全 文 :!23" !3#
Vol.23 No.3
! " # $
ACTA AGRESTIA SINICA
2015$ 5%
May. 2015
犱狅犻:10.11733/j.issn.10070435.2015.03.025
%=>?%&*T;hiFWco
1!®
ïðñ
1,
ø Ú1,2,±Ù)1,2 ò1,Õó1,
¹1,ô3, O1
(1.TÀ®÷à. c]DOúR¶â]ÌÍn,> TÀ210095;2.r0®÷à. ×&-.
./,r0 IY030801;
3.8¸-./45-.¶À?ÌÍn,À100101)
67
:
_ºpq©Þ&]Ñû&Í/&â¤IoÂݽcc6
,
Ì®b&â*ú)
。
J&]Ñû&Í
(犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲)/&âcâ8Iݽc,£¤äúñ&"«³j16SrRNAuæJK³<ݽc5W@
,
¶·|ñ&.Hñ
,
PºpqoÂIݽcc6
。
JôK46btݽcc6,|8 HG24,LH2_
&Ýc
(犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犾犪狀狋犪狉狌犿),LH9_ݽ.þc(犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊犪犮犻犱犻犾犪犮狋犻犮犻),LH7_ðü.þc(犘犲犱犻狅
犮狅犮犮狌狊狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊)。JqIݽcc6vôf5~30℃,pH3.5~7.0Q3.0%j6.5% NaCl"«28ñ·Â
2
,
|8HG24,LH2fpHð_3I"«287ôñ·,2,qJIݽcc6ðâ3y、3½ñj3Õñ/
IHI
。46ݽcc68 HG24jLH2ͽô./、ñ·ûæR,z©ªÞ¤x&âݽcc`。
89:
:
&Í/
;
&âcâ
;
ݽc
;<,-=
:S816.53 >?@AB:A >CD=:10070435(2015)03060709
犆犺犪狉犪犮狋犲狉犻狕犪狋犻狅狀犪狀犱犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犎犻犵犺犙狌犪犾犻狋狔犔犪犮狋犻犮犃犮犻犱
犅犪犮狋犲狉犻犪犳狉狅犿犎狌犾犲狊狊犅犪狉犾犲狔犛狋狉犪狑犛犻犾犪犵犲
CUIZhaoming1,GUOGang1,2,YUANXianjun1,LIJunfeng1,YANGXiaodan1,
DINGLiang1,YUChengqun3,SHAOTao1
(1.InstituteofEnsilingandProcessingofGrass,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing,JiangsuProvince210095,China;
2.ColegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,ShanxiProvince030801,China;
3.InstituteofGeographicSciencesandNaturalResourcesResearch,ChineseAcademyofSciences,Beijing100101,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Theobjectivesofthisstudyweretoselectthesuitablelacticacidbacteriaofhighlandbarley
strawsilageandresearchthenewtypeofsilageadditivesinTibetanPlateau.Optimallacticacidbacteria
wereisolatedandscreenedfromhulessbarleystrawsilageinTibetanPlateau.Conventionalmicrobiali
dentificationand16SrRNAsequenceanalysismethodswereusedtoidentifytheselacticacidbacteria.A
totalnumberoffourhomofermentativelacticacidbacteriastrainswereisolated,ofwhichHG24andLH2
wereidentifiedas犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊.犘犾犪狀狋犪狉狌犿,LH9as犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊犪犮犻犱犻犾犪犮狋犻犮犻andLH7as犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊狆犲狀
狋狅狊犪犮犲狌狊.Alisolatedstrainscouldgrowat5~30℃,pH3.5~7.0and3.0% ~6.5% NaCl.Inaddition,
HG24andLH2gaveapositivereactatpH3.0.ThecharacteristicsoflacticacidbacteriaisolatedinTibet
anPlateauincludedlowtemperature,highacidandhighsaltresistances.Ofaltheselectedstrains,HG24
andLH2weretheeximiousstrainstobeusedassilageadditivewiththeuniqueabilitiesofhighacidpro
ductionandfastgrowth.
犓犲狔狑狅狉犱狊:Hulessbarleystraw;Silage;Lacticacidbacteria
EFGH
:20140714;IJGH:20141203
KLMN
:
8¸-./-QRPñ¼^
(STS¼^)“0]¼b®÷÷(ÉÕ÷)]4®÷2ùÕ¶Í÷\ÅL”(KFJEWSTS071);
¸¹õi¼^¿¥½¾
“
oÀc]`¶JËÌ«Ì
Ên¶ÅL
”(2013GA840003);“´ Ãꔸ ¹-º»¼^“]
[\]4³ïT
¶ÅL
”(2011BAC09B03)ÀÁ
OPQR
:
·òó
(1990),á,ÉWmô§,úË,mVÏÐc]DOúRÌÍ,Email:cuizhaoming096@163.com;:6x× Author
forcorrespondence,Email:taoshaolan@163.com
&]Ñû͸mVI)*÷24g¥,¶Í ¸|ý)*÷4@¬t,&]Ñû4Ñõ,rs/
! " # $ !23"
Û
,
çZC·
,
HÌ
,
<"Ü
[1]。
¹ÒZ
Ixÿ]4ñÍ.
,
*]ñ·#H
,
Í]"
,
&ñcâIRîf#I,ñu)
[2]。
LNÈö]4I_öñÍ.éíô2ܹ)IU
y
,
c]¡¢én_OÉ0])*÷I»¼
,
ü
N)*÷íQÖµÏÈö]4Ó*b®*
b;ã
。
0]®@âà"I®x&/
,
ß&Í
(犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲)、4E(犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿)j
eE
(犃狏犲狀犪狊犪狋犻狏犪L.)/,·#P:x_ÑI
^Scâºà£¤
,
-®x&/À4`ø
、`
M
(¯"Ñ
、
vÏ\«J
、
©µñã
,
0O£¤Q«
ïð
,
ô2ܹ)ñ·;Q)Í»ñÍIU
V
[3]。
W®x&/&â¢vP4|©µñ
,
¦
ÑÏ\æ
,
,É*]À?
,
ݽÑÒ4@*]Í"
、
c]R,ñu)Ö¾
。
ݽcf&âcâIt;S8ï#C·~V
Ix¤
,
&âcâIt»ÀýØ&¢#Iݽ
cG"
、
!ñjøFñÕÖ
[4]。
ÌÍ,f&]Ñ
ûÑw
、
yj¡pI9ø(NO5W&â
ôÛKØoÀI&âcâ
,
&âcâñ
,
½T,
,
©µñ2
,
xy/âÃ~tI,Ä
[5]。
!&
]Ñûü|HÌI45Sòjñò(
,
vôîf
#ôÛf9ø(8t&âcâIHÌݽc`
ÀÀ?
,
üNn¿j£¤&]ÑûHâIsYݽ
c`ÀÀ?
,
|©ñ/IHñ
,
<Þf4@
oÀ&âcâIñÍ
,
5)*÷ðâ~V
¨
。
è$:
,
â·&]ÑûݽcIøFñ¶`À
À?IÌÍ
,
mVÊ8ÞÑûäútÝO»8Ý
½cIJ¶@
[78],
â·*]8Èö¢#ݽc
J@Q|f&âcâ8IºpÌͶ¤zè
x$uÛÜâ¸|
[6],
æ·Þ&]Ñû4@®x&
/8¢#ݽcIÌÍiÿ§Q
。
&Í0]
HâI®x&
,
ºpq<Þ&Í/ðâö¥ñ
,
P
çôf&Í/&â;S8I(ñ·+,Â
2Iݽc]_~V
。
?íîcf<&Í/&â
câ8Iݽc5WJ
、
@jñ&.HñÌÍ
,
ºpq©Þ&]Ñû&Í/&â¤IoÂݽ
cc6
,
_®b&â*ú)I̦R-.LH
。
1 STUVW
1.1 %&*T`b
&Í`Þ0]²Ò°4@]ûRxEíî<
(
uvw3836m,N29°16′,E88°51′),4@Ð
ÞÑr&ÒUx¹¸xÿ
,
$vÙ"_422.4
mm,uvxy6.3℃,$uv²àG3233h。&
ÍËÞnI#
,
Þ2013$9%26²Ó5,WìüÖ
q¢I&Í/¤ÓoKn2~3cm,Rû©>P
of2LîÞ&âÎ8,ÆåCÆP¤ÁU
J~
,
fÞyNOéî
。
J*f&â¢!10j
45dÛÎF,<&âcâ8ݽc5Wºp@
。
&Í/&â10,45d)5A~¡,¼10A
&âÎ
。
1.2 %=>?osѺu,,c
°¤ux"«Ö³5Wñ&¼G
,
fõR
xÝ8°¤¥J³&Í/10g,Ó¬90mLI
ÿcñ5ÕÉJ~
,
òÞY|P120rpmY×2
h。¤ÿcñ5ÕÉ©eiÞ,3A©ªe
x
,
Ae2AuW。ݽcp¤ MRS"«2,
âpcp¤Q«"«2
,
kcjtxcp¤Ì
"«2
,
J*òÞ35℃Qy"«R8"«2
~3d¼G,|8ݽcÓfÿcëp®8。GYP
"«2j MRS"«2JÍL¨Ä[9]IÖ³{O,
Q«"«2
、
Ì"«2_¸üÊo.í)â@r
。
1.3 FWco,Uó)
fõRxÝ8W&âF»Û~F§y
,
9
10gF»Þ250mL7M»8ú¬90mLIÿ
cñ5ÕÉJ~
,
òÞY|P120rpmÞyÂu
2h。¤ÿcñ5ÕÉ5Wö°eiÞ,p3A
©e
,
Ae2AuW。£¤§c³fGYP
"«2837℃ëp("«48h。HcI
ô
、
à4
、
=d
、
,âEz<Çc
,
f
MRS+2"«2^¶"«(37℃,24h),~¡^
¶J"«3~,Kز\IÇc6。<c65
W×ò÷ð
、`
öc2à4
、
M=Q%æÖ
µ
;
;p\þ£íî
。
a×ò÷ñ
、
;p\þ£
ñIc6fzø_ݽc
[9],
¤ MRSn2"
«28Ê
(37℃,24h),ú¬240%IÆ,J
©
,-20℃éîÁ¤。
1.4 FWco
6
,
5W×ò÷ð
、`
ö
、
;p\þ£íî
,
KØ
456ݽc,:;ye、pH j3Õñí
806
!3# ·òó:&Í/&âcâ8oÂݽcIºpQ@
îItS
,
KØ1663y、pHIݽcc6,
!<|5Wñ·Í½íî
,
KØ46ñ·Hû、ͽ
RIoÂݽcc6
。
|8 HG24JÞ&â
t10dI&Í/&âcâ,LH2,LH7jLH9J
Þ&ât45dI&Í/&âcâ。
1.5 FWcoÑlÑ)Ýлm
¤Ôc624hI"«n,P3%IO`"O
¬ MRSn2"«28,J*f5,10,15,30℃
yeNO"«
,
|85℃"«10d,10℃j15℃
"«5d,30℃"«3d,ݽcc6Iñ·
FG
。
J*fpH3.0,3.5,4.0,5.0,6.0,7.0I
MRSn2"«2830℃"«3d,ݽcc6
I3½ô.
。
J*f¯â3.0%j6.5%NaClI
MRSn2"«2830℃"«3d,ݽcI3
Õô.
。
£¤ API50CHL (bioMérieux,l′Etoile,
France)öݽc<49`Ä?I\ô.。
ð2Ö³àí)®I!5W
。
1.6 ÒW0NÑ"OÅom®
¤Ôݽcc624hI"«n,P3%IO
`"O¬ MRSn2"«28,Þ30℃"«R8"
«36h,M2h1~F»,¤pH ¼(HANNA
pH211)"«2IpH ð,P"«h_-÷
{
,pHð_÷{,øOͽûæô¶。P"«2
!ÑÒ
,
f[·600nm¤XCvªJ==e¼
(
²1
,U2910)F»I0=eð(ODð),P"
«h_-÷{
,ODð_÷{,øOñ·ô¶。
1.7 FWc16犛狉犚犖犃K¨©m®
JIݽcf MRS"«28"«12h¢5
¥z²\P5Wc6DNAI¦。DNA¦í
)®ÝÈñ\í)
(
À
)
â@r¦R
。DNA
I¦Q²\àí)®£¤Ö³5W
。
JÇc
DNA!´x,
,
d & u æ _ 27f:5′AGAGTTTGATCCTG
GCTCAG3′j1492r:5′TACCTTGTTACGACT
3′,Ýmù~2â@rn,ù¥I.ù·
e_1465bp。PCR.2ùYZ:2×PCRMaster
Mix12.5μL,d&)1μL,DNA´x1μL,ddH2O
9.5μL;PCRùSu:añ,94℃,5min;ñ,
94℃,30s;[i,52℃,30s;?ß,72℃,1.5min,30
A1¢
;
?ß
,72℃,7min,4℃éî。PCRù
Í&f1.5%üÀÁÂö,ßaPCRn
ó
,
°vªØÉ_1500bpINU。WPCRùÍ
&Cmù~2â@rl
、
.u
。
1.8 ij,c
£¤BLASTWnc6I16SrRNAuæ
¶GenBankGHe8éÀ+cI16SrRNAuæ
5Wt<
,
-R¶¥I2üuæ?ñzÑIé
ÀJa4SIc`
。
ö¢Ï GenBankGHe8,
¦éÀI{%c6I16SrRNA2üuæ,¶
c6I16SrRNAuæ,¤ MEGA6.0É
O8I Neighborjoining5W¥%%N,øOùú
5\。
2 mnU,c
2.1 sѺgi
íî¤&Í/8ñ&InJß+1nÅ。
ݽcIG"S_2.1×104CFU·g-1FW,kc
jtxG"v_103CFU·g-1FW;2pcIG"
zø}Ø5.6×107CFU·g-1FW。
q1 %=>?sѺ,c
Table1 Microbiologicalanalysisofhulessbarleystraw CFU·g-1FW
&âþâ
Silagesample
ñ&¼G
Countsofviablemicroorganisms
ݽc
Lacticaacidbacteria
2pc
Aerobicbacteria
kc
Mold
tx
Yeast
&Í/
Hulessbarleystraw
2.1×104 5.6×107 4.2×103 6.9×103
(Note):CFU,colonyforminguni;FW,freshweight
2.2 FWcoop,ÝÐ
íîJØI46ݽcc6IMòHIß+
2nÅ。|8c6 HG24,LH2ßH=,ÇA6
ßJ=%æ
,
c_ÝÒ
,
8yúï
,
+=û
,
c
MðâEz
。LH7,LH96þM,<ñ,c
_ÝÒ
,
Ju
,
+=û
,
cMðâEz
。
906
! " # $ !23"
q2 %&*T;,oFWcopÝÞ
Table2 Morphologicalcharacteristicsoflacticacidbacteriafromsilage
c6U
Strainnumber
&âh
Ensilingtime/d
A2M=
Individualshape
cHI
Colonycharacteristics
Ez
Transparentzone
HG24 10
H=
,
ÇA6ßJ=%æ
Shortrod,singleorchain
ÝÒ
,
6M
,
8yúï
,
+=û
Milkywhite,round,centralbulge,smoothsurface
â
Existence
LH2 45
H=
,
ÇA6ßJ=%æ
Shortrod,singleorchain
ÝÒ
,
6M
,
8yúï
,
+=û
Milkywhite,round,centralbulge,smoothsurface
â
Existence
LH7 45
6þ=
,
<ñ
Cocci,opposite
ÝÒ
,
6M
,
Ju
,
+=û
Milkywhite,round,flat,smoothsurface
â
Existence
LH9 45
6þ=
,
<ñ
Cocci,opposite
ÝÒ
,
6M
,
Ju
,
+=û
Milkywhite,round,flat,smoothsurface
â
Existence
2.3 FWcoÑlÑ)ÝÐ
JôKIݽcc6Iñ5Hñß+3n
Å
。
nâݽcc6v_×ò÷ñ
、
;p\þ£
ñ
、
btݽc
。
ÏJݽcc6f
yeIñ·FG:Ú
,
nâݽcc6ùôÛf
5~30℃LMåñ·Â2。fpHjNaCl
NOIñ·FG+
,
nâݽcc6ùôÛf
pH3.5~7.0ILMåñ·Â2,f3%j6.5%
NaClNOñ·Â2。<+nâݽcc6ù
ðâ3y
、
3½j3ÕIHñ
,
vfpHjy
(8ñ·
。
]| HG24jLH2vfpH3.0
INOñ·
,
+<26ݽcc6¬ô©½
ñ(
。
ݽcc6Iütíîaß+4nÅ,Ý
½cc6HG24,LH2,LH7,LH9vôtLoü
、
ëü
、
xÝü
、Dxyü、Daü、DÆfü、
NûÖxyü×、β²üÃü、êýÁá、naá、
þ2á
、
"Ãü
、
Ýü
、
ûü
、
É~á
、
M(Ãü
、
E
ü
、
ÿü
、
xyü½Õ
。
üݽcc6LH7C,n
âݽcc6ùôtÆfê
、
rê
、
n=ü
、D
VÖü
、αâ2DÆfüá、DnÃü、D
。
-ݽcc6LH7ôtDCjü,æ|Î
c6ôtN`ü
。
ݽcc6LH7jLH9i
ô£¤C3ü
,
æ|ýݽcc6ô£¤<`ü
。
q3 %&*T;FWcoÝÐ
Table3 Characteristicsoflacticacidbacteriafromsilage
HñCharacteristics HG24 LH2 LH7 LH9
M=Shape ݽcRod ݽcRod ݽþcCocci ݽþcCocci
tabFermentationtype bt Homo bt Homo bt Homo bt Homo
×ò÷ðGramstain + + + +
;p\þ£Catalase - - - -
xyüÍxGasfromglucose - - - -
yeTemperature
30℃ + + + +
15℃ + + + +
10℃ + + + +
5℃ + + + +
NaCl
6.5% + + + +
3% + + + +
pH
7.0 + + + +
6.0 + + + +
5.0 + + + +
4.0 + + + +
3.5 + + + +
3.0 W W - -
:“+”+Åñ,“-”+Åñ,“W”+ÅÆñ
Note:“+”meanspositive;“-”meansnegative;“W”meansweaklypositive
016
!3# ·òó:&Í/&âcâ8oÂݽcIºpQ@
q4 %&*T;FWco¬ûBÝÐ
Table4 Sugarfermentationprofilesoflacticacidbacteriafromsilage
HñCharacteristics HG24 LH2 LH7 LH9
P=êGlycerol - - - -
j_üêErythritol - - - -
D
DlüDXylose - - - -
LlüLXylose - - - -
<êAdonitol - - - -
βâ2lüáβMethylxyloside - - - -
xÝüGalactose ++ ++ ++ ++
DxyüDGlucose ++ ++ ++ ++
DaüDFructose ++ ++ ++ ++
DÆfüDMannose ++ ++ ++ ++
LrüLSorbose - - - -
C3üRhamnose - - + +
xÝüêDulcitol - - - -
ðüInositol - - - -
Æfê Mannitol ++ ++ - ++
rêSorbitol ++ ++ - ++
αâ2DÆfüáαMethylDmannoside ++ ++ - ++
αâ2DxyüáαMethylDglucoside - - - -
NûÖxyü×NAcetylglucosamine ++ ++ ++ ++
êýÁáAmygdalin ++ ++ ++ ++
naáArbutin ++ ++ ++ ++
þ2áEsculin ++ ++ ++ ++
É~áSalicin ++ ++ ++ ++
M(ÃüCelobiose ++ ++ ++ ++
Eü Maltose ++ ++ ++ ++
ÝüLactose ++ ++ ++ ++
"Ãü Melibiose ++ ++ ++ ++
ûüSaccharose ++ ++ ++ ++
ÿüTrehalose ++ ++ ++ ++
püInsulin - - - -
n=ü Melezitose ++ ++ - ++
DVÖüDRaffinose ++ ++ - ++
Ç+Starch - - - -
!üGlycogen - - - -
lüêXylitol - - - -
β²üÃüβGentiobiose + + + -
DnÃüDTuranose ++ ++ - +
D:üDLyxose - - - ++
DCjüDTagatose - - ++ -
DùÿüDFucose - - - -
LùÿüLFucose - - - -
D
2Z2xyü½Õ2Cetogluconate - - - -
5Z2xyü½Õ5Cetogluconate - - - -
:“++”+Åñ·Â2,“+”+Åñ·,“-”+Åñ·,“W”+ÅÆñ·
Note:“++”meansgrowthwel,“+”meansgrowth,“-”meansnongrowth,“W”meansgrowthweakly
2.4 FWccj16犛狉犚犖犃K¨©,c
ݽcc6 HG24,LH2,LH7jLH9íPCR
ùnôKI16SrRNA2üUJuæ·eJ*_
1451bp,1453bp,1462bpj1466bp。16SrRNA
116
! " # $ !23"
ua+
(
+5),HG24jLH2¶&Ýc
(犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊.犘犾犪狀狋犪狉狌犿 ‘WCFS1’)jðüÝ
c
(犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊.狆犲狀狋狅狊狌狊‘1242’)I16SrRNA
2üuæ¬Ùñv}Ø100%;LH7¶ðü.þc
(犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊.狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊‘ATCC25745’)I16S
rRNA2üuæ¬Ùñ}Ø100%;LH9¶Ý½.
þc
(犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊.犪犮犻犱犻犾犪犮狋犻犮犻‘DSM20284’)I
16SrRNA2üuæ¬Ùñ}Ø99.5%。WJÝ
½cc6¶UJJÍݽcc62Þ16SrRNA2
üuæÕùú5\(
1),aÅ HG24j
LH2¶&Ýc(犔.狆犾犪狀狋犪狉狌犿)jðüÝc
(犔.狆犲狀狋狅狊狌狊)I5\ñèev_99%;LH7¶ðü
.þc
(犘.狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊)I5\ñèe_100%;
LH9¶Ý½.þc(犘.犪犮犻犱犻犾犪犮狋犻犮犻)I5\ñèe
_100%。HG24,LH2,LH7,LH9f GenBank8
IÏU_KJ779086KJ779089。
<1 FWccj犎犌24,犔犎2,犔犎7犔犎91d8c0ûÊÆ)
Fig.1 PhylogenetictreeshowingtherelativepositionsofstrainsHG24,LH2,LH7,LH9and
relatedspeciesasinferredbytheneighborjoiningmethodwith16SrRNAgenesequences
q5 FWccjo16犛狉犚犖犃K¨©,c
Table5 Resultsof16SrRNAgenesequencesoflacticacidbacteria
c6QU
Strainandnumber
2üeîU
Accessionnumber
è?`
Closestrelatedstrain
¶GenBank8è?`I¬Ùñ
Similaritywiththeclosest
describedspeciesinGenBank/%
HG24 KJ779086 &Ýc‘WCFS1’犔 .狆犾犪狀狋犪狉狌犿‘WCFS1’ 100%
ðüÝc
‘1242’犔 .狆犲狀狋狅狊狌狊‘1242’ 100%
LH2 KJ779087 &Ýc‘WCFS1’犔 .狆犾犪狀狋犪狉狌犿‘WCFS1’ 100%
ðüÝc
‘1242’犔 .狆犲狀狋狅狊狌狊‘1242’ 100%
LH7 KJ779088 ðü.þc‘ATCC25745’犘 .狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊‘ATCC25745’ 100%
LH9 KJ779089 ݽ.þc‘DSM20284’犘 .犪犮犻犱犻犾犪犮狋犻犮犻‘DSM20284’ 99.5%
216
!3# ·òó:&Í/&âcâ8oÂݽcIºpQ@
2.5 ,oFWccjÒW1Ñ"ÝÐ
Jݽcc6Iͽûæô¶ß2nÅ,
HG24jLH2ðâ¬ÙIͽûæ,0~8hͽû
æSR
,8~16h
i,16~36hÞuT,
LH7jLH9ðâ¬ÙIͽûæ,pHðé))°
i"I
。46ݽcc6t36h¢pH
v}Ø3.7P,f MRSn2"«28 HG24j
LH2ͽô.S2。
<2 FWcoÒW0NOÅ
Fig.2 Acidproductionrateoflacticacidbacteria
Jݽcc6Iñ·ô¶ß3nÅ,
HG24jLH2<26ݽcñ·Hû,0~8hËÞ
h¢5¬T#,ODð2?ÿ\,"«Ø36hd
ªØ=[#
。LH7jLH9<26ݽcc6 OD
ðß
÷I
,20h¢ODð2?ÿ\,"
«Ø36hdªØ=[#。46ݽcc6ft
36h¢IODðv}Ø2.4P。46ݽcc
6f MRSn2"«280~12hIÚ!×
R
,
+ÍG"Hûù·
,
5¬T#0Ø36hODð
2?é)
,
!ݽc}ØT#¢vPT
îfÞpÀ8
。46ݽcc6ft;S8/â
I/I#
,
!f MRSn2"«28IÚ
!×tSR
,
ôvR5¬+ÍIJa#
,
£+ÍG¥
Rûù·
,
5æÍñà"ݽ
,pH Rû,vX
O&âûâ8Itxc
、
kcPQÐÑcIñ·
。
|8f MRSn2"«28 HG24jLH2ñ·ô
.¬/
。
<3 FWcoÑ"OÅ
Fig.3 Growthcurveof
lacticacidbacteria
3
ݽcf&ât;S8ï#~VIx¤
,
|
`a
、
G"j!ñÕÖ#&âcâIt»À
。
f
_öÙ
,
&+¢ñIݽcG"v
,
<ä+c
²GI0.01%~1%,¥zd}ØÂ2&âtn
UIzG"Éu105CFU·g-1FW[10],H*®
x&/a+¢#IݽcG"¬
,
f&â;
S80n_oc
。
ßaݽcôm
t
,
OcÛÔRûñ·
,
&âcât»Àã
,
Q«ïð
。
?íî8
,
0]4@&Í/+
¢#ݽcIG"_104CFU·g-1FW,ô2Ü
&â t n U V I Ý ½ c G "
(> 105
CFU·g-1FW)。üN,_4&âcâIt»
À
,
zWgâ>IÖ³Û*úoÀݽc
,
£Ý½
cHûn_oc
。
¥ÖݽcO)ônó4x¤#½
Þ(ye
[11],
&âye;6;Ñ
,
ù£ÞÝ
½t
。Liu[12],Kim[13],j Weinberg[11]J*<
yeWL]
(犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊犵狌犻犪狀犲狀狊犻狊)、[h
(犣犲犪犿犪狔狊)j4EI&â»À5WJK,,ye
;ݽc!ñ:/
,
fyNO*úݽ
c<&ât»ÀI¦Ñ/â>a
[14]。
͸&]
Ñû4@xÿ(ÑÒ
,
£KäúQ»Ý½cO)
f4@I¤ýØ@O
,
ü_Q»Ý½cO)
I©ªñ·ye:_30℃,æf&]Ñû4
@
,
*]Óô,xyéC10~20℃,çÎÏy
ãà
,
<Ô<*]&âItSeQt»ÀÍ
ñ~VÕÖ
。
?íî8Ï&Í/&âcâ8J
IݽcôÛf5℃INOñ·,æçf10℃
ñ·lm
,
2,qÑÒ(8JqIݽc<
yI©Hñ
,
_fÑÒyNO
,
£¤JqI
3yݽc5W&âcâIñͦR5
LH
。
16SrRNAðâóôj5\I?ñ,|u
æ5\Rúæi"
,
fï29øé
,
Pç
16SrRNAJrà4©8,¬UâàJIñ&67
v¤:5Wv"Iùú5\Ja
。16SrRNA uæ
JKvPRû
、
%4<ñ&5WJa@
,
2Þ
16SrRNAÕ1Iùú5\\vPñ&f5
\8ISò
。
¥z:â
,
f`Jay
,
ßa2A
JaÇShI16SrRNAuæ?ñàÞ97.5%,
°ø_ÐÞ¥A`
[15]。
?íî8
,LH7¶ðü.
þc
(犘.狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊)Iuæ¬Ùñ_100%,5316
! " # $ !23"
ñèe#_100%,üNLH7@_ðü.þc
(犘.犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊),LH9¶Ý½.þc(犘.犪犮犻犱犻犾犪犮
狋犻犮犻)Iuæ¬Ùñ_99.5%,5\ñèe_100%,
üNLH9@_ݽ.þc(犘.犪犮犻犱犻犾犪犮狋犻犮犻)。
HG24jLH2¶&Ýc(犔.狆犾犪狀狋犪狉狌犿)jð
üÝc
(犔.狆犲狀狋狅狊狌狊)Iuæ¬Ùñv}Ø
100%,5\ñèev_99%。&Ýcjðü
ÝcI16SrRNAuæçâ2bpIã*,+,q
vÑIuæ¬Ùñ
,
bÿ³`^
。
c6M
ò.Qñ\Hñ
,
ðüÝcvP£¤C3üͽ
,
&Ýc£¤C3üͽ
;
&ÝcôÛ£
¤n=ü
,DVÖüjαâ2DÆfüátÍ
½
,
-ðüÝcô
。HG24jLH2ô£¤n=
ü
,DVÖü,αâ2DÆfüájL
,
-ô£¤C3ü
[16]。
üNWݽcc6
HG24jLH2@_&Ýc(犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆
犾犪狀狋犪狉狌犿)。?íîJIݽcc`ºàîfÞ
ÝݽctIcâjw»8
,
ft;S8ï~
Vx¤
,
vJÞø`:?
[6,9]。
-Ï&]ÑûH
âI®x&&Í/&âcâ8JIݽcid
ª¸|
。
¤Þ&âIݽcðâ3½ñ/
,
ñ·ûe
RIHI
,
vRûpH ð,XOÂñ&G
Ì
,
ßtx
、
kc
,
Ïæ¦Ñ&âcâIt»À
,
iôºà4£¤)`vøñü
,
fSàIyeL
MåPQø`NOvvPñ·
[17]。
?ÌÍ+
,
JØI46ݽcc6vôf3%j6.5%NaCl
INO
,pHf3.5~7.0ILMåñ·,HG24j
LH2iôfpH_3INOñ·,2,qS/I
3Õj3½ô.
。
ÝNvª
,
Ï&]Ñû9ø(
8JIݽcc6ðâ¬<(4#I3ýñ
。
foÂc6Iºpz{8
,
ͽjñ·ûæ
~VIz{
,
ݽc!ñÂ2I~VHI
,
Ic6îfvàIãR
。
?íî8ݽcSÝ
½þcðâS/Iͽô.jSRñ·ûe
,
ͽ
ô.z/I&ÝcLH2j HG24,ñ·ûe
zRI#&ÝcLH2j HG24。³2¿
z{
,46ݽcc68&Ýcz©!&â
câݽc*ú)c`
。
ÌÍ+
,
ݽc*ú)c`Òp&Ýc
,
Pçc6f&âcâ80ÞJ
[17]。
L¤
a+
,
ݽcc6f&â8nïIx¤
,
Ç0£¤¥`ݽcâPô}Ø#§2
I&â>a
,
ݽc*ú):ù&Ýcj
|ýݽcc`§«n
,
¥zFGp¤Ý½þ
c
,
ßåØc
、
.þc
、
Ýþc
,
ü_|¬©Þ
&âtIfÜNO
,
ftf#GÌlm
,
áá!
_tI¨×ݽc
,
æ"#&â;S8pH I
,
btݽcIG"ãÃùø
,
ݽcô
tv·h
,
ftIïA;S8ïmx¤
。
JqI46ݽcc6:?Þ&Í/&â
câ
,
¬Î0©Þ&Í/I&â
。
?íîW
5¥zP<46cx_*ú):î{P&Í/_
ûâI&âíî
,
ÌÍ<46c<&Í/&â
t»ÀIÕÖ
,
àJ£¤0]4@&Í/À?
,
Û
*]¶®x&/§&âcâIñÍ
,
5e
4)*÷I
。
4 m
?íîÒ~¸|Ï&]Ñû&Í/&âc
â8JIݽc
。
JqI46ݽc,v_
btݽc
,
ðâ3y
、
3½ñ/IHI
。
íä
úñ&@Ö³j16SrRNA uæJK,c6
LH9_ݽ.þ c (犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊犪犮犻犱犻犾犪犮狋犻犮犻),
LH7 _ðü.þc (犘犲犱犻狅犮狅犮犮狌狊狆犲狀狋狅狊犪犮犲狌狊),
HG24jLH2_&Ýc(犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊狆犾犪狀
狋犪狉狌犿)。|8&Ýcͽô.z/,ñ·ûæ
zR
,
z©ªÞ¤x&âcâݽc*ú)c`
。
>?
[1] §$,n,ÌUS,.O=YMj6`a;§&ât
»ÀIÌÍ
[J].]4.¸,2012,20(5):952956
[2] ÃX,.,¬Ò,.0]ø$ñXE]¶XL\]§
&âIÌÍ
[J].]4.¸,2013,21(5):985990
[3] .,û,´,W,.*úü"¶Ý½c
[J].]4.¸,2014,22(2):409
413
[4] MasanoriT,HisamiK.Genotypicandphenotypiccharacter
izationoflacticacidbacteriaisolatedfromItalianryegrasssi
lage[J].AnimalScienceJournal,2012,83(2):111120
[5] ~~,Ô,.ñ,.ÑÒ].Ø÷ݽcIJ@Q
5\HñÌÍ
[J].]÷.¸,2014,23(1):266275
[6] HuiliP,ZhongfangT.Phenotypicandphylogeneticanalysis
oflacticacidbacteriaisolatedfromforagecropsandgrassesin
thetibetanplateau[J].TheJournalofMicrobiology,2012,50
(1):6371
[7] ,ò,SÖ,ö,.0]4@IJtÝO»8ݽcI
J¶@
[J].w»-.,2008,29(12):408412
416
!3# ·òó:&Í/&âcâ8oÂݽcIºpQ@
[8] TanZF,PangHL.16SribosomalDNAanalysisandcharac
terizationoflacticacidbacteriaassociatedwithtraditionalTi
betanQulacheesemadeformyakmilk[J].AnimalScience
Journal,2010,81(6):706713
[9] YiminC,SumioK.Characterizationandidentificationofpedio
coccusspeciesisolatedfromforagecropsandtheirapplication
forsilagepreparation[J].AppliedandEnvironmentalMicro
biology,1999,65(7):29012906
[10]TengerdyRP,WeinbergZG.Ensilingalfalfawithadditives
oflacticacidbacteriaandenzymes[J].JournaloftheScience
ofFoodandAgriculture,1991,55(2):215228
[11]WeinbergZG,SzakácsG.Theeffectoftemperatureonthe
ensilingprocessofcornandwheat[J].JournalofAppliedMi
crobiology,2001,90(4):561566
[12]LiuQH,ZhangJG.Theeffectsofwiltingandstoragetem
peraturesonthefermentationqualityandaerobicstabilityof
stylosilage[J].AnimalScienceJournal,2011,82(4):549553
[13]KimSC,AdesoganAT.Influenceofensilingtemperature
simulatedrainfalanddelayedsealingonfermentationcharac
teristicsandaerobicstabilityofcornsilage[J].Journalof
DairyScience,2006,89(8):31223132
[14]AshbelG,WeinbergZG.Theeffectsoftemperatureonthe
aerobicstabilityofwheatandcornsilages[J].JournalofIn
dustrialMicrobiology,2002,28(5):261263
[15]²¥,[W,§W,.&âcâ8ݽcIJ@QoÂ
c6ºp
[J].]4.¸,2011,19(1):137141
[16]BalEBB,BalMA.Effectsofchemicaladditivesandensiling
timeonwholeplantwheatsilagemicrobialprofilesinferredby
phenotypicand16SribosomalDNAanalyses[J].WorldJour
nalofMicrobiologyandBiotechnology,2012,28(2):767776
[17]rPÓ,§n,ý¨,.ríùcM&â8oÀݽcI
Jj@
[J].]4.¸,2012,20(1):166170
(
%&( , -)
516