全 文 ：第 ww卷 第 v期
u s s {年 v 月
林 业 科 学
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油茶 ƒ„⁄u基因全长 ¦⁄‘„的克隆和序列分析
谭晓风 陈鸿鹏 张党权 曾艳玲 李 魏 蒋 瑶 谢禄山 胡孝义 胡芳名
k中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室 长沙 wtssswl
摘 要 } ƒ„⁄u基因控制油酸转化为亚油酸 o是油茶油脂合成代谢的关键酶基因 ∀在构建的油茶 ∞≥× 文库基础
上 o采用 xχ• „≤∞和交错延伸 °≤• 技术获得了油茶 ƒ„⁄u基因的全长 ¦⁄‘„克隆 ∀该基因序列长 t y{u ¥³o开放阅读
框为 t tw| ¥³o编码 v{u个氨基酸 o并且具有 ƒ„⁄u特有的保守序列和相关特征 ∀经过比对分析 o发现油茶的 ƒ„⁄u
基因与其他植物的 ƒ„⁄u基因具有较高的相似性 ∀
关键词 } 油茶 ~∞≥×文库 ~ƒ„⁄u基因 ~ • „≤∞~交错延伸 °≤• ~基因克隆
中图分类号 }≥zt{1wy ~±|wv1u 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kuss{lsv p sszs p sy
收稿日期 }ussz p s| p uw ∀
基金项目 }国家 / 十一五0科技支撑项目 kussy…„⁄t{…susw oussy…„⁄st„tzsyl o国家自然科学基金 kvsvztt{wl o湖南省自然科学基金
kszvszsl o湖南省科学技术厅科技计划项目ksyƒwtttl ∀
Χλονινγ οφ Φυλλ2Λενγτη χ∆ΝΑ οφ ΦΑ∆u Γενεφροµ Χαµελλια ολειφερα
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Αβστραχτ } Χαµελλια Ολειφερᬶ¤±¬°³²µ·¤±·²¬¯2³µ²§∏¦¬±ªº²²§¼¶³¨¦¬¨¶¬± ≤«¬±¤o¤±§·«¨ ²¬¯o¦¤¯¯¨ §¤¶·¨¤2²¬¯o¦¤± ¥¨ ∏¶¨§
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ολειφερᤱ§«¤√¨ ¬°³²µ·¤±·¬°³¤¦·²± ·«¨²µ¼ ¤±§¤³³¯¬¦¤·¬²±q ƒ∏¯¯ 2¯ ±¨ª·«¦⁄‘„ ¦¯²±¨ ²© ƒ„⁄u ª¨ ±¨ º¤¶©²µ·«¨ ©¬µ¶··¬°¨
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Κεψ ωορδσ} Χαµελλια ολειφερα~∞≥× ¬¯¥µ¤µ¼~ƒ„⁄u ª¨ ±¨ ~ • „≤∞~’√¨ µ¯¤³∞¬·¨±¶¬²± °≤• ~ª¨ ±¨ ¦¯²±¬±ª
油茶k Χαµελλια ολειφεραl是我国南方重要的木本油料树种 o用其种子榨取的茶油富含油酸 !亚油酸和亚麻
酸等不饱和脂肪酸 o营养价值较高k胡芳名等 oussy ~廖书娟等 oussxl ∀茶油还是制造优质化妆品的原料 o也
可作为优质生物柴油使用 ∀在油茶的油脂合成代谢过程中 o油酸经硬脂酸脱氢而来 o由 ≥„⁄基因控制 ~而亚
油酸和亚麻酸等多不饱和脂肪酸则是在 ƒ„⁄基因家族的控制下 o由油酸经过脱氢形成的 ∀ ƒ„⁄u的主要功
能是在油酸的第 tu和第 tv位碳原子之间形成双键 o生成亚油酸 o因此 ƒ„⁄u决定了油酸与亚油酸的比例 ∀
ussw年 o作者以优良无性系湘林 t号和湘林 w号的近成熟种子构建了高质量的 ¦⁄‘„文库k胡芳名等 oussw ~
谭晓风等 oussxl o并在此基础上又构建了相应的高代表性 ∞≥×文库k谭晓风等 oussyl o从中发现了 t条 ƒ„⁄u
基因片段 o经分析确认为非全长的 ¦⁄‘„序列 ∀分离克隆该基因对于揭示油茶油脂合成的基本规律具有重
大的理论意义 o对于油茶的分子育种具有重大的实用价值 ∀为得到该基因的全长 ¦⁄‘„序列 o采用 xχ• „≤∞
技术k≤«¨ ±¦«¬® ετ αλqot||{l和交错延伸 °≤• 技术开展了以获得油茶 ƒ„⁄u基因全长 ¦⁄‘„的研究 ∀
t 材料与方法
111 材料
ussy年 |月下旬 o湘林 t 号油茶的近成熟果实采自湖南省林业科学研究院油茶采穗圃 o洗净后于
p zx ε 超低温冰箱保存 ∀油茶近成熟种子的 ¦⁄‘„文库为作者所在实验室构建 o其相应的 ∞≥×文库和大肠
杆菌 ⁄‹xΑ也为作者所在实验室保存 ∀³⁄t{2× 质粒载体 !ײ·¤¯ • ‘„ °∏µ¬©¬¦¤·¬²± ≥¼¶·¨° !≥„• × • „≤∞ Ž¬·!
°∏³µ¨³ Š¨ ¯ ∞¬·µ¤¦·¬²± Ž¬·等分别购自 פŽ¤•¤!Œ±√¬·µ²ª¨± !≤¯ ²±·¨¦«!„°¥¬²ª¨ ±公司 o⁄∞°≤ !‹u ’u !×µ¬¶!∞⁄ׄ !无水
乙醇 !∞… !Βp巯基乙醇等均为分析纯 ∀
112 方法
t1u1t 油茶 ¦⁄‘„文库中 ƒ„⁄u基因的分离 将油茶 ¦⁄‘„文库中的 ƒ„⁄u基因的克隆进行活化 o对重组子
进行 ×v和 ×z双向测序 o并应用软件 ∂ ¦¨·²µ‘׌|1s分析测序结果 o在网上进行 …„≥× ÷ 比对分析 ∀
t1u1u 油茶种子总 • ‘„提取 将超低温保存的湘林 t号油茶果实迅速取出 o去除果壳和种皮 o称质量并记
录 o在液氮中研磨种仁 o用 ײ·¤¯ • ‘„ °∏µ¬©¬¦¤·¬²± ≥¼¶·¨°提取油茶种子的总 • ‘„ ∀
t1u1v • „≤∞扩增与克隆鉴定 首先根据文库中 ƒ„⁄u基因的 ¦⁄‘„序列 o使用软件 °µ¬°¨ µ°µ¨°¬¨µx1s设计
t个特异的下游引物 Š≥° }xχ p Š×ŠŠ×Š„≤ŠŠ≤ŠŠ×Š„≤׊ׄ×××≤ p vχk上海生工公司合成l ∀参照 ≥„• ×2
• „≤∞ ®¬·说明书上的步骤进行逆转录反应 ∀用 °∏³µ¨³ Š¨ ¯ ∞¬·µ¤¦·¬²± Ž¬·回收 • „≤∞产物 o并通过 ׄ克隆法将
xχ• „≤∞产物连接至载体 ³⁄t{2× o转化大肠杆菌 ⁄‹xΑ∀在含有 ÷2ª¤¯ 和 Œ°×Š及氨苄青霉素的 …平板上进
行蓝白斑筛选 o挑取单菌落于含有相同浓度氨苄青霉素的液体 …中 o过夜培养 ∀采用碱式裂解法提取质粒
⁄‘„ o°≤• 鉴定重组子 o最后对重组子测序 ∀
t1u1w 交错延伸 °≤• 扩增油茶 ƒ„⁄u基因全长 ¦⁄‘„ 根据 ∞≥×序列和 • „≤∞技术获得的部分序列拼接成
的 ƒ„⁄u全长 ¦⁄‘„序列 o设计交错延伸 °≤• 引物 ’∞2ƒt和 ’∞2• t o’∞2ƒu和 ’∞2• u o其中 ’∞2ƒt和 ’∞2• u分
别位于全长 ¦⁄‘„序列的两端 o’∞2• t和 ’∞2ƒu位于 xχ • „≤∞序列与文库中 ƒ„⁄u 基因的 ¦⁄‘„序列的重叠
区 o且有 tv ¥³的重叠 o引物由上海生工公司合成 o序列如下 }
’∞2ƒt } xχ p ×≤ׄ„ׄ≤Š„≤×≤„≤ׄׄŠŠŠ≤„„Š p vχ ~’∞2• t } xχ p „≤„≤„„≤≤×׊„„Š×Š≤≤≤„Š p vχ ~
’∞2ƒu }xχ p ××≤„„ŠŠ×׊׊×≤≤×≤„≤׊Š× p vχ ~’∞2• u }xχ p ≤ׄ≤„׊××≤„×ׄ≤„ׄ≤≤„„„Š≤≤ p vχ ∀
用 ’∞2ƒt和 ’∞2• t扩增 xχ• „≤∞重组质粒 ⁄‘„ o’∞2ƒu和 ’∞2• u扩增文库中的 ƒ„⁄u基因的质粒 ⁄‘„ o
所得产物分别命名为 ×t和 ×u ou个反应体系见表 t ∀反应条件为 }|w ε 预变性 v °¬±~|w ε 变性 vs ¶oy{ ε
退火 vs ¶ozu ε 延伸 v °¬±ovx个循环 ~zu ε 延伸 ts °¬±~w ε 终止反应 ∀
°≤• 反应结束后 o电泳检测并分别回收 ×t和 ×u ∀在 uss ˏ无菌离心管中加入 t1s ˏ°©∏oy1s ˏ¥∏©©¨µo
y1s ˏ§‘×° ¬¬ots1s ˏ×t ots1s ˏ×u out1s ˏ超纯水后 o进行交错 °≤• ∀反应条件为 }|w ε 预变性 x °¬±~
|w ε 变性 wx ¶oxx ε 退火 t °¬±ozu ε 延伸 zs ¶ox个循环 ~zu ε o延伸 ts °¬±~w ε x °¬±终止反应 ∀反应结
束后 o立刻取出离心管 o加入 v1s ˏ’∞2ƒt ov1s ˏ’∞2• u o混匀 o置入 °≤• 仪中 o反应条件为 }|w ε 预变性 x
°¬±~|w ε 变性 wx ¶oys ε 退火 wx ¶ozu ε 延伸 u °¬±ovx个循环 ~zu ε 延伸 x °¬±~w ε 终止反应 ∀最后电泳
检测并回收 ∀
将交错延伸 °≤• 产物进行回收 !克隆 !转化 !提取质粒 ⁄‘„ !°≤• 检测等常规分子生物学操作后 o再对重
组子进行双向测序 ∀
表 1 Τ1 和 Τ2 的 ΠΧΡ 反应体系
Ταβ .1 ΠΧΡ ρεαχτιον σψστεµσ οφ Τ1 ανδ Τ2
×t的反应体系 °≤• µ¨¤¦·¬²± ¶¼¶·¨° ²©×t ×u的反应体系 °≤• µ¨¤¦·¬²± ¶¼¶·¨° ²©×u
°©∏ s1x ˏ °©∏ s1x ˏ
ts ≅ °©∏¥∏©©¨µ x ˏ ts ≅ °©∏¥∏©©¨µ x ˏ
§‘×°¶ w ˏ §‘×°¶ w ˏ
引物 ’∞2ƒt °µ¬° µ¨’∞2ƒt s1x ˏ 引物 ’∞2ƒu °µ¬°¨ µ’∞2ƒu s1x ˏ
引物 ’∞2• t °µ¬° µ¨’∞2• t s1x ˏ 引物 ’∞2• u °µ¬°¨ µ’∞2• u s1x ˏ
xχ• „≤∞的重组质粒 ⁄‘„
• ¦¨²°¥¬±¤±·³¯¤¶°¬§⁄‘„ ²©xχ• „≤∞ t1x ˏ
文库中 ƒ„⁄u基因的重组质粒 ⁄‘„
• ¦¨²°¥¬±¤±·³¯¤¶°¬§⁄‘„ ²©ƒ„⁄u ¬± ¦⁄‘„ ¬¯¥µ¤µ¼ t1x ˏ
超纯水 ˜¯·µ¤2³∏µ¨ º¤·¨µ v{ ˏ 超纯水 ˜¯·µ¤2³∏µ¨ º¤·¨µ v{ ˏ
共 计 ײ·¤¯ xs ˏ 共 计 ײ·¤¯ xs ˏ
u 结果与分析
211 5χΡΑΧΕ产物的克隆与测序
• „≤∞反应结束后 o对其产物进行电泳检测 o获得了图 t的结果 ∀从图中可以看出 o⁄‘„条带清晰特异 o
tz 第 v期 谭晓风等 }油茶 ƒ„⁄u基因全长 ¦⁄‘„的克隆和序列分析
大小约为 yws ¥³o符合预期目的片段的大小 o说明此条带即为 • „≤∞的扩增产物 ∀ • „≤∞产物转化感受态大
肠杆菌后 o提取质粒 ⁄‘„ o经 °≤• 检测获得图 u的电泳结果 ∀在图 u中 oy个 °≤• 产物在 yws ¥³处均有与
• „≤∞产物大小接近的 ⁄‘„条带 o说明随机挑取的 y个克隆均为阳性 ∀选取其中 t个克隆进行测序 o结果显
示该片段长 yvy ¥³o与原来的 ¦⁄‘„片段重合 t|s ¥³o包括 xχ非编码区 usv ¥³和编码区 wvv ¥³o编码 ‘端 tww
个氨基酸残基 ∀通过网上 …„≥×分析 o该片段与其他油料植物的 ƒ„⁄u基因的相似性达到了 {x h以上 o由此
确认所得片段为 ƒ„⁄u基因的 xχ端的部分序列 ∀
图 t xχ • „≤∞产物电泳图
ƒ¬ªqt ∞¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶³¤·¨µ± ²©xχ • „≤∞ ³µ²§∏¦·
图 u °≤• 鉴定重组子
ƒ¬ªqu Œ§¨±·¬©¬¦¤·¬²± ²©µ¨¦²°¥¬±¤±·¶¥¼ °≤•
212 交错延伸 ΠΧΡ 扩增产物分析
将 °≤• 扩增得到的 ×t和 ×u进行电泳检测k图 vl ∀图 v中 o×t条带清晰特异 o大小约 xss ¥³o×u在 t uss
¥³左右处有 t条特异条带 o这与引物的设计和预期的长度相符 ∀采用交错延伸 °≤• 技术对 ×t和 ×u进行重
组 o获得油茶 ƒ„⁄u基因的全长 ¦⁄‘„ o得到图 w的电泳结果 ∀从图 w看出 o交错延伸 °≤• 的产物约长 t zss
¥³o恰好为除去重叠部分以外的 ×t与 ×u的长度之和 o说明此产物为油茶 ƒ„⁄u基因的全长 ¦⁄‘„ ∀
图 v ×t !×u电泳结果
ƒ¬ªqv ׫¨ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶µ¨¶∏¯·²©×t ¤±§×u
图 w 交错延伸 °≤• 产物电泳结果
ƒ¬ªqw ׫¨ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶µ¨¶∏¯·²©
’√¨ µ¯¤³ ∞¬·¨±¶¬²± °≤•
213 油茶 ΦΑ∆2基因的全长 χ∆ΝΑ序列分析
将 xχ• „≤∞测序结果与原来文库中的序列进行拼接 o得到了 t条长 t y{u ¥³的 ¦⁄‘„序列 o并且此序列
与交错延伸 °≤• 产物的测序结果完全一致 o其 ¦⁄‘„序列及推导的氨基酸序列见图 x ∀序列分析结果表明 o
该 ¦⁄‘„含有 t个 t tw| ¥³的编码框 o编码 v{u个氨基酸 oxχ非编码区长 usv ¥³ovχ非编码区长 vtt ¥³o有 t个
长 t| ¥³的 ³²¯¼„尾 ∀ ƒ„⁄u的活性作用位点是特有的 v个组氨酸簇k²¶ ετ αλqot||{ ~≥«¤±®¯¬± ετ αλqot||{l ∀
将油茶 ƒ„⁄u 推导的蛋白质序列提交到网上进行结构预测后 o发现有 v 个保守性很高的组氨酸簇 ) ) )
‹∞≤Š‹‹ !‹• ‹‹和 ‹∂ „‹‹ o分别在此序列的 tsw ∗ ts| !tws ∗ tww !vty ∗ vus的位置 o在图 x中分别用红色阴
影部分表示 ∀其中第 t个和第 u个组氨酸簇相隔为 vs个氨基酸 o距离比较短 o而第 u个与第 v个之间的距离
较远 o这个预测结果与其他不同来源的 ∃tu p ƒ„⁄u的氨基酸簇的特征相同 o由此可以进一步确认此¦⁄‘„序
列为 ∃tu p ƒ„⁄u的编码序列 ∀
将此序列在 ‘≤…Œ网站上进行 …¯¤¶·÷ 比对分析 o并将部分比对结果列于表 u ∀从表 u中可以看出 o油茶
uz 林 业 科 学 ww卷
图 x 油茶 ƒ„⁄u的 ¦⁄‘„序列与推导的蛋白质序列
ƒ¬ªqx ¦⁄‘„ ¤±§§¨§∏¦¨§³µ²·¨¬± ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶²©ƒ„⁄u ª¨ ±¨ ©µ²° Χαµελλια ολειφερα
„׊是起始密码子 o׊„是终止密码子 o’∞2ƒt ! ’∞2• t ! ’∞2ƒu和 ’∞2• u是交错延伸 °≤• 的引物 ∀箭头标注的位置为交错
延伸 °≤• 的引物 o下划线表示 xχ• „≤∞产物与文库中 ƒ„⁄u基因 ¦⁄‘„ 的重叠区 ov个组氨酸簇用阴影标注 ∀ „׊ ¬¶¶·¤µ·
¦²§²± o׊„ ¬¶¶·²³¦²§²±o’∞2ƒt o’∞2• t o’∞2ƒu ¤±§’∞2• u ¤µ¨ ·«¨ ³µ¬° µ¨¶©²µ’√¨ µ¯¤³∞¬·¨±¶¬²± °≤• qƒ²∏µ¤µµ²º¶°¤µ® ’∞³µ¬°¨ µ¶o
·«¨ ³¤µ·∏±§¨µ¯¬±¨ §¬¶·«¨ ²√ µ¨¯¤³²© • „≤∞ ³µ²§∏¦·º¬·«ƒ„⁄u ¦⁄‘„ ¬±·«¨ ¬¯¥µ¤µ¼o¤±§·«µ¨¨ ‹¬¶¦¯∏¶·¨µ¶¤µ¨ °¤µ®¨ §¥¼ ¶«¤§²º q
的 ƒ„⁄u基因同其他物种的 ƒ„⁄u基因相似性很高 o最高达到了 {{ h o并且同油料植物油橄榄k Σεσαµυµ
ινδιχυµl的相似性为 {z h o推测它们在功能以及结构上可能相似 ∀
将油茶的 ƒ„⁄u与其他植物的 ƒ„⁄u的蛋白质序列进行亲缘关系分析 ∀结果表明 o在 ƒ„⁄u的亲缘关系
进化树中 o这些物种在遗传进化上主要分为 v类 o其中 o拟南芥 !欧洲油菜 !亚麻 !旱金莲 !麻疯树 !油桐 !千年
桐 !蓖麻 !杨树亲缘关系较近 o向日葵 !菠菜和鳄梨的亲缘关系较近 o花生 !大豆 !茄子 !石榴和油茶等属于第 u
类 o并且油茶与油橄榄的 ƒ„⁄u的亲缘关系最接近k图 yl ∀
v 讨论
≤’‘×∞≤‹公司的/ ײ∏¦«§²º± °≤• 0技术增强了 • „≤∞产物的特异性 ∀引物设计是 • „≤∞成功的关键 ∀
一般采用 Š≤含量kxs h ∗ zs h l和 Τ° 值kzs ε 以上l较高的引物 o才可以进行 ײ∏¦«§²º± °≤• ∀在用 ˜° 和
vz 第 v期 谭晓风等 }油茶 ƒ„⁄u基因全长 ¦⁄‘„的克隆和序列分析
表 2 油茶 ΦΑ∆2 基因的全长 χ∆ΝΑ序列的 Βλαστ Ξ 结果
Ταβ .2 Βλαστ Ξ ρεσυλτ οφ φυλλ2λενγτη χ∆ΝΑ οφ ΦΑ∆2 φροµ Χ . ολειφερα
种 ≥³¨¦¬¨¶ 基因名称 Š¨ ±¨ ±¤° ¶¨ 相似性 ≥¬°¨¯¤µ¬·¼
芝麻 Σεσαµυµ ινδιχυµ Ξy2ƒ„⁄u vvuΠvz{ k{z h l
油橄榄 Ολεα ευροπαεα ∃tu2ƒ„⁄u vu|Πvz{ k{z h l
蓖麻 Ριχινυσ χοµ µυνισ ∃tu2ƒ„⁄u vuxΠvz{ k{x h l
石榴 Πυνιχα γρανατυµ ∃tu2ƒ„⁄u vtyΠvx{ k{{ h l
油桐 ςερνιχια φορδιι ∃tu2ƒ„⁄u vuxΠvzy k{y h l
马铃薯 Σολανυµ χοµ µερσονιι ∃tu2ƒ„⁄u vusΠvzz k{w h l
橡胶树 Ηεϖεα βρασιλιενσισ Ξy2ƒ„⁄u vuyΠvz{ k{y h l
千年桐 ςερνιχια µοντανα ∃tu2ƒ„⁄u vuwΠvzy k{y h l
西葫芦 Χυχυρβιτα πεπο Ξy2ƒ„⁄u vtvΠvyt k{y h l
陆地棉 Γοσσψπιυµ ηιρσυτυµ ∃tu2ƒ„⁄u vu|Πvz{ k{z h l
麻疯树 ϑατροπηα χυρχασ ∃tu2ƒ„⁄u vuvΠvz| k{x h l
烟草 Νιχοτιανα ταβαχυµ Ξy2ƒ„⁄u vtxΠvys k{z h l
大豆 Γλψχινε µαξ Ξy2ƒ„⁄u vtxΠvzz k{v h l
旱金莲 Τροπαεολυµ µαϕυσ ∃tu2ƒ„⁄u vtyΠvzz k{v h l
亚麻 Λινυµ υσιτατισσιµυµ ∃tu2ƒ„⁄u vusΠvzy k{x h l
Š≥°进行 °≤• 反应时 o虽然可能出现
非目的条带或无扩增带的情况 o但可
通过升高或降低退火温度来解决 ∀再
经过 ‘˜°和 ‘Š≥°扩增后 o扩增产物
的特异性会得到进一步的增强 ∀本研
究中 o通过 ˜° 和 Š≥°扩增即得到非
常特异的条带 o故省去用 ‘˜° 和
‘Š≥°扩增一步 ∀
交错延伸 °≤• 技术又称重叠延
伸 °≤• o是 ‹²µ·²±等kt|{|l创建的一
种技术 o并应用该技术成功地构建了
一种杂交基因 o其原理主要是通过寡
聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭
桥 !互为模板进行 °≤• 扩增 o从而获
得目的 ⁄‘„ 基因片段 ∀在重叠延伸
°≤• 反应中 o引物的设计是整个试验
图 y 几种植物的 ƒ„⁄u的亲缘关系进化树
ƒ¬ªqy °«¼¯²ª¨ ±¨ ·¬¦·µ¨¨¥¤¶¨§²± ƒ„⁄u ²© Χq ολειφερα ¤±§²·«¨µ¶³¨¦¬¨¶
最重要的一个环节 ∀本研究巧妙地设计了 u对引物 o尤其是 ’∞2• t与 ’∞2ƒu有 tv ¥³的反向互补 o使得 ×t
和 ×u有 tv ¥³的重叠区 o进而将 ×t和 ×u拼接成油茶 ƒ„⁄u基因的全长 ¦⁄‘„ ∀
本研究在已建立的油茶 ¦⁄‘„文库的基础上 o根据油茶的 ƒ„⁄u基因片段设计引物 o进行 xχ• „≤∞扩增 o
获得了油茶 ƒ„⁄u基因 ¦⁄‘„的 xχ端部分 ¦⁄‘„ o利用交错延伸 °≤• 技术将 xχ• „≤∞扩增片段与原来的 ¦⁄‘„
部分片段拼接成油茶 ƒ„⁄u基因的全长 ¦⁄‘„ o为油茶 ƒ„⁄u基因的结构和 ƒ„⁄u的功能研究 o以及转基因应
用奠定了基础 ∀ ƒ„⁄u基因已经从大豆 !花生 !芝麻等很多植物中克隆得到 o但对油茶中 ƒ„⁄u基因的研究本
文为首次报道 ∀今后将在此研究的基础上 o构建合适的原核表达载体 o对目的蛋白进行检测 !回收 o对其进行
酶活性鉴定等 ∀
wz 林 业 科 学 ww卷
参 考 文 献
胡芳名 o谭晓风 o刘惠民 o等 qussy1 中国主要经济树种栽培与利用 q北京 }中国林业出版社 ovzs p v{v1
胡芳名 o谭晓风 o石明旺 o等 qussw1 油茶种子 ¦⁄‘„文库的构建 q中南林学院学报 ouwkxl }t p x1
廖书娟 o吉当玲 o童荣华 qussx1 茶油脂肪酸组成及其营养保健功能 q粮食与油脂 okyl }z p |1
谭晓风 o胡芳名 o谢禄山 o等 qussx1 油茶近成熟种子表达的发育相关基因及其分析 q中南林学院学报 ouxkwl }tz p uv1
谭晓风 o胡芳名 o谢禄山 o等 qussy1 油茶种子 ∞≥×文库构建及主要表达基因的分析 q林业科学 owuktl }wv p w{1
≤«¨ ±¦«¬® „ o«∏ ≠ ≠ o⁄¬¤·¦«¨ ±®²o ετ αλqt||{1 Š¨ ±¨ µ¤·¬²± ¤±§∏¶¨ ²©«¬ª«2 ∏´¤¯¬·¼¦⁄‘„ ©µ²°¶°¤¯¯¤°²∏±·¶²©·²·¤¯ • ‘„ ¥¼ ≥ „• × °≤• q…¬²× ¦¨«±¬´∏¨¶
…²²®¶o„ }vsx p vt|1
‹²µ·²± •  o ‹∏±·‹ ⁄o ‹² ≥ ‘o ετ αλqt|{|1 ∞±ª¬±±¨ µ¬±ª«¼¥µ¬§ª¨ ±¨ º¬·«²∏··«¨ ∏¶¨ ²©µ¨¶·µ¬¦·¬²± ±¨½¼°¨ ¶}ª¨ ±¨ ¶³¯¬¦¬±ª¥¼ ²√¨ µ¯¤³ ¬¨·¨±·¬²±q Š¨ ±¨ ozz
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≥«¤±®¯¬± o≤¤«²²± ∞ …qt||{1 ⁄¨ ¶¤·∏µ¤·¬²± ¤±§µ¨ ¤¯·¨§ °²§¬©¬¦¤·¬²±¶²©©¤·¼ ¤¦¬§¶q„±± • √¨ °¯ ¤±·°«¼¶¬²¯ °¯ ¤±·²¯ …¬²¯ ow|kyl }ytt p ywt1
k责任编辑 徐 红l
5工程索道与柔性吊桥 ) ) ) 理论设计案例6
5工程索道与柔性吊桥 ) ) ) 理论设计案例6k周新年著 o人民交通出版社 ouss{l注重理论与实践的紧密结
合 o注重理论推导 !工程设计和案例分析 ∀在结合作者科研和教学实践的基础上 o前 u章阐明工程索道的基
础理论和基本方法 !基本结构和架设技术 ~后 x章为客运索道设计 !滑索设计 !林业索道设计 !货运索道设计
和柔性吊桥设计等 o主要阐述各种工程索道和柔性吊桥的配套设备与设施的设计 o尤其注意案例解析 ∀本书
适用于交通运输 !土木工程 !森林工程 !采矿工程 !冶金工程 !水利水电工程 !环境工程 !农业建筑与能源工程
等大学本科专业教学用书 ∀后 x章可作为硕士研究生教材 o也可供工程索道与柔性吊桥的科研 !工程设计和
管理人员参考 ∀著者主持的/工程索道0课程 oussx年获福建省优质硕士学位课程立项建设 oussz年获福建
省本科精品课程 ∀
订购者通过邮局汇款 o并请注明/购书款0 o详细收书地址 o以及平装 !精装册数 o款到立即邮书 ∀单价k含
邮资l }平装 wv qss元 ~精装 xv qss元 ∀收款地址 }vxsssu福建省福州市金山 }福建农林大学交通学院 周新年 ∀
xz 第 v期 谭晓风等 }油茶 ƒ„⁄u基因全长 ¦⁄‘„的克隆和序列分析