全 文 ：武汉植物学研究 2003, 21 (5) : 449～ 451
J ourna l of W uhan B otan ica l Resea rch
不同季节水杉叶总黄酮含量变化的研究
王 日韦, 王有为Ξ
(中国科学院武汉植物研究所ö武汉植物园, 武汉　430074)
摘　要: 水杉含有丰富的黄酮成分。用超声提取法制备同一来源、不同季节水杉叶总黄酮样品, 以芦丁作标准品, 用
分光光度法进行了含量测定。结果显示, 含量范围为 01970～ 11556% , 其中以 6 月份样本的含量最高。初步揭示了
水杉叶总黄酮含量随季节变化的规律。
关键词: 水杉叶; 总黄酮; 芦丁; 分光光度法
　　中图分类号: R 284. 1　　　　　文献标识码: A 　　　　　文章编号: 10002470X (2003) 0520449203
Study on Var ia tion of Tota l Flavono ids’ Con ten t in the L eaves of
M etasequoia g lyp tos troboides in D ifferen t Season s
W AN G W ei, W AN G You2W eiΞ
(W uhan B otan ica l Gard enöW uhan Institu te of B otany , T he Ch inese A cad emy of S ciences, W uhan　430074, Ch ina)
Abstract: M etasequoia g lyp tostroboid es abounds w ith flavono ids. To ta l f lavono ids in the leaves of
M . g lyp tostroboid es from th ree samp led trees in differen t season s w ere ex tracted by m ethod of su2
person ic ex tract ion and their con ten ts w ere determ ined by m ean s of UV 2V ision spectrom etry w ith
ru t in as a standard. T he con ten ts range from 0. 970% to 1. 556% , w h ich the peak is in the end of
June. N atu ra l change ru le of to ta l f lavono ids’ con ten t a long w ith the change of season s w as
rough ly disclo sed.
Key words: L eaves of M etasequoia g lyp tostroboid es; To ta l f lavono ids; R u t in; Spectrom etry
　 　 水 杉 (M etasequoia g lyp tostroboid es H u et
Cheng) 为杉科水杉属植物, 为我国特有孑遗物种,
被称为“活化石”。据《中国中药资源志要》[1 ]记载, 其
叶、果实有清热解毒、消炎止痛之功效, 用于痈疮肿
痛、癣疮等症。作为古老孑遗植物, 水杉中化学成分
非常复杂。如黄酮类[2 4 ]、萜类[5 7 ]、木脂素类[8 ]、类
胡萝卜素[9 ]、甾醇[10 ]、氰甙[11 ]等成分均有研究和报
道。药理实验表明水杉总黄酮具有较好的抗心肌肥
厚[12 ]和心律失常[13 ]的药理作用。水杉是国家一级保
护植物, 现在已经大量栽培, 资源越来越丰富, 为合
理开发和利用水杉提供了资源基础。
总黄酮的测定方法有 H PL C 法[14 ]、分光光度
法[15 ]等, 我们以芦丁作标准品, 采用分光光度法对
同一来源、不同生长时期水杉叶总黄酮含量进行了
测定分析, 从而初步揭示了水杉叶总黄酮含量随季
节变化的规律。
1　仪器与材料
1. 1　仪器与设备
7520 紫外可见分光光度计 (上海分析仪器厂) ;
Sarto riu s BS2110S 电子分析天平 (德国) ; JP 超声
300 清洗仪 (武汉嘉鹏电子有限公司)。
1. 2　材料和试剂
芦丁含量测定用对照品 (中国药品生物制品检
定所) ; 甲醇、三氯化铝试剂均为分析纯。水杉叶采集
于武汉植物园同一块地上的 3 棵植株, 2002 年 4 月Ξ 收稿日期: 2003203213, 修回日期: 2003206203。作者简介: 王日韦 (1972- ) , 男, 硕士研究生, 从事天然活性成分研究。通讯作者 (E2m ail: w yw @ ro se. w h iob. ac. cn)。
底至 10 月底每间隔一月采集 1 次, 自然干燥、粉碎、
过 4 号筛备用。
2　方法与结果
2. 1　检测波长的确定
取芦丁标准品, 加甲醇配成 100 ΛgömL 的溶
液, 即为对照品溶液。同时取样品 015 g 按“218 样
品含量测定”项下制备供试品溶液。分别取对照品溶
液和供试品溶液 1 mL , 各加入 5% 三氯化铝甲醇溶
液 1 mL , 用甲醇定容于10 mL , 容量瓶中。放置
10 m in, 于 370～ 620 nm 每隔 10 nm 测定吸收度。
结果显示, 对照品和供试品溶液的吸收曲线基本一
致, 两者均在 430 nm 处有最大吸收峰, 因此选择确
定430 nm 为样品测定吸收波长。
2. 2　标准曲线的绘制
精密称取芦丁标准品 1012 m g, 以甲醇溶解并
定容于 100 mL 容量瓶内, 精密吸取 015、110、115、
210、215 mL 置 10 mL 的容量瓶中, 各加入 5% 三
氯化铝甲醇溶液 1 mL 显色, 以甲醇定容至刻度。放
置 10 m in, 于 430 nm 处测定其消光值 (OD 值) , 以
OD 值 (A )为纵坐标、浓度 (C) (m gömL ) 为横坐标描
出各点, 连接得一直线, 其回归方程为: A =
35182C + 01011 1, 相关系数 r= 01999 9, 表明芦丁
在 01005 1～ 01025 5 m gömL 浓度范围内呈良好的
线性关系 (表 1)。
表 1　不同浓度芦丁标准样品OD 值的测定
T able 1　D eterm ination of OD of differen t concen tra t ion
of ru tin standard samp le
编号
N o. 1 2 3 4 5
浓度 (m gömL )
Concen tra t ion 0. 0051 0. 0102 0. 0153 0. 0204 0. 0255
OD 0. 190 0. 378 0. 565 0. 741 0. 922
2. 3　提取时间的确定
取 6 份样品细粉, 按“218 样品含量测定”项下
分别超声提取 10、20、30、40、50、60 m in, 测定水杉
叶总黄酮含量。从表 2 可以看出, 30 m in 的提取时
间比较合适。
表 2　不同提取时间样品含量的测定
T able 2　D eterm ination of con ten t of samp le of
differen t ex tracted tim e
提取时间 (m in)
Extracted tim e 10 20 30 40 50 60
含量 (% )
Conten t 1. 125 1. 174 1. 268 1. 280 1. 283 1. 303
2. 4　显色稳定性试验
取芦丁标准品溶液 (01102 m gömL ) , 加显色
剂, 分别于 0、10、20、30、40、50、60 m in 测定OD 值,
从表 3 可看出, 显色后 10～ 60 m in OD 值基本不变,
表明显色稳定。
表 3　不同显色时间芦丁标准样品OD 值的测定
T able 3　D eterm ination of OD of ru tin standard samp le
after differen t t im e of reaction
时间 (m in)
T im e 0 10 20 30 40 50 60
OD 0. 263 0. 386 0. 384 0. 384 0. 383 0. 382 0. 382
2. 5　精密度试验
取一定浓度的供试品溶液连续测定 3 次, 读取
OD 值, 计算R SD 值为 01484% , 表明仪器精密度良
好。
2. 6　重现性实验
取 3 份相同样品, 按“218 样品含量测定”项下
平行制备 3 份供试品溶液, 测定总黄酮含量, 分别为
1. 141%、1. 079%、1. 106% , 平均值为 1. 109% (n=
3) , R SD = 2. 823%。表明重现性良好。
2. 7　加样回收率试验
取 3 份已知含量的水杉叶样品, 定量加入
2155 m g的芦丁, 按“218 样品含量测定”项下分别测
定含量, 结果显示其平均回收率为 9518% (n = 3) ,
R SD = 2172% (表 4)。结果表明, 本法回收率较好。
表 4　回收率测定结果
T able 4　R esu lt of recovery rate
样品
Samp le
加入量 (m g)
A dded w eigh t
测得量 (m g)
M easured w eigh t
回收率 (% )
R ecovery rate
平均回收率 (% )
A verage recovery ate R SD (% )
1 2. 55 2. 40 94. 1
2 2. 55 2. 41 94. 5 95. 8 2. 72
3 2. 55 2. 52 98. 8
2. 8　样品含量测定
取样品细粉, 精密称取 015 g, 加甲醇 25 mL , 称
量记录。超声处理 30 m in。以甲醇按记录值补足重
量后过滤, 取滤液 2 份各 015 mL , 1 份加 1 mL 显色
剂, 另 1 份不加显色剂, 均以甲醇定容于 10 mL , 放
置 10 m in, 测定其OD 值。以显色管的OD 值减去空
054 武 汉 植 物 学 研 究　　　　　　　　　　　　　　　　　第 21 卷　　
白管的OD 值, 用标准曲线计算含量。另取样品细
粉, 按药典要求进行水分含量测定, 最后结果扣除水
分。结果见表 5 和图 1。
表 5　不同季节水杉叶中总黄酮含量的测定 (n= 3)
T ab le 5　D eterm ination of to ta l flavono ids’ con ten t in
M etasequoia g lyp tostroboid es leaves
in differen t seasons (n= 3)
编号
N o.
四月
A p ril
六月
June
八月
A ugust
十月
O ctober
植株 1
P lan t 1 1. 109 1. 305 1. 048 0. 885
植株 2
P lan t 2 1. 417 1. 637 1. 321 1. 054
植株 3
P lan t 3 1. 440 1. 725 1. 329 0. 971
平均含量 (% )
A verage con ten t 1. 322 1. 556 1. 232 0. 970
图 1　不同季节水杉叶中总黄酮含量的变化
F ig11　V ariat ion of to ta l flavono ids’ con ten t in
M etasequoia g lyp tostroboid es leaves of differen t seasons
3　讨论
(1) 因为水杉叶含有叶绿素会干扰总黄酮的测
定, 故样品测定采用扣除背景法方能反映准确含量。
( 2) 从样品含量测定结果可以看出, 3 棵植株
总黄酮含量随季节的变化规律基本一致。其总黄酮
含量以初夏 (6 月) 样品测定值最高。这可能因为从
开春到初夏, 随着植物生长愈来愈旺盛其代谢活动
也逐渐增强, 总黄酮含量呈上升态势, 到 6 月份达到
高峰。7、8 月份是武汉的盛夏季节, 天气炎热、昼夜
温差较小, 不利于总黄酮的累积; 秋季气温降低、气
候干燥, 其代谢逐渐受到抑制, 叶片变黄。故从盛夏
到秋季, 其总黄酮含量呈下降态势。
(3) 以芦丁作为标准品按上述方法测定计算水
杉叶总黄酮的含量, 具有简便、稳定、结果可靠的优
点, 对进一步推动水杉总黄酮的研究工作很有意义。
参考文献:
[ 1 ]　中国药材公司. 中国中药资源志要[M ]. 北京: 科学出
154　第 5 期　　　　　　　　　　　　王 日韦等: 不同季节水杉叶总黄酮含量变化的研究