全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2006, 33 (5) : 1048～1050
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2006 - 05 - 10; 修回日期 : 2006 - 08 - 16
基金项目 : 河北省重点科技攻关项目 (04395501D23)
‘富有 ’和 ‘次郎 ’甜柿叶片再生植株的研究
马俊莲 1 　刘　恺 2 　张子德 1
(1 河北农业大学食品科技学院 , 河北保定 071001; 2 保定师范专科学校化学系 , 河北保定 071051)
摘 　要 : 比较了不同生长调节剂及其种类浓度和培养时间对 ‘富有 ’和 ‘次郎 ’两个甜柿 (D iospyros
kak i Thunb. ) 品种的叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。TDZ诱导叶片愈伤组织和不定芽再生的能力
很强 , 在含 ZT 015 mg·L - 1的培养基中 , 愈伤组织的形成率达 96% , 愈伤组织不定芽分化率达 80%以上 ,
由 015 mg·L - 1 TDZ诱导形成的富有和次郎愈伤组织 , 在含有 ZT 015 mg·L - 1的 1 /2DKW培养基培养 30 d,
不定芽分化率均达 96%以上 , 平均芽数分别为 718和 514, 所得再生苗的生根率近 75%。
关键词 : 柿 ; TDZ; 叶片 ; 植株再生 ; 愈伤组织
中图分类号 : S 66512　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2006) 0521048203
Shoot Regenera tion from L eaves of‘Fuyu’and‘J iro’Persimm on
Ma Junlian1 , L iu Kai2 , and Zhang Zide1
(1 College of Food Science and Technology, A gricultura l U niversity of Hebei, B aod ing, Hebei 071001, Ch ina; 2D epartm ent of
Chem istry, B aoding Teachers College, B aoding, Hebei 071051, China)
Abstract: Studies were carried out on high2frequency shoot regeneration from leaves of Fuyu and J iro,
two Japanese non2astringent persimmon. The effects of growth regulator and cultural time on the adventitious
shoot regeneration from leaves were investigated. The results showed that TDZ was a strong and efficient hor2
mone inducing adventitious shoot and calli formation. The best regeneration was achieved in 1 /2DKW + TDZ
015 mg·L - 1 + ZT 110 mg·L - 1 , in which callus percentage was 96% and shooting was near above 80%.
After 30 day culture, the calliwith small shooting were transferred to 1 /2DKW medium supp lemented with 015
mg·L - 1 zeatin and 011 mg·L - 1 IAA. Shooting regeneration rate were more than 96% , and average adventi2
tious shoots per exp lant were 718 and 514 respectively for Fuyu and J iro after 30 days culture. Rooting per2
centage from regenerated shoots was about 75%.
Key words: Persimmon; TDZ; Leaf; Plant regeneration; Callus
1　目的、材料与方法
近年来甜柿的组织培养技术取得一定进展〔1, 2〕, 但再生效率较低〔3, 4〕。本研究旨在通过柿叶片的
组织培养 , 为其遗传转化提供参考。
供试甜柿品种为 ‘富有’和 ‘次郎 ’, 树龄约 8年。以休眠芽为外植体 , 建立了初代培养体系。
在 MS (1 /2N ) + ZT 110 mg·L - 1 + IAA 011 mg·L - 1 + PVP 500 mg·L - 1培养基中离体繁殖 15代后 ,
转入 DKW + ZT 110 mg·L - 1 + IAA 011 mg·L - 1 + PVP 500 mg·L - 1中继代培养。
剪取组培苗幼叶 , 去叶尖 , 剪成 015 cm ×015 cm小块 , 接种于分化培养基上。分化基本培养基
为 1 /2DKW , 添加蔗糖 3% , PVP 500 mg·L - 1 , 琼脂 016% , pH为 518, 生长调节剂处理见表 1。每
处理接种 30个小块叶片。培养温度为 (25 ±2) ℃, 光照 40μmol·m - 2 ·s- 1 , 将经过 20～40 d初代
诱导形成的愈伤组织切割成小块转移到不定芽伸长培养基。基本培养基为 1 /2DKW , 添加 IAA 011
mg·L - 1 , ZT 110 mg·L - 1 , 培养条件同上 , 30 d后统计两个品种的不定芽再生率和平均不定芽数。
　5期 马俊莲等 : ‘富有 ’和 ‘次郎 ’甜柿叶片再生植株的研究 　
剪取继代 2代 (115 cm高 ) 的不定芽转移至生根培养基中。基本培养基为 1 /2MS, 含蔗糖 3% ,
PVP 500 mg·L - 1 , 琼脂 016% , pH 518, IBA 110 mg·L - 1或 IAA 110 mg·L - 1。培养条件同上。所有
试验均重复 2次。
2　结果与分析
211　TD Z (噻苯隆 ) 对愈伤组织和不定芽的诱导效果
柿叶片在添加了 TDZ的培养基中培养 10 d后开始长大 , 20 d后陆续长出嫩绿色的愈伤组织 , 数
天后愈伤组织迅速膨大。
TDZ浓度在 015 mg·L - 1以上时 , 愈伤组织形成率达 95%以上 , 愈伤组织比较疏松。培养 30 d
后不定芽分化率达到 80%以上 , 但不定芽点很小 , 生长缓慢 , 节间距很短。培养时间超过 40 d时会
对叶片产生毒害作用 , 愈伤组织容易褐化死亡。而在含 NAA的培养基中 , 愈伤组织诱导率达 100% ,
愈伤组织较大 , 颜色较深 , 但没有不定芽再生。
212　带芽愈伤组织的继代分化培养
21211　初代生长调节剂处理对继代不定芽分化效果的影响 　由表 1可见 , 在仅添加 110 mg·L - 1 ZT
培养基中诱导形成的愈伤组织 , 在不含 TDZ的继代培养中分化率为 0。由 TDZ初代诱导形成的愈伤
组织 , 在继代培养中 , 其分化率和平均不定芽数与初代培养基中 TDZ浓度成正相关。由 015 mg·L - 1
TDZ诱导形成的富有、次郎愈伤组织不定芽分化率均达到 96%以上 , 平均芽数分别为 718和 514 (图
版 , 1、2)。由 110 mg·L - 1 TDZ诱导的愈伤组织平均不定芽数明显高于其它处理 , 但形成的不定芽
较小 , 节间短 , 部分芽表现为丛状苗 , 不利于再生苗的快速生长。因此 , 比较适宜的 TDA诱导浓度
为 015 mg·L - 1。
在含 NAA的培养基中 , 愈伤组织诱导率达 100% , 但在继代分化生长中愈伤组织不定芽的分化
率和平均不定芽数都很低 , 当 NAA浓度达到 012 mg·L - 1时两品种的分化率为 0, 表明 NAA对柿叶
片不定芽的分化有较强的抑制作用。
表 1　初代生长调节剂处理对继代不定芽分化效果的影响
Table 1　Effects of growth regula tor used in the f irst culture on the shoot regenera tion in the successive culture
生长调节剂 Growth regulator(mg·L - 1 )
ZT TDZ NAA
不定芽分化率 Shooting percentage ( % )
富有 Fuyu 次郎 J iro
平均不定芽数 Adventitious shoots per exp lants
富有 Fuyu 次郎 J iro
110 0 0 0e 0e 0d 0d
110 011 0 6311b 5519c 210c 117c
110 012 0 8917a 8211b 513b 415b
110 015 0 9618a 9715a 718ab 514b
110 110 0 9618a 9618a 911a 815a
110 012 011 2911c 1612d 212c 118c
110 012 012 1612d 0e 115cd 0d
21212　TDZ处理时间对继代不定芽再生的影响 　将叶片放在含有 TDZ的 1 /2DKW培养基上培养 20～
40 d后 , 将形成的愈伤组织接种到不含 TDZ的培养基中 , 30 d后观察不定芽的再生效果 (表 2)。在
含有 TDZ 210 mg·L - 1培养基中培养 20 d时 , 愈伤组织的分化率较低 , 转移至继代培养基后不定芽的
分化率低。随着初代 TDZ处理时间的延长 , 继代培养后的不定芽分化率升高。
富有柿叶片对 TDZ较为敏感 , 在 TDZ 015 mg·L - 1诱导的愈伤组织培养 30 d以上时 , 少数苗开
始出现丛生矮化现象 , 平均有效新梢率较低。
次郎柿对 TDZ的耐受性较高 , 在 TDZ 015 mg·L - 1的培养基中培养 40 d才会产生少量丛状苗。
一直以来 , ZT被认为是诱导柿不定芽再生的最有效的激素〔5〕, 而 TDZ在柿的组织培养中研究极
少。本研究表明 , TDZ有很强的诱导愈伤组织和不定芽形成的能力 , 对叶片不定芽的诱导效果远远好
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园 　　艺 　　学 　　报 33卷
于 ZT。综合考虑 , 富有柿适宜的 TDZ处理时间应在 30 d, 而次郎可以延长至 35 d。
表 2　TD Z处理时间对继代培养中叶片不定芽再生的效果
Table 2　Effects of cultura l tim e in the TD Z m ed ium on the shoot regenera tion in the successive culture
培养天数
Cultural time ( d)
TDZ
(mg·L - 1 )
不定芽再生率 Regeneration rate ( % )
富有 Fuyu 次郎 J iro
平均不定芽数 Adventitious shoots per exp lants
富有 Fuyu 次郎 J iro
20 012 7617c 3719d 211c 211d
015 8016bc 8711ab 313c 311d
25 012 8313bc 6717c 311c 213d
015 9613a 9010ab 714a 513bc
30 012 8917ab 8211b 513b 415c
015 9618a 9715a 718a 514bc
40 012 9617a 9618a 611b 516ab
015 9618a 9617a 719a 616a
213　生根
不定芽在生根培养基上培养 20 d左右开始形成不定根 , 40 d后形成较发达的根系。 IBA的效果
好于 IAA。在 1 /2MS + IBA 110 mg·L - 1培养基上两个甜柿品种的生根率近 75% , 平均不定根数达到 3
条以上。
参考文献 :
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图版说明 : 015 mg·L - 1 TDZ初代诱导的再生效果。
Explana tion of pla tes: Shooting regeneration effect of p rimary culture with 015 mg·L - 1 TDZ.
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