全 文 ：武汉植物学研究 2007，25(2)：118～122
／oarna／of Wuhan Botanical Research
含 VHb基 因和 GFMcrylA基因的双价基因植物
高效表达载体的构建
王友如 ，”，崔洪志 ，郭三堆
(1．湖北师范学院生物系，湖北黄石 435002；2．中国农业科学院生物技术研究所基因工程实验室，北京 100081)
摘 要 ：将人工合成的、密码子优化后的透明颤菌血红蛋 白基因与人工合成的 GFMcrylA基因构建成双价基因植物
高效表达载体 PGBI4ASVHBBt，vgbM基因表达盒中含 2个增强子的 35S启动子、Q前导序列、Kozak序列、多联终止
密码子及 Nos终止子；Bt基因表达盒中，除含有以上提高转录和翻译的调控元件外，还包含有正确切割、加工序列、
Poly(A)信号序列。利用根癌农杆菌介导转化烟草，获得了转基因植株；PER及 Southem blot检测，证实了双价基
因在烟草基因组中的整合；Western blot检测证实了vgbM基因在转基因烟草中的表达；杀虫实验表明GFMcrylA基
因也表达出活性毒蛋白。
关键词 ：双价基因；表达载体；抗虫性；活性蛋白
中图分类号 ：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000·470X(2007)02—0118·05
Construction of Plant Expression Vector Harbouring Bivalent Genes
Composed of Synthetic vHb Gene and GFMcry／A Gene
WANG You．Ru ， ‘
。 CUI Hong．Zhi ．GUO San．Dui
(1．The Biolosy Department ofHubei Normal University，Huangshi，Hubei 430052，China；
2．The Genetic Engineering Laboratory ofBiotechnology s椰 Institute o，Chinese Academy ofAgr／cu／tural&／ence，Beijing 100081，China)
Abstract：The highly·eficient plan t expression vector harbouring bivalent genes was constructed by ap·
plying the artifcialy·modifed·synthesized VHb gene(vgbM gene)and the modifed Bt gene(GFMcrylA
gene)，vgbM gene experession cassetes contained such cis—acting elements as 35S promoter，two enhanc．
ers，Q and Kozak sequence，poly—terminator an d Nos terminator，besides these elements，Bt gene expres．
sion cassetes contained splicing sequence，processing sequence and Poly(A)sequence．Transgenic tobac·
CO plants wel~obtained through the transformation with Agrobacterium tumefaiens carying the expression
vector PGBI4ASVHBBt，by PCR amplification and So uthem blot analysis，it was proved that the bivalent
genes were inserted into the tobacco plan t genome；through western blot an alysis it was also verified that
vgbM gene expressed in the tran sgenic plan ts．Toxicity assay indicated that transgenic plan ts expressed
pesticidal toxin protein．
Key words：Bivalent gene；Expression vector；Pest·resistance；Active protein
转苏云金芽包杆菌 cry基因抗鳞翅 目及鞘翅目
的转基因研究已经取得了重大进展 ¨J，在我国，转
人工合成的GFMcrylA基因(以下简称 基因)抗虫
棉已经实行商业化生产⋯。透明颤菌能合成血红
蛋白以适应在贫氧的环境生活，由于它具有结合氧
的特性，从而暗示着在好氧的生物过程中具有潜在
的应用价值 J。优化后人工合成的透明颤菌血红
蛋白基因是根据植物偏爱的密码子，按照透明颤菌
血红蛋白(VHb)的氨基酸序列，对透明颤菌血红基
因(vgb)进行优化改造，人工合成了全长450 bp的
透明颤菌血红蛋白基因(以下称之为vgbM)。把优
化的透明颤菌血红蛋白基因同已经商业化生产 的
GFMcrylA基因构建成双价基因植物表达载体，导人
烟草。转基因烟草植株的PCR、Sou山era blot检测
表明vgbM及 双价基因都已整合至烟草的基因组
中，Western blot分析说明 vgbM基因也表达出了活
性蛋白质，转基因烟草植株杀虫实验证实 基因表
达出了活性杀虫毒蛋白。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
大肠杆菌 DI-ISct感受态细胞购自北京天为时代
收稿 日期：2OO6—08-09，修回日期 ：2OO6．11-30。
作者简介：王友如(1972一)，男，在读博士生，讲师，从事生物化学与分子生物学研究。
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122 武 汉 植 物 学 研 究 第 25卷
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