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Analysis on the Constituents of Wild Rare Chinese Medicinal Plant Paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.)Hara

野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析



全 文 :武汉植物学研究 2004,22(6):575~577
Journal of Wuhan Botanical Research
野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析
袁 晓 ,袁 萍 ,严海燕 ,李建强 ,袁友明
(1.中国科学院武汉植物园,武汉 430074;2.湖北省农业科学院,武汉 430064)
摘 要:利用分光光度计、高效液相色谱仪和等离子光谱仪对华中地区珍稀药用植物七叶一枝花~Paris polyphylla
Smith var.chinensis(Franch.)Hara]根茎的化学成分薯蓣皂甙元、黄酮、19种游离氮基酸、微量元素进行了分析。
结果显示 :薯蓣皂甙元含量为 0.62 ,黄酮含量为 0.062 8 ,总游离氨基酸含量为 0.33 ,微量元 素中钙为
0.77 ,镁为 0.20%,钾为 0.98 ,铁为 0.20%,锌为 44.8 mg/kg,磷为 746 mg/kg。
关键词 :七叶一枝花;根茎;薯蓣皂甙元 ;黄酮;游离氨基酸;微量元素
中图分类号:Q946 文献标识码:A 文章编号:1000.470X(2004)06—0575.03
Analysis on the Constituents of W ild Rare Chinese M edicinal
Plant Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara
YUAN Xiao ,YUAN Ping ,YAN Hai—Yan ,LI Jian—Qiang ,YUAN You—Ming。
(1.Wuhan Botanical Garden,The Chinese Academy of Sciences.Wuhan 430074,China;
2.Hubei Academy of Agricultural Science,Wuhan 430064,China)
Abstract:The rhizoma of Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara,which iS wild
rare Chinese medicinal plant in the central region of China,was analyzed quanititatively by UV—
Vis,HPLC and ICP—AES.The constituents of disogenin,flavone。1 9 free amino acids and trace
elements in the rhizoma paridis were determined.The analytical results indicate that disogenin.
flavone,total free amino acids,Ca,Mg,K and Fe are 0.62%,0.062 8 ,0.33%,0.77% ,
0.20 ,0.98 9/6 and 0.2O ,respectively,and Zn 44.8 mg/kg,P764 mg/kg.
Key words:Paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.)Hara; Rhizoma; Disogenin;
Flavone;Free amino acid;Trace element
百合科重楼属植物七 叶一枝花 (Paris poly-
phyla Smith var.chinensis(Franch.)Hara)的根茎
(商品名为重楼),药用历史悠久,其植物属华中珍稀
濒危植物[1],以前民间主要用于治疗各种疮毒、痈
疽、毒蛇咬伤等[引。现有药理研究表明,它还具有止
血、镇静镇痛、免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗菌抑菌、抑
制精子活性等作用[2矗]。与七叶一枝花一起列为中
药 “重楼”的同属植物云南重楼(Paris polyphyla
Smith var.yunnanensis (Franch.)Hand.一Mazz.)
是 云南 白药 的组成之一,Zhou L G[4 和 Hisashi
Matsuda L5 等研究发现,云南重楼的有效成分中两
种寡糖有植物生长调节剂的作用,甾体皂甙能抑制
由酒精引起的胃损伤症。近几年的临床实验表明,七
叶一枝花根茎对治疗妇女子宫大量出血疗 效显
著L2 ;对治疗咳嗽、喘症、肺胀、恶性胸水等肺系疾
病和热毒引起的疾病多有奇效;对淋巴结核溃疡、体
内炎症、毒蛇咬伤、皮炎蜂蛰都有很显著的疗效[7 ],
Ma J C N和 Lau F W 1985年研究了七叶一枝花根
茎中的甾体皂甙成分,发现与云南重楼的成分相同,
称其薯蓣皂甙为抗肿瘤和止血的有效成分[9]。近几
收稿 日期:2003—12—17,惨回日期;2004—04.15。
基金项目:中国科学院武汉植物园知识创新工程所长基金资助项目。
作者简介:袁晓(1962一),男,副研究员,博士在读,研究方向为天然产物研究和新药开发。
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武 汉 植 物 学 研 究 第 22卷
年来对七叶一枝花根茎中有效成分的研究主要是薯
蓣皂甙,鉴于这些,我们对该植物的成分作了较全面
的分析,以为该植物引种驯化、迁地保护、药理研究
及GAP种植提供基础数据。
1 材料和方法
1.1 材料
七叶一枝花材料由湖北省鹤峰县科源农业技术
开发有限责任公司袁唯洲提供。九月下旬在鹤峰县
海拔 500~1 300 m的不同地点采集七叶一枝花全
株,取 3~5年生植株的根茎,经过烘干、粉碎、混匀
备用。植物材料经中国科学院武汉植物园李建强博
士鉴定。薯预皂甙元、芦丁对照品由中国药品生物制
品检定所提供 。
1.2 仪器与药品
722型分光光度计(上海分析厂),Waters高效
液相色谱仪(PIERCE公司),IRS advantage ICP全
谱直读等离子光谱仪(TJA公司),JP超声仪。试剂
均为分析纯。
1.3 方法与条件
①量取 20 mL甲醇于 250 mL三角瓶中,逐滴
加入 80 mL浓硫酸(比例 1:4),搅拌均匀后即为薯
蓣皂甙元显色剂。②黄酮显色剂用 5 的A1C1。甲醇
溶液 250 mL配制。⑧将七叶一枝花根茎在干燥箱
内 80℃鼓风干燥 2 h,粉碎后过 80目筛,再于 80~C
干燥至衡重,待用。④精密称量处理后的七叶一枝花
根茎样品 5 g于 100 mL圆底烧瓶中,加入 20 mL
去离子水置入 4O℃恒温箱内发酵 24 h,取浓硫酸
5 mL逐滴加入并不断摇动,加热回流 4 h水解;水
解液加氢氧化钠溶液中和至 pH为 7,水解液抽滤,
滤渣置 80℃的烘箱内干燥 2 h,并用 100 mL石油醚
索氏提取 2 h,石油醚溶液定容于 100 mL容量瓶
中,待测薯蓣皂甙元。⑤精密称量处理后的七叶一枝
花根茎样品 5 g,加 100 mL甲醇超声提取 30 min,
过滤,重复 2次,合并滤液,浓缩,定容于 100 mL容
量瓶中,待测样品中的黄酮成分。⑥精密称量处理后
的七叶一枝花根茎样品 2 g,加去离子水超声提取
20 min,过滤,定容于 100 mL容量瓶中,待测样品
中的氨基酸成分。⑦精密称量处理后的七叶一枝花
根茎样品 0.5 g置于 30 mL瓷坩埚中,于 550℃马
福炉干灰化 ,取出冷却后加 1:1 HC1(浓盐酸 :水)
5 mL,加热溶解,并用去离子水定容至 25 mL容量
瓶中,待测样品中的微量元素。⑧精密称量薯预皂甙
元标准品 5 mg,用石油醚(60~90℃)溶解定容至
100 mL为薯预皂甙元标准液。⑨精密称量芦丁标准
品 2.5 mg,用甲醇溶解并定容至 25 mL为芦丁的标
准液。⑩用 10 HC1配制 Ca、Mg、K、Zn、P标准溶
液。⑩氨基酸分析柱前处理 :Waters AeeQ—Tag柱
前衍生法制成氨基酸标准溶液及样 品溶液。⑥
HPLC的分析条件:液相色谱柱为 C NoVaPak(直
径4.6 mm,长 20 mm),检测波长为 248 nm,柱压
为8.3 Mpa,流速为 1.0 mL/min。⑩等离子光谱仪
工作参数:高频功率 1.15 kw,Ar气0.5 L/min,泵
速为 130 r/min,载气压力为 30 Pa;检测器为 CID。
2 结果与讨论
2.1 实验结果
薯预皂甙元标准曲线制作 取标准溶液 0.5、
1.0、1.5、2.0、2.5 mL于试管中,置水浴上挥发去溶
剂,然后加显色剂 5 mL摇匀,放置 30 min,于分光
光度计 412 nm处,读取吸光度数值。以显色剂为空
白,回归方程为 y一8.784X一0.016 4,R一0.993 7。
薯预皂甙元样品测定 取样品溶液 0.1 mL于
试管中,置水浴上挥发去溶剂,然后加显色剂 5 mL
摇匀,放置 30 min,于分光光度计 412 nm处,以显
色剂为空白,读取吸光度数值。计算结果 :薯预皂甙
元为 0.62 ,RSD为 1.08 ,平均回收率 100.5
(n一 5)。
芦丁标准曲线制作 取芦丁标准液0.5、1.0、
1.5、2.0、2.5 mL,分别置于 10 mL容量瓶中,加
A1C1。显色剂定容于 10 mL容量瓶,于分光光度计
425 nm处,读取吸光度数值,以 A1C1。显色剂为空
白,回 归 方 程 为 Y一 3.712X + 0.019 6,R 一
0.998 99。
黄酮样品测定 取样品溶液 5 mL加 A1C1。显
色剂定容于 10 mL容量瓶,于分光光度计 425 nm
处,以 A1C1。显色剂为空白,读取吸光度数值(n一
5)。计 算 结果:黄 酮 含量 为 0.062 8 ,RSD 为
1.03 ,平均回收率 100.3 (n-5)。
氨基酸的含量测定 氨基酸的含量测定见表 1。
微量元素测定 微量元素测定中,标准溶液与
样品溶液酸介质浓度一致,对实际样品平衡测定 10
次;RSD分别为 1.04 、1.48 、1.13 、1.78 、
2.33 ,微量元素含量见表 2。
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第 6期 袁 晓等:野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析
表 1 七叶一枝花根茎中的游离氨基酸及其含量
Table 1 The contents of free amino
acids in the rhizoma paridis
表 2 七叶一枝花根茎中的微量元素及含量
Table 2 The contents of trace elements in rhizoma paridis
2.2 讨论
(1)七叶一枝花根茎中的甾体皂甙主要以薯蓣
皂甙元的多种糖甙为主。我们用分光光度法测试七
叶一枝花根茎中的薯蓣皂甙元含量为 0.62 ,与韦
建荣Eio3报道的云南元阳、绿JI、红河等地区云南重
楼的薯蓣皂甙元含量相近,其含量都较高。湖北省鹤
峰县科源农业技术开发有限责任公司已将七叶一枝
花作为重点药材进行大面积栽培。今后我们的着重
点是将野生七叶一枝花和人工栽植七叶一枝花的化
学成分进行比较,用分析测试等手段跟踪检测,使其
达到规范化种植。另外,在本实验中我们用高压液相
色谱法 ,参照中国药典(2000年版)E13及其它资料,
在样品的制备上有所改进,改进后的方法简单可行
并且重现性好,适合基层单位分析测定。
(2)微量元素测试结果显示七叶一枝花根茎中
钙、钾、铁、镁的含量都较高 ,其中钾的含量达到近
1 9/6,这些元素不仅对人体有重要的生理调节作用,
而且对植物 自身也有重要的生理调节作用[】引。
从本研究结果可知,七叶一枝花根茎中含有丰
富的微量元素,薯蓣皂甙元含量也较高,并含有多种
游离氨基酸,药效也较广泛,因此,可对该植物进行
引种驯化,迁地保护,丰富其资源,并对其进行有针
对性地开发。
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