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Studies Oil Tissue Culture of Oncidium

文心兰组织培养的研究



全 文 :园 艺 学 报 2004,31(2):253~255
Acta Horticulturae Sinica
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文心兰组织培养的研究
崔广荣 刘云兵 张俊长 谷业理
(安徽技术师范学院农学系,凤阳233100)
摘 要:以文心兰不同发育时期的花蕾为外植体,研究了影响丛芽诱导、增殖、生根壮苗的主要因素。
结果表明,处于原芽期的花蕾是诱导丛芽的较好材料;适合花原芽诱导丛芽的培养基是 MS+6-BA 4.0 mr,/
L+NAA 0.5 mg/L+3%蔗糖,适合丛芽增殖成苗的培养基是Ms+6一BA 2.0~4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+
3%蔗糖,适合生根壮苗的培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+2%蔗糖。
关键词:文心兰;组织培养;细胞分裂素;生长素
中图分类号:S 682.31 文献标识码:A 文章编号:0513—353X (2004)02-0253-03
Studies Oil Tissue Culture of Oncidium
Cui Guangrong,Liu Yunbing,Zhang Junchang,and Gu Yeli
(Agronomy Department ofAnhui Technical Teachers College,Fengyang 233100,China)
Abstract:The main factors of crowd shoot induction,propagation and rooting of Oncidium were studied
by using different growth period of bud. The results showed that the primary bud is better explants than oth—
ers. Th e different kinds and different concentration of hormones greatly affected crowd shoot induction,prop—
agation and rooting of Oncidium.The suitable culture medium for crowd shoot induction is MS+6-BA 4.0
mg/L 4-NAA 0.5 mg/L 4-3% sucrose. The best culture medium for shoot propagation is MS 4-6一BA 2.0—
4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+3% sucrose.The proper culture medium for rooting is 1/2 MS+IBA 0.5 mg/
L+2% sucrose.
Key words:Oncidium;Tissue culture;Cytokinin;Auxin
1 目的、材料与方法
文心兰 (Oncidium)原产墨西哥、西印度洋群岛、巴西等地,全球有原生种400多个⋯。文心兰
花形小,颜色艳丽,每支花穗着生15—100朵小花,是上等切花材料,亦可盆栽观赏 。文心兰多采
用分株或播种等方法进行繁殖 J,但分株繁殖系数低,播种的后代性状不一致。前人有关文心兰组
织培养的报道l4 较多,本试验的特点是以文心兰不同发育时期的花蕾为外植体进行丛芽诱导、芽苗
增殖及生根成苗的研究,为快速大量生产优质种苗提供技术参考。
切花文心兰品种金西 (Kinsei)花穗由安徽技术师范学院种植科技园提供。吲哚丁酸 (IBA),
6一苄基腺嘌呤 (6一BA),萘乙酸 (NAA),腺嘌呤硫酸盐 (Ad),激动素 (KT)等购于中国医药集
团上海化学试剂公司。丛芽诱导培养基以MS为基本培养基 (5.8 g/L卡拉胶,30 g/L蔗糖,pH调至
5.8,下同),分别添加适宜浓度的NAA、6-BA、KT、Ad。每处理接5瓶,每瓶接3枚花蕾。取材时
分别取3个不同发育时期的花穗,即花原芽、幼小花苞和成熟花苞,用自来水冲洗后,用70%的酒
精表面消毒30 S,无菌水洗3次,再用0.1%升汞溶液消毒10 rain,然后用无菌水洗5次,在超净工
作台上将花蕾从花穗上切下,留0.5—1.0 cm的花柄,接种到丛芽诱导培养基上培养,温度25℃,
光照12 h/d,光照强度约2000 lx。接种2个月后统计丛芽诱导情况。
收稿日期:2003—08—26;修回日期:2003—12—30
基金项目:安徽技术师范学院自然科学基金项目 (2003Y207)
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254 园 艺 学 报
增殖培养基以MS为基本培养基,添加适宜浓度的NAA和一定浓度的6-BA。每处理接4瓶,每
瓶接2枚芽苗,两个月统计增殖情况。生根培养以1/2 MS为基本培养基,分别添加一定浓度的IBA
和NAA,每个处理接4瓶,每瓶接3枚无根苗,接种后一个月统计生根情况。
2 结果与分析
2.1 花蕾发育时期对丛芽诱导的影响
共接种花蕾225枚,其中花原芽120枚,幼小花蕾5O枚,成熟花蕾55枚。试验结果表明,只有
处于发育初期的花原芽期花蕾能诱导出丛芽,诱导率为17.5%,而发育后期的成型花蕾则不能形成
丛芽。可见花蕾发育时期是丛芽能否诱导成功的关键因素。
2.2 细胞分裂素类对丛芽诱导的影响
表 1表明,6一BA 0.5~4.0 mg/L+NAA 0.5
ms/L时,接种花原芽都能长出丛芽,但差异较
大。在 6-BA 4.0mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基中
能够较早地分化出不定芽,且丛芽生长速度快,2
个月统计单花花芽平均诱导成不定芽的个数达
4.5,长势良好。另外也可看出,在一定范围内,
随着6-BA/NAA的比值增大,芽增殖数和繁殖系
数明显提高,但超过一定的范围 (如 I.5处理)
则只形成原球茎。从本试验看,最适于文心兰丛
芽诱导的两种激素配比为6-BA 4.0 mg/L+NAA
0.5 mg/L,在此条件下的繁殖系数达到4.5(接
种花原芽数/形成单芽总个数)。
KT对文心兰丛芽诱导效果不好,只在 KT浓
度为4.0 mg/L,NAA浓度为0.5 mg/L时,8枚
花原芽才能分化出 1个丛芽,且苗况较差,无实
用价值。
Ad在所设定的浓度及组合范围不能诱导出文
心兰丛芽。
2.3 6-BA对芽苗增殖的影响
如表2结果所示,6-BA的浓度对文心兰芽苗
增殖影响较大。不同浓度的6-BA均表现出一定
的增殖率,其中Ⅱ一3、Ⅱ4表现最好,也就是6一
BA在2~4 mg/L时增殖率最好,增殖系数分别高
达7.3、7.0,且生长良好。当6一BA为4 ms/L
时,有较多的原球茎产生。在文心兰的生产中,
较多的原球茎积累则并不是一件好事。
2.4 mA与NAA对生根的影响
两类生长素对文心兰的生根作用效果也有较
大的差异,IBA为0.5 mg/L,文心兰生根情况较
表 l 不同浓度的6-BA对丛芽诱导的影响
Table1 le efect ofdi rent concentration of6.BA
On crowd shoot induction
号 理 一
N0. ‰ 【ment tration ilOCU 一 No.of
(mg/L) coefl cient
5 O.4
14 1.9
23 2.9
37 4.5
I-5 8.0+0.5 8 一 少量原 一
球茎 Less
PLBs
表2 6-BA对芽苗增殖的影响
Table 2 Theef ects of6-BA on shootp~ tion
好,生根率达 100%;在不添加生长素时,虽有少量根形成,但根生长缓慢;当IBA浓度增大至 1.0
mg/L时,生根情况反而不好,所生根多为畸形。NAA在较低浓度时,有少量根形成;在较高浓度情
况下,易形成愈伤组织或畸形根,不能较好地促进文心兰生根 (表3)。
3 5 5 7
8 8 8 8
5 5 5 5
O O O O
+ + + +
5 O O O
O ● 2 4

N
+
A
B
0 4
H H H I
5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
n n m n m 仉 m n n
+ + + + + + + + + +
5 O O O 0 5 O O O O
O ● 2 4 8 O ● 2 4 8
A A
A A
N N
T d K A
一 加Ⅲ “
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2期 崔广荣等:文心兰组织培养的研究 255
试验表明,只有发育早期的花原芽才能诱导
出丛芽。文心兰花原芽诱导转变为丛芽的最适培
养基为 MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+
3%蔗糖。芽苗增殖的最适培养基为 MS+6-BA
2.0~4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+3%蔗糖。生根
培养基以 1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+2%蔗糖较为
合适。
3种不同的细胞分裂素6-BA、KT、Ad对文
心兰的丛芽诱导、增殖效果差异较大,6-BA的效
果最好,KT次之 ,而Ad几乎不起什么作用。这
也有可能是激素组合配比不当或试验浓度范围不
表3 IBA、NAA对生根的影响
Table 3 The efect ofIBA、NAA On rooang
序号 IBA NAA
No. (mg/L)(mg/L)
平均生根数 根长度 生根率
Mean no.of roots Mean length Rooting
per shot(个) of roots(cm)rate
适等原因造成的,详细情况还有待于进一步研究。以往报道的关于文心兰或其它洋兰的组织培养中常
常添加椰子汁、香蕉泥等有机质,以促进其生长或提高增殖率 引,而本试验在未添加其它有机质的
情况下,也获得了较高的增殖率。
参考文献:
1 Santana G E,Chaparro K.Clonal of Oncidium through the culture of floral buds. Acta Horticulture,1987,482:315—320
2 陈兴贻.文心兰的组织培养.植物生理学通讯,1989,(6):49
3 陈 璋,蔡幼华.洋兰.福州:福建科学技术出版社,2000,l12页
4 彭晓明,曾宋君,张京丽,等.文心兰的茎尖及花梗组织培养和快速繁殖.园艺学报,2000,27(2):127—129
5 何松林,十鸟三和子,王 献,等.不同基本培养基及增殖方式对文心兰原球茎增殖的影响.华北农学报,2001,,16(1):88—
91
6 何松林,杨秋生,孔德政,等.施CO2时培养基糖浓度对文心兰试管苗生长的影响.园艺学报,2003,30(6):745—747
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