全 文 ：武汉植物学研究 2006，24(6)：498～504
Journal of Wuhan Botanical Research
紫茎泽兰 DNA的提取及 AFLP反应体系的建立
黄文坤 ’2， ，郭建英 ’。，万方浩 ， ，高必达 ，谢丙炎4
(1．植物病虫害生物学国家重点实验室，中国农业科学院植物保护研究所，北京 100094；
2．农业部外来人侵生物预防与控制研究中心，北京 100081；3．湖南农业大学生物安全科学技术学院，长沙 410128；
4．中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081)
摘 要：以紫茎泽兰叶片为材料 ，用改进的 CTAB法，在提取液中加入 2％PVP40( y)、0．4％ BME( y)，提取到
了高质量的基因组 DNA，0D26。／0D 在 1．7～1．9之间，蛋白质、多酚类、多糖、RNA等去除较彻底，适于 AFLP分
析。通过对紫茎泽兰 DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程中各关键因素的比较研究，建立了一套
优化的 AFLP分子标记体系，得到了清晰的 AFLP银染指纹图谱，实验结果重复性好。
关键词：紫茎泽兰；入侵植物；DNA提取；AFLP；指纹图谱
中图分类号：Q786；Q949．783．5 文献标识码：A 文章编号：1000-470X(2006)06-0498-07
Genomic DNA Extraction M ethod and AFLP Amplification Reaction
System of Ageratina adenophora Spreng．
HUANG Wen—Kun · ，GUO Jian—Ying ，WAN Fang．Hao ” ，GAO Bi．Da。，XIE Bing—Yan
(1．State Key Laboratoryfor Biology ofPlant Diseases andInsect Pests，Institute ofPlant Protection，Chinese Academy ofAgricultural Sciences，
Beijing 100094，China；2．Centerfor Management oflnvasive Alien Species，Ministry ofAgr／c~ure，P．R．China，
Beijing 100081；3．Colege ofBio-Safety Science and Technology，HunanAgricultural University，Changsha 410128，China；
4．Institute ofVegetables and Flowers，Chinese Academy ofAgricultural ，Beijing 100081，China)
Abstract：The study dealt with extraction of DNA with improved CTAB(cetyl—trimethyl-ammonium bro—
mide、method from Ageratina adenophora Spreng．It showed that CTAB bufer supplemented with 2％
PVP40(polyvinylpyrolidone 40)and 0．4％ B—mercaptoethanal was suitable for the genomic DNA ex—
traction of A．adenophora， th OD260／OD280 value of 1．7一1．9，representing high purity of the extracted
DNA an d the complete elimination of protein．phenol。polyhexose an d RNA．Thus the improved CTAB
method was approved suitable for further AFLP an alysis of A．adenophora．Some key factors affecting DNA
extraction．restriction—ligase reaction。pre—amplification and amplification processes were studied and an
optimized AFLP reaction system of A．adenophora was established．With this AFLP reaction system ．clear
DNA electrophoresis fingerprints of A．adenophora was obtained．and the reprod ucibility was high．
Key words：Ageratina adenophora Spreng．；Invasive species；DNA extraction；AFLP；Fingerprints
紫茎泽兰(Ageratina adenophora Spreng．)是一
种人侵性极强的外来恶性杂草，原产中美洲墨西哥、
哥斯达黎加等地 J。20世纪40年代从中缅边境传
人我国云南地区，约经半个世纪的传播扩散，现已在
西南地区的云南、贵州、四川、广西、西藏、重庆等地
广泛分布和危害，严重影响人侵地的人畜健康及农
业、林业和畜牧业等的发展 -4 J。国内外有关紫茎
泽兰的研究主要集中在其传播人侵模式、生理生态、
个体生物学特性、防除方法和利用等方面 J，而对
利用分子生物学手段研究其人侵传播扩散和遗传多
样性等方面尚未见报道。
针对紫茎泽兰在我国半个多世纪人侵过程中的
遗传分化问题，为了研究其不同地理种群的群体遗
传结构多态性特征、遗传分化与生物人侵的关系，本
研究以紫茎泽兰为试材，通过对 AFLP反应体系各
关键影响因素进行优化，建立紫茎泽兰AFLP反应
体系，为进一步研究紫茎泽兰遗传多样性、亲缘关系
及遗传分化，揭示其人侵过程中种群系统发育地理
格局与扩散路线，提出紫茎泽兰入侵的风险防范与
遗传控制策略等奠定技术基础，对其他人侵生物遗
收稿 13期：2OO6—04-28，修回13期：2006—07-20。
基金项 目：国家 973计划资助项 目(2002CB1l1400)。
作者简介：黄文坤(1971一)，男，湖南邵阳人，湖南农业大学生物安全科学技术学院在读博士生 ，农艺师，主要从事外来人侵生物的预防
与控制研究，发表论文 5篇(E-mail：wkhuang2002@163．com)。
+通讯作者(E—mail：wanth@cjac．org．ca)。
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第6期 黄文坤等：紫茎泽兰 DNA的提取及AFLP反应体系的建立
传分化与演变的研究也具有一定的借鉴意义。
AFLP(扩增片断长度多态性)是一种新的 DNA
分子标记技术，结合了RFLP和PCR的优点，具有高
效、快速、稳定、可靠等特点 。。，已广泛应用于植物
种质鉴定、遗传图谱构建、目的基因定位、遗传多样
性分析等方面 卜¨M J，在很多菊科植物(如向日葵、
莴苣等)的遗传分化研究中也得到了应用 。
1 材料与方法
1．1 材料
紫茎泽兰(Ageratina adenophora Spreng．)种子
和根茎采 自云南、四川、贵州、广西、重庆等地，并在
中国农业科学院温室中用种子和根茎繁殖，单株盆
栽，取其幼叶供试。
实验所用主要试剂： I接头、Mse I接头及引
物均由上海生工生物技术有限公司合成(接头与引
物序列见表 1)。 I、Mse I内切酶、Taq酶、dNTP、
DI2000 marker购 自NEB公司，T4连接酶、DNA电
泳分子质量标准 kDNA／EcoR I购 自Promega公司，
pBR322／MspI marker购 自华美生物技术公司。
实验所用主要仪器设备有：UV2550型紫外分光
光度仪(日本岛津公司)；离心机(Sigma 3K-30型)；
PTC-200PCR仪 (MJ公司)；Power／PAC Basic电泳
仪、Power／PAC-3000电泳仪(BIO．RAD公司)等。
表 1 紫茎泽兰 AFLP分析的限制性酶切位点、接头及引物序列(引物只列出单链序列，粗体字母为选择性碱基)
Table 1 Restriction sites(symbols‘t include the actual cuting sites)，adapters and primem sequences(only
sin~e—stranded primem 8re shown；Selective bases aye in bold)used in the AFLP analysis 0f A．adenophora
1．2 DNA提取及质量检测
1．2．1 DNA提取 紫茎泽兰 DNA的提取采用改
进的 CTAB法 。其提取缓冲液为：100 mmol／L
Tris HC1(pH 8．0)，1．4 mol／L NaC1，20 mmol／L ED．
TA(pH 8．0)，2％ CTAB，用前在提取液缓冲液中加
入2％ PVP(polyvinylpyrrolidone，聚乙烯吡咯烷酮)、
0．4％ B一巯基乙醇(2一Mercaptoethanol，BME)。取嫩
． 2—0．5 g加液氮在 一2O℃预冷的研钵中迅速研
磨成粉末。冻粉迅速转入2 mL离心管，加入800 IL
预热至 65℃的 CTAB提取缓冲液，65℃水浴 1 h。
4℃ 13 000 r／min离心 10 min，取上清液至新管，加
入等体积的酚／氯仿／异戊醇(25：24：1，V／V)，轻缓
颠倒混匀。13 000 r／min离心5 min，取上清，加入等
体积氯仿／异戊醇(24：1，v／v)，轻缓颠倒混匀。
13000 r／min离 心 5 min，取 上清液加入等体 积
一 2O℃预冷的异丙醇，轻缓颠倒混匀，一2O℃放置
30 min。13000 r／min离心 10 min，弃上清液，沉淀
用70％乙醇浸洗 2次。在超净工作台上将残留乙
醇抽干，加入800 L，I’E、1O L 10 mg／mL的RNase，
37℃水浴1 ho加入等体积氯仿／异戊醇(24：1，V／V)
抽提 2次，上清液转移至新离心管，加入 0．1倍体积
的3 mol／L NaAc，2倍体积冰冷的无水乙醇，一2O℃
沉淀30 min。7 000 r／min离心15 min，弃上清液，沉
淀用 70％乙醇洗 2次，超净台上抽干，加入 5O一
100 pL TE，一2O℃存放。
1．2．2 紫外分光光度法检测DNA质量 取 15 L
DNA样品加入超纯水稀释 100倍 ，用紫外分光光度
计检测，并根据 A260／A：∞和 A260／A：30比值判断 DNA
纯度，根据 A：印值计算 DNA浓度[DNA浓度(
mL)=50×A26o×稀释倍数]和 DNA得率[DNA得
率( g)=DNA浓度 ×体 叶片量(g)]。
1．2．3 琼脂糖凝胶电泳检测 DNA质量 琼脂糖
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凝胶 电泳在水 平 电泳槽 中进 行。将终 浓度 为
0．5 g／mL的溴化乙锭(ethidium bromide，EB)直接
混匀在凝胶中，加样缓冲液为 4o％蔗糖、0．25％溴
酚蓝(bromophenol blue，Bb)，电泳缓冲液为 1×TAE
(Tris acetic acid—EDTA，pH 8．0)，电压为 5 V／cm；
DNA标样为 Promega kDNA／EcoR I。DNA谱带用
凝胶成像系统观测、拍照。
1．3 AFLP反应体系的建立与优化
紫茎泽兰AFLP反应体系的建立参照Vos等
的方法，并对各关键影响因素进行优化。
1．3．1 模板 DNA的获得 将改进的 CTAB法提取
的云南省思茅市的紫茎泽兰 DNA用 1×TE稀释并
标定到50 ng／IxL作为模板，比较不同模板浓度(50、
100、150、200、250、300 ng)对AFLP反应的影响。
分别提取3次，用于后续的AFIJP流程以检验紫茎泽
兰AFLP标记体系的重复性。
1．3．2 酶切连接 采用 ￡I和 Mse I双酶切模板
DNA，酶切连接分两步进行。双酶切反应体系按
NEB公司的内切酶产品说明设计 ，酶切时间设 3、4、
5、6、7 h共5个处理，在 PCR仪上37℃酶切后，80℃
灭活酶 20 min以终止反应；然后用加入接头连接
液，16℃连接过夜。酶切产物用 1．2％琼脂糖凝胶
电泳检测，5 V／cm电泳 30 min。酶切、连接体系见
表2。
表 2 紫茎泽兰 AFLP反应体系
Table 2 AFLP reaction system ofA．adenophora
1．3．3 预扩增 预扩增体系见表 2。将酶切连接
产物稀释10倍作为预扩增模板，采用不带有任何选
择性碱基的引物 P∞和 M∞作为预扩增引物。PCR
扩增程序为：94℃ 1 min，1个循环；94℃ 30 s，56℃，
1 min，72℃ 1 min，25个循环；4℃保存。预扩增产物
用 1．5％琼脂糖凝胶电泳检测，5 V／cm电泳 30 min。
对预扩增后的产物分别稀释 10倍、20倍、30倍、50
倍、100倍、200倍进行选择性扩增。
1．3．4 选择性扩增 选择性扩增体系见表 2。参
照 Vos等 ¨的反应体系，用云南省思茅市的紫茎泽
兰基因组 DNA预扩增并稀释 50倍的产物，对选择
性扩增体系中影响实验结果的关键因素进行了优
化。在保持其它因子不变的情况下，先对 Mg 浓度
设计 6种梯度实验，筛选其最佳浓度；然后再利用最
佳 Mg 浓度，在保持其它因子不变的情况下，依次
筛选 dNTP、Taq酶、引物、预扩增产物的最佳浓度或
用量(表 3)。PCR扩增程序：94℃ 1 min，1个循环；
94℃ 1 min，65—57℃ 1 min，每个循环降低 0．7~C，
72℃ 1．5 min，13个循环；94℃ 30 S。56℃ 30 s。72℃
1 min，23个循环；4℃保存。
表3 紫茎泽兰AFLP选择性扩增反应体系各
因子梯度设计
Table 3 Concentration gradients of diferent ingredients for
optimizing the AFLP selective amphfication
system ofA．adenophora
1．3．5 扩增产物的凝胶电泳分析 用 90 mL质量
分数为 5％的聚丙烯酰胺，加上 720 10％过硫酸
胺、90 TEMED制胶 ，在 PAC3000型电泳仪上以
70 w恒功率电泳2 h。点样前在选扩产物中加入等
体积甲酰胺染液(98％甲酰胺，10 mmol／L EDTA，
0．25％溴酚蓝，0．25％二甲苯腈)，在 PCR仪上 95℃
变性 7 min，取出后立即置于0~C冰盒内以防复性。
电泳后的银染程序参照 Bassam等[1刚和 Chalhoub
等 的方法进行，略作改动。利用冰醋酸固定、硝
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酸银染色、无水碳酸钠加上甲醛及硫代硫酸钠显影，
于胶后用数码相机拍照。用银染法检测引物的多态
性效果后 ，利用多态性好的引物建立荧光标记AFLP
(nFIJP)反应体系，在 AB1377型自动测序仪上进行
扩增产物的凝胶电泳检测。
2 结果
2．1 DNA提取及检测结果
2．1．1 DNA浓度的紫外检测 紫外分光光度法检
测表明+用改进的 CTAB法，在提取液中加人 2％
PVP(V／V)、0．4％ BME(v／v)，所提取的紫茎泽兰
DNA A2 ／A： 在1．7～1．9范围内．新鲜叶片的 DNA
得率在62～100 ／g之间，表明该法能较完全地去
除蛋白质、酚类及多糖类等杂质，提取时残留的氯
仿、乙醇、无机盐等小分子也基本去除，即DNA纯度
符合质量标准，已达到AFLP分析下游操作的要求
2．1．2 DNA质量的凝胶电泳检测 琼脂糖凝胶电
泳检测表明，用改进的CTAB法提取的紫茎泽兰基
因组 DNA在电泳凝胶上能呈现清晰、低迁移率、无
弥散的整齐条带，表明基因组 DNA完整性较好，降
解较少。在点样 L内无滞留物亮点出现，溴酚兰前
没有光亮区，表明提取到的DNA纯度高，蛋白质、酚
类及多糖类等杂质去除彻底，无RNA残留(图 1)。
臣
泳道 M：KDNA／E~RImarker；泳道^：云南思茅；辣道 B：云南太
理；辣道 c：广西百色；沫道D：贵州贵阳；沫道 E：四JIl西昌；诛
道 F：重庆巴南
I洲 M：DNA mark r(KDNA／E~RI)；Lane A：Simao．Y⋯ ；
L龃 e B：Dali．Yunnan；IAirle C：Balse．Guangxi；L~tlt．D ：Gulyang
Guizhou；lane E：Xiehang，Sieh~ ； e F：Ba’⋯ ．Chongqing
圈 1 改进 的 CrAB法提取 的不 同地 区紫 茎泽 兰
基因组DNA 0．8％琼脂糖凝胶电渌图谱
Fig 1 0．8％ agarose斛 electrophoresis of genomic DNAs
ofAger~ na adenoptwra from diferent lcoaftons．using
improved CTAB method fh 2％ PVP and 0．4％ BME
2．2 AFLP体系的建立与优化结果
2．2．1 模板DNA的准备 本实验所设置的5O～
300 ng 6个紫茎泽兰 DNA模板浓度，均能得到清
晰的AFLP图谱，表明紫茎泽兰 AFLP体系对 50～
300 ng范围内的模板 DNA浓度变化不敏感
2．2．2 酶切与连接 本实验采用Pst I与MseI限制
性内切酶双酶切．酶切产物在凝胶上呈现出连续的
大小不 同的 DNA片段，表明 DNA能放 fI与
J~seI彻底消化(图2) 对设置的5个酶∞时间进行
分析，发现以酶切4 h为最好 酶 叼时间过短，酶切
不完全；酶切时问过长，易产生“star”活性，降低特
异性 。
泳道 M：kDN,~EcoR J marker；诛道 ：^ 南思茅；沫道 B：云南
大理；泳道 C：广西百乜；诛道D：贵州贵阳；非道E：四川I西昌；
法道 r：重庆巴南
I— M：DNA md er(kDNIA／EceR1)；Lalf*A：Siv a．Y⋯ ；
I B：DsJJ．Yunnm~； C：B ，Guan ；Lane D：Guly~g，
Guizhou；L~,le E：Xichang，Siehuan；I e F：Ba IqQt，Chotqgqing
图2 不同地区紫茎泽兰基因缉 DNA经tstl／MseI
双酶切4 h的1．2％琼脂糖凝胶电泳图谱
Fig 2 1．2％ agamse gel electrophoresis of／st I／Mac I
digested~enomic DNAs for 4 h of ．^adenophara from
diferent locations，using improved CTAB method
2．2．3 预扩增 预扩增反应起着承上启下的作用．
既反应酶切与连接效果的好坏，又直接影响着选择
性扩增的电泳结果。预扩增产物的电泳结果表明，
预扩增片段范围较大，一般在 100—750 bp之间，扩
增信号较强，各样品间相对一致(图3) 表明预扩
增效果较好，为随后进行的选择性扩增提供了理想
妹遵 M：kDN,X／E~R1 Mma~er；溶道 A：云南思茅 林道 B：云南
大理；沫遒 C：广西百色；棘道 D：贵l州贵阳；沫道 E：四JI J西昌；
泳道 F：重庆巴南
】删 M：DNA marker(kDNA／EcoRI J：l删 A：Sinlao，Yunman：
Lane B：DMi PYummn；L皿 e C：B Guangxi； Lane 【)：Guly*mg，
Guizhou；Lane E：Xich~ g Sichuan；l e F：BⅡ’⋯ ，Choogql B
圉 3 紫茎泽兰基园组 DNA预扩增产物 1．5％
琼脂糖凝胶电泳图谱
Fig 3 1 5％ agmome gel electrophare~is of the results of
pre—mnpliftcaftan of A．adenophora genome
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的摸板；并表明此前进行的基因组 DNA的提取和酶
切连接操作符合要求。
对预扩增产物设置的 6个稀释倍数进行的对比
研究结果表明，稀释1O倍到 100倍都能得到选择性
扩增产物．以稀释 5O倍扩增效果最好，稀释200倍
时扩增产物条带较弱(图略)
2．2．4 选择性扩增反应体系的筛选 通过对影响
选择性扩增反应的关键因素(Mg“浓度、dNTP浓
度、Taq酶浓度、引物浓度、预扩增产物用量)进行对
比研究，筛选出2O 选择性扩增体系中各关键因
素的最适用量为：2．5 mmoL／L Mg“、0．8 mmol／L
dNTP、1 U Taq、0．5 gano1．／L引物、1．5 IxL预扩增稀
释5O倍 DNA(图4，以Mg2 浓度为例) 选择性扩
增产物稀释 10倍后，在 ABI 377型自动测序仪上经
5％聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，得到了清晰、多态性
好的电泳谱带(图5)。
泳道 M：kDN：L／EmRI Marker；泳道A：i南思茅；泳道 B：云南
太理；棘道c：广西百色；沫道 D：贵州贵阳 泳遭E：四川西昌；
泳道 F：重庆 巴南
L e M：DNA ma er(XDNA／EcoR1)；L4ne A： 咖 ．Yunnan；
Lane B：D ，Y~ nan；LtL,le,C：Baise，Guangx[； Lane D：Guiy~ g．
Gulzhou；IAItle E：Xich~ g，Sichu~ ；Lane F：Ba’tl,~tn，Chongqing
图4 1．5％琼脂糖电泳检测不同Mg¨ 浓度对
选择性扩增反应的影响
Fig 4 】 5％ agarc,se gel electrophoresis of the effects
of selective mnplification of A adenophora genorne
using diferent eoncen~afions of Mg：
图5 5％PAGE检测引物组合P+GTC／M+CAC对26个絮茎泽兰种群fAFLP选择性扩增结果
Fig 5 AFLP pa~ems obtained 山the rtter r tI+GTC／MseI+CAAforthe 26
A-adenophora populations in China(The electrophomsis wBs nLl1㈣ 5％
denamring polyac~lamlde~querming ge1)
Ⅻ ¨ l兰
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第6期 黄文坤等：紫茎泽兰DNA的提取及AFIJP反应体系的建立
2．2．5 引物对的筛选及重复性实验 在建立 AFLP
分析技术体系的基础上(表 2)，以云南思茅和四川
自贡2个点的基因组DNA，对64对 P+ ／M+ 引物进
行筛选，其中4O对引物能对上述 2个材料同时进行
扩增，并具有多态性。再以 8个不同地区的试材对
这4O对引物进行扩增，筛选出9对多态性较高、带
型质量较好的引物。9对引物共扩增出685条带，
其中多态性条带为474条，多态性比率达 63．5％ ～
75．3％(表 4)，为后续的不同地理种群紫茎泽兰
AFLP分析奠定了基础。
表 4 不同引物对对紫茎泽兰荧光标记 AFLP(fAFLP)
选择性扩增的效果
Table 4 Fluorescent哪 plifcation ofA．adenophora
of9 diferent primer pairs
3 讨论
(1)由于 AFLP分析对供试 DNA的要求高，所
以提取高质量、高纯度的DNA是 AFLP分析成功的
关键之一。紫茎泽兰为菊科泽兰属植物，多糖类物
质和酚类化合物含量较高 ¨ ，加大了 DNA提取的
难度。因为多酚类易氧化，氧化后与 DNA共价结合
引起DNA褐变降解，并造成氯仿抽提时DNA的丢
失；多糖与 DNA同时沉淀，从而影响对 DNA样品的
浓缩 。许多研究者认为，多糖、多酚、色素等会严
重影响 DNA聚合酶的活性，干扰引物与模板的结
合，从而导致扩增失败。
针对紫茎泽兰中多糖、酚类等物质含量高的特
点，在 CTAB提取液中添加较高浓度的 PVP40和
BME，能够有效地去除多糖类、多酚类等物质的影
响，提高 DNA的纯度。PVP40有很强的结合多酚的
能力，结合后可防止酚类氧化成醌类，避免溶液变褐
而具有抗氧化作用，也可防止 DNA酶降解 DNA 】，
同时还能有效去除多糖。BME的“一SH”基可打断
多酚氧化物酶的二硫键而使之失活，故可防止多酚
类被氧化。进一步的 AFLP分析证明，用改进的
CTAB法，在提取缓冲液中加人 2％ PVP40(V／V)和
0．4％ BME(v／v)，所提取的 DNA符合 AFLP分析
要求，条带丰富，多态性高。
(2)紫茎泽兰 AFLP分析过程中的影响因素较
多，除对模板DNA的质量要求较高外，引物的筛选、
酶切连接与预扩增反应体系、选择性扩增反应体系
中各关键影响因素的浓度都很关键。DNA模板的
质量和浓度是影响 AFLP扩增结果的一个重要 因
子。DNA浓度过低，扩增条带模糊；浓度过高，可能
使引物或 dNTPs过早被耗尽，底物过量扩增，出现
扩增结果不稳定的假象 】。Mg 浓度不仅影响
Tatl酶的活性，还能与反应液中的 dNTP、模板 DNA
及引物结合，影响引物与模板的结合效率、模板与产
物的解链温度以及产物的特异性和引物二聚体的形
成 J，而 dNTP是 AFLP反应的原料，dNTP浓度过
高，会导致 PCR错配，从而使扩增出现非特异性扩
增，浓度过低又会影响合成效率。Tatl酶的种类及
用量直接影响扩增反应的成功与否，使用高浓度的
Tatl酶不仅提高了成本，而且也容易产生非特异性
扩增产物；而当 Tatl酶浓度过低时，则会导致产物的
合成效率下降。引物浓度过低时，会造成差异的假
象；引物浓度过高时，会造成非特异性扩增及增加引
物二聚体的产生 】。因此，对 AFLP反应体系中
各关键因素的最适用量进行筛选，对获得理想的
AFLP指纹图谱具有重要意义。
(3)本研究实验经验表明，从冷冻的粉碎组织
融化到进人提取缓冲液的间隔时间应尽量短，以避
免DNA褐变降解；否则，后续操作很难去除褐变产
物。在以异丙醇和无水乙醇沉淀 DNA时，要采用短
时间沉淀，尽可能减少有机物的共沉淀。实验采用
酚／氯O／异戊 醇和氯O／异 戊醇反 复抽 提，虽然
DNA得率下降，但纯度增加。在银染检测时，若扩
增产物信号较弱，变性时可打开离心管的盖子、不加
热盖子，从而使部分水分蒸发，增加样品浓度。将显
影液放在 一2O℃冰箱预冷 1 h，将减少背景色，使条
带更清晰。
(4)国内外对外来人侵物种的研究多集中于竞
争性排斥、生态位替代、生物学特性、化感、捕食、寄
生等生态过程。随着分子标记技术的成熟及其在植
物分子生态学中的广泛应用，人们开始对人侵植物
在新的生境过程中不断发生并积累的遗传变异及形
成的分子适应等进行研究 -30]。据我们所知，尽管
AFLP技术在很多菊科植物的遗传分化研究中已经
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5O4 武 汉 植 物 学 研 究 第 24卷
得到了应用(如向 日葵、莴苣等) ’ ，但是在泽兰
属植物上应用AFLP标记研究其遗传变异的报道尚
属首次。本研究建立 了紫茎泽兰的 DNA提取及
AFIL 分子标记体系，将为紫茎泽兰的遗传多样性
与亲缘关系研究及遗传分化研究等提供理论基础。
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