全 文 ：武汉植物学研究 2006，24(5)：387～391
Journal of Wuhan Botanical Research
鱼腥藻 PCC7120藻蓝蛋 白 亚基体 内重组研究
陈 芳，周 明，赵 岩，滕 吟，朱菁萍，赵开弘
(华中科技大学环境科学与工程学院，武汉 430074)
摘 要：为了研究藻蓝蛋白仅亚基的生物合成途径，通过构建相容的3种重组质粒 pETDuet—cpcA、pCOLADuet—cpcE—
cpcF和 pACYCDuet．hol-pcyA，将裂合酶基因cpcE和 cpcF、血红素氧化酶基因 ，IDJ、藻蓝胆素合成酶基因p yA和脱辅
基藻蓝蛋白仅亚基基因cpcA共同转入大肠杆菌 BI21(DE3)。通过色素蛋白锌电泳和光谱检测表明产生了生物活
性的CpcA．PCB。成功实现了大肠杆菌内藻蓝蛋白仅亚基 84位半胱氨酸残基与 PCB的连接。而在裂合酶基因
cpcE和cpcF不转人大肠杆菌的情况下，大肠杆菌内只有 0．2％的 CpcA—PCB产生。以上研究为进一步在大肠杆菌
内合成天然的藻蓝蛋白奠定了基础。
关键词：藻蓝蛋白；CpcA；cpcE；cpcF；体内重组
中图分类号 ：Q784 文献标识码：A 文章编号：1000—470X(2006)05—0387—05
Biosynthesis of a Fluorescent Cyanobacterial C-phycocyanin
Holo．仅 Subunit in Escherichia coli
CHEN Fang，ZHOU Ming，ZHAO Yan，TENG Yin，ZHU Jing—Ping，ZHAO Kai—Hong’
(Colege ofEnvironmental Science and Engineering，Huazhong University ofScience and Technology，Wuhan 430074，China)
Abstract：The entire pathway for the synthesis of a fluorescent holophycobiliprotein subunit from a photo—
synthetic cyanobacterium(Anabaena sp．PCC7 120)was reconstituted in Escherichia coli．Cyanobacterial
genes for enzymes hol and pcyA were expressed from a plasmid pACYCDuet—hol-pcyA．Genes for the ap—
oprotein(c—phycocyanin Ot subunit；cpcA)were expresed on a second plasmid pETDuet一 ．Genes f0r
the heterodimeric lyase(cpcE and cpcF)that catalyzes chromophore atmchment were expressed on a third
plasmid pCOLADuet—cpcE—cpcF．Upon induction，recombinant E．coli used the cellular pool of heme to
produce holo—CpcA with spectroscopic properties qualitatively and quantitatively similar to those of the
same protein produced endogenously in cyanobacteria．About 0．2％ of the apo—CpcA was converted to ho一
1o—CpcA—PCB in a similarly engineered E．coli strain that lacks cpcE and cpcF．
Key words：C—phycocyanin；CpcA；印 ；cpcF；Reconstitution in vivo
藻胆体(phycobilisome)是存在于蓝藻和红藻中
的一类捕光蛋白复合物，它由藻胆蛋白和连接蛋 白
组成。而藻胆蛋 白是由藻胆色素(phycobilin)与相
应的脱辅基蛋白中保守性半胱氨酸的巯基以硫醚键
共价结合而成。根据藻胆蛋白的吸收光谱，可分为
藻蓝蛋白(phycocyanin，简称 CPC)、藻红蛋白(phy．
coerythrin，简称 PE)、别藻蓝蛋 白(alophycocyanin，
简称 APC)和藻红蓝蛋 白(phycoerythrocyanin，简称
PEC)⋯。每种藻胆蛋 白通常 由各 自的(亚基和 B
亚基构成，每个亚基连接着 1～4个辅基色素 。
藻胆色素来源于血红素Ⅸ，血红素Ⅸ被氧化而
共轭环断裂形成胆绿素Ⅳ，这一过程是由相应的血
红素氧化酶 hol催化 。胆绿素 IV被藻蓝胆素合
成酶pcyA还原和异构化形成特定的藻胆色素 。
Landgrafa等通过构建含 hol、pcyA的重组质粒，
在大肠杆菌内实现了藻蓝胆素(简称 PCB)的生物
合成 j。前人 的工作证实，在体外，PCC7120的
CpcE和 CpcF在合适的条件下催化藻蓝胆素特异性
的连接到藻蓝蛋白Ot亚基的合适位点，即 Ot—Cys一84
上，形成正确的连接产物。而体 内产生的 PCB在
CpcE和 CpcF蛋白的催化下，也可以共价连接到
CpcA第 84位半胱氨酸的巯基上 J。
本实验室通过构建质粒 pACYCDuet．hol-pcyA，
实现了在大肠杆菌内生成 PCB。本实验先通过分子
克隆技术构建了质粒 pETDuet．cpcA和 pCOLADuet．
一 cpcF，然后将鱼腥藻PCC7120中裂合 酶基因
收稿 日期：2006—05—18．修回日期：2006—07-28。
基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目(30540070)。
作者简介 ：陈芳(1982一)．女，硕士研究生，现在华中科技大学环境学院从事生物技术研究。
+通讯作者。
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388 武 汉 植 物 学 研 究 第 24卷
cpcE和 cpcF、血红素氧化酶基因 1wl、藻蓝胆素合成
酶基因pcyA和脱辅基藻蓝蛋白 亚基基因cpcA共
同转人大肠杆菌，通过体内重组实验研究藻蓝蛋白
亚基在大肠杆菌体内的生物合成，从而为认识藻
蓝蛋白的生物合成奠定了基础。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
大肠杆菌菌株 TGI、BL21(DE3)由本实验室保
存。表达载体 pACYCDuet一1、pCOLADuet一1、pETDu—
et一1购 自 Novagen公司。克隆载体 pBluescript SK
(+)为 Stratagene公司产品质粒。pACYCDuet—hol—
pcyA、pBlu一 、pBlu—cpcE、pBlu—cpcF为本实验室构
建。DNA回收试剂盒、T4 DNA连接酶和限制性内
切酶 EcoR I、Nco I、Hind II、Pst I、 I、Bgl 1I为
MBI公司产品，Taq酶为 Biostar公司产品，IPTG为
SABC产品，亲和层析介质购自Amemham Pharmacia
公司。引物合成及测序由北京奥科生物技术有限责
任公司完成。
1．2 基因片段的 PCR扩增与分子克隆
设计了6条 PCR引物 P 、P 、P，、P 、P5、P ，具
体如下。
引物 P．：5’一GCG AGA TCT GAT GAC GAA
CGA ACT AAT TAA TGG一3’；引物 P，：5’一CTC CTC
GAG ACC TAC TGA C1Tr TGA GCC AAT AG-3’；引
物 P ：5’一CAA CCA TGG CAA TGA TAG AAC CGA
GTG T-3’；引物 P ：5’一GGT CTG CAG CTA CAA
CAA GGA ATC CAT AAG G-3’；引物 P5：5’一GCG
GAA 1TrC GAT GGT TAA AAC CCC GAT TA一3’；引
物P6：5’一CCC AAG C1Tr AAA CTA ACT GAG AGC
G1Tr GAT AGC-3’。
按文献 [9]操作。以 P 、P 为上、下游引物，
pBlu—cpcF为模板，经 PCR反应体系 1扩增得到的
DNA片段经过 B 1I、Xho I酶切后，与同样双酶切
的载体 pCOLADuet一1连 接，转 化大肠杆 菌 BL21
(DE3)，用含卡那霉素的平板进行筛选。根据 PCR、
酶切、蛋白质电泳检验后，测序鉴定阳性克隆，得到
重组质粒 pCOLADuet-cpcF。
以P，、P4为上、下游引物，pBIu-cpcF为模板，经
PCR反应体系2扩增得到的 DNA片段经过 Nco I、
￡I酶切后，与同样双酶切的载体 pCOLADuet-cpcF
连接，转化大肠杆菌 BL21(DE3)，用含卡那霉素的
平板进行筛选。根据 PCR、酶切、蛋白质电泳检验
后，测序鉴定阳性克隆，得到重组质粒 pCOLADuet—
cpcE—cpcFo
以 P 、P6为上、下游引物，pBlu-cpcA为模板，经
PCR反应体系3扩增得到的DNA片段经过 EcoR I、
Hind II酶切后 ，与同样双酶切的载体 pBluescript
SK(+)连接，然后转化至大肠杆菌 TG1。通过 PCR
扩增和双酶切进行检验，初步鉴定正确后进一步通
过基因测序检验。然后导人表达载体 pETDuet一1，
转化至大肠杆菌 BL21(DE3)，用氨苄青霉素平板进
行筛选，挑取菌落。
分子克隆实验中具体使用的PCR反应体系见
表 1。
表 1 PCR反应体 系
Table 1 Reaction system ofPCR
1．3 转化与蛋白质表达
将质粒 pETDuet-cpcA、pCOLADuet—cpcE．cpcF和
pACYCDuet—ho1-pcyA共 同转 化 大 肠 杆 菌 BI21
(DE3)，用含氨苄青霉素、氯霉素和卡那霉素的平板
筛选。
将质 粒 pETDuet—cp,~4和 pACYCDuet—ho1-pcyA
共同转化大肠杆菌 BL21(DE3)，用含氯霉素和卡那
霉素平板筛选。
将含各种表达质粒的 BI21(DE3)分别在 37~C
培养至 OD60约为 0．5，20~C水浴中放置 1 h，加人
IPTG至终浓度为 1 mmol／L，20~C低温过夜诱导后离
心收集细胞 ，二次蒸馏水洗2次，一20~C保存。
1．4 重组蛋白的超声破碎、提纯和透析
表达载体 pETDuet一1中 启动子下游有 6个
组氨酸的密码子，因此构建的重组质粒 pETDuet—
cpcA在大肠杆菌中诱导表达得到的外源融合蛋白 N
端带有 6个组氨酸，故可采用亲和层析法提纯。将
冻存的细胞重悬于0．5 mol／L NaCI、20 mmol／L磷酸
钾缓冲液(pH 7．2)中，超声 7 min，离心得到上清，
重组蛋白上清液采用镍螫合层析柱纯化。柱平衡洗
脱液为0．5 mol／，L NaCI、20 mmo~L磷酸钾缓冲液
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第5期 际 芳等：鱼腥藻 PCC7120藻蓝蛋白d亚基体内重组研究
(pH 7 2)，洗脱 杂 蛋 白 采 用 50 mmol／L眯 唑、
0．5 mol／L NaC1、50 mmo~L磷酸钾缓冲液(pH 7．2)，
收集 色素蛋 白采用500 mmo~L眯唑、0．5 m0L／L
NaCI、50 mmo~L磷酸钾缓 冲液(pH 7．2) 经过过
柱提纯的蛋白采用n 5 moI／L NaCI、5O mmo~L磷酸
钾缓冲液(pH 7 2)透析4 h．以除去小分子杂质
1．5 SDS-PAGE检测与 色素蛋 白锌 电泳
蛋白制样后进行SDS—PAGE分析以及色素蛋白
锌电泳。方法见文献 9．10]=1
I，6 光谱测定
吸收光谱用 Perkin Eliter Lmnbda 25型紫外可
见光谱仪．紫外可见光谱扫描范周300～800 m ，扫
描速度960 rim／rain，狭缝宽度 1．0 Hil。荧光光谱用
Perkin Elmer LS45型荧光光谱仪，荧光光谱扫描速
度 1 200 nnJmin，狡缝宽度 5．0 nnl。
1．7 色素蛋白变性实验
为进一步确定重组产物中色素的种类和性质，
采用酸性腮(8 tool／L，pH=2)使其变性．紫外可见
光谱检测变性后的色素蛋白质。这时蛋白质与色素
问的作用很弱．色素基本呈游离时的结构状态，色素
蛋白质的吸收光谱与游离色素的吸收光谱很相似，
因此从吸收峰最大值可以判断色素的种类和性质。
2 结果
2 1 基因的克隆与蛋白质的表达
由引物P，和P 扩增出太小为603 bp的基因片
段，扩增片段经琼脂糖凝胶电泳、试剂盒回收后，用
Bgl 1、Aho I双酶切．与同样双酶切的表达载体
pCOLADuet—l连接 重组质粒 pCOLa~Duet．cpcF以
酶田和PCR检测。电泳结果与预期符合(图 J)
由引物 P 郝 P 扩增出大小为831 bp的基因片
段，扩增片段经琼脂糖凝胶电泳、试剂盒回收后．用
^ I、 ￡I双酶印，与同样双酶切的表达载体 pCO-
L,~Duet—cpcF连接。重组质粒 pCOLADuet—cpcE cpcF
以酶切和PCR检测。电泳结果与预期符合(图J)：
由引物P 和 扩增出大小为492 bp的基因片
段 ．扩增片段经琼脂糖凝胶电泳、试剂盒回收后，用
EcoR I、Hbsd IlI酶 四，与 同样双酶切的克窿载体
pBluescfipt SK(+)连接。重组质粒pBlue-cP 以酶
切和PCR检测。用 EcoR l、HindⅡI双酶切重组质
粒 pBlue—cpcA，酶切片段经琼脂糖凝胶电泳、试剂盒
回收后．分剐与同样双酶切的表达载体 pE FDuet一1
连接 重组质粒 pETDuet~pe4通过EcoR I、Hind lI
双酶切检测 电泳结果与预期符合(图 1)
l I。段
tm
l}i¨ 段
bn
I pC()I．^Ihtcl-cpct"PCR产l拘；2：pCOI．ADuet—cock"酶切产物；3：
pCOl^ Duel*‘ 一 ’ R 产 {匀：4：pCOI．^ 叩 酶 哪
产物；5：DNA标准分子量．太小从 L至下戗扶世 103【、900、8OO、
700、600、5CO 、40O、300、200、1CO bp；6：I)NA标 准升子 ．大 小从
上至下恢 趺是 lcoco、8000、6000、5000、4000、3500、30(；0、2500、
2000、I50O、1003、750
，500、250 bp；7：PBlu—cpcA PCR产物；8：
pBlu
and．1ho I；3：PCR of pCO1 ADuet一 ·cpcF 4：pCOL．1,Duel·
- ，digested by Ncol and PstI；5：DNA ltnMerf m1lop】
of1031． )o，800．700，60O．500 4c)o，300 ．2(10 100 bI ；5：DNA
ladder(fn帅 top) 10000．8CO0，rico0．5OOO．4(啪 ．3500．30O0，
25∞ ．2000．I 500．I( }．750．500．2543 bp 7 FCR pBlu {：8：
p川u州 digesl~l EeoR l and Hind ni 9：11Hn Je d cI 一
1 【by EcoRI ’d Hind Ⅲ
图 1 印 、cpcE、cpcA的琼脂糖凝胶电泳
Fig．】 Agar~e gel electrophoresis cpcF．cTv~E and cFcA
测序结果表明+通过分子克隆得到的片段序列
与实际序列完全一致。
pCOLADuet—cpcF、pCOLADuet—cpeE—cpcF、 pET-
Duet-cpcA均以大肠杆菌 BI21(DE3)为宿主菌进行
表达。菌种在 20℃、1]nmo]／L IPTG的诱导条件
下，振荡培养6 h 菌体通过 SDS—PAGE电泳．考马
斯亮蓝 R一250染色、pCOLADuet—cpcF、pCOI．ADuet．
cpcE-cpcF、pETDuet—cpa4均检测到了目的蛋白的表
达．其中 pETDuet-cpe4由于表达量很小，细胞制样
在SDS-PAGE电泳中目的蛋白表达不明显，但提纯
产物制样后能明显看到目的蛋白(圈2)
2．2 光谱分析
重组 体 系 I：将 pETDuet—cpcA、pCOLADuet—
cpcE—cpcF和 pACYCDuet-froI-pq~：4共同转化大肠杆
菌 B12I(DE3) 表达菌诱导培养．离心收集细胞后
按照 1．4的方法对重组蛋白进行超声破碎、提纯和
透析 对透析后的产物分别进行荧光光普和吸收光
谱检测，发现荧光发射峰在640 rim左右(围 3：A)，
盛大吸收峰为61 8 lqm左右(图3：B Solid) 以上结
果表明 PCB—CpcA已在大肠杆菌体内产生。酸性尿
素变性后，检测变性后的色素蛋白质最大吸收峰为
662 nm(图 3：B Dot)。可以判断连接上的色素是
PCB
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武 汉 植 物 学 研 究 第 24卷
％
22
t：pCOL．kDuet-q~b’我逃削胞制样；2：袁逃载悱pCOL4Duet诱导
表达产钧；3：蛋白雎丹子量标准．大小从上至下俄攻是35、25、
Is kD；4：pcOL^ c 呷 表选细胞制掸；5：表达藏体
pETl~,et诱导表达产物；6：pE‘rDuet~pc4表达细胞制样；7：pE r-
Duel—cpcA表达提纯制样
1：Prcaein from pCOLADuet~：peF expressed in 丘 co／f BI／1：2：pCO．
1r^Duet ind~ed 山 IPTG 3：ProtBin m 盯 wel小t standzuxI M
(fn：,m top)of35，25．1 8 kD：4：Proteinfront pCOLADuel—cpcE-cpcF
泖 1n卫 co／i BL21；5：pE]Duet indue with 1F1 ；6：P
teln 帅 pETD~ ． expreca~cd in 丘 ∞“ 13 l；7：I~ )tein from
the t’u dJ of pE FI)u~l一
图 2 pCOLADuet—cpcF、pCOLADuet-cpcE．cpcF、
pETDuet-cpcA 的表达产物的 SDS-PAGE谱圈
Fig 2 SDS—PAGE of p(OL~Duet—cp,F，
pCCq ,＼Duet—q,cE—rpcF and pET1)uet一 d
40
3(}
20
3．0
2．5
2 rI
七 I 5
耋 1 0
< 0 5
‘ 、
v ： h(1nf【l】 m 。蛐O 5 00 6 00 7001)
B中的实线：透析产物的紫外可丝光谱；点线：透忻产物经酸性
尿素变性后的紫PI""f见光谱
B solid：AIx-~rpfion spectra of di~dysis：Ⅱ ：Ab~oq)ficm 8【’ 【ra of -
Mysis denatured by rea
髓 3 重组体系I的荧光光谱eA)和紫外可见光谱(B
Fig．3 Absorption(B)and n Lm 号c￡J1ce emission(A)
speclra of systemI
重组件系 Ⅱ：将 pETDuet—cpc4和 pACYCDuet-
。^ 一p A共同转化大脑杆菌 BL2l(DE3) 对提纯
后的重组蛋白分别进行荧光光谱和吸收光谱检测．
发现荧光光谱发射峰在640 Ilrl左右(图4：A)，最大
吸收 波长 为 618 m左右 (图4：B)。
童-
嚣
呈∞
皇
6
o 03
O．02
0 01
n(n 。 。。
图 4 重组体系Ⅱ的荧光光谱《A)和紫外可见光谱(B)
Fig．4 Absorption(B)andⅡuL·re∞㈣ emissionfA)
spectra of system 1
重组体系 IⅡ：将 pETDuet—cpcA转化大肠杆菌
BI21(DE3)，表达菌诱导培养，离心收集细胞后按
照 1．4的方法对蛋白进行超声破碎，得到的上清液
在 0．2 mol／L NaC1、50 mmol／L的磷 酸钾缓 冲液
(pH 7．2)中透析8 h后和PCB于常温重组过夜(黑暗
环境下)。对体外重组产物进行提纯和透析。对透
析后的产物进行荧光光谱和吸收光谱检测．发现荧
光发射峰在665 am左右 (图5：A)，最大吸收峰 为
646 ilm左右(图5：B Solid)。以上结果表明体外重组
产物为非天然的。酸性尿素变性后，检测变性后的
色素蛋白质最大吸收峰为674 IIl(圈5：B Dot) 可
以判断连接上的色素是 PCB和 MBV(mesobiliverdin
的简称)的混合物。
0 2
：
七 0l
羔
m - ( j
。。 ”
-
．．
“
B中的变嫂：透析产物曲肇外可见光潜；点线：透析产物经艘性
尿亲变挫后的綮外可见光潜
B )Hd：Abt~,rpti,：m pecrm of dialysis； ：AI,soq,tion spectra of di—
alysis denalured by u
图5 重组体系Ⅲ的荧光光谱(A】和紫外可见光谱(B
Fig．5 Absorption cB)and fltoresee rtee e rlJss Jon(A)
spectra of system 11
天然的鱼腥藻藻蓝蛋白的荧光量 子产率为
0．27．以此为相对标准计算体内重组产物CpcA—PCB
f勺荧光量子产率为 0．22(±0．01)，仲外重组产物
(CpcA—PCB、CpeA·MBV的混合物)的荧光量子产率
为0．090(±0．00¨
根据色素蛋白在酸性尿素(pH 2．0．8 mol／L尿
素)中的色素PCB的摩尔消光系数 8 ，=3550 L-
cm／mol以及公式 A=t：LC计算庠尔消光系数，算得
体内重组产物 CpcA—PCB的荤尔消光系数为 1．35
(±0．01)×10 L·era／too1．体外重组产物的摩尔消
光系数为0．97(±0．01)×10 L·em／mol
通过比较重组体系 I和重组体系 I，发现在大
肠杆菌内鱼腥藻藻蓝蛋白 “亚基有一定的 自催化
能力。通过荧光激发光谱 汁算其 自催化 比例为
0．2％。通过比较重组体系 II和重组体系 I、I，发
现在缺少cpcE和cpcF的条件下，体外重组产物为非
天然产物。
j E ； l § =
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第5期 陈 芳等：鱼腥藻 PCC7120藻蓝蛋白 亚基体内重组研究 39l
2 3 色素蛋白锌电泳
由于色素可与 zn 形成螫台物．该螯合物在一
定波长光激发下发射荧光。将重组体系 I的细胞、
超声上清、提纯蛋白制样后进行 SDS—PAGE电泳和
色素蛋白锌电泳，发现在蛋白 CpcA相对应的位置
有桔色荧光．这证日月在体内脱辅基蛋白与色素共价
连接成功．得到色素蛋白CpcA-PCB(图6)。
A
[
B
A：重组产掬考 j蜥亮能染也电沫 l：蛋白质标准分子蟹．大
小从上至下依次足35、25、18 kD 2：酆跑．3：上清．4：提纯 B：
重纽产物蚋锌荧光 5：细胞．6：上清．7：提纯
A：Pcn—Cp,：A c⋯ 9Le一$I n ．1：M＆ er pn~qeins(fn帅 top)
35．25，l8 kD 2：Cell；3：Solulion：4：Purifi ． B：Zn 一induced
nⅡl⋯ ⋯ of PCB—CpcA．5：Ceil；6：Solution；7：Purified
闰 6 重组体 系 I的 SDS—PAGE电泳(A)和
色素蛋 白锌 电泳(B)
Fig 6 PCB—CpcA eOOllIa．isle·stain~ (A)and
Zn。·induced]：luorescence of PCB—CpcA (B)
3 讨论
在生物体内，藻胆色素与脱辅基蛋白的正确连
接一般都需要特定的裂台酶朱催化完成。而藻蓝蛋
白脱辅基蛋白 CpcA第 84位半胱氨酸与藻蓝色素
PCB的连接就需要裂合酶CpcE／F、来催化完成 本
实验为了完成 —CPC的生物合成，首先要在大肠杆
菌内实现藻蓝胆素(简称 PCB)的生物合成。 ．即构
建含hol、p卅 的重组质粒。其次为构建古裂合酶
基因cpcE和 cpcF的重组质粒。最后就是构建含 印一
d 的重组质粒。
因为质粒 pACYCDnet_I、pCOLADuet．I、pETD—
uet一1含有不同的复制子，所以它们具有相容性 】，
我们将相应的质粒组合 pETDuet-cpcA、pCOL~kDuet．
cpcE—cpcF利 pACYCDuet—hol—pc>；4共同转化大肠杆
茁 BI2l(DE3)，体内产生的 PCB在 CpcE和 CpcF
蛋白的催化下共价连接到CpcA第 84位半胱氮酸
的筑基上
在缺少 pCOLADuet-clmE一叩c，的大肠杆菌内也
检测到很少量的有生物活性的 CpcA—PCB，所 在生
物体内cpcA与PCB能进行一定程度的自催化连接
反应并形成天然产物．通过荧光光谱计算其自催化
比例为 0，2％。而在缺少 pCOLADuet一印 一cpcF的
体外重组中获得的重组产物为非天然产物。分析原
因可能是 由于体内产生的 PCB能与 PCB合成酶
(即 HO1和 PcyA)复合。使 PCB保持一定的构象．有
利于形成天然产物；反之体外重组中加人的游离的
PCB是众多构象的混合状态，不利于形成天然产物
通过本实验实现了在大肠杆菌悼内合成具有生
物活性的藻蓝蛋 白 亚基．并提高了对藻胆体组装
过程的认识。
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