全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2009, 36 (8) : 1177 - 1183
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2009 - 04 - 20; 修回日期 : 2009 - 06 - 23
基金项目 : 新疆维吾尔自治区自然科学基金项目 (200721106)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: guoaiguang@yahoo1com1cn; lxf3838@1631com)
哈密瓜 ACC合成酶基因 cDNA的克隆及全序列分析
丁群英 1, 3 , 张　瑞 2 , 廖新福 23 , 郭蔼光 1, 33
(1 西北农林科技大学生命科学学院 , 陕西杨凌 712100; 2 新疆维吾尔自治区葡萄瓜果开发研究中心 , 新疆鄯善
838201; 3 西北农林科技大学陕西省农业分子生物学实验室 , 陕西杨凌 712100)
摘 　要 : 以新疆哈密瓜 (Cucum is m elo L. ) 幼叶为材料 , 根据已报道的甜瓜 ACC合成酶 3 (12am inocy2
clop ropane212carboxylic acid synthase, ACS) 基因片段设计特异引物 , 采用 RT2PCR和 RACE (Rap id Amp lifi2
cation cDNA Ends, cDNA末端快速扩增 ) 等技术 , 克隆得到编码哈密瓜 CM e2ACS3基因的全长 cDNA 序列 ,
长 1 895 bp, 编码 482个氨基酸 , 分子量约为 54112 kD, 等电点 8145, GenBank登录号为 FJ383171。利用
软件 MEGA4构建进化树 , 发现哈密瓜 ACS3基因与黄瓜中的同类基因亲缘关系最近。哈密瓜 CM e2ACS3基
因的克隆及序列分析为认识此基因在甜瓜中的功能研究奠定基础。
关键词 : 哈密瓜 ; ACC合成酶 ; RACE; 序列分析
中图分类号 : S 65211; Q 781　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2009) 0821177207
C lon ing and Sequence Ana lysis of cD NA Encod ing for ACC Syn tha se from
Ham iM elon
D ING Qun2ying1, 3 , ZHANG Rui2 , L IAO Xin2fu23 , and GUO A i2guang1, 33
(1 College of L ife Science, N orthw est A & F U niversity, Yang ling, Shaanxi 712100, Ch ina; 2 X injiang D evelopm ent and Research
Center of Grapes and M elons, Shanshan, X injiang 838201, Ch ina; 3 Shaanxi Key L abora tory of M olecu larB iology forA griculture,
N orthw est A & F U niversity, Yang ling, Shaanxi 712100, China)
Abstract: Specific p rimers were designed based on the reported partial sequence of melon ( Cucum is
m elo L. ) ACS3 gene in the GenBank to clone the full2length cDNA of ACS3 gene in using RT2PCR and RACE
methods. Its GenBank Accession No. is FJ383171. The length of Ham i melon ACS gene cDNA is 1 895 bp,
this gene encodes 482 am ino acids, the putative molecular weight is 54112 kD and its p I is 8145. The phylo2
genetic trees constructed by software MEGA4 showed that ACS3 gene of ham i melon was closely related to that
of Cucum is sa tivus. The cloning of ACS3 gene full2length cDNA from the Ham i melon p rovides the basis for
understanding the role of ACS3 gene in melon.
Key words: Ham i melon; ACC synthase; RACE; sequence analysis
在高等植物中 , 乙烯的生物合成主要通过 ACC合成酶 (ACS) 基因和 ACC氧化酶 (ACO ) 基因
的表达 , 在转录水平上进行调节 ( Yang & Hoffman, 1984; Abeles et al. , 1992 )。Yang和 Hoffman
(1984) 的研究表明 , 在乙烯的生物合成途径中 , ACC (1 - 氨基环丙烷 - 羧酸 ) 是乙烯合成的前体 ,
ACC合成酶是催化 SAM ( S - 腺苷蛋氨酸 ) 向 ACC转化的酶 , 抑制 ACC合成酶就可以控制乙烯合
成。目前 , 已从番茄 (Vander et al. , 1990)、马铃薯 ( Schlagnhaufer et al. , 1995)、黄瓜 ( Shiom et
al. , 1998)、桃 (金勇丰和张耀洲 , 2000)、绿豆 ( Song et al. , 2003)、青花菜 ( Gonzalez & Botella,
2003) 和月季 (W ang et al. , 2004) 等多种植物中分离到 ACC合成酶基因的 cDNA序列。利用基因
园 　　艺 　　学 　　报 36卷
工程技术转化番茄 (Oeller et al. , 1991 )、香石竹 (Aanhane et al. , 1995 )、柑橘 (Wong et al. ,
2001)、薄皮甜瓜 (郭庆勋 等 , 2006) 等 , 均已获得转基因植株 , 且转基因植物体内乙烯的生物合成
受到不同程度的抑制 , 从而延缓了果实的成熟或延长了鲜切花的保鲜期。对于哈密瓜 ACC合成酶基
因表达及功能等方面的研究报道甚少。目前 , 已报道甜瓜 ACC合成酶多基因家族的成员有 4个 , 其
中甜瓜 ACC合成酶 3 (CM e2ACS3 ) 只有部分 cDNA序列。本试验中通过克隆哈密瓜 ACC合成酶基因
家族的一个成员 CM e2ACS3 , 并对其进行了生物信息学分析 , 为进一步利用基因工程手段研究其基因
功能奠定基础。
1　材料与方法
111　试材与试剂
以新疆哈密瓜主栽品种 ‘早皇后 ’ (Cucum is m elo L. ‘Zao Huanghou’) 为试材 , 植株长至两叶一
心时 , 取其心叶 , 用液氮速冻后于 - 70 ℃冰箱保存备用。供试材料于 2008年种植于西北农林科技大
学陕西省农业分子生物学实验室。大肠杆菌 ( Escherich ia coli) 菌株 DH5α感受态细胞采用 CaCl2法制
备。DNA回收纯化试剂盒、LA Taq酶、3′RACE、5′RACE试剂盒和 pMD218T载体为大连宝生物公司
( TaKaRa) 产品。RNA提取试剂盒购于杭州博日科技有限公司。主要试剂购于上海生工生物工程技
术服务有限公司。常规试剂均为国产分析纯。
112　引物设计及哈密瓜叶片总 RNA的提取
采用 Primer Prem ier 510软件 , 根据 GenBank中已发表 CM 2ACS3基因 (D86241) 序列设计特异引
物 , 通过扩增、克隆获得一段中间序列 , 按照 RACE试剂盒的要求 , 根据测定的序列设计 3′RACE和
5′RACE的特异引物 , 由上海生工生物工程技术服务有限公司合成 (表 1)。采用 B IOZOL提取试剂盒
提取叶片 RNA。
表 1　哈密瓜 CM e2ACS3引物序列
Table 1　Ham im elon CM e2ACS3 pr im er sequences
引物 Primer 引物序列 (5′→3′) Primer sequence (5′→3′)
中间序列引物 1 M iddle sequence p rimer 1 P1: GCCTTCTCTAATCCACTCACC
中间序列引物 2 M iddle sequence p rimer 2 P2: TTTCTCCTCCCAACTCCATAC
3′RACE内侧引物 3′the RACE inner p rimer P3 1: AGTCACCCAACCCGCTTTAGAAC
3′RACE外侧引物 3′the RACE outer p rimer P3 2: TGCCTTTCTCCTCCCAACTCCATA
3′RACE外侧引物 3′the RACE outer p rimer P3 3: TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT
3′RACE内侧引物 3′the RACE inner p rimer P3 4: CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG
5′RACE内侧引物 5′the RACE inner p rimer P5 1: ACGAATCCTGGAGACCCAAAAACG
5′RACE外侧引物 5′the RACE outer p rimer P5 2: CTTCCTCCTCTTCGTTACTCCTCTCCTT
5′RACE外侧引物 5′the RACE outer p rimer P5 3: CATGGCTACATGCTGACAGCCTA
5′RACE内侧引物 5′the RACE inner p rimer P5 4: CGCGGATCCACAGCCTACTGATGATCAGTCGATG
113　3′RACE反转录及 CM 2ACS3基因中间序列的扩增
以 mRNA为模板 , 按照 3′RACE试剂盒反转录的基本操作流程 , 反转录反应体系如下 : 幼叶 Total
RNA (400 ng·μL - 1 ) 3μL; 3′RACE Adap tor (5μmol·L - 1 ) 1μL; 5 ×M 2MLV Buffer 2μL; dNTP
M ixture (10 mmol·L - 1 each) 1μL; RNase Inhibitor ( 40 U ·μL - 1 ) 0125μL; Reverse Transcrip tase
M 2MLV (RNase H - ) (200 U·μL - 1 ) 0125μL; RNase Free ddH2 O 215μL; 总体积 10μL。
反应条件为 42 ℃温浴 60 m in, 70 ℃灭活 15 m in后获得 RT产物 , - 20 ℃保存待用。
PCR反应体系 : 取 RT产物 2μL, 10 ×LA PCR BufferⅡ (Mg2 + Free) 215μL, dNTPs 015μL, P1
引物 1μL, P2引物 1μL, LA Taq 012μL, 补水至 20μL。反应条件 : 94 ℃预变性 3 m in, 94 ℃预变
8711
　8期 丁群英等 : 哈密瓜 ACC合成酶基因 cDNA的克隆及全序列分析 　
性 30 s, 60 ℃退火 30 s, 72 ℃延伸 45 s, 30次循环 ; 最后 1个循环 72 ℃延伸 10 m in。
114　3′RACE扩增 CM 2ACS3基因的 3′端
参考 TaKaRa公司 3′RACE试剂盒操作流程。取 RT产物 2μL, 1 ×cDNA D ilution BufferⅡ8μL,
P3 2 (10μmol·L - 1 ) 2μL, P3 3 ( 10μmol·L - 1 ) 2μL, 10 ×LA PCR BufferⅡ (Mg2 + Free) 4μL,
MgCl2 (25 mmol·L - 1 ) 3μL, TaKaRa LA Taq (5 U·μL - 1 ) 013μL, ddH2 O 2817μL, 反应条件为
94 ℃ 3 m in, 94 ℃ 30 s, 55 ℃ 45 s, 72 ℃ 1 m in, 30个循环 ; 72 ℃延伸 10 m in。
取第 1次获得的 PCR产物 1μL进行巢式 PCR, dNTP M ixture (各 215 mmol·L - 1 ) 8μL, 10 ×LA
PCR BufferⅡ (Mg2 + Free) 5μL, MgCl2 (25 mmol·L - 1 ) 5μL, LA Taq ( 5 U·μL - 1 ) 015μL, P3 1
(10μmol·L - 1 ) 2μL, P3 4 (10μmol·L - 1 ) 2μL, ddH2 O 2615μL, 反应条件同前一步 PCR。
巢式 PCR扩增产物经回收、克隆、鉴定 , 每个阳性克隆挑选 3个平行菌进行测序。
115　5′RACE扩增 CM 2ACS3基因的 5′端
哈密瓜叶片总 RNA (2μL) 的去磷酸化、“去帽子 ”反应、5′RACE Adap tor连接均参考 TaKaRa
公司试剂盒操作流程进行 , 获得 L igated RNA。
反转录 : 取 L igated RNA 6μL, Random 9 mers (50μmol·L - 1 ) 015μL, 5 ×M 2MLV Buffer 2μL,
dNTPs (各 10 μmol·L - 1 ) 1 μL, RNase Inhibitor ( 40 U ·μL - 1 ) 0125 μL, Reverse Transcrip tase
M 2MLV (RNase H - ) (200 U·μL - 1 ) 0125μL, 30 ℃10 m in, 42 ℃ 60 m in, 70 ℃ 15 m in。
取 RT产物 3μL, 10 ×cDNA D ilution Buffer Ⅱ7μL, 10 ×LA PCR BufferⅡ (Mg2 + Free) 4μL,
MgCl2 (25 mmol·L - 1 ) 3μL, TaKaRa LA Taq (5 U·μL - 1 ) 0125μL, P5 2 (10μmol·L - 1 ) 2μL,
P5 3 (10μmol·L - 1 ) 2μL, ddH2 O 28175μL, 94 ℃ 3 m in, 94 ℃ 30 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 1 m in, 20
个循环 ; 72 ℃延伸 10 m in。
取第 1次 PCR反应液 1μL, 10 ×LA PCR BufferⅡ (Mg2 + Free) 5μL, MgCl2 (25 mmol·L - 1 ) 5
μL, dNTP M ixture (各 215 mmol·L - 1 ) 8μL, LA Taq (5 U·μL - 1 ) 015μL, P5 1 (10μmol·L - 1 ) 2
μL, P5 4 (10μmol·L - 1 ) 2μL, ddH2 O 2615μL, 反应条件同前一步 PCR。
5′RACE PCR产物经回收、克隆、鉴定 , 挑选阳性克隆测序。
116　序列拼接与分析
DNA序列测定委托完成 , 测序结果用 Contig Exp ress序列拼接软件进行全长序列拼接 , 序列分析
则采用 Vector NTI软件、ClustalX程序软件等进行。
2　结果与分析
211　CM e2ACS3基因中间序列的扩增
用特异引物 P1和 P2扩增出 CM e2ACS3中间
序列预期大小的特异片段 (图 1) , 将克隆测序结
果 (628 bp ) 用 Vector NTI软件分析 , 确认其为
CM e2ACS3基因的特异片段。
212　 CM e2ACS3基因 3′端的扩增
根据 CM e2ACS3 基因中间序列和 TaKaRa 3′
RACE原理设计引物 , 以反转录的 cDNA 第一链
为模板 , 基因特异引物 P3 1, P3 2和给定下游引物
进行两次 PCR扩增所得产物 ,经 1 %琼脂糖电泳
图 1　ACS3基因中间序列 PCR扩增产物
F ig. 1　PCR am plif ica tion products of m iddle sequence
of ACS3 gene
检测可见约 1 200 bp条带 (图 2) , 克隆到 pMD218T载体后测序为 1 173 bp。
9711
园 　　艺 　　学 　　报 36卷
213　CM e2ACS3基因 5′端的扩增
根据 CM e2ACS3基因中间序列 , 结合 TaKaRa 5′RACE原理设计特异引物 P5 1和 P5 2, 与哈密瓜总
RNA经去磷酸化、“去帽子 ”反应、5′RACE Adap tor连接后获得 L igated RNA及给定引物 P5 3、P5 4进
行反转录、套式 PCR反应 , 获得的 PCR产物在 1%琼脂糖凝胶上进行电泳 , 片段大小约 1 000 bp
(图 3) , 克隆到 pMD218T载体后测序为 971 bp。
图 2　3′RACE琼脂糖凝胶电泳图
F ig. 2　Agarose gel electrophoresis ana lysis
of 3′RACE PCR products
图 3　5′RACE琼脂糖凝胶电泳
F ig. 3　Agrose gel electrophoresis ana lysis of
5′RACE PCR products
214　全长序列的获得及分析
将测序所得 3条序列进行拼接 , 最终获得长度为 1 895 bp的哈密瓜 ACS3基因全长 cDNA序列
(图 4) , 命名为 CM e2ACS3 , GenBank登录号为 FJ383171。经 ORF (开放阅读框 ) 软件分析 , 确定
ORF长 1 446 bp, 编码 482个氨基酸 , 预测分子量约为 54112 kD , 其中编码酸性氨基酸 53个 , 碱性
氨基酸 57个 , 等电点为 8145。用 SignalP ( http: ∥www1cbs1dtu1dk / services/SignalP / ) 软件对该蛋
白的 N端进行分析 , 没有发现信号肽 , 该蛋白质为非分泌蛋白。
图 4　哈密瓜 ACC合成酶基因 CM e2ACS3的 cD NA序列和由此推导的氨基酸序列
F ig. 4　The nucleotide and deduced am ino ac id sequences of cD NA encod ing ACC syn tha se 3 in Ham im elon
0811
　8期 丁群英等 : 哈密瓜 ACC合成酶基因 cDNA的克隆及全序列分析 　
215　哈密瓜与其他作物 ACS基因编码的氨基酸序列比较分析
应用 NCB I上的 B lastP软件进行序列相似性搜索 , 结果显示哈密瓜 ACS3基因与多种植物的氨基
酸序列具有较高的相似性 , 其中与黄瓜 Cucum is sa tivus ACS1G的相似性最高 ( 98% ) , 其次为笋瓜
Cucu rbita m ax im a ACS2, 绿豆 V igna rad ia ta ACS7 , 矮牵牛花 Petun ia hybrida ACS2 , 其相似性分别为
90% , 77%和 76% 。应用 ClustalX程序 , 将克隆所得的哈密瓜 ACS3基因 cDNA编码的氨基酸序列与
NCB I上已登录的其他作物的 ACS基因编码的氨基酸进行多序列对比。结果表明 : 哈密瓜 ACS3与其
它作物的 ACS基因有许多高度的保守区域 (图 5)。
图 5　哈密瓜 ACS3氨基酸序列与同源氨基酸序列的多序列对比
F ig. 5　The a lignm en t of am ino ac id sequences of Ham im elon and other 9 plan ts ACS3 gene
1811
园 　　艺 　　学 　　报 36卷
216　基因进化树构建
采用 MEGA4软件 ( Kumar et al. , 2004) 的邻接法 (Neighbor2Joining, NJ ) , 构建哈密瓜与苹果
BAA35057等 16种植物的 ACS同源氨基酸序列的基因进化树。该进化树显示 , 哈密瓜 ACS3与黄瓜
Cucum is sa tivus ACS1G亲缘关系最近 , 与笋瓜 Cucurbita m axim a ACS2、白羽扇豆 L upinus a lbus ACS3等
较近 , 而与拟南芥、花椰菜、马铃薯等较远 (图 6)。
图 6　基于 NJ法的哈密瓜 ACS3基因进化树
●表示哈密瓜 ACS3基因。
F ig. 6　Neighbor2jo in ing phylogenetic tree ba sed on ACS3 sequences of Ham im elon and other 16 plan ts
●Ham i melon ACS3 gene.
3　讨论
获得基因全长序列是生物工程和分子生物学研究的重点之一。尽管已有多种获得基因全长序列的
方法 , 但是由于植物中 ACC合成酶含量很低 , RNA在提取中很容易发生降解 , 从而使得由低丰度
mRNA通过转录获得全长 cDNA变得很困难。近年来发展成熟的 cDNA末端快速扩增 (RACE) 技术 ,
为从低丰度转录本快速获得全长 cDNA提供了一个便捷的途径。
在高等植物体内 , 乙烯由 Met (蛋氨酸 ) →SAM (腺苷蛋氨酸 ) →ACC ( 1 - 氨基丙烷 - 1 - 羧
酸 ) →乙烯途径合成。在乙烯生物合成过程中 , 每一步反应都是在特定的酶催化下完成的。ACC合成
酶是乙烯合成的关键酶 , 它催化 SAM 生成 ACC ( Yang & Hoffman, 1984)。了解和研究这些酶 , 特别是
关键酶的基因及其表达的特异性 , 才能有效地调控乙烯的生物合成 , 乃至控制果实的后熟衰老进程。
NCB I公布的 ACC合成酶基因序列及物种 , 共有 39个科 , 70余种植物克隆到了 ACC合成酶基
因 , 涵盖双子叶、单子叶及裸子植物 , 克隆部位主要包括果实、种子、叶片、花瓣、根等部位 , 功能
主要是果实的发育和成熟相关 , 占全部序列的 45% , 有 27%的序列与激素或环境胁迫诱导有关 , 功
能特殊的 ACC合成酶例如棉花中发现 ACC合成酶与纤维伸长有关 (L i et al. , 2004) , 黄瓜中则克隆
了 2个雌性特异的 ACC合成酶序列 ( Kamachi et al. , 1997; Trebitsh et al. , 1997)。本研究采用 RT2
PCR和 RACE技术 , 首次在哈密瓜中获得了 CM e2ACS3基因的全长序列 , 对该序列分析发现 , 该基因
全长 1 895 bp, 开放阅读框为 1 446 bp, 编码 482个氨基酸 , 通过 B lastP、ClustalX软件进行同源性比
对分析 , CM e2ACS3与已报道的笋瓜 (Nakagawa et al. , 1991)、绿豆 ( Yi et al. , 1999)、矮牵牛花
2811
　8期 丁群英等 : 哈密瓜 ACC合成酶基因 cDNA的克隆及全序列分析 　
(L indstrom et al. , 1999) 的相似性达到 70%以上 , 特别是与黄瓜雌性主控基因 CSACS1G相似性达到
了 98% ; 利用 MEGA4软件构建哈密瓜与苹果等 16种植物的 ACS同源氨基酸序列的基因进化树 , 该
进化树显示 , 哈密瓜 ACS3与黄瓜亲缘关系最近 ; 与李、白羽扇豆等较近 ; 而与拟南芥、花椰菜、马
铃薯等较远 , 这与物种起源进化的亲缘关系分类完全相一致。
目前 , 我们正在构建该基因的植物超表达载体和反义植物表达载体 , 以对其功能进行深入研究。
References
Aanhane T, Affrs D R, Flrigene B V. 1995. First rDNA flower to debut in Australia this summer. B iotechnology News, 15 (14) : 3.
Abeles F B, Morgan P W , SaltveltM E. 1992. Ethylene in p lant biology. San D iego: Academ ic Press.
Gonzalez N, Botella J R. 2003. Characterisation of three ACC synthase gene fam ily members during post2harvest2induced senescence in broccoli
(B rassica oleracea L. var. ita lica) . Journal of Plant B iology, 46 (4) : 223 - 230.
Guo Q ing2xun, Q in Zhi2wei, D ing Guo2hua, L i J ing2peng. 2006. Molecular cloning of a muskmelon cDNA fragment encoding an am ino2cyclop ro2
pane212carboxylie acid (ACC) synthase and construction of antisense exp ression vector. Journal of Northeast Agricultural University, 37
(1) : 22 - 27. ( in Chinese)
郭庆勋 , 秦智伟 , 丁国华 , 李景鹏. 2006. 薄皮甜瓜果实 ACC合成酶 cDNA克隆及反义表达载体的构建. 东北农业大学学报 ,
37 (1) : 22 - 27.
J in Yong2feng, Zhang Yao2zhou. 2000. Cloning of a 12am inocyclop ropane212carboxylate cDNA synthase from peach fruit. Acta Horticulture Sini2
ca, 27 (4) : 257 - 262. ( in Chinese)
金勇丰 , 张耀洲. 2000. 桃果实 ACC合酶 cDNA的克隆. 园艺学报 , 27 (4) : 257 - 262.
Kamachi S, Sekimoto H, Kondo N. 1997. Cloning of a cDNA for a 12am inocyclop ropane212carboxylate synthase that is exp ressed during develop2
ment of female flowers at the ap ices of Cucum is sa tivus L. Plant and Cell Physiology, 38 (11) : 1197 - 1206.
Kumar S, Tamura K, NeiM. 2004. MEGA 3: Integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment. B riefings
in B ioinformatics, 5: 150 - 163.
L i X, W ang X, Zhao X, Dutt Y. 2004. Imp rovement of cotton fiber quality by transform ing the acsA and acsB genes into Gossypium hirsu tum by
means of vacuum infiltration. Plant Cell Reports, 22 (9) : 691 - 697.
L indstrom J T, Lei C2H, JonesM L, Woodson W R. 1999. Accumulation of 12am inocyclop ropane212carboxylic acid in petunia pollen is associated
with exp ression of a pollen2specific ACC synthase late in development. J Amer Soc Hort Sci, 124 (2) : 145 - 151.
Nakagawa N, Kam iya Y, Imaseki H. 1991. Cloning of a comp lementary DNA for auxin2induced 12am inocyclop ropane212carboxylate synthase and
differential exp ression of the gene by auxin and wounding. Plant Cell Physiol, 32: 1153 - 1163.
Oeller P W , Wong L M, Taylor L P. 1991. Reversible inhibition of tomato fruit senescence by antisense RNA. Science, 254: 437 - 439.
Schlagnhaufer C D, Glick R E, A rteca R N, Pell E J. 1995. Molecular cloning of an ozone2induced 12am inocyclop ropane212carboxylate synthase
cDNA and its relationship with a loss of rbcS in potato (Solanum tuberosum L. ) p lants. PlantMol B iol, 28 (1) : 93 - 103.
Shiom I S, Yamamoto M, ONO T, Kakiuchi K, Nakamoto J, Kubo Y, Nakamura R, Inaba A, Imaseki H. 1998. cDNA cloning of ACC synthase
and ACC oxidase in genes in cucumber fruit and their differential exp ression by wounding and auxin. Japan Soc Hort Sci, 58: 685 - 692.
Song J D, Lee D H, Rhew T H. 2003. Wound2induced exp ression of ACC synthase genes in etiolated mung bean hypocotyls. Journal of Plant
B iology, 46 (3) : 199 - 203.
Trebitsh T, Staub J E, OpiNeill S D. 1997. Identification of an ACC synthase gene linked to the female ( F) locus that enhances female sex exp res2
sion in cucumber (Cucum is sa tivus L. ) . Plant Physiol, 113 (3) : 987 - 995.
Vander S D, van W L, Goodman H M, M V. 1990. Cloning and sequence of two different cDNA s encoding 12am inocyclop ropane212carboxylate
synthase in tomato. Proc Natl Acad Sci USA, 87 (12) : 4859 - 4863.
W ang D, Fan J, Ranu R S. 2004. Cloning and exp ression of 12am inocyclop ropane212carboxylate synthase cDNA from rosa (R osa hybrida) . Plant
Cell Reports, 22 (6) : 422 - 429.
WongW S, L i G G, N ingW , Xu Z F, H siao W L W , Zhang L Y, L i N. 2001. Rep ression of chilling induced ACC accumulation in transgenic
citrus by over2p roduction of antisense 12am inocyclop rop ane212carboxylate synthase RNA. Plant Science, 161 (5) : 969 - 977.
Yang S F, Hoffman N E. 1984. Ethylene biosynthesis and its regulation in higher p lants. Annu Rev Plant Physiol, 35: 155 - 189.
Yi H C, Joo S, Nam K H, Lee J S, KangB G, Kim W T. 1999. Auxin and brassinosteroid differentially regulate the exp ression of three members
of the 12am inocyclop ropane212carboxylate synthase gene fam ily in mung bean (V igna radia ta L. ) . PlantMol B iol, 41 (4) : 443 - 454.
3811