全 文 ：植物科学学报　 ２０１５ꎬ ３３(６): ７３４~７４３
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
　 　 ＤＯＩ:１０􀆰 １１９１３ / ＰＳＪ􀆰 ２０９５￣０８３７􀆰 ２０１５􀆰 ６０７３４
鸡爪槭种下分类群的 ＤＮＡ条形码筛选
高 健１ꎬ２ꎬ 孟婉姮１ꎬ２ꎬ 杜 芳１ꎬ２ꎬ 李俊清１ꎬ２∗
(１􀆰 北京林业大学林学院ꎬ 北京 １０００８３ꎻ ２ꎬ 北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室ꎬ 北京 １０００８３)
摘　 要: 槭属鸡爪槭(Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ.)是北温带广泛分布的一类园艺观赏树种ꎬ 由于频繁的种内杂交渐
渗导致其种下分类群的形态性状特征趋同ꎬ 致使传统的形态学分类难以准确鉴定ꎬ 新兴的 ＤＮＡ条形码技术为快
速、 准确的鉴定鸡爪槭种下分类群提供了新的思路ꎮ 本研究采用 ５ 个叶绿体 ＤＮＡ 片段( ｒｐｌ１６、 ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ、
ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ、 ｒｂｃＬ、 ｍａｔＫ)和核基因组 ＩＴＳ片段ꎬ 运用 ＰＷＧ￣ｄｉｓｔａｎｃｅ和 Ｔｒｅｅ￣Ｂｕｉｌｄｉｎｇ两种方法对鸡爪槭的 ８ 个分
类群共 ３２个个体进行 ＤＮＡ条形码分析ꎮ 结果显示ꎬ 单个叶绿体基因组片段(分辨率为 ０％~２５％)或核 ｒＤＮＡ
ＩＴＳ片段(１２􀆰５％)的分辨率较低ꎬ 不同组合的叶绿体 ＤＮＡ 片段(０％~６２􀆰５％)、 叶绿体片段与核 ｒＤＮＡ ＩＴＳ 片段
(１２􀆰５％~５０％)的分辨率则相对较高ꎮ 其中ꎬ ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ 片段组合的分辨率最高(６２􀆰５％)ꎬ
较为符合 ＤＮＡ条形码快速、 准确鉴定的要求ꎬ 因此建议将其作为鸡爪槭种下分类群鉴定的 ＤＮＡ条形码ꎮ
关键词: 鸡爪槭ꎻ ＤＮＡ条形码ꎻ 叶绿体 ＤＮＡ片段ꎻ 核基因组 ＩＴＳ片段ꎻ 物种分辨率
中图分类号: Ｑ９４９􀆰７５５􀆰３　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１５)０６￣０７３４￣１０
　 　 　 收稿日期: ２０１５￣０６￣２９ꎬ 退修日期: ２０１５￣０７￣２７ꎮ
　 基金项目: 北京市科技新星(Ｚ１５１１０００００３１５０５６)ꎻ 国家环境保护公益性行业科研专项(２０１５０９０４２)ꎮ
　 作者简介: 高健(１９９０－)ꎬ 男ꎬ 博士研究生ꎬ 研究方向为生物多样性(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｇａｏｊｉａｎ５６８８＠１６３.ｃｏｍ)ꎮ
　 ∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ􀆰 Ｅ￣ｍａｉｌ: ｌｉｊｑ＠ｂｊｆｕ.ｅｄｕ.ｃｎ)ꎮ
ＤＮＡ Ｂａｒｃｏｄｉｎｇ ｏｆ Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ (Ａｃｅｒａｃｅａｅ)
ＧＡＯ Ｊｉａｎ１ꎬ２ꎬ ＭＥＮＧ Ｗａｎ￣Ｈｅｎｇ１ꎬ２ꎬ ＤＵ Ｆａｎｇ１ꎬ２ꎬ ＬＩ Ｊｕｎ￣Ｑｉｎｇ１ꎬ２∗
(１. Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ｏｆ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｔｈｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｓｉｌｖｉｃｕｌｔｕｒｅ
ａｎｄ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ. ( Ａｃｅｒａｃｅａｅ ) ｉｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｇａｒｄｅｎ ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ ｔｒｅｅ
ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｅ ｒｅｇｉｏｎｓ. Ｉｔ ｉｓ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ ｔｏ ｃｌａｓｓｉｆｙ ｂｙ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ
ｄｕｅ ｔｏ ｆｒｅｑｕｅｎｔ ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ａｎｄ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｈａｓ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｉｓ ｉｓｓｕｅ. Ｉｎ
ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ｆｉｖｅ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ＤＮＡ ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ ( ｒｐｌ１６ꎬ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨꎬ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦꎬ ｒｂｃＬ ａｎｄ
ｍａｔＫ) ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ｇｅｎｏｍｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ ( ＩＴＳ) ｒｅｇｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ
ｎｕｃｌｅａｒ ｇｅｎｏｍｅ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ ｅｉｇｈｔ ｔａｘａ ｏｆ Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ. Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ｂｙ ＰＷＧ￣ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ Ｔｒｅｅ￣Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓｉｎｇｌｅ
ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔ (０％ － ２５％) ｏｒ ＩＴＳ ｆｒａｇｍｅｎｔ (１２􀆰５％) ａｌｗａｙｓ ｓｈｏｗｅｄ ｌｏｗ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ
ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎꎬ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ (０％ － ６２􀆰５％)
ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｐｌｕｓ ＩＴＳ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ (１２􀆰５％ － ５０％) ｈａｄ ｈｉｇｈｅｒ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｆｏｒ
ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ. Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ
ｒｅａｃｈｅｄ ６２􀆰５％. Ｔｈｕｓꎬ ｗｅ ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈａｔ ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ
ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｂａｒｃｏｄｅ ｆｏｒ ｔａｘａ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍꎻ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｉｎｇꎻ Ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔꎻ ｎｒＤＮＡ ＩＴＳ ｒｅｇｉｏｎꎻ
Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
　 　 槭属(Ａｃｅｒ)鸡爪槭(Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ Ｔｈｕｎｂ.)
原产于日本ꎬ 是广泛栽培于中国、 日本及北美等北
温带地区的重要森林树种ꎬ 并因其错落的树形、 变
化的叶形等极具生态、 经济及观赏价值[１]ꎮ 鸡爪
槭种下分类群主要有: 鸡爪槭(原变种) (Ａ. ｐａｌ￣
ｍａｔｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｐａｌｍａｔｕｍ)、 小鸡爪槭(Ａ. ｐａｌｍａ￣
ｔｕｍ ｖａｒ. ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ)、 细叶鸡爪槭(俗称羽毛槭ꎬ
Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ｖａｒ. ｄｉｓｓｅｃｔｕｍ)、 紫红鸡爪槭(俗称
红枫ꎬ Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ｆ. ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍ)以及种类繁
多的栽培品种等[２]ꎮ 鸡爪槭种下划分目前主要参
考传统形态分类学依据ꎬ 如叶形与叶态、 翅果大小
及两翅间角度等ꎮ 其中ꎬ 小鸡爪槭与鸡爪槭(原变
种)的主要形态区别为: 叶较小且较深 ７ 裂ꎬ 叶边
缘重锯齿较锐尖ꎬ 翅较小ꎬ 小坚果呈卵圆形等ꎮ 然
而ꎬ 这些形态差异的不显著有时会导致野外采集时
难以辨别ꎬ 并且鸡爪槭种间杂交频繁ꎬ 形态性状特
征趋同严重ꎬ 也加大了鉴定难度ꎮ 因此ꎬ 鉴于形态
学分类的局限性ꎬ 需借助 ＤＮＡ 条形码技术对具有
重要园林、 园艺及观赏价值的鸡爪槭种下分类群进
行区分ꎬ 这在理论与实践上都具有重要意义ꎮ
近年来ꎬ ＤＮＡ条形码技术的兴起、 成熟与应
用为解决鸡爪槭种下分类群的划分与鉴定提供了
可参考的新思路[３ － ６] ꎮ ＤＮＡ 条形码技术由加拿
大动物学家 Ｈｅｂｅｒｔ 在 ２００３ 年首次提出ꎬ 即利用
标准化的、 较短的 ＤＮＡ 序列对物种进行快速、
准确的鉴定[７] ꎮ 与传统分类运用表型鉴定不同ꎬ
ＤＮＡ条形码鉴定技术不受个体形态特征限制和物
种发育阶段影响ꎬ 并可快速、 准确的进行物种识
别ꎮ 在动物基因组片段的条形码鉴定方面ꎬ 线粒
体 ＣＯＩ(细胞色素 ｃ 氧化酶亚基 Ｉ)基因具有良好
的 ＤＮＡ条形码通用性ꎬ 并在鉴定鱼类[８ － １０] 、 鸟
类[１１ － １３] 、 两栖类[１４ꎬ１５] 、 鹿类[１６] 、 蝶类[１７] 、 蝇
类[１８]等物种中取得了良好的效果ꎮ 而在植物不同
种类的条形码鉴定中ꎬ 通用性较高的基因组片段
目前还较为缺乏ꎬ 但已有的相关研究成果为 ＤＮＡ
条形码的筛选提供了参考ꎮ 例如ꎬ Ｋｒｅｓｓ和 Ｅｒｉｃｋ￣
ｓｏｎ[１９]提出采用叶绿体 ＤＮＡ 片段组合 ｒｂｃＬ ＋
ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ对陆生植物进行鉴定ꎻ 生物条形码联盟
植物工作组(ＣＢＯＬ Ｐｌａｎｔ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ)则推荐
叶绿体 ＤＮＡ ｒｂｃＬ ＋ ｍａｔＫ 片段组合作为陆生植物
的鉴定条形码[２０]ꎻ 中国植物条形码研究团队(Ｃｈｉ￣
ｎａ Ｐｌａｎｔ ＢＯＬ Ｇｒｏｕｐ)认为叶绿体 ＤＮＡ片段 ｐｓｂＡ￣
ｔｒｎＨ与核基因组 ＩＴＳ 片段组合对于大多数被子植
物的鉴定有较高的通用性[２１]ꎮ 此外ꎬ 还有一些叶
绿体片段如 ｒｐｏＢ 和 ｒｐｏＣ１[２２ꎬ２３]、 ｒｐｌ１６[２４]、 ｔｒｎＳ￣
ｔｒｎＧ[２５]、 ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ[２６]、 ｒｐｓ４[２７]、 ｙｃｆ１[２８] 等也陆
续被用于条形码研究ꎬ 且取得了较好的效果ꎮ
叶绿体 ＤＮＡ片段与核基因组 ＩＴＳ 片段在多数
植物鉴别中有较高的分辨率ꎬ 但由于基因组片段在
植物中的通用性相对较低ꎬ 故为了筛选出适合鸡爪
槭种下分类群的候选或标准条形码ꎬ 本研究拟以 ３
个常用的叶绿体 ＤＮＡ 片段 ( ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ、 ｒｂｃＬ、
ｍａｔＫ)、 ２ 个候选叶绿体 ＤＮＡ 片段( ｒｐｌ１６、 ｔｒｎＬ￣
ｔｒｎＦ)和核基因组 ＩＴＳ 片段快速、 准确地识别鸡爪
槭种下 ８个分类群ꎬ 以期筛选出适合鸡爪槭种下鉴
定的 ＤＮＡ条形码片段或片段组合ꎬ 为鸡爪槭种下
分类群的快速、 准确鉴定ꎬ 以及鸡爪槭植物资源合
理开发利用与保护、 定向育种等提供科学依据ꎮ
１　 材料与方法
１􀆰 １　 实验材料
本研究以鸡爪槭种下 ８ 个分类群的 ３２ 株个体
为材料(表 １)ꎬ 每个分类群至少选取 ２株个体并采
集其幼嫩叶片ꎬ 分别放入置有变色硅胶的取样袋中
干燥、 备用ꎮ 同时ꎬ 压制鸡爪槭种下 ８个分类群的
凭证标本并存放于北京林业大学林学院ꎮ
１􀆰 ２　 ＤＮＡ提取、 聚合酶链式反应(ＰＣＲ)及测序
每份样品取约 ０􀆰２ ｇ干燥叶片ꎬ 采用植物基因
组 ＤＮＡ小型提取试剂盒(Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｋｉｔ)
提取基因组 ＤＮＡꎮ 叶绿体基因组片段 ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ、
ｒｂｃＬ、 ｍａｔＫ、 ｒｐｌ１６、 ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ 和核 ｒＤＮＡ ＩＴＳ 片
段的 ＰＣＲ 扩增均在 Ｌａｂｎｅｔ ＭｕｌｔｉＧｅｎｅＴＭ ９６￣ｗｅｌｌ
Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ上完成ꎮ ＰＣＲ反应体系为
２０ μＬꎬ 主要包含 １０~３０ ｎｇ ＤＮＡ 模板、 ５０ ｍｍｏｌ / Ｌ
Ｔｒｉｓ￣ＨＣｌ、 １􀆰５ ｍｍｏｌ / Ｌ ＭｇＣｌ２、 １ ｍｍｏｌ / Ｌ ｄＮＴＰｓ、
正反引物各 ０􀆰３ μＬ(表 ２)、 ０􀆰２ Ｕ Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶
(博尔纳德股份有限公司ꎬ 台湾)ꎮ ＰＣＲ 反应程序
为: ９４℃预变性 ３ ｍｉｎꎻ ９４℃变性 ３０ ｓꎬ ５２℃ ~
５８℃退火 ３０ ｓꎬ ７２℃延伸 ６０ ｓꎬ 共 ３０个循环ꎻ 最
后 ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ 扩增产物经 １％琼脂糖
５３７　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 高 健等: 鸡爪槭种下分类群的 ＤＮＡ条形码筛选
表 １　 材料来源
Ｔａｂｌｅ １　 Ｏｒｉｇｉｎｓ ｏｆ Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ ｍａｔｅｒｉａｌ
分类群 Ｔａｘｏｎ 采集地点 Ｌｏｃａｌｉｔｙ 样本编号 Ｃｏｄｅ
细叶鸡爪槭 上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊ２＿１
Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ ｖａｒ. ｄｉｓｓｅｃｔｕｍ 江苏栖霞山 Ｑｉｘｉａｓｈａｎꎬ Ｊｉａｎｇｓｕ ＪＳＮＪｘｘｓ＿０６＿００１
江苏紫金山 Ｚｉｊｉｎｓｈａｎꎬ Ｊｉａｎｇｓｕ ｍ００２ｂ
上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ｉ００３ｃ
山东泰安 Ｔａｉａｎꎬ Ｓｈａｎｄｏｎｇ ｎ００１ｉ
紫红鸡爪槭 江苏栖霞山 Ｑｉｘｉａｓｈａｎꎬ Ｊｉａｎｇｓｕ ＪＳＮＪｘｘｓ＿０３＿００１
Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ｆ. ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍ 江苏紫金山 Ｚｉｊｉｎｓｈａｎꎬ Ｊｉａｎｇｓｕ ＪＳＮＪｚｗｙ＿０１＿０１９
江苏徐州 Ｘｕｚｈｏｕꎬ Ｊｉａｎｇｓｕ ＪＳＸＺｚｗｙ＿０１＿０３５
江西庐山 Ｌｕｓｈａｎꎬ Ｊｉａｎｇｘｉ ＪＸＬＳ＿０６＿００２
浙江西湖 Ｘｉｈｕꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ ＺＪＨＺｘｈ＿０３＿００１
广西兴宁 Ｘｉｎｇｎｉｎｇꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ ｌ０１０ａ
广西青秀山 Ｑｉｎｇｘｉｕｓｈａｎꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ ｋ００５ａ
鸡爪槭(原变种) 湖北磨山 Ｍｏｓｈａｎꎬ Ｈｕｂｅｉ ＨＢＷＨｚｗｙ＿０４＿００１
Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｐａｌｍａｔｕｍ 河南白云山 Ｂａｉｙｕｎｓｈａｎꎬ Ｈｅｎａｎ ＨＮｂｙｓ＿０４＿００２
江苏栖霞山 Ｑｉｘｉａｓｈａｎꎬ Ｊｉａｎｇｓｕ ＪＳＮＪｘｘｓ＿０１＿０１２
江苏紫金山 Ｚｉｊｉｎｓｈａｎꎬ Ｊｉａｎｇｓｕ ＪＳＮＪｚｗｙ＿０２＿０１６
江西庐山 Ｌｕｓｈａｎꎬ Ｊｉａｎｇｘｉ ＪＸＬＳ＿０５＿００１
陕西杨凌 Ｙａｎｇｌｉｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ ＳＸＸＹｎｗａｆｕ＿０２＿００９
浙江西湖 Ｘｉｈｕꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ ＺＪＨＺｚｗｙ＿０７＿００２
北京香山 Ｘｉａｎｇｓｈａｎꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ ｂ０１５
上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ｉ００３ｅ
湖北十堰 Ｓｈｉｙａｎꎬ Ｈｕｂｅｉ ｙ００２
小鸡爪槭 上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ｉ００３ａ
Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ｖａｒ. ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ 广西兴宁 Ｘｉｎｇｎｉｎｇꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ ｌ０１０ｂ
‘红镜’鸡爪槭 上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ｘ００２ｐ
Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ‘Ｂｅｎｉ Ｋａｇａｍｉ’ 上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ｘ００２ｊ
‘猩猩’鸡爪槭 上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊ５＿１
Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ‘Ｓｈｏｊｏ’ 上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊ１３＿１
‘青龙’鸡爪槭 上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊ２２＿１
Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ‘Ｓｅｉｒｙｕ’ 上海辰山 Ｃｈｅｎｓｈａｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ｘ００２ｏ
‘深红细叶’鸡爪槭 四川茂县 Ｍａｏｘｉａｎꎬ Ｓｉｃｈｕａｎ ｕ００２
Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ ‘Ｏｒｎａｔｕｍ’ 山东泰安 Ｔａｉａｎꎬ Ｓｈａｎｄｏｎｇ ｎ００１ｂ
表 ２　 利用 ＰＣＲ扩增基因组片段的引物信息
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ＤＮＡ ｒｅｇｉｏｎｓ
基因组片段
ＤＮＡ ｒｅｇｉｏｎｓ
引物序列(５’－ ３’)
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
引物来源
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ ｔｒｎＬ: ＣＧＡＡＡＴＣＧＧＴＡＧＡＣＧＣＴＡＣＧｔｒｎＦ: ＡＴＴＴＧＡＡＣＴＧＧＴＧＡＣＡＣＧＡＧ
Ｔａｂｅｒｌｅｔ ｅｔ ａｌ.[３２]
Ｔａｂｅｒｌｅｔ ｅｔ ａｌ.[３２]
ｒｐｌ１６ Ｆ: ＧＣＴＡＴＧＣＴＴＡＧＴＧＴＧＴＧＡＣＴＣＧＴＴＧＲ: ＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＧＴＴＧＴＴＴＡＣＧ
Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ.[３３]
Ａｓｍｕｓｓｅｎ[３４]
ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ｐｓｂＡ: ＧＴＴＡＴＧＣＡＴＧＡＡＣＧＴＡＡＴＧＣＴＣｔｒｎＨ: ＣＧＣＧＣＡＴＧＧＴＧＧＡＴＴＣＡＣＡＡＴＣＣ
Ｓａｎｇ ｅｔ ａｌ.[３５]
Ｔａｔｅ ｅｔ ａｌ.[３６]
ｒｂｃＬ １Ｆ: ＡＴＧＴＣＡＣＣＡＣＡＡＡＣＡＧＡＡＡＣ７２４Ｒ: ＴＣＧＣＡＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＴＡＧＣ
Ｆａｙ ｅｔ ａｌ.[３７]
Ｏｌｍｓｔｅａｄ ｅｔ ａｌ.[３８]
ｍａｔＫ ３Ｆ＿ＫＩＭ: ＣＧＴＡＣＡＧＴＡＣＴＴＴＴＧＴＧＴＴＴＡＣＧＡＧ１Ｒ＿ＫＩＭ: ＡＣＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＴＧＧＡＡＡＴＣＴＴＧＧＴＴＣ
Ｈｉｌｕ ｅｔ ａｌ.[３９]
Ｈｉｌｕ ｅｔ ａｌ.[３９]
ＩＴＳ ＩＴＳ５: ＧＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧ
ＩＴＳ４: ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ
Ｂａｕｍ ｅｔ ａｌ.[４０]
Ｂａｕｍ ｅｔ ａｌ.[４０]
６３７ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
凝胶电泳检测后ꎬ 送往北京生工生物工程股份有限
公司并在 ＡＢＩ３７３０ＸＬ遗传分析仪上进行测序ꎮ
１􀆰 ３　 数据分析
利用 Ｂｉｏｅｄｉｔ ７􀆰１􀆰１１软件对获得的基因组片段
序列进行整理、 拼接以及校正[２９]ꎻ 使用 ＤＮＡｓｐ
５􀆰１０􀆰０１软件[３０]对各个序列进行插入缺失( ｉｎｄｅｌｓ)
以及单核苷酸多态性(ＳＮＰｓ)统计ꎮ 将经手工矫正
后的各基因组片段的完整序列提交至 ＧｅｎＢａｎｋꎬ
其登录号为 ＫＴ１６００２９~ＫＴ１６０１６８ꎮ 将 ５个叶绿体
基因组片段( ｒｐｌ１６、 ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ、 ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ、 ｒｂｃＬ、
ｍａｔＫ)和核基因组 ＩＴＳ片段分别以单独、 两两以及
多重组合(６３种)构建矩阵ꎬ 并以此来评估在单基
因组片段或多基因组片段组合的情况下 ＤＮＡ 条形
码对槭属鸡爪槭种下分类群的鉴定能力ꎮ 利用
ＭＥＧＡ ６􀆰０软件[３１]对 ５ 个叶绿体基因组片段和核
基因组 ＩＴＳ 片段的 Ｋｉｍｕｒａ￣２￣ｐａｒａｍｅｔｅｒ ｄｉｓｔａｎｃｅ
(Ｋ２Ｐ)遗传距离进行计算分析ꎬ 并构建单个以及多
个基因组片段组合的邻接树 ( ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ
ｔｒｅｅ)ꎻ 运用两种不同的方法ꎬ 即 ｐｌａｎｔ ｗｏｒｋｉｎｇ
ｇｒｏｕｐ距离法(ＰＷＧ￣ｄｉｓｔａｎｃｅ)和 ＮＪ 系统聚类树
法(Ｔｒｅｅ￣Ｂｕｉｌｄｉｎｇ)ꎬ 对基因组片段的鉴定能力进
行评估ꎮ 生物条形码联盟植物工作组推荐使用的
ＰＷＧ距离法(单独计算每个物种的遗传距离)认
为ꎬ 当种间最小遗传距离大于种内最大遗传距离
时ꎬ 方可表明物种鉴定成功ꎻ 而利用 Ｔｒｅｅ￣Ｂｕｉｌ￣
ｄｉｎｇ方法评估时ꎬ 只有同一个分类群的不同个体在
构建的 ＮＪ系统树上形成单系分支方可认为分类群
鉴定成功ꎮ
２　 结果与分析
２􀆰 １　 各基因组片段的序列信息
对 ５个叶绿体 ＤＮＡ 片段和核基因组 ＩＴＳ 片段
的序列长度、 变异位点、 插入缺失数等的分析结果
(表 ３) 显示ꎬ 各 ＤＮＡ 片段的测序成功率均为
１００％ꎻ 叶绿体 ＤＮＡ片段总长度为 ３７５４ ｂｐꎬ 核基
因组 ＩＴＳ 片段为 ６９４ ｂｐꎮ 在 ５ 个叶绿体片段中ꎬ
ｍａｔＫ 序列的变异位点最多ꎬ 为 ６１ 个 ( ５４ 个
ＳＮＰｓꎬ ７个 ｉｎｄｅｌｓ)ꎬ 占其片段总长度的 ７􀆰４８％ꎻ
ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ序列的变异位点为 ４９ 个(４０ 个 ＳＮＰｓꎬ ９
个 ｉｎｄｅｌｓ)ꎬ 占其片段总长度的 ５􀆰４６％ꎻ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ
序列的变异位点为 ４０ 个 (３３ 个 ＳＮＰｓꎬ ７ 个 ｉｎ￣
ｄｅｌｓ)ꎬ 占其片段总长度的 ８􀆰８７％ꎻ ｒｐｌ１６ 序列的变
异位点为 １７个(１１个 ＳＮＰｓꎬ ６个 ｉｎｄｅｌｓ)ꎬ 占其片
段总长度的 １􀆰８１％ꎻ ｒｂｃＬ序列的变异位点最少ꎬ 为
６个(４个 ＳＮＰｓꎬ ２个 ｉｎｄｅｌｓ)ꎮ 核 ｒＤＮＡ ＩＴＳ片段的
变异位点为 ６１个(５１个 ＳＮＰｓꎬ １０个 ｉｎｄｅｌｓ)ꎮ
２􀆰 ２　 单个及多个 ＤＮＡ片段的分辨率
采用 ＰＷＧ￣ｄｉｓｔａｎｃｅ和 Ｔｒｅｅ￣Ｂｕｉｌｄｉｎｇ 两种方法
比较了单个 ＤＮＡ片段和多个 ＤＮＡ片段组合对鸡爪
槭种下 ８个分类群的分辨率(图 １)ꎬ 结果显示ꎬ 单
个叶绿体 ＤＮＡ 片段 ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ、 ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ、 ｒｐｌ１６、
ｒｂｃＬ、 ｍａｔＫ 的分辨率分别为 ２５％、 １２􀆰５％、 ０％、
０％、 ０％ꎬ 核基因组 ＩＴＳ 片段的分辨率为１２􀆰 ５％ꎮ
在叶绿体 ＤＮＡ片段的不同组合分析中ꎬ ２ 个片段
组合的分辨率为 ０％~３７􀆰５％ꎬ 其中生物条形码联
盟植物工作组推荐的 ｍａｔＫ ＋ ｒｂｃＬ 组合的分辨率
为 ０％ꎻ ３ 个片段组合的分辨率为 ０％ ~６２􀆰５％ꎬ
其中 ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ组合的分辨率
最高(６２􀆰５％)ꎬ 能鉴定出 ８ 个分类群中的 ５ 个ꎻ ４
个、 ５个片段组合的分辨率为 １２􀆰５％~６２􀆰５％ꎬ 表
明组合片段虽增加ꎬ 但对鸡爪槭种下 ８个分类群的
分辨率没有提高ꎮ 在叶绿体 ＤＮＡ 片段与核基因组
ＩＴＳ片段联合构建的组合片段分析中ꎬ 所有片段组
合的分辨率介于 １２􀆰５％~５０％ 之间ꎬ 与相对应的单
表 ３　 用于条形码分类的 ＤＮＡ片段长度、 变异位点、 分辨率和遗传距离
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｅｎｇｔｈꎬ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ｏｆ ｅａｃｈ ＤＮＡ ｒｅｇｉｏｎꎬ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｆｏｒ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｉｎｇ
基因组片段
ＤＮＡ
ｒｅｇｉｏｎｓ
比对长度
Ａｌｉｇｎｅｄ
ｌｅｎｇｔｈ(ｂｐ)
ＳＮＰｓ位点数
Ｎｏ. ｏｆ
ＳＮＰｓ
插入缺失数
Ｎｏ. ｏｆ
ｉｎｄｅｌｓ
变异位点
Ｎｏ. ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
ｓｉｔｅｓ
ＰＷＧ法分辨率
Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ ｏｆ ＰＷＧ
ＮＪ法分辨率
Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ ｏｆ ＮＪ
分类群间遗传距离∗
Ｉｎｔｅｒ￣ｔａｘｏｎ
ｄｉｓｔａｎｃｅ
分类群内遗传距离∗
Ｉｎｔｒａ￣ｔａｘｏｎ
ｄｉｓｔａｎｃｅ
ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ ８９７ ４０ ９ ４９ (５.４６％) ２５％ ２５％ ０~０.０２９８ ０~０.０２９８
ｒｐｌ１６ ９３５ １１ ６ １７ (１.８１％) ０％ ０％ ０~０.０１８９ ０~０.０１２５
ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ４５１ ３３ ７ ４０ (８.８７％) １２.５％ １２.５％ ０~０.０７８５ ０~０.０６９０
ｒｂｃＬ ６５５ ４ ２ ６ (０.０１％) ０％ ０％ ０~０.００６１ ０~０.００４６
ｍａｔＫ ８１６ ５４ ７ ６１ (７.４８％) ０％ ０％ ０~０.０４６７ ０~０.０４００
ＩＴＳ ６９４ ５１ １０ ６１ (８.８％) １２.５％ １２.５％ ０~０.４１６９ ０~０.３７６６
　 　 Ｎｏｔｅ: ＰＷＧꎬ Ｐｌａｎｔ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐꎻ ＮＪꎬ Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ. ∗ ｍｅａｎ Ｋ２Ｐ ｄｉｓｔａｎｃｅ.
７３７　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 高 健等: 鸡爪槭种下分类群的 ＤＮＡ条形码筛选
PWG-distance Tree-Building (NJ)
P M L PR P
H PLPM R
M R
L
R
H
M
H H
L H
I LIM
L PI M
I
R
I
PR
H
PR
M
PR
L
PM
H
PM
L
PH
L
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M
L
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M
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I
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H
LI
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PR
H
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M
H
L
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M
I
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L
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M
H
PM
H
L
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M
H
I
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M
L I
M
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H
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LI
PM
H
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PH
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PM
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M
H
L I
PR
M
H
L
PR
H
LI
PR
M
LI
PR
M
H
L I
R
M
H
LI
Single- and multi-DNA regions
DNA!"#$%
70
60
50
40
30
20
10
0
&

(
（
%）
D
is
cr
im
in
at
io
n
ra
te
R H I
Ｐ: ｒｐｌ１６ꎻ Ｈ: ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨꎻ Ｌ: ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦꎻ Ｒ: ｒｂｃＬꎻ Ｍ: ｍａｔＫꎻ Ｉ: ＩＴＳ.
图 １　 单个及多个 ＤＮＡ片段组合对鸡爪槭种下 ８个分类群的分辨率
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｔａｘｏｎ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ａｌｌ ｔｅｓｔｅｄ ｓｉｎｇｌｅ￣ ａｎｄ ｍｕｌｔｉ￣ＤＮＡ ｒｅｇｉｏｎｓ ｉｎ Ａ. ｐａｌｍａｔｕｍ
个或多个叶绿体 ＤＮＡ 片段组合相比ꎬ 其分辨率略
有下降ꎮ
３　 讨论
３􀆰 １　 单个叶绿体 ＤＮＡ 片段及核基因组 ＩＴＳ 片段
对鸡爪槭种下分类群的分辨率较低
本研究中单个叶绿体 ＤＮＡ 片段对鸡爪槭种
下分类群的分辨率较低(０％~２５％)ꎬ 其中被广泛
推荐使用的 ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ 片段[１９ꎬ２１ꎬ４１ꎬ４２]的分辨率仅
有 １２􀆰５％(图 １)ꎻ 核基因组 ＩＴＳ 片段因突变速率
较快ꎬ 被认为是鉴别陆地被子植物种类的核心
ＤＮＡ片段[２１] ꎬ 如 ＩＴＳ１ 和 ＩＴＳ２ 片段在大多数植
物类群识别中取得了较好的分辨效果[４３ꎬ４４] ꎬ 但核
基因组 ＩＴＳ 片段对鸡爪槭种下分类群的分辨率只
有 １２􀆰５％ꎬ 仅能分辨出小鸡爪槭(图 ２)ꎬ 而对其
余分类群无分辨能力ꎮ 我们推测单个 ＤＮＡ 条形
码对鸡爪槭种下分类群分辨率较低的原因可能
是: (１)鸡爪槭种内植物可能存在较为频繁的杂
交ꎬ 导致基因渐渗ꎬ 共享基因广泛存在ꎬ 使得单
一 ＤＮＡ 片段难以辨别ꎮ Ｓｋｅｐｎｅｒ 和 Ｋｒａｎｅ[４５]研
究显示ꎬ 同属于槭组( ｓｅｃｔｉｏｎ Ａｃｅｒ)的黑枫(Ａ.
ｎｉｇｒｕｍ)和糖枫(Ａ. ｓａｃｃｈａｒｕｍ)广泛共域ꎬ 会产
生大量杂交种ꎻ Ｐｆｏｓｓｅｒ[４６]也认为ꎬ 槭属植物的
一个显著特征是物种分布区重叠ꎬ 会导致出现大
量杂交物种ꎬ 此现象在日本槭属植物的分布地区
尤为明显[４７] ꎮ (２)对于种下分类群ꎬ 尤其以近期
栽培品种为主要构成的鸡爪槭ꎬ 可能经历了快速
成种ꎬ 致使其种下分类群没有足够时间累积有效
变异ꎻ (３)形态分类学对鸡爪槭种下划分不合理ꎬ
如鸡爪槭(原变种)与小鸡爪槭的表型形态性状极
其相似ꎬ 却被划分为 ２ 个不同变种ꎻ (４)槭属植
物的亲缘地理学研究结果显示ꎬ 鸡爪槭为较早分
化出的物种(未发表数据)ꎬ 而槭属植物的化石证
据最早可追溯到约 ６６􀆰５ Ｍａ 前[４８] ꎬ 即物种经历
了较长世代时间ꎬ 不完全的谱系筛选可能导致种
下分类群较小的差异水平ꎬ 从而阻碍了鸡爪槭种
下分类群的鉴定ꎮ
综上分析ꎬ 单独采用叶绿体 ＤＮＡ 片段或核
基因组 ＩＴＳ 片段对鸡爪槭种下分类群进行鉴定ꎬ
均存在一定的困难ꎮ
３􀆰 ２　 多个 ＤＮＡ 片段组合能够提高对鸡爪槭种内
分类群的分辨率
３􀆰 ２􀆰 １　 多个叶绿体基因组片段组合
在单一 ＤＮＡ片段对植物分类群鉴定分辨率较低
的情况下ꎬ 采用多片段组合是提升分辨率较为有效
的途径ꎮ 本研究中多个叶绿体 ＤＮＡ 片段(２ 个、 ３
个或 ４个)组合对鸡爪槭种下分类群的分辨率(０％~
６２􀆰５％)高于单个 ｃｐＤＮＡ片段ꎬ 其中 ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣
ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ组合(图３)与 ｒｂｃＬ ＋ ｒｐｌ１６ ＋ｐｓｂＡ￣
ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ 组合的分辨率均可达 ６２􀆰５％ꎮ 本
研究采用的 ｃｐＤＮＡ 片段中ꎬ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ 间隔区是
进化速率较快的叶绿体间隔区之一[４９] ꎬ 其片段长
８３７ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
A. palmatum atropurpureumf. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum atropurpureumf. (1 individual)
A. palmatum . dissectumvar (1 individual)
A. palmatum . dissectumvar (1 individual)
A. palmatum . dissectumvar (1 individual)
A. palmatum . dissectumvar (1 individual)
A. palmatum . dissectumvar (1 individual)
A. palmatum . atropurpureumf (1 individual)
A. palmatum . atropurpureumf (1 individual)
A. palmatum‘ ’Beni_Kagami (1 individual)
A. palmatum Ornatum (1 individual)’‘
A. palmatum Ornatum (1 individual)’‘
A. palmatum . atropurpureumf (1 individual)
A. palmatum . atropurpureumf (1 individual)
A. palmatum . palmatumsubsp (1 individual)
A. palmatum Beni_Kagami (1 individual)’‘
A. palmatum . palmatumsubsp (1 individual)
A. palmatum atropurpureumf. (1 individual)
A. palmatum Shojo (1 individual)‘ ’
A. palmatum Shojo (1 individual)‘ ’
A. palmatum . palmatumsubsp (1 individual)
A. palmatum . palmatumsubsp (2 individuals)
A. palmatum . thunbergiivar (2 individuals)
A. palmatum . palmatumsubsp (1 individual)
A. palmatum . palmatumsubsp (1 individual)
A. palmatum Seiryu (1 individual)’‘
A. palmatum . palmatumsubsp (1 individual)
A. palmatum . palmatumsubsp (1 individual)
A. palmatum Seiryu (1 individual)’‘0.02
菱形表示利用 Ｔｒｅｅ￣ｂｕｉｌｄｉｎｇ方法被成功鉴定的分类群ꎮ 下同ꎮ
Ｔａｘａ ｗｉｔｈ ｓｏｌｉｄ ｒｈｏｍｂｉ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｄｅｌｉｍｉｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｒｅｅ￣ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ. Ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
图 ２　 基于核基因组 ＩＴＳ片段构建的鸡爪槭种下分类群的 ＮＪ系统发育树
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ ｒｅｇｉｏｎ
A. palmatum atropurpureumf. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum‘ ’Seiryu (1 individual)
A. palmatum atropurpureumf. (3 individuals)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum atropurpureum (1 individual)f.
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum‘Shojo (2 individuals)’
A. palmatum‘ ’Ornatum (2 individuals)
A. palmatum dissectumvar. (5 individuals)
A. palmatum‘Seiryu (1 individual)’
A. palmatum thunbergiivar. (2 individuals)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (2 individuals)
A. palmatum atropurpureumf. (2 individuals)
A. palmatum‘Beni_Kagami (2 individuals)’0.001
图 ３　 基于 ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ片段组合构建的鸡爪槭种下分类群 ＮＪ系统发育树
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｐｌ１６ꎬ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ａｎｄ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ ＤＮＡ ｒｅｇｉｏｎｓ
９３７　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 高 健等: 鸡爪槭种下分类群的 ＤＮＡ条形码筛选
度最短(４５１ ｂｐ)ꎬ 但变异位点率最高(８􀆰８７％)ꎻ
ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ的变异位点数较多ꎬ 在单个 ＤＮＡ 片段的
分辨率中最高(表 ３)ꎬ 表现出良好的鉴定能力ꎻ
ｒｐｌ１６ 片段作为族群遗传研究中常用的 ＤＮＡ 片
段[２４]ꎬ 却在鸡爪槭种下分类群鉴定中效果一般ꎻ
ｒｂｃＬ的变异位点可能主要存在于种以上的分类群
中[１９ꎬ４１ꎬ４２]ꎬ 其在鸡爪槭种下分类群鉴定中变异位
点率仅为 ０􀆰０１％ꎮ 采用 ５ 个叶绿体 ＤＮＡ 片段进行
组合鉴别时ꎬ 对鸡爪槭种下分类群的分辨率仅为
３７􀆰５％(低于 ３ 个或 ４ 个 ｃｐＤＮＡ 片段的部分组
合)ꎬ 这可能是本研究采用的 ５ 个叶绿体基因组片
段中ꎬ 存在进化速率较慢且其序列中无效变异位点
居多的片段ꎬ 导致组合片段的数量增加但鉴定能力
下降的现象[４２]ꎬ 此结果也曾在莎草科[５０]、 蔓藓
科[５１]等研究中报道ꎮ
３􀆰 ２􀆰 ２　 多个叶绿体 ＤＮＡ 片段与核基因组 ＩＴＳ 片
段组合
核基因组和叶绿体基因组具有不同的遗传模
式ꎬ 即核基因是双亲遗传、 叶绿体基因为母系遗
传ꎮ 依据不同的遗传方式ꎬ 可以追踪植物不同的进
化历史ꎬ 阐明植物的进化过程ꎬ 其中进化速率较快
的核基因组比叶绿体基因组会携带更多的遗传信
息[５２￣５４]ꎮ 目前选择多种基因组片段组合ꎬ 尤其是
不同遗传背景来源的基因组片段组合并构建系统发
育矩阵ꎬ 是进行 ＤＮＡ 条形码鉴定尝试较多的方法
之一[２５ꎬ５５]ꎮ
在核基因组片段的选择上ꎬ ＩＴＳ 区一直是选用
的热点片段之一[２１ꎬ５６]ꎬ 尤其与叶绿体基因组片段
组合可显著提升物种分辨率[２６ꎬ５７￣５９]ꎮ 而在本研究
中ꎬ 多个叶绿体 ＤＮＡ 片段与核基因组 ＩＴＳ 片段组
合的分辨率为 １２􀆰５％~５０％ꎬ 其中 ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣
ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ ＋ ＩＴＳ (图 ４)与 ｒｂｃＬ ＋ ｒｐｌ１６ ＋
ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ ＋ ＩＴＳ分辨率均为 ５０％ꎬ 即
加入核 ｒＤＮＡ ＩＴＳ 片段并未使分辨率增加ꎮ ＩＴＳ 片
段虽在植物种下分类群中的序列变异较大[４９] ꎬ 且
在许多植物中的鉴定效率较高[２１] ꎬ 但对于世代周
期较长且种内分类群杂交、 渐渗较为频繁的鸡爪
槭来讲ꎬ 核 ｒＤＮＡ ＩＴＳ 片段可能有一定的局限性
(不是很好的 ＤＮＡ 条形码选择)ꎬ 故建议开发其
他适于鸡爪槭种下分类群鉴定的核基因组片段ꎮ
本研究中未能被准确鉴定的分类群主要有鸡爪
槭(原变种)与紫红鸡爪槭(俗称红枫)ꎮ 这 ２ 个分
类群对环境适应性较强ꎬ 其被应用于园林、 园艺景
观的频率也较高ꎬ 致使两者的分布与应用范围较为
A. palmatum atropurpureumf. (3 individuals)
A. palmatum palmatumsubsp. (2 individuals)
A. palmatum atropurpureumf. (1 individual)
A. palmatum atropurpureumf. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum‘ ’Ornatum (1 individual)
A. palmatum dissectumvar. (5 individuals)
A. palmatum‘ ’Ornatum (1 individual)
A. palmatum‘ ’Shojo (2 individuals)
A. palmatum‘ ’Beni_Kagami (2 individuals)
A. palmatum atropurpureumf. (2 individuals)
A. palmatum palmatumsubsp. (2 individuals)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum thunbergiivar. (2 individuals)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum‘ ’Seiryu (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum palmatumsubsp. (1 individual)
A. palmatum Seiryu (1 individual)‘ ’0.005
图 ４　 基于 ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ ＋ ＩＴＳ片段组合构建的鸡爪槭种下分类群 ＮＪ系统发育树
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ Ａｃｅｒ ｐａｌｍａｔｕｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ
( ｒｐｌ１６ꎬ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ａｎｄ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ) ｒｅｇｉｏｎｓ ａｎｄ ｎｒＤＮＡ ＩＴＳ
０４７ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
广泛ꎬ 从而使相同分类群中不同个体可能因区域性
适应而累积各自独有的突变ꎬ 这也许是鸡爪槭(原
变种)与紫红鸡爪槭未被准确鉴定的原因ꎮ
本研究结果虽未实现对全部材料的准确识别和
鉴定ꎬ 但 ｒｐｌ１６ ＋ ｐｓｂＡ￣ｔｒｎＨ ＋ ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ 片段组合
以其相对较高的分辨率而被优先考虑作为鉴定鸡爪
槭种下分类群的 ＤＮＡ 条形码ꎮ 该条形码的筛选也
可为槭属植物遗传多样性分析方面提供参考ꎬ 并为
完善木本植物 ＤＮＡ条形码技术研发奠定基础ꎮ
致谢: 感谢台湾师范大学廖培钧副教授、 黄秉宏博士
对论文初稿的修改ꎻ 感谢北京林业大学林学院分子生态学
实验室侯盟博士、 鲁四海博士在数据处理上的帮助ꎮ
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[１６] 　 张蓉ꎬ 刘春生ꎬ 黄璐琦ꎬ 王学勇ꎬ 崔光红ꎬ 董栗. 鹿
茸饮片的 ＤＮＡ条形码鉴别研究[Ｊ] . 中国药学杂志ꎬ
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[１７] 　 诸立新ꎬ 吴孝兵ꎬ 晏鹏. 基于 ＣＯＩ 基因部分序列对
尾凤蝶属(鳞翅目ꎬ 凤蝶科)四种蝴蝶分子系统关系
及相关问题的探讨[Ｊ] . 动物分类学报ꎬ ２００６ꎬ ３１
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[１８] 　 陈庆ꎬ 白洁ꎬ 刘力ꎬ 林红斌ꎬ 唐晖ꎬ 赵伟ꎬ 周红章ꎬ
严江伟ꎬ 刘雅诚ꎬ 胡松年. 北京地区 ７种常见嗜尸性
蝇类的 ＣＯＩ 基因序列分析及 ＤＮＡ 条形码的建立
[Ｊ] . 昆虫学报ꎬ ２００９ꎬ ５２(２): ２０２－２０９.
[１９] 　 Ｋｒｅｓｓ ＷＪꎬ Ｅｒｉｃｋｓｏｎ ＤＬ. Ａ ｔｗｏ￣ｌｏｃｕｓ ｇｌｏｂａｌ ＤＮＡ
ｂａｒｃｏｄｅ ｆｏｒ ｌａｎｄ ｐｌａｎｔｓ: ｔｈｅ ｃｏｄｉｎｇ ｒｂｃＬ ｇｅｎｅ
ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｓ ｔｈｅ ｎｏｎ￣ｃｏｄｉｎｇ ｔｒｎＨ￣ｐｓｂＡ ｓｐａｃｅｒ
ｒｅｇｉｏｎ[Ｊ] . ＰＬｏＳ Ｏｎｅꎬ ２００７ꎬ ２(６): ｅ５０８.
[２０] 　 ＣＢＯＬ Ｐｌａｎｔ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ. Ａ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｅ ｆｏｒ
ｌａｎｄ ｐｌａｎｔｓ[ Ｊ] . Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡꎬ ２００９ꎬ
１０６(３１): １２７９４－１２７９７.
[２１] 　 Ｌｉ ＤＺꎬ Ｇａｏ ＬＭꎬ Ｌｉ ＨＴꎬ Ｗａｎｇ Ｈꎬ Ｇｅ ＸＪꎬ Ｌｉｕ ＪＱꎬ
Ｃｈｅｎ ＺＤꎬ Ｚｈｏｕ ＳＬꎬ Ｃｈｅｎ ＳＬꎬ Ｙａｎｇ ＪＢꎬ Ｆｕ ＣＸꎬ
Ｚｅｎｇ ＣＸꎬ Ｙａｎ ＨＦꎬ Ｚｈｕ ＹＪꎬ Ｓｕｎ ＹＳꎬ Ｃｈｅｎ ＳＹꎬ
Ｚｈａｏ Ｌꎬ Ｗａｎｇ Ｋꎬ Ｙａｎｇ Ｔꎬ Ｄｕａｎ ＧＷ. Ｃｏｍｐａｒａ￣
ｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａ ｌａｒｇｅ ｄａｔａｓｅｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈａｔ ｉｎｔｅｒ￣
ｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ ( ＩＴＳ) ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｃｏｒｐｏ￣
ｒａｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｃｏｒｅ ｂａｒｃｏｄｅ ｆｏｒ ｓｅｅｄ ｐｌａｎｔｓ [ Ｊ] .
Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡꎬ ２０１１ꎬ １０８(４９): １９６４１－
１９６４６.
[２２] 　 于杰ꎬ 闫化学ꎬ 鲁振华ꎬ 周志钦. 基于柑橘及其近缘
属植物 ＤＮＡ条形码的叶绿体编码序列筛选[Ｊ] . 中
国农业科学ꎬ ２０１１ꎬ ４４(２): ３４１－３４８.
[２３] 　 Ｃｈａｓｅ ＭＷꎬ Ｃｏｗａｎ ＲＳꎬ Ｈｏｌｌｉｎｇｓｗｏｒｔｈ ＰＭꎬ Ｃａｓｓｉｏ
１４７　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 高 健等: 鸡爪槭种下分类群的 ＤＮＡ条形码筛选
ＶＤＢꎬ Ｍａｄｒｉ Áｎ Ｓꎬ Ｐｅｔｅｒｓｅｎ Ｇꎬ Ｓｅｂｅｒｇ Ｏꎬ Ｒｇ￣
ｓｅｎｓｅｎ ＴＪꎬ Ｃａｍｅｒｏｎ ＫＭꎬ Ｃａｒｉｎｅ Ｍ. Ａ ｐｒｏｐｏｓａｌ
ｆｏｒ ａ ｓｔａｎｄａｒｄｉｓｅｄ ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｔｏ ｂａｒｃｏｄｅ ａｌｌ ｌａｎｄ
ｐｌａｎｔｓ[Ｊ] . Ｔａｘｏｎꎬ ２００７ꎬ ５６(２): ２９５－２９９.
[２４] 　 姚领爱ꎬ 胡之璧ꎬ 郑志仁ꎬ 周吉燕ꎬ 王莉莉ꎬ 化海
霞ꎬ 黎万奎. 铁皮石斛种质资源研究中的 ＤＮＡ 条形
码初探[Ｊ] . 上海农业学报ꎬ ２０１２(１): ４９－５４.
[２５] 　 邹嘉宾ꎬ 王茜ꎬ 李丽丽ꎬ 刘建全. 结合叶绿体和核
ＤＮＡ序列变异可提高云杉属物种的分子鉴别率[Ｊ] .
植物分类与资源学报ꎬ ２０１３ꎬ ３５(３): ３７５－３８５.
[２６] 　 程芳婷ꎬ 李忠虎ꎬ 刘春艳ꎬ 原超ꎬ 李雪童ꎬ 刘占林.
地黄属植物的 ＤＮＡ条形码研究[Ｊ] . 植物科学学报ꎬ
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[２７] 　 李丹丹ꎬ 郭水良ꎬ 于晶ꎬ 李莎ꎬ 曹同. 基于 ４ 个叶绿
体基因识别蓑藓属(Ｍａｃｒｏｍｉｔｒｉｕｍ)植物的可行性研
究[Ｊ] . 植物科学学报ꎬ ２０１３ꎬ ３１(１): ２３－３３.
[２８] 　 Ｄｏｎｇ ＷＰꎬ Ｘｕ Ｃꎬ Ｌｉ ＣＨꎬ Ｓｕｎ ＪＨꎬ Ｚｕｏ ＹＪꎬ Ｓｈｉ Ｓꎬ
Ｃｈｅｎｇ Ｔꎬ Ｇｕｏ ＪＪꎬ Ｚｈｏｕ ＳＬ. ｙｃｆ１ꎬ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｒｏｍ￣
ｉｓｉｎｇ ｐｌａｓｔｉｄ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｅ ｏｆ ｌａｎｄ ｐｌａｎｔｓ[Ｊ] . Ｓｃｉ
Ｒｅｐꎬ ２０１５ꎬ ５: ８３４８.
[２９] 　 Ｈａｌｌ ＴＡ. ＢｉｏＥｄｉｔ: Ａ ｕｓｅｒ￣ｆｒｉｅｎｄｌｙ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｅｄｉｔｏｒ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ
Ｗｉｎｄｏｗｓ ９５ / ９８ / ＮＴ[ Ｊ] . Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐｏｓ Ｓｅ￣
ｒｉｅｓꎬ １９９９ꎬ ４１: ９５－９８.
[３０] 　 Ｌｉｂｒａｄｏ Ｐꎬ Ｒｏｚａｓ Ｊ. ＤｎａＳＰ ｖ５: ａ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ
ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｄａ￣
ｔａ[Ｊ] . Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓꎬ ２００９ꎬ ２５(１１): １４５１－１４５２.
[３１] 　 Ｔａｍｕｒａ Ｋꎬ Ｓｔｅｃｈｅｒ Ｇꎬ Ｐｅｔｅｒｓｏｎ Ｄꎬ Ｆｉｌｉｐｓｋｉ Ａꎬ Ｋｕ￣
ｍａｒ Ｓ. ＭＥＧＡ６: ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａ￣
ｎａｌｙｓｉｓ ｖｅｒｓｉｏｎ ６􀆰０ [ Ｊ] . Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｅｖｏｌꎬ ２０１３ꎬ ３０
(１２): ２７２５－２７２９.
[３２] 　 Ｔａｂｅｒｌｅｔ Ｐꎬ Ｇｉｅｌｌｙ Ｌꎬ Ｐａｕｔｏｕ Ｇꎬ Ｂｏｕｖｅｔ Ｊ. Ｕｎｉｖｅｒ￣
ｓａｌ ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｎｏｎ￣ｃｏｄｉｎｇ
ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌꎬ
１９９１ꎬ １７(５): １１０５－１１０９.
[３３] 　 Ｊｏｒｄａｎ ＷＣꎬ Ｃｏｕｒｔｎｅｙ ＭＷꎬ Ｎｅｉｇｅｌ ＪＥ. Ｌｏｗ ｌｅｖｅｌｓ
ｏｆ ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｔ ａ ｒａｐｉｄｌｙ ｅｖｏｌ￣
ｖｉｎｇ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ ｌｏｃｕｓ ｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ
ｄｕｃｋｗｅｅｅｄｓ (Ｌｅｍｎａｃｅａｅ)[Ｊ] . Ａｍ Ｊ Ｂｏｔꎬ １９９６ꎬ
８３(４): ４３０－４３９.
[３４] 　 Ａｓｍｕｓｓｅｎ ＣＢ. Ｔｏｗａｒｄ ａ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ ｐｈｙｌｏ￣
ｇｅｎｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｉｂｅ Ｇｅｏｎｏｍｅａｅ (Ｐａｌｍａｅ)[Ｊ] . Ｍｅｍ
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｂｏｔ Ｇａｒｄꎬ １９９９ꎬ ８３: １２１－１２９.
[３５] 　 Ｓａｎｇ Ｔꎬ Ｃｒａｗｆｏｒｄ Ｄꎬ Ｓｔｕｅｓｓｙ Ｔ. Ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ
ｐｈｙｌｏｇｅｎｙꎬ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ ａｎｄ ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ
ｏｆ Ｐａｅｏｎｉａ (Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ) [Ｊ] . Ａｍ Ｊ Ｂｏｔꎬ １９９７ꎬ
８４(９): １１２０－１１３６.
[３６] 　 Ｔａｔｅ ＪＡꎬ Ｓｉｍｐｓｏｎ ＢＢ. Ｐａｒａｐｈｙｌｙ ｏｆ Ｔａｒａｓａ (Ｍａｌ￣
ｖａｃｅａｅ) ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｅ ｏｒｉｇｉｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｐｌｏｉｄ ｓｐｅ￣
ｃｉｅｓ[Ｊ] . Ｓｙｓｔ Ｂｏｔꎬ ２００３ꎬ ２８(４): ７２３－７３７.
[３７] 　 Ｆａｙ ＭＦꎬ Ｓｗｅｎｓｅｎ ＳＭꎬ Ｃｈａｓｅ ＭＷ. Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ａｆ￣
ｆｉｎｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｍｅｄｕｓａｇｙｎｅ ｏｐｐｏｓｉｔｉｆｏｌｉａ ( Ｍｅｄｕｓａｇ￣
ｙｎａｃｅａｅ)[Ｊ] . Ｋｅｗ Ｂｕｌｌｅｔꎬ １９９７ꎬ ５２(１): １１－１２０.
[３８] 　 Ｏｌｍｓｔｅａｄ ＲＧꎬ Ｍｉｃｈａｅｌｓ ＨＪꎬ Ｓｃｏｔｔ ＫＭꎬ Ｐａｌｍｅｒｓ
ＪＤ. Ｍｏｎｏｐｈｙｌｙ ｏｆ ｔｈｅ Ａｓｔｅｒｉｄａｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｍａｊｏｒ ｌｉｎａｇｅｓ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ＤＮＡ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｒｂｃＬ[Ｊ] . Ａｎｎ Ｍｏ Ｂｏｔ Ｇａｒｄꎬ １９９２ꎬ ７９
(２): ２４９－２６５.
[３９] 　 Ｈｉｌｕ ＫＷꎬ Ｂｏｒｓｃｈ Ｔꎬ Ｍüｌｌｅｒ Ｋꎬ Ｓｏｌｔｉｓ ＤＥꎬ Ｓｏｌｔｉｓ ＰＳꎬ
Ｓａｖｏｌａｉｎｅｎ Ｖꎬ Ｃｈａｓｅ ＭＷꎬ Ｐｏｗｅｌｌ ＭＰꎬ Ａｌｉｃｅ ＬＡꎬ
Ｅｖａｎｓ Ｒꎬ Ｓａｕｑｕｅｔ Ｈꎬ Ｎｅｉｎｈｕｉｓ Ｃꎬ Ｓｌｏｔｔａ ＴＡꎬ Ｒｏ￣
ｈｗｅｒ ＪＧꎬ Ｃａｍｐｂｅｌｌ ＣＳꎬ Ｃｈａｔｒｏｕ ＬＷ. Ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍ
ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍａｔＫ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
[Ｊ] . Ａｍ Ｊ Ｂｏｔꎬ ２００３ꎬ ９０(１２): １７５８－１７７６.
[４０] 　 Ｂａｕｍ ＤＡꎬ Ｓｍａｌｌ ＲＬꎬ Ｗｅｎｄｅｌ ＪＦ. Ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ
ａｎｄ ｆｌｏｒａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｏｂａｂｓ (Ａｄａｎｓｏｎｉａꎬ Ｂｏｍ￣
ｂａｃａｃｅａｅ) ａｓ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄａｔａ ｓｅｔｓ[Ｊ] .
Ｓｙｓｔ Ｂｉｏｌꎬ １９９８ꎬ ４７(２): １８１－２０７.
[４１] 　 Ｆａｚｅｋａｓ ＡＪꎬ Ｂｕｒｇｅｓｓ ＫＳꎬ Ｋｅｓａｎａｋｕｒｔｉ ＰＲꎬ Ｇｒａ￣
ｈａｍ ＳＷꎬ Ｎｅｗｍａｓｔｅｒ ＳＧꎬ Ｈｕｓｂａｎｄ ＢＣꎬ Ｐｅｒｃｙ
ＤＭꎬ Ｈａｊｉｂａｂａｅｉ Ｍꎬ Ｂａｒｒｅｔｔ ＳＣ. Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｓ
ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｌａｓｔｉｄ ｇｅｎｏｍｅ ｄｉｓｃｒｉｍｉ￣
ｎａｔｅ ｐｌａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｅｑｕａｌｌｙ ｗｅｌｌ [ Ｊ] . ＰＬｏＳ Ｏｎｅꎬ
２００８ꎬ ３(７): ｅ２８０２.
[４２] 　 Ｌａｈａｙｅ Ｒꎬ Ｖａｎ ＤＢＭꎬ Ｂｏｇａｒｉｎ Ｄꎬ Ｗａｒｎｅｒ Ｊꎬ Ｐｕ￣
ｐｕｌｉｎ Ｆꎬ Ｇｉｇｏｔ Ｇꎬ Ｍａｕｒｉｎ Ｏꎬ Ｄｕｔｈｏｉｔ Ｓꎬ Ｂａｒｒａ￣
ｃｌｏｕｇｈ ＴＧꎬ Ｓａｖｏｌａｉｎｅｎ Ｖ. ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｉｎｇ ｔｈｅ ｆｌｏ￣
ｒａｓ ｏｆ ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｏｔｓｐｏｔｓ[Ｊ] . Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
ＵＳＡꎬ ２００８ꎬ １０５(８): ２９２３－２９２８.
[４３] 　 陈士林ꎬ 姚辉ꎬ 韩建萍ꎬ 辛天怡ꎬ 庞晓慧ꎬ 石林春ꎬ
罗焜ꎬ 宋经元ꎬ 侯典云ꎬ 石上梅ꎬ 钱忠直. 中药材
ＤＮＡ条形码分子鉴定指导原则[Ｊ] . 中国中药杂志ꎬ
２０１３ꎬ ３８(２): ５４－６１.
[４４] 　 王晓玥ꎬ 陈晓辰ꎬ 廖保生ꎬ 王丽丽ꎬ 韩建萍. 基于
ＤＮＡ条形码鉴定豆蔻类中药材[Ｊ] . 中国现代中药ꎬ
２０１４ꎬ １６(１１): ８８８－８９４.
[４５] 　 Ｓｋｅｐｎｅｒ ＡＰꎬ Ｋｒａｎｅ ＤＥ. ＲＡＰＤ ｒｅｖｅａｌｓ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ Ａｃｅｒ ｓａｃｃｈａｒｕｍ ａｎｄ Ａｃｅｒ ｎｉｇｒｕｍ[Ｊ] .
Ｈｅｒｅｄｉｔｙꎬ １９９７ꎬ ８０(４): ４２２－４２８.
[４６] 　 Ｐｆｏｓｓｅｒ ＭＦꎬ Ｇｕｚｙ￣Ｗｒóｂｅｌｓｋａ Ｊꎬ Ｓｕｎ ＢＹꎬ Ｓｔｕｅｓｓｙ
ＴＦꎬ Ｓｕｇａｗａｒａ Ｔꎬ Ｆｕｊｉ Ｎ. Ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ
Ａｃｅｒ ( Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ) ｅｎｄｅｍｉｃ ｔｏ Ｕｌｌｕｎｇ Ｉｓｌａｎｄꎬ
Ｋｏｒｅａ[Ｊ] . Ｓｙｓｔ Ｂｏｔꎬ ２００２ꎬ ２７(２): ３５１－３６７.
[４７] 　 张毅ꎬ 刘伟ꎬ 李桂祥. 世界各国的日本枫树垂枝型园
２４７ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
艺品种资源[ Ｊ] . 中国农学通报ꎬ ２０１４ꎬ ３０(１０):
７３－８２.
[４８] 　 Ｒｅｎｎｅｒ ＳＳꎬ Ｇｒｉｍｍ ＧＷꎬ Ｓｃｈｎｅｅｗｅｉｓｓ ＧＭꎬ Ｓｔｕｅｓｓｙ
ＴＦꎬ Ｒｉｃｋｌｅｆｓ ＲＥ. Ｒｏｏｔｉｎｇ ａｎｄ ｄａｔｉｎｇ ｍａｐｌｅｓ (Ａｃｅｒ)
ｗｉｔｈ ａｎ ｕｎｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ￣ｒａｔｅｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｃｋ: ｉｍｐｌｉ￣
ｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ / Ａｓｉａｎ ｄｉｓｊｕｎｃｔｉｏｎｓ[Ｊ] .
Ｓｙｓｔ Ｂｉｏｌꎬ ２００８ꎬ ５７(５): ７９５－８０８.
[４９] 　 宁淑萍ꎬ 颜海飞ꎬ 郝刚ꎬ 葛学军. 植物 ＤＮＡ 条形码
研究进展[ Ｊ] . 生物多样性ꎬ ２００８ꎬ １６(５): ４１７－
４２５.
[５０] 　 Ｓｔａｒｒ ＪＲꎬ Ｎａｃｚｉ ＲＦꎬ Ｃｈｏｕｉｎａｒｄ ＢＮ. Ｐｌａｎｔ ＤＮＡ
ｂａｒｃｏｄｅｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｅｓ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎ ｓｅｄｇｅｓ
(Ｃａｒｅｘꎬ Ｃｙｐｅｒａｃｅａｅ ) [ Ｊ ] . Ｍｏｌ Ｅｃｏｌ Ｒｅｓｏｕｒꎬ
２００９ꎬ ９(Ｓｕｐｐｌ １): １５１－１６３.
[５１] 　 赵丽嘉ꎬ 贾渝ꎬ 周世良ꎬ 杜桂森. 藓类植物 ＤＮＡ 条
码的初步研究———以蔓藓科部分属为例[Ｊ] . 云南植
物研究ꎬ ２０１０ꎬ ３２(３): ２３９－２４９.
[５２] 　 Ｄｕ ＦＫꎬ Ｘｉａｏ ＬＰꎬ Ｊｉａｎ ＱＬꎬ Ｌａｓｃｏｕｘ Ｍꎬ Ｆｅｎｇ ＳＨꎬ
Ｐｅｔｉｔ ＲＪ. Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｔ ｏｆ ｏｒｇａｎｅｌｌｅ ＤＮＡ ｉｎ￣
ｔｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｓｐｒｕｃｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ
Ｑｉｎｇｈａｉ￣Ｔｉｂｅｔａｎ Ｐｌａｔｅａｕ [ Ｊ] . Ｎｅｗ Ｐｈｙｔｏｌꎬ ２０１１ꎬ
１９２(４): １０２４－１０３３.
[５３] 　 Ｄｕ ＦＫꎬ Ｐｅｔｉｔ ＲＪꎬ Ｌｉｕ ＪＱ. Ｍｏｒｅ ｉｎｔｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｗｉｔｈ
ｌｅｓｓ ｇｅｎｅ ｆｌｏｗ: ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ｖｓ. ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ
ｉｎ ｔｈｅ Ｐｉｃｅａ ａｓｐｅｒａｔａ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎ Ｃｈｉｎａꎬ ａｎｄ ｃｏｍ￣
ｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ Ｃｏｎｉｆｅｒｓ[ Ｊ] . Ｍｏｌ Ｅｃｏｌꎬ ２００９ꎬ
１８(７): １３９６－１４０７.
[５４] 　 杜芳ꎬ 徐放. 基因流介导的种间渐渗与物种界定
[Ｊ] . 植物分类与资源学报ꎬ ２０１２ꎬ ３４(３): ２５７－
２６２.
[５５] 　 Ｈｏｌｌｉｎｇｓｗｏｒｔｈ ＰＭ. Ｒｅｆｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｅ ｆｏｒ
ｌａｎｄ ｐｌａｎｔｓ[ Ｊ] . Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡꎬ ２０１１ꎬ
１０８(４９): １９４５１－１９４５２.
[５６] 　 葛颂ꎬ Ｓｃｈａａｌ ＢＡꎬ 洪德元. 用核糖体 ＤＮＡ的 ＩＴＳ序
列探讨裂叶沙参的系统位置———兼论 ＩＴＳ 片段在沙
参属系统学研究中的价值 [ Ｊ] . 植物分类学报ꎬ
１９９７ꎬ ３５(５): ３８５－３９５.
[５７] 　 Ｋｒｅｓｓ ＷＪꎬ Ｗｕｒｄａｃｋ ＫＪꎬ Ｚｉｍｍｅｒ ＥＡꎬ Ｗｅｉｇｔ ＬＡꎬ
Ｊａｎｚｅｎ ＤＨ. Ｕｓｅ ｏｆ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｅｓ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｆｌｏ￣
ｗｅｒｉｎｇ ｐｌａｎｔｓ[Ｊ] . Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡꎬ ２００５ꎬ
１０２(２３): ８３６９－８３７４.
[５８] 　 Ｒｅｎ ＢＱꎬ Ｘｉａｎｇ ＸＧꎬ Ｃｈｅｎ ＺＤ. Ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｎｕｓ ( Ｂｅｔｕｌａｃｅａｅ ) ｕｓｉｎｇ ｎｒＤＮＡ ａｎｄ
ｃｐＤＮＡ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ [ Ｊ] . Ｍｏｌ Ｅｃｏｌ Ｒｅｓｏｕｒꎬ
２０１０ꎬ １０(４): ５９４－６０５.
[５９] 　 Ｘｉａｎｇ ＸＧꎬ Ｈｕ Ｈꎬ Ｗａｎｇ Ｗꎬ Ｊｉｎ ＸＨ. ＤＮＡ ｂａｒｃｏ￣
ｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｃｅｎｔｌｙ ｅｖｏｌｖｅｄ ｇｅｎｕｓ Ｈｏｌｃｏｇｌｏｓｓｕｍ
(Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ: Ａｅｒｉｄｉｎａｅ): ａ ｔｅｓｔ ｏｆ ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｅ
ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ[Ｊ] . Ｍｏｌ Ｅｃｏｌ Ｒｅｓｏｕｒꎬ ２０１１ꎬ １１(６):
１０１２－１０２１.
(责任编辑: 刘艳玲)
３４７　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 高 健等: 鸡爪槭种下分类群的 ＤＮＡ条形码筛选