进生根作用。上
述培养均可诱导生根 , 2个月生根率为 100%。在
W 113中作生根培养 , 2周后即有根点长出 ,新根粗
壮 ,生根苗浓绿 ,畸形率低 ,较适宜文心兰生根培养。
2. 5　瓶苗移植
经过自然光照 3 d、半敞口 2 d、全敞口 2 d的一
周练苗模式 ,改善了瓶苗叶片的表皮结构 ,激活了表
皮气孔功能 ,极大地提高了瓶苗适应环境的能力 ,辅
之以透气、保湿的水苔和椰丝混和移植介质 , 1月内
移植成活率可达 85%以上。
3　结论与讨论
综上所述 ,对文心兰组培规模化育苗技术的研
究 ,有以下结论 : ( 1 )当 62BA 0. 1 ～2 mg·L - 1 ,
NAA0. 1～1 mg·L - 1时 ,可诱导拟原球茎形成与增
殖 ;诱导初期 62BA2 mg·L - 1协同 NAA0. 2 mg·L - 1
有助于增加繁殖基数 ; 62BA0. 05～0. 1 mg·L - 1或附
加 NAA0. 1 mg·L - 1 ,就可以满足拟原球茎的增殖与
分化 ;添加 NAA、IBA 0. 1～1 mg·L - 1时 ,均可诱导
生根 ; (2)低浓度 62BA (0. 01～0. 1 mg·L - 1 )和中盐
浓度矿质营养 ZW培养基有助于降低壮苗培养畸形
率 ; (3)添加活性炭 1 000 mg·L - 1和维生素 C30 mg
·L - 1对减轻外植体褐化是必要的 ; 500～1 000 mg
·L - 1蛋白胨或酵母提取物可促进诱导拟原球茎 ;添
加香蕉泥 100 g·L - 1有助于拟原球茎分化和瓶苗健
化 ; (4)基本培养基 (MS、改良 MS、V&W、改良 KC)
对文心兰组培各阶段均有影响 ,改良 MS高盐类培
养基致畸比例较高 ;自制 ZW 培养基为中盐矿质营
养 (总盐 2 300～2 600 mg·L - 1 ) , N∶P∶K = 3∶1∶2.
9,文心兰在其中生长健壮 ; ( 5)文心兰可以在无糖
培养基中自养生长。
当外植体为无菌苗时 ,多处于幼态 ,故而较容易
诱导出拟原球茎 ,诱导率与拟原球茎形成数不完全
一致 ,与所接的外植体状况不同有关。实验中用
固 —液交替培养加快了增殖速度。
KT在诱导拟原球茎初期有促进作用 ,而后期有
致畸作用 ,使用要慎重 ,诱导出拟原球茎后及时转移
至无 KT、低 62BA的培养基中增殖培养可有效避免
畸形发生。
自制培养基 ZW 是在 V&W 培养基的基础上提
高 N、P、K含量 ,调整总盐浓度到 2 300 ～2 600 mg
·L - 1 ,使 N∶P∶K之比为 3∶1∶2. 9,添加微量元素
Na2MoO4 ·2H2 O 0. 25mg·L - 1 ,从而更适合文心兰
增殖与健化。狩野培养基用于文心兰组培是一方便
的选择 ,但还需进一步调整。
瓶苗分级转移、壮苗培养阶段的生根控制以及
苗型调控 ,都对规模化生产的操作有较大的影响 [ 6 ]。
无糖培养既可降低成本 ,又可减少污染 ,是一个值得
继续探讨的方向。
此外 ,还试验了通过加装透气膜、透气筛来调整
培养容器的透气性和微环境湿度 ,改变封口方式和
光照方向 ,提高光照效率 ,都对瓶苗质量产生了有利
的影响。
参考文献 :
[ 1 ] 彭晓明 ,曾宋君 ,张京丽 ,等. 文心兰的茎尖及花梗组织培养和快
速繁殖 [ J ]. 园艺学报 , 2000, 27 (2) : 127～129
[ 2 ] 陈发菊 ,陈菽 ,万小明. 活性炭和椰乳对文心兰离体芽尖培养的
影响 [ J ]. 实用医学进修杂志 , 2000, 28 (4) : 219～221
[ 3 ] 何松林 ,孔德政 ,杨秋生 ,等. 组织培养容器环境因子调控技术研
究进展 [ J ]. 河南农业大学学报 , 2003, 37 (1) : 25～32
[ 4 ] 曹孜义. 实用植物组织培养技术教程 [M ]. 兰州 :甘肃科学技术
出版社 , 1996: 35～41
[ 5 ] 加古舜治. 园艺植物器官与组织培养 [M ]. 王玉璞 ,关贵武 ,方允
贵 ,等译. 郑州 :河南科学技术出版社 , 1987: 293～301
[ 6 ] 熊丽 ,吴丽芳. 观赏花卉的植物组织培养与大规模生产 [M ]. 北
京 :化学工业出版社 , 2003: 71～79
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