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11 　Fang Z Y, Sun P T , Liu YM , et al . A male sterile line with dominant gene ( Ms) in cabbage ( Brassica oleracea var. capitata) and its utiliza2
tion for hybrid seed production. Euphytica , 1997 , 97 : 265～268
12 　Kianian S F , Quiros C E. Generation of a Brassica oleracea composite RFLP map : linkage arrangements among various population and evolutionary
implications. Theor. Appl . Genet . , 1992 , 84 : 544～554
Identif ication of a RFLP Marker Linked to a Donminent Male Sterile Gene in
Cabbage
Liu Yumei1 , Fang Zhiyuan1 , Michael D. McMullen2 , Zhuang Mu1 , Yang Limei1 , Wang Xiaowu1 ,
Zhang Yangyong1 , and Sun Peitian1
(1 Institute of Vegetables and Flowers , Chinese Academy of Agricultural Sciences , Beijing 100081 , China ;　2 Plant Science Unit Univer2
sity of Missouri , USA)
Abstract : Bulked segregant analysis was used to identify RFLP marker linked to a dominant male sterile gene
in cabbage ( Brassica oleracea var. capitata) . The dominant male sterile gene was found to be linked to RFLP
marker pBN11. The genetic distance between the marker and the dominant male sterile gene is 51189 cM and
11787 cM in two backcross populations , respectively. The gene was located on chromosome 1 and 8.
Key words : Cabbage ; Dominant male sterile gene ; RFLP ; Gene mapping
收稿日期 : 2003 - 05 - 21 ; 修回日期 : 2003 - 08 - 11
基金项目 : 黑龙江省科技厅国际合作项目　　3 通讯作者 Author for correspondence
一种简易快速提取洋葱线粒体 D NA 的方法
刘 　杰1 　崔成日2 　李景鹏1 , 3
(1 东北农业大学生命科学学院 , 哈尔滨 150030 ;　2 哈尔滨长日圆葱研究所 , 哈尔滨 150020)
A Simple and Rapid Method for the Isolation of Mitochondrial DNA from Onion
Liu Jie1 , Cui Chengri2 , and Li Jingpeng1 3
(1 Northeast Agriculture University , Harbin150030 , China ;　2 Harbin Institute of Onion , Harbin 150020 , China)
关键词 : 洋葱 ; 线粒体 DNA ; 细胞质雄性不育
中图分类号 : S 63312 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 05132353X (2003) 0520553
以哈尔滨长日圆葱研究所提供的洋葱细胞质雄性不育系 A 为试材 , 取其块茎 50 g 剪碎 , 加入 100 mL 预冷的缓冲
液 A 〔30 mmol/ L 甘露醇 , 50 mmol/ L Tris2HCl , 3 mmol/ L EDTA , 011 % BSA , 10 mmol/ Lβ- 巯基乙醇 (pH 810)〕 (按 1∶2
比例) , 捣碎后 , 4 层无菌纱布过滤 , 滤液 1 500 g 离心 10 min , 弃沉淀 , 上清液 12 000 g 离心 15 min , 弃上清 , 加入 10
mL 缓冲液 A 悬浮沉淀 , 1 500 g 离心 10 min , 弃沉淀。上清液加入 1 mol/ L MgCl2 终浓度 10 mmol/ L , DNase Ⅰ至 100μg/
mL , 冰上放置 1 h , 然后加入 3 倍体积的缓冲液 B 〔1125 mol/ L NaCl , 50 mmol/ L Tris2HCl , 20 mmol/ L EDTA (pH 810)〕,
轻轻混匀 , 12 000 g 离心 15 min , 弃上清。沉淀悬浮于 50 mL 缓冲液 C 〔50 mmol/ L Tris2HCl , 10 mmol/ L EDTA (pH
810)〕中 , 12 000 g 离心 15 min , 弃上清 , 重复此步骤 3 次 , 沉淀用 600μL 缓冲液 D 〔100 mmol/ L NaCl , 100 mmol/ L
Tris2HCl , 50 mmol/ L EDTA , 100 mmol/ Lβ- 巯基乙醇 (pH 810)〕, 苯酚、苯酚/ 氯仿各抽提 1 次 , 12 000 g 离心 15 min ,
取上清 , 然后加入 2/ 3 体积异丙醇 , 于 - 20 ℃放置大约 20 min 沉淀 DNA , 12 000 离心 15 min , 收集沉淀 , 70 %乙醇洗
涤沉淀 , 干燥 , TE溶解。
传统的方法利用梯度离心提取 mtDNA , 其成本高 , 耗时长 , 产率低 , 不宜广泛应用。本方法用差速离心去除组织
碎片 , 高盐环境下反复洗涤与DNase 结合除尽在线粒体膜上吸附的核DNA , 保证线粒体DNA 的高纯度 , 省去了蛋白酶
K及梯度离心的蔗糖 , 降低了提取成本 , 对离心机等其它仪器的要求也很低。通过此方法提取的 mtDNA 由紫外分光光
度计测得浓度可知 , 一般可以达到 015～115μg/ g , 和同类其它方法相比 , DNA 的产率是相当可观的 , 完全可以达到
限制性内切酶及 RAPD 的分析要求。
3555 期 　　　　　　　　　　刘玉梅等 : 一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的 RFLP标记