全 文 ：植物科学学报　 ２０１６ꎬ ３４(１): １３５~１４２
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｐｌａｎｔｓｃｉｅｎｃｅ.ｃｎ
ＤＯＩ:１０􀆰 １１９１３ / ＰＳＪ􀆰 ２０９５￣０８３７􀆰 ２０１６􀆰 １０１３５
张芳芳ꎬ 宋希强ꎬ 朱国鹏. 不同生境下五唇兰根部可培养内生细菌多样性研究[Ｊ] . 植物科学学报ꎬ ２０１６ꎬ ３４(１): １３５－１４２
Ｚｈａｎｇ ＦＦꎬ Ｓｏｎｇ ＸＱꎬ Ｚｈｕ ＧＰ. Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ ｉｎ ｔｗｏ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈａｂｉｔａｔｓ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ２０１６ꎬ ３４(１): １３５－１４２
不同生境下五唇兰根部可培养内生细菌多样性研究
张芳芳１ꎬ２ꎬ 宋希强１ꎬ２ꎬ 朱国鹏１ꎬ２∗
(１. 海南大学园艺园林学院ꎬ 海口 ５７０２２８ꎻ ２. 热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室ꎬ 海口 ５７０２２８)
摘　 要: 兰科植物内生细菌与菌根真菌的协作对宿主植物的生长、 抗病、 抗逆及植物修复环境能力等具有重要意
义ꎬ 揭示其内生细菌多样性及与生境之间的关系有助于阐明兰科植物的适应与进化机制ꎮ 本研究基于 １６Ｓ ｒＤＮＡ
序列分析探讨了不同生境下东南亚特有种五唇兰根部可培养内生细菌多样性及其空间异质性ꎮ 结果表明: 从不
同生境下五唇兰根部共分离出内生细菌 ５９株ꎬ 其中从土生型五唇兰根部分离出内生细菌 ４５ 株(７６􀆰２７％)ꎬ 从石
生型五唇兰根部分离出内生细菌 １４株(２３􀆰７３％)ꎻ 基于内生细菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列同源性分析及构建的系统发育
树显示ꎬ 五唇兰根部内生细菌分属于 ７ 属ꎬ 即芽孢杆菌属(Ｂａｃｉｌｌｕｓ)、 伯克氏菌属(Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ)、 草酸菌属
(Ｐａｎｄｏｒａｅａ)、 土壤杆菌属(Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)、 类芽孢杆菌属(Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ)、 泛菌属(Ｐａｎｔｏｅａ)、 欧文氏菌属
(Ｅｒｗｉｎｉａ)ꎬ 其中优势属为芽孢杆菌属ꎬ 次优势属为泛菌属和伯克氏菌属ꎻ 多样性分析显示ꎬ 土生型五唇兰根部
内生细菌群落的 Ｓｈａｎｎｏｎ多样性指数大于石生型五唇兰ꎬ 不同生境下五唇兰根部内生细菌群落结构差异极显著
(Ｐ < ０􀆰 ０１)ꎮ 土生型五唇兰根部内生细菌群落优势属为芽孢杆菌属和泛菌属ꎬ 石生型五唇兰根部内生细菌群落
优势属为芽孢杆菌属和伯克氏菌属ꎮ
关键词: 五唇兰ꎻ 内生细菌ꎻ 多样性ꎻ 空间异质性
中图分类号: Ｑ９４８􀆰１２＋２􀆰３ꎻ Ｑ９４９􀆰７１＋８􀆰４３　 　 文献标识码: Ａ　 　 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１６)０１￣０１３５￣０８
　 　 　 收稿日期: ２０１５￣０８￣２５ꎬ 退修日期: ２０１５￣０９￣２８ꎮ
　 基金项目: 海南省自然科学基金(３１２０６３)ꎻ 海南省科技成果示范推广专项(ＣＧＳＦ２０１２０００１￣０２)ꎻ 中央级公益性科研院所基本科研
业务费专项资金(１６３００３２０１４０４３)ꎮ
Ｔｈｉｓ ｗｏｒｋ ｗａｓ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｇｒａｎｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈａｉｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ (３１２０６３)ꎬ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａ￣
ｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓ Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ ｏｆ Ｈａｉｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ (ＣＧＳＦ２０１２０００１￣０２)ꎬ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｆｕｎｄ ｆｏｒ Ｂａｓｉｃ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ｏｆ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｕｂｌｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ (１６３００３２０１４０４３) .
　 作者简介: 张芳芳(１９９０－)ꎬ 女ꎬ 硕士研究生ꎬ 主要从事植物微生物研究(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｚｈａｎｇｆａｎｇ＿７１２＠１６３􀆰 ｃｏｍ)ꎮ
　 ∗通讯作者: 朱国鹏(１９７１－)ꎬ 男ꎬ 研究员ꎬ 主要从事热带园艺作物营养研究(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｇｕｏｐｅｎｇｚｈｕ＠１６３􀆰 ｃｏｍ)ꎮ
Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｒｏｏｔ
Ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ ｉｎ Ｔｗｏ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｈａｂｉｔａｔｓ
ＺＨＡＮＧ Ｆａｎｇ￣Ｆａｎｇ１ꎬ２ꎬ ＳＯＮＧ Ｘｉ￣Ｑｉａｎｇ１ꎬ２ꎬ ＺＨＵ Ｇｕｏ￣Ｐｅｎｇ１ꎬ２∗
(１. Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｇａｒｄｅｎｉｎｇꎬ Ｈａｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｈａｉｋｏｕ ５７０２２８ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓꎬ
Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎꎬ Ｈａｉｋｏｕ ５７０２２８ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｏｒｃｈｉｄ ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ ｇｒｏｗｎ ｉｎ ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ ｃａｎ ｈａｖｅ ａ
ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ ｉｎ ｔｅｒｍｓ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎬ ｓｔｒｅｓｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ
ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ. Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ
ｈａｂｉｔａｔ ｃａｎ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｏｒｃｈｉｄ ｐｌａｎｔｓ. Ｔｈｅ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ
ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｓｐａｔｉａｌ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈａｂｉｔａｔｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａꎬ
ａｎ ｅｎｄｅｍｉｃ Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａｎ ｏｒｃｈｉｄ ｓｐｅｃｉｅｓꎬ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｓｅｄ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ. Ｆｉｆｔｙ￣
ｎｉｎｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ Ｐ. ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｈａｂｉｔａｔｓꎬ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｆｏｒｔｙ￣ｆｉｖｅ (７６􀆰２７％) ａｎｄ ｆｏｕｒｔｅｅｎ (２３􀆰７３％) ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ
ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｌａｎｄ￣ｂｏｒｎｅ ａｎｄ ｓｔｏｎｅ￣ｂｏｒｎｅ ｔｙｐｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＤＮＡ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓꎬ ｆｉｆｔｙ￣ｎｉｎｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｐ. ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ ｗｅｒｅ
ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ ｉｎｔｏ ｓｅｖｅｎ ｇｅｎｅｒａꎬ ｔｈａｔ ｗａｓꎬ Ｂａｃｉｌｌｕｓꎬ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａꎬ Ｐａｎｄｏｒａｅａꎬ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍꎬ
Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓꎬ Ｐａｎｔｏｅａꎬ ａｎｄ Ｅｒｗｉｎｉａ. Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓꎬ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｗａｓ ｔｈｅ
ｄｏｍｉｎａｎｔ ｇｅｎｕｓꎬ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ Ｐａｎｔｏｅａ ａｎｄ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ. Ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｌａｎｄ￣ｂｏｒｎｅ ｔｙｐｅ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｗａｓ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｓｔｏｎｅ￣ｂｏｒｎｅ ｔｙｐｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｖａｒｉａｎｃｅ ( ＡＭＯＶＡ) ａｌｓｏ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｐ.
ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ ｉｎ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｈａｂｉｔａｔｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ (Ｐ < ０􀆰０１)ꎬ ｗｉｔｈ ｌａｎｄ￣ｔｙｐｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ
ｓｐｅｃｉｅｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｄ Ｐａｎｔｏｅａꎬ ａｎｄ ｓｔｏｎｅ￣ｔｙｐｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｄ
Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａꎻ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａꎻ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎻ Ｓｐａｔｉａｌ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ
　 　 内生菌(ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ)是指生长在植物组织中且
不会使植物产生明显病害症状的微生物[１]ꎮ 热带
雨林生态系统高湿、 高热的水热条件以及丰富的腐
殖质资源为兰科植物生存及繁衍提供了良好的适生
生境ꎻ 此外ꎬ 兰科植物是典型的菌根植物ꎬ 在长期
的进化过程中形成依赖菌根成活和生长的特性[２]ꎮ
在兰科植物微生态系统中ꎬ 内生真菌是其赖以生存
的营养之源ꎬ 同时内生真菌又强烈依赖于系统中的
细菌ꎮ １９３３年 Ｒｏｇｅｒｓ 首次报道了原产澳大利亚
的天麻(Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｓｅｓａｍｏｉｄｅｓ)根状茎、 根和芽
中存在细菌ꎬ 目前已从 ９０ 多种兰科植物中分离出
大量内生细菌ꎬ 并且这些内生细菌对兰科植物具有
重要的生物学功能[３]ꎮ 兰科内生细菌能通过产生
植物激素促进植物生长[４ꎬ５]、 缩短开花周期、 增加
着花密度并提高花朵品质[６]ꎻ 能释放拮抗物质ꎬ
有效阻止其他病原菌的侵入ꎬ 减轻病虫害传播[７]
等ꎮ 从兰科植物中分离出的常见内生细菌为芽孢杆
菌属 ( Ｂａｃｉｌｌｕｓ) [８]、 类芽孢杆菌属 ( Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌ￣
ｌｕｓ)、 伯克氏菌属(Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ)及肠杆菌科(Ｅｎ￣
ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ)等[９]ꎮ 芽孢杆菌属、 类芽孢杆
菌及伯克氏菌属等内生细菌对植株表现出一定的促
生作用[１０]ꎮ 随着内生细菌的重要性被日益肯定ꎬ
其研究也显示出巨大的潜力和应用前景ꎮ
五唇兰(Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ (Ｌｉｎｄｌ.) Ｊ.
Ｊ. Ｓｍ.)为兰科(Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ)蝴蝶兰属(Ｐｈａｌａｅ￣
ｎｏｐｓｉｓ)多年生常绿草本植物ꎬ 是东南亚特有种ꎻ
主产于印度东北部、 老挝、 泰国、 缅甸等东南亚国
家ꎬ 中国仅海南有分布[１１]且主要见于热带雨林的
低海拔地区ꎮ 五唇兰花型美丽、 色彩娇艳ꎬ 具有较
高的观赏价值ꎬ 也是蝴蝶兰杂交的重要亲本ꎻ 以五
唇兰为亲本的蝴蝶兰杂交种一度被列为朵丽蝶兰属
(Ｄｏｒｉｔａｅｎｏｐｓｉｓ)ꎬ 并且其切花和盆花在国际兰花
市场上颇受追捧[１２]ꎮ 由于滥采乱挖、 生境破坏等
原因ꎬ 海南岛野生五唇兰已难觅踪影ꎮ 在自然状态
下ꎬ 五唇兰常生长于杂木疏林、 灌丛之枯落物堆积
的腐叶土表层或岩石上[１３]ꎮ 对五唇兰内生真菌多
样性的研究表明ꎬ 在这两种不同生境下五唇兰内生
真菌群落丰富度则表现出较大差异[１４]ꎬ 但关于野
生五唇兰根部内生细菌的研究国内还未见报道ꎮ
分离培养法是研究兰科植物内生细菌的传统方
法[１５]ꎬ 因内生细菌对生存环境的要求尚未完全解
析ꎬ 分离培养基所营造的小环境仅能满足小部分内
生细菌的需求ꎮ 分离培养虽不能将植物体内的菌体
全部分离ꎬ 但通过培养能得到部分菌株实体ꎬ 经纯
化后可进行菌落形态观察、 理化性质检测以及传统
的形态学分类研究ꎮ 分离培养法是微生物研究的重
要基础ꎬ 对研究内生细菌生物学特性、 发现未报道
的新种资源等具有不可替代的作用ꎮ 本研究拟采用
培养法分离不同生境下五唇兰根部的可培养内生细
菌ꎬ 并通过内生细菌的 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析揭示五
唇兰内生细菌的多样性、 群落结构及其与生境之间
的关系ꎬ 以期为阐明兰科植物适应与进化机制以及
制定五唇兰的保育策略等提供理论依据ꎮ
１　 材料与方法
１􀆰 １　 实验材料
五唇兰采自海南省昌江县境内的霸王岭国家级
自然保护区ꎬ 其地形主要以山地为主(海拔 １００ ~
１６５４ ｍ)ꎬ 横跨雅加大岭、 斧头岭、 黄牛岭、 猴猕
岭四大山脉ꎬ 且均为东北 －西南走向[１６]ꎮ 该地区属
６３１ 植 物 科 学 学 报 第 ３４卷　
热带季风气候ꎬ 干湿季明显ꎬ 每年的 ５ －１１月为雨
季ꎬ １２月 ~翌年 ４月为旱季ꎬ 年均降水量为 ２０００ ~
２５００ ｍｍꎻ 气候温和ꎬ 年平均气温在 ２４􀆰２℃ 左右ꎮ
霸王岭国家级自然保护区林内土壤以花岗岩、 沙岩
为母质发育而成的砖红壤为主ꎬ 并随海拔升高逐渐
过渡为山地红壤ꎻ 其地带性优势植被类型为低地雨
林、 山地雨林、 山地常绿林和山顶矮林[１７]ꎮ
２０１４年 ９月ꎬ 在保护区内采集石生型(生长于
岩石或树干基部)和土生型(生长于杂木疏林、 灌
丛之枯落物堆积的腐叶土表层)两种不同生境下健
康的野生五唇兰植株ꎮ 每种生境选取 ３株且植株间
距大于 ５ ｍꎬ 以保证平均取样ꎬ 使样品更具有代表
性ꎮ 样品采集后ꎬ 放入冰盒并在 ２４ ｈ 内带回实验
室分离ꎮ
１􀆰 ２　 实验方法
１􀆰 ２􀆰 １　 五唇兰内生细菌的分离与保存
称取 ０􀆰１ ｇ 五唇兰根段ꎬ 表面清洗干净后用
２％次氯酸钠消毒 ９０ ｓꎬ 研磨并稀释到 １０－２、 １０－３、
１０－４浓度ꎬ 涂布于 ＮＡ 平板中ꎬ 同时轻压 ＮＡ 平板
做对照以检验其表面消毒是否彻底ꎮ 若对照平板上
无菌落长出ꎬ 说明其表面消毒彻底ꎬ 所分离出的菌
株为内生细菌ꎻ 若对照平板上有菌落长出ꎬ 说明其
表面消毒不彻底ꎬ 则丢弃所分离出的菌株ꎬ 补样后
重新分离ꎮ 每个处理重复 ３ 次ꎬ ２８℃暗培养ꎬ 有
菌落长出后进行划线纯化ꎻ 将纯化的单菌落划线于
斜面 ＮＡ培养基中ꎬ ２８℃暗培养 ４８ ｈ 并剔除污染
后ꎬ ４℃培养箱保存ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ２　 五唇兰根部内生细菌的 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列扩
增与测序
采用 Ｔｉａｎｇｅｎ 细菌基因组 ＤＮＡ 试剂盒提取内
生细菌基因组 ＤＮＡꎬ 然后采用细菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序
列扩增的通用引物 ２７Ｆ(５′￣ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧ￣
ＧＣＴＣＡＧ￣３′)和 １４９２Ｒ(５′￣ＴＡＣＧＡＣＴＴＡＡＣＣＣＣＡ￣
ＡＴＣＧＣ￣３′) [１８]扩增五唇兰根部内生细菌的 １６Ｓ
ｒＤＮＡ序列ꎮ ＰＣＲ 扩增体系为 ５０ μＬꎬ 主要包含
３９􀆰４ μＬ ｄｄＨ２ Ｏ、 ５ μＬ １０ × Ｂｕｆｆｅｒ、 １ μＬ ｄＮＴＰ
(１０ ｍｍｏｌ / Ｌ)、 引物各 １ μＬ、 ０􀆰６ μＬ Ｔａｑ酶(１ Ｕ /
μＬ)、 ２ μＬ ＤＮＡ 模板ꎮ ＰＣＲ 反应程序: ９５℃预变
性 ３ ｍｉｎꎻ ９４℃变性 ３０ ｓꎬ ５７℃退火 ３０ ｓꎬ ７２℃延
伸 ９０ ｓꎬ ３２个循环ꎻ 最后 ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ
产物经 １􀆰６％琼脂糖凝胶电泳检测后ꎬ 选取条带清
晰的 ＰＣＲ扩增产物直接送往上海立菲生物技术有
限公司测序ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ３　 数据分析
利用软件 ＢｉｏＥｄｉｔ ７􀆰１􀆰９中 Ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ａｐｐｌｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ｌｏｃａｌ ｂｌａｓｔ模式将测序获得的序列划分为不同
的操作分类单元 ( ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｕｎｉｔꎬ
ＯＴＵ)ꎬ 并在 ＧｅｎＢａｎｋ数据库中利用 ｂｌａｓｔ 软件搜
索ꎻ 选取同源性较高的相似序列ꎬ 并用软件
ＭＥＧＡ ５􀆰０ 中 Ｍａｘｉｍｕｍ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ 模
式分析和构建系统发育树ꎮ 按照不同的生境将五唇
兰根部内生细菌划分为 ２个群落ꎬ 并利用软件 Ａｒｌｅ￣
ｑｕｉｎ ３􀆰５对群落间和群落内序列进行 ＡＭＯＶＡ 和多
样性参数分析ꎮ
２　 结果与分析
２􀆰 １　 内生细菌的分离
对不同生境下五唇兰根部内生细菌进行分离ꎬ
并根据菌落形态、 颜色、 大小、 透明度以及菌落表
面粘稠液的多少、 干湿程度不同ꎬ 共挑取具有代表
性的细菌 ５９株ꎮ 其中ꎬ 从土生型五唇兰根部分离
出内生细菌 ４５ 株ꎬ 占内生细菌总数的 ７６􀆰２７％ꎻ
从石生型五唇兰根部分离出内生细菌 １４ 株ꎬ 占内
生细菌总数的 ２３􀆰７３％ꎮ
２􀆰 ２　 内生细菌的鉴定
根据测序获得的五唇兰根部内生细菌的 １６Ｓ
ｒＤＮＡ序列ꎬ 利用 ＢｉｏＥｄｉｔ将 ５９株内生细菌划分成
１０组(ＯＴＵ１ ~ ＯＴＵ１０)ꎬ 再从每组随机选取一个
代表菌株ꎬ 将其序列在 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中进行同
源性比对ꎬ 发现所有比对序列的覆盖度和一致性均
大于 ９９％ꎬ 可确定其分类学地位(表 １)ꎮ 基于选
取的 １０ 株代表菌株及与其 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列最为一
致(一致性为 ９９％或 １００％)的菌株ꎬ 利用软件
Ｍｅｇａ ５􀆰０构建其系统发育树(图 １)ꎬ 结果显示ꎬ
优势种为 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓꎬ 占五唇兰根部内生细菌
总株数的 ３３􀆰９０％(表 １)ꎻ 五唇兰根部内生细菌分
属于 ７个属ꎬ 即芽孢杆菌属(Ｂａｃｉｌｌｕｓ)、 伯克氏菌
属(Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ)、 草酸菌属(Ｐａｎｄｏｒａｅａ)、 土壤
杆菌属(Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)、 类芽孢杆菌属(Ｐａｅｎｉ￣
ｂａｃｉｌｌｕｓ)、 泛菌属 (Ｐａｎｔｏｅａ)、 欧文氏菌属 ( Ｅｒ￣
ｗｉｎｉａ)ꎮ 其中ꎬ 优势属为芽孢杆菌属ꎬ 其菌株数占
五唇兰根部内生细菌总株数的 ６２􀆰７１％ꎻ 次优势属
为泛菌属和伯克氏菌属ꎬ 其菌株数分别占内生细菌
总株数的 １１􀆰８６％和 １０􀆰１７％(表 １)ꎮ
７３１　 第 １期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 张芳芳等: 不同生境下五唇兰根部可培养内生细菌多样性研究
表 １　 五唇兰根部内生细菌的代表性菌株的序列相似性比较
Ｔａｂｌｅ １　 １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ ａｎｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔａｘａ
操作单元
Ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ
ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｕｎｉｔｓ
(ＯＴＵ)
代表菌株编号
Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ
ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅｓ
最相似菌株
Ｃｌｏｓｅｓｔ ＮＣＢＩ
ｍａｔｃｈ ａｎｄ ｉｔｓ
ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ.
覆盖度 /一致性
Ｃｏｖｅｒａｇｅ /
Ｉｄｅｎｔｉｔｙ
(％)
菌株数
Ｎｏ. ｏｆ
ｓｔｒａｉｎｓ
占总菌株数
的比例 (％)
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
ＯＴＵ１ ＴＷ２－２ ＫＰ８６３７８０ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｃｅｒａｎｓ (ＦＪ０４０８０９.１) １００ / ９９ ２ ３.３９
ＯＴＵ２ ＴＷ３－９ ＫＰ８６３７８１ Ｐａｎｔｏｅａ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ (ＡＭ１８４２６４.１) １００ / ９９ ７ １１.８６
ＯＴＵ３ ＴＷ１－２ ＫＰ８６３７８２ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ (ＫＪ２１０３２９.１) １００ / ９９ ８ １３.５６
ＯＴＵ４ ＳＷ２－１ ＫＰ８６３７８３ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ (ＫＪ５２４５０５.１) １００ / １００ ２０ ３３.９０
ＯＴＵ５ ＳＷ１－７ ＫＰ８６３７８４ Ｐａｎｄｏｒａｅａ ｐｎｏｍｅｎｕｓａ (ＣＰ００９５５３.１) １００ / ９９ １ １.６９
ＯＴＵ６ ＳＷ１－６ ＫＰ８６３７８５ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ (ＨＦ６７８３８６.１) １００ / ９９ １ １.６９
ＯＴＵ７ ＴＷ３－１６ ＫＰ８６３７８６ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｓｐ.(ＡＢ２９９５９９.１) １００ / ９９ ６ １０.１７
ＯＴＵ８ ＴＷ３－８ ＫＰ８６３７８７ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｙｃｏｉｄｅｓ (ＪＮ３７７６６６.１) １００ / ９９ ９ １５.２５
ＯＴＵ９ ＴＷ３－３ ＫＰ８６３７８８ Ｅｒｗｉｎｉａ ｔａｓｍａｎｉｅｎｓｉｓ (ＡＢ４８０７７１.１) ９９ / ９９ ４ ６.７８
ＯＴＵ１０ ＴＷ２－６ ＫＰ８６３７８９ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｒａｍｉｎｉｓ (ＣＰ００９２８７.１) １００ / ９９ １ １.６９
SW2-1 KP863783( )
Bacillus mycoides (JN377666.1)
Outgroup AY928077.1)(
100
83
100
84
78
97
100
98
99
99
100
87
65 100
100
100
88
99
0.2
Bacillus cereus (KJ524505.1)
Bacillus megaterium (KJ210329.1)
TW1-2 KP863782( )
TW3-8 KP863787( )
Paenibacillus macerans (FJ040809.1)
TW2-2 KP863780( )
Paenibacillus graminis (CP009287.1)
TW2-6 KP863789( )
Agrobacterium radiobacter HF678386.1( )
SW1-6 KP863785)(
Burkholderia .sp AB299599.1( )
TW3-16 KP863786( )
Pandoraea pnomenusa CP009553.1( )
SW1-7 KP863784( )
TW3-9 KP863781( )
Pantoea agglomerans AM184264.1( )
TW3-3 KP863788( )
Erwinia tasmaniensis ( )AB480771.1
图中分支数字表示自展支持率ꎻ 括号内数字为 ＧｅｎＢａｎｋ登录号ꎮ
Ｎｕｍｂｅｒｓ ａｔ ｎｏｄｅｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｂｏｏｔｓｔｒａｐ ｓｕｐｐｏｒｔ ｖａｌｕｅｓꎻ Ｎｕｍｂｅｒｓ ｉｎ ｐａｒｅｎｔｈｅｓｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ.ꎻ ＳＷ２－１ꎬ
ＴＷ１－２ꎬ ＴＷ３－８ꎬ ＴＷ２－２ꎬ ＴＷ２－６ꎬ ＳＷ１－６ꎬ ＴＷ３－１６ꎬ ＳＷ１－７ꎬ ＴＷ３－９ ａｎｄ ＴＷ３－３ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｃｏｄｅｓ ｏｆ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ
ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｔａｂｌｅ １.
图 １　 基于五唇兰根部内生细菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列构建的系统发育树
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ
ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎａｌｙｓｅｓ
８３１ 植 物 科 学 学 报 第 ３４卷　
２􀆰 ３　 五唇兰根部内生细菌多样性
五唇兰内生细菌群落结构因生境而异ꎬ 即在两
种生境下五唇兰根部可培养的内生细菌种类和数量
不同(图 ２)ꎬ 除芽孢杆菌属与伯克氏菌属在土生型
和石生型五唇兰根部均被分离出外ꎬ 其余各属内生
细菌分别从不同生境下五唇兰根部获得ꎮ 土生型五
唇兰根部的内生细菌优势种为蜡样芽孢杆菌
(Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ)ꎬ 石生型五唇兰根部的内生细菌
优势种为 Ｂ. ｍｙｃｏｉｄｅｓꎮ 分别将土生型和石生型五
唇兰根部的内生细菌看作两个群落ꎬ 并进行 ＡＭＯ￣
ＶＡ分析和多样性指数分析ꎬ 结果显示: 两个内生
细菌群落间的变异百分率为 ４􀆰４１％ꎬ 群落内的变异
百分率为 ９５􀆰５９％ꎬ 说明同一生境下五唇兰根部内生
细菌群落的种间组成差异明显(表 ２)ꎻ 多样性指数
分析显示(表 ３)ꎬ 土生型五唇兰根部内生细菌群落
的多样性指数(Ｈ)与均匀度(Ｊ)大于石生型ꎬ 而其丰
度(Ｄ)小于石生型五唇兰根部内生细菌群落ꎬ 说明
林下枯枝落叶层最有利于五唇兰根部内生细菌的
生长ꎮ
３　 讨论
张萍[１５]研究认为内生细菌隶属于不同属反映
了兰科植物生活小生境的不同ꎮ 一般而言ꎬ 内生细
菌的 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列同源性大于 ９０％ꎬ 可确定为同
一科ꎻ 序列同源性为 ９９％ ~ １００％ꎬ 可确定为同一
种ꎻ 序列同源性为 ９５％ ~ ９９％ꎬ 可认为同属不同
种ꎻ 序列同源性为 ９３％ ~ ９５％ꎬ 可认为同科不同
属[１８－２０]ꎮ 本研究从两种生境下五唇兰根部共分离
出内生细菌 ５９株ꎬ 其中从土生型五唇兰根部分离
出内生细菌 ４５株(７６􀆰２７％)ꎬ 从石生型五唇兰根部
0
10
20
30
40
50
60
70
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(" Land type-
图 ２　 不同生境下五唇兰根部内生细菌的种类组成
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ ｉｎ ｔｗｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈａｂｉｔａｔｓ
表 ２　 五唇兰根部内生细菌群落的 ＡＭＯＶＡ分析
Ｔａｂｌｅ ２　 ＡＭＯＶＡ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
自由度
ｄ.ｆ.
方差组分
Ｖａｒｉａｎｃｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ
变异百分率(％)
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
Ｐ值
Ｐ ｖａｌｕｅ
群落间 Ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ １ ０.０２００２ ４.４１ < ０.０１
群落内 Ｗｉｔｈｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ５７ ０.４３４４８ ９５.５９ < ０.００１
表 ３　 不同生境下五唇兰根部内生细菌的多样性分析
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ ｉｎ ｔｗｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈａｂｉｔａｔｓ
生境
Ｈａｂｉｔａｔ
多样性指数
Ｓｈａｎｎｏｎ ｉｎｄｅｘ (Ｈ)
丰度
Ｒｉｃｈｎｅｓｓ (Ｄ)
均匀度
Ｅｖｅｎｎｅｓｓ (Ｊ)
土生型 Ｌａｎｄ￣ｔｙｐｅ １.７９８０ ０.３６４２ ０.６９５６
石生型 Ｓｔｏｎｅ￣ｔｙｐｅ １.０８９０ ０.５１６３ ０.４２１３
９３１　 第 １期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 张芳芳等: 不同生境下五唇兰根部可培养内生细菌多样性研究
分离出内生细菌 １４株(２３􀆰７３％)ꎻ 根据 １６Ｓ ｒＤＮＡ
序列将 ５９ 株内生细菌划分成 １０ 组 (ＯＴＵ１ ~
ＯＴＵ１０)ꎬ 再从每组随机选取一个代表菌株ꎬ 将其
序列在 ＧｅｎＢａｎｋ数据库中与已知内生细菌种进行
同源性比对ꎬ 发现所有比对序列的覆盖度和一致性
均大于 ９９％ꎬ 因此所有代表菌株均可准确鉴定
到种ꎮ
经序列同源比对及构建的系统发育树显示ꎬ 从
两种生境下五唇兰根部分离出的内生细菌分属于 ７
属ꎬ 其中芽孢杆菌属、 伯克氏菌属、 泛菌属占可培
养的内生细菌总数(５９ 株)的 ８４􀆰７４％ꎬ 分离频率
分别 为 ５７􀆰７８％ ~ ７８􀆰５７％、 ７􀆰１４％ ~ １１􀆰１１％、
１５􀆰 ５６％ꎬ 而芽孢杆菌属是五唇兰植株中分离频率
最高的菌种ꎬ 可能是五唇兰根部内生细菌群落的优
势属ꎻ 在石生型五唇兰根部未分离出泛菌属内生细
菌ꎬ 但其是土生型五唇兰根部内生细菌群落的优势
属ꎬ 这可能是因为生境不同而导致的五唇兰根部内
生细菌群落结构有所不同ꎮ Ｔｓａｖｋｅｌｏｖａ 等[２１]研究
表明ꎬ 假单胞菌属(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ)与芽孢杆菌属
为兰科植物内生细菌的优势属ꎬ 本实验中芽孢杆菌
属为五唇兰根部内生细菌群落的优势属ꎬ 但未分离
出假单胞菌属ꎬ 可能是由于培养基分离培养的局限
性ꎬ 使其在培养过程中丢失了部分内生细菌ꎮ
在土生型和石生型五唇兰根部均分离出芽孢杆
菌属、 伯克氏菌属内生细菌ꎬ 揭示它们可能对五唇
兰内生细菌群落结构起着重要作用ꎬ 但具体功能还
需进一步实验验证ꎮ 芽孢杆菌属细菌能有效降解土
壤中的有机磷ꎬ 是生产生物有机肥的常用菌种ꎻ 可
以产生 ＩＡＡ 等生长激素ꎻ 同时ꎬ 它也是一种生防
菌ꎬ 可有效防治兰花炭疽病[１５ꎬ２２]ꎮ 王倩等[２３]认为
芽孢杆菌属细菌对外界有害因子的抵抗力强ꎬ 菌体
在生长过程中产生的制霉菌素、 枯草菌素、 多粘菌
素、 短杆菌肽等活性物质对致病菌有明显抑制作
用ꎻ 芽孢杆菌属内生细菌对番茄病原菌(Ｐｓｅｕｄｏ￣
ｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ)有拮抗作用[２４]ꎮ 巨大芽孢杆菌为
解磷菌种ꎬ 并已经作为微生物菌剂广泛使用[２５]ꎬ
本研究分离出与巨大芽孢杆菌(Ｂ. ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ)
１６Ｓ ｒＤＮＡ序列同源性高达 ９９％的菌株ꎬ 由于伯克
氏菌属细胞具有固氮和潜在的促生作用ꎬ 近年来
伯克氏菌属细菌和植物之间的关系备受重视ꎮ 在
春兰[２６] 、 蕙兰[２７] 、 铁皮石斛[２８]等兰科植物以及
一些农作物中都分离出伯克氏属内生细菌ꎬ 而且
该属的很多菌株都有生防作用[２９] ꎮ 此外ꎬ 类芽孢
杆菌属细菌和菌根真菌有着微妙的联系ꎬ 这种关
系能够促使内生真菌侵入植物组织中ꎬ Ｅｒｔｕｒｋ
等[３０ꎬ３１]研究发现类芽孢杆菌能促进植株的生长以
及根部发育ꎮ 因此ꎬ 本研究从不同生境下五唇兰根
部分离出的内生细菌为进一步探讨其促生活性、 制
作菌剂等提供了资源ꎮ
分别将土生型和石生型五唇兰根部内生细菌看
作两个群落并进行 ＡＭＯＶＡ分析ꎬ 发现五唇兰根部
内生细菌的种类组成在不同生境间差异显著(Ｐ <
０􀆰０１)ꎬ 表明生境对五唇兰内生细菌群落结构有一
定影响ꎻ 群落间的变异百分率为 ４􀆰４１％ꎬ 群落内
的变异百分率为 ９５􀆰５９％ꎬ 即群落内变异大于群落
间且差异显著ꎬ 说明同一生境下五唇兰根部内生细
菌群落的物种组成差异明显ꎮ 多样性分析结果显
示ꎬ 土生型五唇兰根部内生细菌群落的多样性指数
(Ｈ)和均匀度(Ｊ)均大于石生型ꎬ 而其丰度(Ｄ)小
于石生型五唇兰根部内生细菌群落ꎬ 说明五唇兰内
生细菌多样性受生境的影响ꎬ 即土生型五唇兰根部
的内生细菌群落多样性高于石生型ꎬ 林下枯枝落叶
层最有利于五唇兰内生细菌的生长ꎮ
土生型五唇兰根部内生细菌多样性明显高于石
生型ꎬ 这与柯海丽等[１４]对五唇兰内生真菌研究结
果相同ꎬ 反映出生境对细菌与真菌在兰科植物植株
内定殖的影响ꎮ 自然条件下土生型五唇兰植株明显
多于石生型[１３]ꎬ 说明土生型生境更适宜五唇兰及
五唇兰内生细菌的生长ꎬ 因此从其根部分离出内生
细菌的数量和种类都比较丰富ꎮ 内生菌的丰富度可
在一定程度上反映生境中其宿主的分布情况ꎬ 这样
就可根据内生菌群落多样性来评价适于兰科植物生
存的环境[１４]ꎮ
综上分析ꎬ 本研究首次以野生五唇兰为材料ꎬ
采用组织破碎与稀释涂布法从其根部分离出内生细
菌ꎻ 基于内生细菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列同源相似性并采
用 ＡＭＯＶＡ和多样性分析ꎬ 探讨了两种生境下五唇
兰根部内生细菌的多样性ꎮ 本研究结果对五唇兰内
生菌资源的开发和利用有重要意义ꎬ 也为进一步研
究五唇兰内生细菌的促生活性提供了参考ꎮ
参考文献:
[ １ ] 　 Ｐｅｔｒｉｎｉ Ｏ. Ｆｕｎｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ｏｆ ｔｒｅｅ ｌｅａｖｅｓ[Ｃ] / / Ａｎｄｒｅｗｓ
ＪＨꎬ Ｈｉｒａｎｏ ＳＳꎬ ｅｄｓ. Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｌｅａｖｅｓ. Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ: Ｓｐｒｉｎｇｅｒ￣Ｖｅｒｌａｇꎬ １９９１: １７９－１９７.
０４１ 植 物 科 学 学 报 第 ３４卷　
[ ２ ] 　 李洪立ꎬ 何云ꎬ 申志斌ꎬ 杨福孙ꎬ 宋希强ꎬ 周兆德. 菌根化
五唇兰组培苗的光合生理特性[Ｊ] . 热带作物学报ꎬ ２０１１ꎬ
３２(６): １０６０－１０６３.
Ｌｉ ＨＬꎬ Ｈｅ Ｙꎬ Ｓｈｅｎ ＺＢꎬ Ｙａｎｇ ＦＳꎬ Ｓｏｎｇ ＸＱꎬ Ｚｈｏｕ ＺＤ.
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆ Ｄｏｒｉｔｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉ￣
ｍａ Ｌｉｎｄｌ. ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ [ Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓꎬ ２０１１ꎬ ３２(６): １０６０－１０６３.
[ ３ ] 　 Ｖａｒｍａ Ａ. Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ[Ｃ] / / Ｔａｒｋｋａ ＭＴꎬ Ｆｒｅｙ￣Ｋｌｅｔｔ Ｐꎬ ｅｄｓ.
Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ Ｈｅｌｐｅｒ Ｂａｃｔｅｒｉａ. Ｂｅｒｌｉｎ: Ｓｐｒｉｎｇｅｒ￣Ｖｅｒｌａｇꎬ
２００８: １１３－１３２.
[ ４ ] 　 杨友联ꎬ 刘作易. 兰科菌根真菌在兰科植物生长发育中的作
用与应用[Ｊ] . 种子ꎬ ２００５ꎬ ２４(５): ５５－５８.
Ｙａｎｇ ＹＬꎬ Ｌｉｕ ＺＹ. Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｏｒｃｈｉｄ ｐｌａｎｔｓ’ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ [ Ｊ ] .
Ｓｅｅｄꎬ ２００５ꎬ ２４(５): ５５－５８.
[ ５ ] 　 Ｔｓａｖｋｅｌｏｖａ ＥＡꎬ Ｃｈｅｒｄｙｎｔｓｅｖａ ＴＡꎬ Ｂｏｔｉｎａ ＳＧꎬ Ｎｅｔｒｕｓｏｖ
ＡＩ. Ｂａｃｔｅｒｉａ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｏｒｃｈｉｄ ｒｏｏｔｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｕｘｉｎ [ Ｊ] . Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｓꎬ ２００７ꎬ １６２ ( ３):
６９－７６.
[ ６ ] 　 张喜宁ꎬ 周玲勤. 丝核菌属兰菌对数种兰科植物种苗生产之
影响[Ｊ] . 植物种苗ꎬ ２００４ꎬ ６(２): ３３－４２.
Ｚｈａｎｇ ＸＮꎬ Ｚｈｏｕ ＬＱ. Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｂｌｕｅ ｂａｃ￣
ｔｅｒｉａ ｏｎ ｓｅｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｏｒｃｈｉｄ ｓｐｅｃｉｅｓ [ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｓｅｅｄｌｉｎｇｓꎬ ２００４ꎬ ６(２): ３３－４２.
[ ７ ] 　 陈瑞蕊ꎬ 林先贵ꎬ 施亚琴. 兰科菌根的研究进展[ Ｊ] . 应用
与环境生物学报ꎬ ２００３ꎬ ９(１): ９７－１０１.
Ｃｈｅｎ ＲＲꎬ Ｌｉｎ ＸＧꎬ Ｓｈｉ ＹＱ. Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｄｖａｎｃｅｓ ｏｆ ｏｃｈｉｄ
ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｅ[Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎ￣
ｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００３ꎬ ９(１): ９７－１０１.
[ ８ ] 　 Ｂｏｅｒ Ｗｄꎬ Ｆｏｌｍａｎ ＬＢꎬ Ｓｕｍｍｅｒｂｅｌｌ ＲＣꎬ Ｂｏｄｄｙ Ｌ. Ｌｉｖｉｎｇ ｉｎ
ａ ｆｕｎｇａｌ ｗｏｒｌｄ: ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｆｕｎｇｉ ｏｎ ｓｏｉｌ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｎｉｃｈｅ ｄｅ￣
ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ] . ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖꎬ ２００５ꎬ ２９(４): ７９５－
８１１.
[ ９ ] 　 Ｇａｌｄｉａｎｏ ＲＦꎬ Ｐｅｎｒｉｎｈｏ Ｅꎬ Ｃａｓｔｅｌｌａｎｅ Ｔꎬ Ｌｅｍｏｓ Ｅ. Ａｕｘｉｎ￣
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ Ｃａｔｔｌｅｙａ ｗａｌ￣
ｋｅｒｉａｎａꎬ ａｎ ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ Ｂｒａｚｉｌｉａｎ ｏｒｃｈｉｄꎬ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ
ａｃｃｌｉｍａｔｉｚａｔｉｏｎ[ Ｊ] . Ｒ Ｂｒａｓ Ｃｉ Ｓｏｌｏꎬ ２０１１ꎬ ３５(３): ７２９－
７３７.
[１０] 　 Ｐｈｉ ＱＴꎬ Ｙｕ ＭＰꎬ Ｋｅｙｕｎｇ ＪＳꎬ Ｃｈｏｏｎｇ ＭＲꎬ Ｓｅｕｎｇ ＨＰꎬ
Ｊｏｎｇ ＧＫꎬ Ｓａ ＹＧ. Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｒｏｏｔ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐａｅｎｉｂａ￣
ｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ ｇｒｏｕｐｓ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ
ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｐｅｐｐｅｒ[Ｊ] . Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌꎬ
２０１０ꎬ ２０(１２): １６０５－１６１３.
[１１] 　 吉占和ꎬ 陈心启ꎬ 罗毅波. 中国植物志: 第 １９ 卷[Ｍ] . 北
京: 科学出版社ꎬ １９９９: ２７６－２７８.
Ｊｉ ＺＨꎬ Ｃｈｅｎ ＸＱꎬ Ｌｕｏ ＹＢ. Ｆｌｏｒａ ｏｆ Ｃｈｉｎａ: Ｖｏｌ. １９ [Ｍ] .
Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓꎬ １９９９: ２７６－２７８.
[１２] 　 张哲ꎬ 宋希强ꎬ 朱国鹏ꎬ 黄绵佳. 东亚特有种五唇兰的开花
物候与繁殖特性[Ｊ] . 热带作物学报ꎬ ２０１３ꎬ ３４(７): １２２３－
１２２７.
Ｚｈａｎｇ Ｚꎬ Ｓｏｎｇ ＸＱꎬ Ｚｈｕ ＧＰꎬ Ｈｕａｎｇ ＭＪ. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｆｌｏｗｅ￣
ｒｉｎｇ ｐｈｅｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ
ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ (Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ)[Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉ￣
ｃａｌ Ｃｒｏｐｓꎬ ２０１３ꎬ ３４(７): １２２３－１２２７.
[１３] 　 柯海丽. 五唇兰菌根化育苗技术研究[Ｄ] . 儋州: 华南热带
农业大学ꎬ ２００７.
Ｋｅ ＨＬ. Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｏｆ Ｄｏｒｉｔｉｓ ｐｕｌ￣
ｃｈｅｒｒｉｍａ Ｌｉｎｄｌ. ｗｉｔｈ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ [ Ｄ ] . Ｄａｎｚｈｏｕ:
Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ２００７.
[１４] 　 柯海丽ꎬ 宋希强ꎬ 谭志琼ꎬ 刘红霞ꎬ 罗毅波. 野生五唇兰根
部内生真菌多样性研究[ Ｊ] . 生物多样性ꎬ ２００７ꎬ １５(５):
４５６－４６２.
Ｋｅ ＨＬꎬ Ｓｏｎｇ ＸＱꎬ Ｔａｎ ＺＱꎬ Ｌｉｕ ＨＸꎬ Ｌｕｏ ＹＢ. Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ
ｆｕｎｇｉ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｒｏｏｔ ｏｆ Ｄｏｒｉｔｉｓ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ (Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ)
[Ｊ] . Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２００７ꎬ １５(５): ４５６－４６２.
[１５] 　 张萍. 铁皮石斛内生细菌研究[Ｄ] . 海口: 海南大学ꎬ ２０１２.
Ｚｈａｎｇ Ｐ. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ
ｃａｔｅｎａｔｕｍ Ｌｉｎｄｌ. [Ｄ] . ＨａｉＫｏｕ: Ｈａｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ２０１２.
[１６] 　 龙文兴ꎬ 丁易ꎬ 臧润国ꎬ 杨民ꎬ 陈少伟. 海南岛霸王岭热带
云雾林雨季的环境特征[Ｊ] . 植物生态学报ꎬ ２０１１ꎬ ３５(２):
１３７－１４６.
Ｌｏｎｇ ＷＸꎬ Ｄｉｎｇ Ｙꎬ Ｚａｎｇ ＲＧꎬ Ｙａｎｇ Ｍꎬ Ｃｈｅｎ ＳＷ. Ｅｎｖｉｒｏｎ￣
ｍｅｎｔａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｒｏｐｉｃａｌ ｃｌｏｕｄ ｆｏｒｅｓｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｉｎｙ
ｓｅａｓｏｎ ｉｎ Ｂａｗａｎｇｌｉｎｇ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｓｅｒｖｅ ｏｎ Ｈａｉｎａｎ
Ｉｓｌａｎｄꎬ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ[ Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｅｃｏｌｏ￣
ｇｙꎬ ２０１１ꎬ ３５(２): １３７－１４６.
[１７] 　 蒋有绪ꎬ 王伯荪ꎬ 臧润国. 海南岛热带林生物多样性及其形
成机制[Ｍ] . 北京: 科学出版社ꎬ ２００２.
Ｊｉａｎｇ ＹＸꎬ Ｗａｎｇ ＢＳꎬ Ｚａｎｇ ＲＧ. Ｈａｉｎａｎ Ｉｓｌａｎｄ ｔｒｏｐｉｃａｌ ｆｏ￣
ｒｅｓｔ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ[Ｍ] .
Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓꎬ ２００２.
[１８] 　 ＴｓａｖｋｅＬｏｖａ ＥＡꎬ Ｌｏｂａｋｏｖａ ＥＳꎬ Ｋｏｌｏｍｅｉｔｓｅｖａ ＧＬꎬ Ｃｈｅｒｄ￣
ｙｎｔｓｅｖａ ＴＡꎬ Ｎｅｔｒｕｓｏｖ ＡＩ. Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ ｃｙａ￣
ｎｏｂａｃｔｅｒｉａ ｏｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ ｏｒｃｈｉｄｓ[Ｊ] . Ｍｉｃｒｏｂｉｏ￣
ｌｏｇｙꎬ ２００３ꎬ ７２(１): ９９－１０４.
[１９] 　 Ｊａｎｄａ ＪＭꎬ Ａｂｂｏｔｔ ＳＬ. Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｕｂｌｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ｗｈｅｎ ｉｓ ｅｎｏｕｇｈ[Ｊ] . Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌꎬ ２００２ꎬ ４０(６):
１８８７－１８９１.
[２０] 　 闫孟红. 具有生物防治作用的辣椒内生细菌及根面细菌的分
离筛选和初步鉴定[Ｄ] . 北京: 首都师范大学ꎬ ２００４.
Ｙａｎ ＭＨ. Ｉｓｏｌａｔｉｏｎꎬ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏ￣
ｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｒｈｉｚｏｐｌａｎｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｉｔｈ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｐｅｐｐｅｒ (Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ Ｌ.) ｐｌａｎｔｓ
[Ｄ] . Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｃａｐｉｔａｌ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ２００４.
[２１] 　 Ｔｓａｖｋｅｌｏｖａ ＥＡꎬ Ｃｈｅｒｄｙｎｔｓｅｖａ Ｔꎬ Ｎｅｔｒｕｓｏｖ ＡＩ. Ｂａｃｔｅｒｉａ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ ｏｒｃｈｉｄｓ[ Ｊ] . Ｍｉｃｒｏ￣
ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００４ꎬ ７３(６): ７１０－７１５.
[２２] 　 Ｂｏｓｓｈａｒｄ ＰＰꎬ Ａｂｅｌｓ Ｓꎬ Ｚｂｉｎｄｅｎ Ｒꎬ Ｂｏｔｔｇｅｒ ＥＣꎬ Ａｌｔｗｅｇｇ
Ｍ. Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｅｒｏｂｉｃ
ｇｒａｍ￣ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｏｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ (ａｎ １８￣ｍｏｎｔｈ
１４１　 第 １期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 张芳芳等: 不同生境下五唇兰根部可培养内生细菌多样性研究
ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ) [ Ｊ] . Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌꎬ ２００３ꎬ ４１ (９): ４１３４ －
４１４０.
[２３] 　 王倩ꎬ 李术娜ꎬ 朱宝成ꎬ 李潞滨ꎬ 庄彩云ꎬ 彭镇华. 兰花炭
疽病拮抗细菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ １￣１２菌株的产芽孢条件
优化[Ｊ] . 河北大学学报: 自然科学版ꎬ ２００８ꎬ ２８(５): ５２２－
５２８.
Ｗａｎｇ Ｑꎬ Ｌｉ ＳＮꎬ Ｚｈｕ ＢＣꎬ Ｌｉ ＬＢꎬ Ｚｈｕａｎｇ ＣＹꎬ Ｐｅｎｇ ＺＨ.
Ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｓｐｏｒｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ
ｓｔｒａｉｎ １￣１２ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ａｇａｉｎｓｔ Ｃｏｌｌｅｔｏｉｃｈｕｍ
ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ[ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ: Ｎａｔｕｒａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎꎬ ２００８ꎬ ２８(５): ５２２－５２８.
[２４] 　 杨娜ꎬ 杨波. 蕙兰根部内生细菌多样性及季节动态变化[Ｊ] .
植物科学学报ꎬ ２０１１ꎬ ２９(２): １５６－１６３.
Ｙａｎｇ Ｎꎬ Ｙａｎｇ Ｂ. Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｓｅａｓｏｎａｌ ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎｓ ｏｆ
ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ｃｙｍ￣
ｂｉｄｉｕｍ ｆａｂｅｒｉ[ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ２０１１ꎬ ２９(２):
１５６－１６３.
[２５] 　 Ｓｉｌｖａ ＪＲＣꎬ Ｓｏｕｚａ ＲＭꎬ Ｚａｃａｒｏｎｅ ＡＢꎬ Ｓｉｌｖａ ＬＨＣＰꎬ Ｃａｓｔｒｏ
ＡＭＳ. Ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎｈｉｂｉ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ ｔｏｍａｔｏꎬ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｓｐｅｃｋ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ[Ｊ] . Ｃｉｅｎｃ Ａｇｒｏｔｅｃꎬ ２００８ꎬ ３２(４): １０６２－
１０７２.
[２６] 　 刘琳ꎬ 孙磊ꎬ 张瑞英ꎬ 姚娜ꎬ 李潞滨. 春兰根中可分泌吲哚
乙酸的内生细菌多样性[ Ｊ] . 生物多样性ꎬ ２０１０ꎬ １８ (２):
１９５－２００.
Ｌｉｕ Ｌꎬ Ｓｕｎ Ｌꎬ Ｚｈａｎｇ ＲＹꎬ Ｙａｏ Ｎꎬ Ｌｉ ＬＢ. Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＩＡＡ￣
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ
Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ[ Ｊ] . Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２０１０ꎬ １８
(２): １９５－２００.
[２７] 　 褚晓玲ꎬ 杨波ꎬ 高丽ꎬ 李洪林ꎬ 胡磊ꎬ 杨娜. 蕙兰根内可培
养细菌的物种多样性[Ｊ] . 武汉植物学研究ꎬ ２０１０ꎬ ２８(２):
１９９－２０５.
Ｃｈｕ ＸＬꎬ Ｙａｎｇ Ｂꎬ Ｇａｏ Ｌꎬ Ｌｉ ＨＬꎬ Ｈｕ Ｌꎬ Ｙａｎｇ Ｎ. Ｓｐｅｃｉｅｓ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｂｌｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ
Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｆａｂｅｒｉ Ｒｏｌｆｅ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｗｕｈａｎ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ
Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２０１０ꎬ ２８(２): １９９－２０５.
[２８] 　 俞婕. 铁皮石斛的内生细菌多态性与优势种群分析[Ｄ] . 杭
州: 浙江理工大学ꎬ ２０１２.
Ｙｕ Ｊ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｐｏｐ￣
ｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ
[Ｄ] . Ｈａｎｇｚｈｏｕ: Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｓｃｉ￣Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ２０１２.
[２９] 　 Ｇｙａｎｅｓｈｗａｒ Ｐꎬ Ｎａｒｅｓｈ ＫＧꎬ Ｐａｒｅｋｈ ＬＪꎬ Ｐｏｏｌｅ ＰＳ. Ｒｏｌｅ ｏｆ
ｓｏｉｌ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｉｎ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ｐ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔｓ[ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｓｏｉｌꎬ ２００２ꎬ ２４５(１): ８３－９３.
[３０] 　 Ｅｒｔｕｒｋ Ｙꎬ Ｅｒｃｉｓｌｉ Ｓꎬ Ｈａｚｎｅｄａｒ Ａꎬ Ｃａｋｍａｋｃｉ Ｒ. Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉａ (ＰＧＰＲ) ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ
ａｎｄ ｒｏｏｔ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｋｉｗｉｆｒｕｉｔ (Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｄｅｌｉｃｉｏｓａ) ｓｔｅｍ ｃｕｔ￣
ｔｉｎｇｓ[Ｊ] . Ｂｉｏｌ Ｒｅｓꎬ ２０１０ꎬ ４３: ９１－９８.
[３１] 　 Ｅｒｔｕｒｋ Ｙꎬ Ｅｒｃｉｓｌｉ Ｓꎬ Ｃａｋｍａｋｃｉ Ｒ. Ｙｉｅｌｄ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅ￣
ｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｔｏ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ￣ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｒｈｉｚｏｂａｃ￣
ｔｅｒｉａ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ] . Ｊ Ｐｌａｎｔ Ｎｕｔｒꎬ ２０１２ꎬ ３５: ８１７－８２６.
(责任编辑: 刘艳玲)
２４１ 植 物 科 学 学 报 第 ３４卷