全 文 ：武汉植物学研究 2003, 21 (4) : 295～ 300
J ourna l of W uhan B otan ica l Resea rch
海洋单细胞四爿藻基因组D NA 的微量提取
罗立明, 欧阳叶新Ξ , 胡鸿钧
(中国科学院武汉植物研究所ö武汉植物园, 武汉　430074)
摘　要: 四爿藻具有坚硬的囊壳和特殊的细胞壁组成, 细胞不易破碎, 且含有丰富的糖蛋白, 易对 DNA 造成污染,
使其基因组 DNA 提取较为困难、纯度不高。研究对比传统的 CTAB 法与高盐低 pH 法提取四爿藻DNA , 高盐低
pH 法快速经济, 得到的基因组DNA 纯度较高, 是一种行之有效的四爿藻基因组DNA 提取方法。该法通过改变抽
提介质, 提高细胞破碎效率, 减少抽提次数, 有效去除污染, 提取的基因组DNA 不仅可以成功进行 nrDNA 转录间
隔区 ( IT S) 扩增, 而且扩增产物适合于进行测序分析, 这为其它淡水和海洋单细胞及多细胞藻类基因组 DNA 的提
取也提供了借鉴。
关键词: 四爿藻; 基因组DNA 提取; 高盐低 pH 法; CTAB 法
中图分类号: Q 949. 21; Q 946. 2　　　　　文献标识码: A 　　　　　文章编号: 10002470X (2003) 0420295206
M in iprepara tion of Genom ic D NA of a M ar ine Un icellular
Green A lgae Tetra selm is
LUO L i2M ing, OU YAN G Ye2X inΞ , HU Hong2Jun
(W uhan B otan ic Gard enöW uhan Institu te of B otany , T he Ch inese A cad em ic of S ciences, W uhan　430074, Ch ina)
Abstract: T etraselm is, a un icellu lar green algae located un iquely in phytophylogeny, is a new im 2
po rtan t model o rgan ism fo r the study of the o rig in and evo lu t ion of green p lan ts. T he genom ic
DNA s of T etraselm is are diff icu lt to be iso la ted becau se of its hard theca and un ique cellw all com 2
ponen ts, as w ell as its richness in glycop ro tein easy to impu rify the genom ic DNA. W e repo rted
here that an imp roved low pH ex tract ion m atrix w ith h igh salts o rig inally developed fo r h igher
p lan t w as successfu lly to ob ta in h igh quality of genom ic DNA of T etraselm is. Compared to the tra2
dit ional CTAB ex tract ion, th is app roach is very fast and econom ical ju st by changing ex tract ion
m edium so that the eff iciency of T etraselm is cell b reakage w as great ly imp roved, and the po llu t ion
of p ro tein s released du ring DNA ex tract ion w ere drast ica lly reduced as w ell. T he fragm en ts of T e2
traselm is nuclear ribo som e in ternal t ran scribed DNA spacers (n rDNA IT S) w ere PCR 2amp lif ied
successfu lly from th is m in ip repara t ion s of the genom ic DNA , bu t a lso am enab le to n rDNA IT S
sequencing. D ue to its app lica t ion to som e h igher p lan ts w ho se genom ic DNA s are hard to be iso2
la ted, th is imp roved m ethod of low pH ex tract ion m atrix w ith h igh salts w e described here fo r the
m arine un icellu lar m icroalga T etraselm is cou ld be righ t fo r the m in ip repara t ion of genom ic DNA
of o ther un icellu lar o r m u lt icellu lar fresh and m arine algae.
Key words: T etraselm is; M in ip repat ion of genom ic DNA ; L ow pH ex tract ion w ith h igh salts
m ethod; CTAB ex tract ion m ethodΞ 收稿日期: 2002211227, 修回日期: 2003203218。基金项目: 中国科学院武汉植物研究所ö武汉植物园所长创新基金项目资助。作者简介: 罗立明 (1976- ) , 女, 硕士, 助理研究员, 现从事藻类学研究。通讯作者 (现通讯地址: D ep t. of B io logy &M icrob io logy, U niv. of W isconsin2O shko sh, O shko sh,W I 54901 U SA )。
　　四爿藻 (T etraselm is) 属绿藻门 (Ch lrophyta ) ,
绿枝藻纲 (P rasinophyceae) , 为具有 4 根鞭毛的单
细胞真核绿藻, 多为海生, 也有淡水类[1 ]。四爿藻因
其特殊的系统位置和化学组成, 近来受到国际学者
的普遍注意[2 4 ]。四爿藻细胞形态较为特殊, 细胞外
具坚硬的囊壳, 细胞和鞭毛表面覆盖有鳞片[5, 6 ] , 囊
壳的化学成分不同于在系统演化位置上处于较高级
的绿藻的纤维素细胞壁, 但类似于更近缘的团藻类
的糖蛋白细胞壁, 普遍被认为是原始的绿色鞭毛类,
与绿色高等植物的起源有密切关系, 是研究绿色植
物起源和系统演化的重要材料。但因为四爿藻具有
坚硬的囊壳, 在生活史中常进入不动期, 细胞聚
集[1 ] , 细胞难以破碎, 使得 DNA 提取比较困难,
DNA 得率较低。四爿藻囊壳的主要化学成分为中
性、酸性多糖与一定的氨基酸组成[7 9 ] , 难以去除,
对DNA 质量造成很大的污染。在藻类分子系统学
蓬勃发展的今天[10 13 ] , 四爿藻尽管具有重要的系统
位置, 但它的分子数据却很少, 这与DNA 提取的困
难不无关系。近年来, 我们在进行团藻目编志研究和
系统演化分析中发现, 对四爿藻分子系统学进行深
入研究是一个非常有意义的课题, 同时四爿藻因富
含各种营养物质, 且生长迅速, 常作为海产养殖的饵
料[4 ] , 因此为探讨其分子生物学机理, 以及为海产养
殖提供理论基础, 这些促使我们寻找解决其基因组
DNA 提取困难的办法。作者通过两种DNA 提取方
法的对比和改良, 得到一种简易、有效的微量提取四
爿藻基因组DNA 方法, 其纯度高、重复性好, 适宜
于 PCR 扩增和扩增片段的测序, 为下一步的分子系
统学分析和其它分子生物学研究奠定了基础, 同时
这也可能为其它难以提取基因组DNA 的淡水和海
洋单细胞及 多细胞藻类提供了良好的借鉴。
1　材料与方法
1. 1　材料
实验所用海洋单细胞四爿藻材料采自我国沿海
地区 (包括广东、浙江、山东等省) [14 ] , 具体取样地点
见表 1。
表 1　实验所用的四爿藻品系
T able 1　T he list of T etraselm is stra ins used in th is invest igation
种　名　Species　　　 培养品系　Strains　　　 取样地点　Samp ling sites
T etraselm is chu i T etraselm is chu i W H 01 (W H 01) 山东省青岛市鲁迅公园、潮间带、岩坑
T. cord if orm is T. cord if orm is W H 02 (W H 02) 山东省青岛市石老人、潮间带、岩坑
T. helg oland ica T. helg oland ica W H 03 (W H 03) 浙江省象山县渔山岛、大沙湾
T. suecica T. suecica W H 04 (W H 04) 浙江省象山县渔山岛、小岛
T. g uang d ong ensis T. g uang d ong ensis W H 05 (W H 05) 广东省湛江市海近沙滩土坑
T. cord if orm is var. chuha iensis T. cord if orm is var. chuha iensis W H 06 (W H 06) 广东省珠海市海近沙滩土坑
1. 2　方法
1. 2. 1　四爿藻的培养
将四爿藻置于L RH 21502G 型恒温光照培养箱
中培养。培养温度为 (20±2)℃, 持续光照振荡培养,
光强 2 000～ 4 000 lx, 摇床转速为 120 röm in。培养
基配方参照文献[ 15 ], 选取对数生长期 (运动) 的细
胞用于基因组DNA 的提取。
1. 2. 2　四爿藻基因组DNA 的提取
(1) CTAB 法[16 ]提取基因组D NA: 加热CTAB
抽提缓冲液、研钵、研杵到60℃; 离心收集115 mL 不
同品系的对数生长期的四爿藻培养物, 用新鲜培养
基洗涤1～ 2次; 取适量 (按 1∶10) 的 2×CTAB (含
2% 巯基乙醇) , 研磨组织; 60℃下温浴 30～ 60 m in,
轻摇, 充分混合降至室温; 加入等体积的氯仿∶异戊
醇 (24∶1) , 轻摇使其混合, 室温下, 10 000 röm in 离
心, 转移上清液至新离心管中, 反复抽提, 直至溶液
呈现无色为止; 加入 2ö3 体积的冷异丙醇, 轻混, -
20℃下放置 30 m in 或更长时间以沉淀DNA , 室温
下离心 3～ 5 m in, 小心倒掉上清。加入 80% 乙醇+
1ö10 体积的N aC l 清洗 2 次, 真空或室温干燥核酸
沉淀, 并将抽提的DNA 溶于适量的 T E (pH 810)
后, 贮存于- 20℃备用。电泳检测DNA 抽提效果及
DNA 含量。
(2) 高盐低 pH 法提取基因组D NA: 参照文献
[ 17, 18 ]的方法, 在提取四爿藻基因组DNA 时, 我
们根据提取情况作了适当的改进, 其步骤为: 加热提
取介质 (100 mmo löL 醋酸钠, 50 mmo löL ED TA ,
500 mmo löL N aC l, 2% PV P, 114% SD S, pH 515)、
研钵、研杵到 65℃; 离心收集 115 mL 不同品系的四
爿藻培养物, 用新鲜培养基洗涤 1～ 2 次; 加入 1～
115 mL 提取介质, 1% 巯基乙醇, 65℃迅速研磨, 保
温10 m in。10 000 röm in 离心 10 m in。取上清, 加入
692 武 汉 植 物 学 研 究　 　　　　　　　　　　　　　　　　第 21 卷　
2ö3 体积的醋酸钾 (215 mo löL , pH 515) ; 在 4℃下
10 000 röm in离心 10 m in, 取上清; 加入等体积的氯
仿: 异戊醇 (24∶1) 抽提 1 次, 取上清加入 016 体积
的异丙醇, - 20℃放置 30 m in; 10 000 röm in 离心
10 m in; 70% 的乙醇清洗 2 次, 干燥; 溶于适量的 T E
(pH 810)后, 贮存于- 20℃备用。电泳检测DNA 抽
提效果及DNA 含量。
(3) D NA 浓度和纯度的测定: 采用紫外吸收法
测定DNA 的浓度和纯度。利用德国产的B ioPho2
tom eter 仪检测不同稀释度DNA 样品 260 nm 和
280 nm 处的光吸收 (A 260) 值, 根据A 260, 计算DNA
浓度 [C = A 260ö0102×稀释倍数 ( ΛgömL ) ], 根据
A 260öA 280和A 260öA 230的值确定DNA 样品的纯度并
计算DNA 的产率[19 ]。
(4) 四爿藻 nrD NA ITS 的扩增及测序: PCR 扩
增引物序列为 IT S1: TCCTCCGCT TA T T GA TA 2
T GC, IT S2: GAA GTAAAA GTCGTAA CAA GG;
PCR 反应液为 IT S1引物 (浓度为10 ΛgöL ) 1 ΛL ,
IT S2引物 (浓度为10 ΛgöL ) 1 ΛL , 10×PCR Buffer 5 ΛL , M gC l2 ( 50 m göL ) 215 ΛL , dN T P 混 合 液( 1 m göL ) 4 ΛL , T aq DNA 聚 和 酶 ( 5 un itöΛL )012 ΛL , 基因组DNA 提取液2 ΛL , 加无菌重蒸水至50 ΛL。PCR 扩增反应程序为: 95℃ 5 m in, 94℃1 m in, 50℃ 1 m in, 72℃ 2 m in, 共 35 个循环, 72℃5 m in, 在 PER K IN ELM ER 9600 型 PCR 扩增仪上进行扩增。通过 1% 的琼脂糖凝胶 (EB 染色)电泳检测结果。将扩增产物进行纯化, 在 3700 自动测序仪上进行测序 (上海联合基因公司测序)。2　结果及分析2. 1　紫外吸收法测定D NA 浓度和纯度6 个品系用CTAB 法提取的基因组DNA A 260öA 280的值分布范围为 1124～ 1181, 平均值为 1153,A 260öA 230的值分布范围为 1116～ 2101, 平均值为1153, 见表 2。除W H 03 品系外, 其它品系四爿藻DNA 纯度明显低于 118, 这是经过 3 次氯仿∶异戊醇 (24∶1)抽提后的结果, 说明多次抽提后效果不明显, 仍存在较严重的蛋白质污染。
表 2　CTAB 法及高盐低 pH 法的基因组D NA 纯度比较
T able 2　A nalysis of purity of DNA iso lated by CTAB extraction m ethod and low pH extraction w ith h igh salts m ethod
　 　 W H 01 W H 02 W H 03 W H 04 W H 05 W H 06 平均值M ean
CTAB 法
A 260öA 280 1. 59 1. 24 1. 81 1. 56 1. 31 1. 68 1. 53
A 260öA 230 1. 48 1. 16 2. 01 1. 50 1. 31 1. 72 1. 53
高盐低 pH 法
A 260öA 280 1. 90 1. 93 1. 61 1. 95 1. 90 1. 70 1. 83
A 260öA 230 1. 32 1. 98 1. 70 2. 23 1. 87 2. 10 1. 87
　　6 个品系用高盐低 pH 法提取的基因组DNA
A 260öA 280值的分布范围为 1161～ 1195, 平均值为
1183, 除 W H 03 和 W H 06 稍低于 118, 其余均在
118～ 1195 间, 说明 DNA 纯度较高, 蛋白污染较
少; 而A 260öA 230的值分布范围为 1132～ 2123, 平均
值为 1187, 明显高于 CTAB 法提取的基因组DNA
得到的平均值 1153, 说明用高盐低 pH 法提取的基
因组DNA 中肽链或芳香族的物质 (如蛋白质, 酚
等)及盐和小分子的含量明显低于CTAB 法。总之,
与 CTAB 法提取的基因组DNA 结果进行比较, 不
难看出: 高盐低pH 法提取的基因组DNA 蛋白质污
染明显较低, 且酚、盐和小分子的污染也明显少于
CTAB 法, 多次重复实验结果基本相同, 证明此法可
重复性较好 (数据未显示)。
浓度检测结果显示, CTAB 法提取的DNA 得
率为 0159～ 0194 Λgöm g 鲜重, 高盐低 pH 法提取的 DNA 得率分布于 0105～ 0114 Λgöm g 鲜重, 两种方法提取的DNA 得率在各品系间的差异较大, 不同种的四爿藻品系的基因组DNA 法提取仍然存在差异, 这可能与四爿藻藻种的细胞结构差异有关, 也可能与其细胞生长状况相关, 且提取DNA 所用的材料较少 (3815～ 59 m g) , 在计算DNA 得率时容易产生较大的误差。2. 2　提取的基因组D NA 的电泳检测将CTAB 法和高盐低 pH 法提取的DNA 在同一块胶上电泳, 经 1% 的琼脂糖电泳, 溴化乙锭染色, 紫外灯下检测并照相。结果见图 1 和图 2。由CTAB 法提取的基因组 DNA 电泳图可以看到,DNA 条带有明显的拖尾, 条带不够清晰整齐, 用改进的高盐低 pH 法提取基因组DNA 电泳条带的拖尾较少, 条带较整齐清晰, 这与分光光度法检测DNA 纯度结果相吻合。
792　第 4 期　　　　　　　　　　　　罗立明等: 海洋单细胞四爿藻基因组DNA 的微量提取
图 1　CTAB 法提取的基因组D NA 电泳图
(1～ 7 泳道依次为M arker,W H 01,W H 02,W H 03,
W H 04,W H 05,W H 06)
F ig. 1　Eelectropho resis pattern of T etraselm is genom ic
DNA iso lated by CTAB extraction m ethod
(1- 7:M arker,W H 01,W H 02,W H 03,
W H 04,W H 05,W H 06)
图 2　用高盐低 pH 法提取基因组D NA 电泳图
(1～ 7 泳道依次为M arker,W H 01,W H 02,W H 03,
W H 04,W H 05,W H 06)
F ig. 2　Eelectropho resis pattern of T etraselm is genom ic
DNA iso lated by low pH extraction w ith
h igh salts m ethod
(1- 7:M arker,W H 01,W H 02,W H 03,
W H 04,W H 05,W H 06)
2. 3　高盐低 pH 法提取的D NA 进行 ITS PCR 扩
增片断的电泳检测
利用高盐低 pH 法提取的DNA 进行 IT S PCR
扩增, 通过 1% 的琼脂糖凝胶 (EB 染色) 电泳检测其
扩增 (见图 3) , 结果显示了特异 n rDNA IT S 的扩增
图 3　高盐低 pH 法提取的D NA 进行 ITS PCR
扩增产物电泳图
(1～ 7 依次为W H 01,W H 02,W H 03,
W H 04,W H 05,W H 06,M arker)
F ig. 3　Eelectropho resis pattern of PCR amp lificat ion
p roducts from T etraselm is genom ic DNA by low
pH extraction w ith h igh salts m ethod
(1- 7:W H 01,W H 02,W H 03,
W H 04,W H 05,W H 06,M arker)
片段信号条带 (大小为 650 bp 左右) , 证明其 PCR
扩增的有效性。在 3700 自动测序仪上测序, 峰带清
晰, 测序可读碱基为 700 bp , 其中约 600 个碱基无读
不出的位点 (数据未显示) , 满足了 n rDNA IT S 测
序分析的要求。
3　讨论
获得一定数量高质量的DNA 样品, 是进行某
些分子生物学研究的前提条件。四爿藻这种海洋单
细胞绿藻具有特殊的形态结构, 以及作为新型的模
式生物, 已经显示出其在生物学研究中的重要
性[2 4 ] , 但目前关于其分子生物学研究报道较少, 我
们尚未见到关于四爿藻基因组DNA 高效、稳定的
抽提方法的报道。
传统的CTAB 法虽然已经很成熟, 但在四爿藻
基因组DNA 提取中却仍然存在很多问题, 主要表
现在: ①四爿藻具有坚硬的囊壳, 在高等植物中常用
到的 CTAB 法, 不能有效的破碎四爿藻细胞, 需要
长时间用力研磨, 费时费力, 且破碎效率极低, 只有
结合使用液氮才能提高细胞破碎效率 (数据未显
示) , 而且使用液氮后增加了蛋白质污染。②四爿藻
富含蛋白等其它营养物质常被作为水产养殖饵料,
因而不恰当的细胞破碎方法可能会带来更多的污
染, 导致需要反复多次抽提, 因而降低了提取效率。
③四爿藻囊壳中含有丰富的中性、酸性多糖与蛋白,
需要特定方法去除。我们的实验结果表明, 用CTAB
法经多次抽提所提取的基因组DNA 中仍存在较多
的蛋白质污染 (表 2) , 这种方法不能有效去除四爿
藻中的蛋白质。
高盐低 pH 法主要在简化细胞破碎方法、改变
抽提介质 (缓冲溶液)、减少氯仿ö异戊醇等抽提次数
方面作了改进, 有效提高了提取四爿藻基因组DNA
的质量, 其可能原因在于: ①高盐酸性介质可以在较
短时间内完成细胞的破碎, 勿需使用液氮, 不仅细胞
破碎效率较高, 而且蛋白 (包括色素蛋白) 污染物相
对较少, 便于高效去除, 从而提高DNA 纯度。②可
以有效防止细胞破碎和沉淀时的电离作用及酚化合
物的进一步氧化; ③高浓度的醋酸钾, 对四爿藻囊壳
所含的中性, 酸性蛋白的去除十分有效, 不需反复的
抽提, 节省时间。④该法所用的试剂多为无机盐类与
异丙醇, 经济、廉价, 且对环境引起的污染相对较少。
⑤用高盐低 pH 法提取的基因组DNA 的A 260öA 230
平均值 (1187) 明显高于 CTAB 法提取的基因组
DNA 得到的平均值 1153 (表 1) , 说明这种方法在肽
892 武 汉 植 物 学 研 究　 　　　　　　　　　　　　　　　　第 21 卷　
链或芳香族物质、盐和小分子的去除中明显优于
CTAB 法, 详细机理尚不清楚。⑥高盐低 pH 法同
CTAB 法一样也能有效去除多糖, 可能在于高盐低
pH 下改变了多糖杂质的溶解度, 提高了去除多糖
的效率, 这与在高等植物中得到的结果类似[17, 18 ]。
由于DNA 提取质量的提高, 我们尝试用微量的样
品 (1 mL 鲜藻) 便可进行基因组DNA 抽提, 完全满
足了 PCR 扩增特定基因组片段的要求 (数据未显
示) , 具有方便快捷的特点, 这种微量制备方法大大
简化了四爿藻基因组DNA 提取过程。
用两种方法提取的基因组DNA 进行 PCR 扩
增特定基因组片段, 结果表明用CTAB 法提取的基
因组DNA 扩增 n rDNA IT S 片断的稳定性和重复
性差; 相反, 用高盐低 pH 法提取的基因组DNA 扩
增 n rDNA IT S 片段时稳定性好, 重复性高, 便于进
行DNA 测序。利用此种方法提取的DNA , 我们也
可以扩增出 18S 片段, 并进行了测序分析 (数据未显
示)。因此, 我们认为此法提取的DNA 应该可以满
足一般的 PCR 扩增基因组DNA 片段的需要。
总之, 改进后的高盐低 pH 法在提取四爿藻基
因组DNA 时明显优于CTAB 法, 不失为一种快速
有效、稳定可靠的微量制备方法。虽然该法是针对四
爿藻基因组DNA 提取而改良, 鉴于此提取方法在
一些难以抽提基因组DNA 的陆生植物中已有报
道[17, 18 ] , 同时应用此法, 我们也已经成功提取了原
甲藻的基因组DNA (数据未显示) , 因此我们推测该
法可能也适用于其它基因组DNA 提取较为困难的
藻类, 这为其它淡水和海洋单细胞及多细胞藻类基
因组DNA 的提取提供了良好的借鉴, 为我们进行
下一步分子系统学分析奠定了可靠的基础。
致谢: 中国科学院武汉植物研究所李中奎副研究员在本
研究的引物设计中提供了具体指导, 特此致谢!
参考文献:
[ 1 ]　Bo ld H C,W ynne M J. T he Genus T etraselm is in In2
t roduction to the A lage. 2nd ed[M ]. N ew Jersey: En2
glew ood C liffs N J: P ren tice2H all, 1985. 94 96.
[ 2 ]　Perez2R M , A lonso J A , L opez C H , et a l. Cadm ium
removal by living cells of the m arine m icroalga T e2
traselm is suecica [J ]. B ioresou r T echnol, 2002, 84 (3) :
265 270.
[ 3 ]　Cheng L C, Hw ang S P, Chang J. Gene sequence and
exp ression of an analog of p ro lifera t ing cell nuclear
an tigen (PCNA ) in the alga T etraselm is chu i and de2
tect ion of the encoded p ro tein w ith an ti2ra t PCNA
monoclonal an tibody [ J ]. A pp l E nv iron M icrobiol,
1997, 63 (10) : 4 010 4 014.
[ 4 ]　R ene R , Giu liana P,L iliana R , et a l. U se of fresh and
p reserved T etraselm is suecica fo r feeding C rasso stre
gigas larvae[J ]. A quacu ltu re, 2001, 192: 333 346.
[ 5 ]　Stew ard K D , M attox K R. Comparative cyto logy,
evo lu tion and classificat ion of the green algae w ith
som e considerat ion of the o rigin of o ther o rgan ism s
w ith ch lo rophylls a and b [ J ]. B ot R ev , 1975, 41:
104 135.
[ 6 ]　Stew ard K D , M attox K R. Structu ral evo lu tion in
the flagella ted cells of green algae and land p lan ts
[J ]. B iosy stem s, 1978, 10: 145 152.
[ 7 ]　L ew in A R. T he cell w all of P la tym onas [J ]. J Gen
M icrobiol, 1958, 19: 87 90.
[ 8 ]　Gooday G M. A biochem ical and au to radiograh ic
study of the ro te of the Go lgi bodies in thecal fo rm a2
t ion in P la tym onas teta thele [J ]. J E xp B ot, 1978, 22
(73) : 959 971.
[ 9 ]　Becker B , H ard K,M elkon ian M , et a l. Iden tificat ion
of 32deoxy2m anno222octu lo son ic acid, 32deoxy252O 2
m ethyl2m anno222octu lo son ic acid and 32deoxy2lyxo2
22hep tu lo saric acid in the cell w all ( theca ) of the
green alga T etraselm is stria ta Butcher ( P rasino2
phyceae ) [J ]. E u r J B iochem , 1989, 182 (1) : 153
160.
[10 ]　李中奎, 胡鸿钧, 李夜光. 团藻目分子系统学研究进展
[J ]. 植物学通报, 2002, 19 (4) : 419 424.
[11 ]　T urm el M , O tis C, L em ieux C. T he ch lo rop last and
m itochondria l genom e sequences of the charophyte
Chaetosp haerid ium g lobosum : insigh ts in to the tim ing
of the even ts that restructu red o rganelle DNA s w ith2
in the green algal lineage that led to land p lan ts [J ].
P roc N atl A cad S ci U SA , 2002, 99 ( 17) : 11 275
11 280.
[12 ]　P ro scho ld T ,M arin B , Sch lo sser U G, et a l. M o lecu2
lar phylogeny and taxonom ic revision of Ch lam y 2
d om onas (Ch lo rophyta ). I. Em endation of Ch lam y2
domonas Eh renberg and Ch lo romonas Gobi, and de2
scrip t ion of O og am och lam y s gen. nov. and
L oboch lam y s gen nov. [ J ]. P rotist, 2001, 152 ( 4 ) :
265 300.
[13 ]　Karo l K G, M ccourt R M , C im ino M T , et a l. T he
clo sest living rela t ives of land p lan ts [ J ]. S cience,
2001, 294 (5 550) : 2 351 2 353.
[14 ]　Zhang C W , H u H J , T axonom y and U ltrastructu re of
five speciesof T etraselm is (P rasinophyceae) Iso la ted
from Ch ina Sea [J ]. A cta O ceanolog ica S in ica , 2002,
992　第 4 期　　　　　　　　　　　　罗立明等: 海洋单细胞四爿藻基因组DNA 的微量提取
21 (4) : 557 579.
[15 ]　欧阳叶新, 罗立明, 胡鸿钧, 等. 我国沿海四爿藻的室
内培养[J ]. 应用生态学报, 2003 (待刊).
[16 ]　Sco tt O R , Bendich A J. Ex traction of DNA from
p lan t t issue [J ]. P lan t M ol B iol M anual, 1988, A6:
1 10.
[17 ]　P ierre G, H aurence M D. Iso la t ion of p lan t DNA : A
fast, inexpensive, and reliab le m ethod [J ]. P lan t M ol
B iol R ep , 1992, 10: 60 65.
[18 ]　邹喻苹, 汪小全, 雷一丁, 等. 几种濒危植物及其近缘
类群基因组DNA 的提取和鉴定[J ]. 植物学报, 1994,
36 (7) : 528 533.
[19 ]　奥斯伯 F, 布伦特 R , 金斯顿R E, 等编. 颜子颖, 王海
林译. 精编分子生物学实验指南[M ]. 北京: 科学出版
社, 1999. 832 833.
征　订　启　事
　　《植物遗传资源学报》是中国农业科学院作物品种资源研
究所和中国农学会遗传资源分会联合主办的学术期刊, 由中
国工程院院士董玉琛研究员担任主编, 2000 年创刊, 2003 年
公开发行。国内刊号CN 1124996öS, 国际统一刊号 ISSN 16722
1810。报道内容: 大田作物、园艺作物、观赏植物、林用植物、草
类植物、药用植物及其他一切经济植物的有关遗传资源研究
结果和高水平综述或评论。诸如种质资源的考察、收集、保存、
评价、利用、创新、信息学、管理学等; 以及起源、演化、分类等
系统学; 基因发掘、鉴定、克隆、基因文库建立、遗传多样性研
究等。介绍研究成果和学科进展, 进行学术交流, 提供可供遗
传育种和农业生产利用的优异资源以及国外有关研究信息。
读者对象: 从事植物遗传资源科学研究以及相关学科的
科技人员, 各有关大专院校的师生, 农业行政和推广人员。季
刊, 大 16 开本, 96 页。每期 10 元, 全年 40 元。全国各地邮局
发行, 邮发代号: 822643。
本刊编辑部常年办理订阅手续、如需邮挂每期另加 2 元。
地址: 100081 北京中关村南大街 l2 号作物科学研究所
《植物遗传资源学报》编辑部。联系电话: 010262186657,
62180279 (传真)
《中国农学通报》是中国科协主管、中国农学会主办, 两院
院士、著名农业科学家石元春先生任主编的农业综合性学术
期刊, 也是国家科技部“中国科技核心期刊”、中国科协优秀学
术期刊和全国优秀农业期刊。主要刊登种植业、养殖业、农牧
产品贮藏加工业等方面的国家级和省部级基金项目所资助的
研究论文、学术报告、文献综述等, 栏目设置有作物遗传育种、
种质资源、耕作栽培、生理生态、植物保护、土壤肥料、节水灌
溉、园艺园林、贮藏保鲜加工、畜牧兽医、资源昆虫和研究简报
等; 另外还开设了有关农业、农村、农民等社会经济发展的宏
观社科栏目——三农论坛。读者对象为各级农牧科研人员、农
业大中专院校师生、农牧行政管理干部、农技推广人员等。《中
国农学通报》为双月刊, 彩色封面; 胶版印刷, 逢单月 30 日出
版, 国内外公开发行, 国内统一刊号为CN 1121984öS, 大 16
开本, 200 页, 内文 80 克胶版纸印刷, 每期定价 15. 00 元, 全年
6 期合计 90. 00 元。本刊由北京报刊发行局面向全国公开发
行, 邮发代号 22772; 如错过邮局订阅, 可向本刊直接联系订
阅, 订购者邮局汇款: 北京市朝阳区麦子店街 20 号中国农学
会编辑出版部 (银行转帐: 开户银行: 农行北京分行朝阳支行
营业部, 账号: 040101040003509, 户名: 中国农学会) , 邮政编
码: 100026, 电话: 010264194480, 传真: 010264194705, E2m ail:
edit@cav. net. cn　网上投稿: www. caass. o rg. cnöqkbjöbjin2
dexöbjindex. aspx
《长江蔬菜》面向蔬菜全产业: 发布先进、实用的科技成
果; 研究准确、及时的市场预测; 剖析迫切、棘手的行业难题;
发布迅速、可靠的种业信息。栏目设“本期主题”、“科技与工
作”、“分析与预测”、“信息集萃”四大版块, 涵盖新优品种、栽
培技术、病虫害防治、产销研究、经验交流、土壤肥料、选种育
种、设施园艺、学术园地、蔬菜种子信息等栏目, 内容丰富、信
息量大, 科学实用、可操作性强。适宜蔬菜科技及管理人员、种
子经营者和蔬菜种植专业户订阅。
《长江蔬菜》国际大 16 开本, 月刊; 每册订价 3. 80 元, 全
年订价 45. 60 元; 国内外公开发行, 各地邮局均可订阅, 邮发
代号 382129, 本刊发行部也可直接汇款邮购, 不另收邮费。
地址: 湖北省武汉市汉口万松园路 15 号, 邮编: 430022;
电 话: 027285776183; 传 真: 027285751511; E2m ail: cjsczzs
@ 263. net; h t tp: ööwww. cj2veg. com
《浙江林学院学报》是全国林业类核心期刊之一, 荣获第
二届国家期刊奖百种重点期刊奖, 首届浙江省优秀科技期刊
二等奖, 第二届浙江省优秀科技期刊一等奖, 首届和第二届全
国优秀科技期刊三等奖, 全国高校优秀学报一等奖。
《浙江林学院学报》主要刊登林学、经济林、园林、生态、林
产加工、森林病虫防治、林木遗传育种、林业经济、林业机械、
木材加工、水土保持、森林动物等方面的学术论文、科研报告
和研究简报等, 供农林科技工作者、园林绿化和规划设计人
员、大专院校师生、基层干部、农林科技专业户及科技信息人
员参阅。季刊。季末月出版。大 16 开, 每期 112 页。国内外发
行。所刊文章被国内外多种文摘刊物和数据库收录。附英文目
次和英文摘要。2004 年定价, 每期 5. 00 元, 全年 20. 00 元ö份。
欢迎订阅, 欢迎投稿。
国内订户请向全国非邮发报刊联合发行部订阅, 地址: 天
津市大寺泉集北里别墅 17 号。邮政编码: 300381, 电话: (022)
23973378。E2m ail: L H ZD @public. tp t. t j. cn。也可直接向浙江
林学院学报编辑部汇款订购。邮汇: 浙江临安浙江林学院学报
编辑部, 邮政编码: 311300。电话: (0571) 63732749。E2m ail:
zlxb@zjfc. edu. cn。银行汇款: 建行临安市支行营业部。账号:
85622304266。户名: 浙江林学院。
国外读者请向中国出版对外贸易总公司办理。地址: 北京
782 信箱, 邮政编码 100011。
003 武 汉 植 物 学 研 究　 　　　　　　　　　　　　　　　　第 21 卷