全 文 :Vol131 , No12
pp1 154 - 158 Feb1 , 2005作 物 学 报ACTA AGRONOMICA SINICA第 31 卷 第 2 期2005 年 2 月 154~158 页
从小麦 EST序列中开发新的 SSR引物
陈军方1 ,2 任正隆2 高丽锋1 贾继增1 , 3
(1 中国农业科学院作物品种资源研究所 ,农业部作物种质资源与生物技术重点开放实验室 ,北京 100081 ; 2 四川农业大学农学院遗传育种系 ,
四川雅安 625014)
摘 要 : 小麦 EST数量的迅速增加为开发新的 SSR 标记提供了宝贵的数据资源 ,本实验从国际小麦族 EST协作网 ( ITEC)
上公布的 10 380 条 EST序列中检索到 444 条含有 SSR 的序列 ,检出率为 411 %。其中含二核苷酸重复单元和三核苷酸重
复单元的 SSR2ESTs 分别为 34 条 (717 %)和 347 条 (7810 %) 。利用这些 SSR2ESTs 序列共设计 135 对 cSSR 引物 ,其中 82 对
在小麦上有扩增产物 ,占所设计引物总数的 6018 %。利用小麦缺体2四体 ,32 对 cSSR 引物被定位到小麦除 2D、4B 和 4D
外的 18 条染色体上。
关键词 : EST; SSR2ESTs ; cSSR引物 ; 小麦
中图分类号 : S512 ,Q78
Developing Ne w SSR Markers from EST of Wheat
CHEN Jun2Fang1 ,2 ,REN Zheng2Long2 ,GAO Li2Feng1 ,J IA Ji2Zeng1 , 3
(1 Key Laboratory of Crop Germplasm & Biotechnology , Ministry of Agriculture , Institute of Crop Germplasm Resources , Chinese Academy of Agricultural Sciences ,
Beijing 100081 ; 2 Department of Plant Breeding and Genetics , Sichuan Agricultural University , Ya’an 625014 , Sichuan , China)
Abstract : The growing availability of EST sequences from wheat provides a potential valuable source of new SSR markers1
In this study , 444 SSR2ESTs from 10 380 ESTs in the International Triticeae EST Cooperative ( ITEC) database ,
representing 411 % of the total number of ESTs were identified1 Among them , 34 dinucleotide repeats and 347 trinucleotide
repeats were found , accounting for 717 % and 78. 0 % of the total SSR2ESTs respectively1 135 cSSR primers were designed
to sequence flanking SSRs from 175 selected SSR2ESTs , of which 82 primers were efficient in wheat1 32 of the 82 cSSR
primers were located on 18 wheat chromosomes except for 2D , 4B and 4D of 21 wheat chromosomes1
Key words :EST;SSR2ESTs ;cSSR primers ;Wheat
SSRs (simple sequence repeats) 即简单重复序列 ,
又称微卫星DNA (Microsatellites) ,是一种由 2~5 个核
苷酸为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重
复序列 ,现已证明存在于绝大多数真核生物基因组
中。与其他分子标记相比 ,SSR 标记数量丰富 ,等位
基因变异多 ,信息含量高 ,表现为共显性遗传 ,可利
用 PCR 进行分析 ,DNA 用量少 ,操作简便 ,重复性
好 ,因此 20 世纪 90 年代以来已经被遗传学家广泛
用做分子标记。
目前 ,SSR 标记已经在小麦基因组作图、小麦种
质资源遗传多样性分析、构建小麦指纹图谱、小麦品
种鉴定和基因诊断等研究领域展示出较大的应用潜
力。但随着小麦基因组研究的进一步深入 ,现有的
SSR 标记已不能满足小麦高密度遗传图谱构建等研
究的需要 ,成为小麦遗传作图、基因克隆等研究的限
制因素 ,因此开发应用新的 SSR 标记势在必行。
ESTs (expressed sequence tags) 是指从不同组织
来源的 cDNA 文库中随机挑选克隆进行 5′或 3′端
测序后得到的长约 300~400 bp 的基因表达序列片
段。随着国际麦类 EST 计划的不断实施 ,截至目
前 ,小麦中开发、登记的 EST 已由 2000 年 6 月的 7
条增加到了 2003 年 5 月 9 日的 415 747 条。研究表
明 ,7 %~10 %的 EST 序列中存在简单重复序列 ,这
为从 EST 序列中开发利用新的 SSR 标记奠定了分
繱基金项目 : 国家 863 项目“小麦新型分子标记开发及抗病、优质、高产新品种培育”(2001AA211031) 。
作者简介 : 陈军方 (1975 - ) ,女 ,山东省冠县人 ,作物遗传育种专业博士。3 通讯作者 :贾继增 ,男 ,博导 ,中国农业科学院研究员。E2mail :
jzjia @mail1caas1net1cn
Received(收稿日期) :2003211211 ,Accepted(接受日期) : 20042042101
子基础。
1 材料与方法
111 材料
实验材料为普通小麦品种中国春和以中国春为
回交亲本 ,连续回交 12 代的中国春矮败小麦。EST2
SSR 标记定位材料为中国春的 21 个小麦缺体2四体
系列。
112 方法
11211 DNA 的提取 采用常规的酚Π氯仿法 ,纯
化后用 1 ×TE溶解 ,4 ℃保存备用。
11212 含 SSR 小麦 EST 序列的检索 EST 序列
来源为本实验室共享的国际小麦族 EST协作网 ( In2
ternational Triticeae EST Cooperative , ITEC) 上已公布
的 40 320 条 EST序列 ,随机选取其中 10 380 条。利
用 SSRIT (http :ΠΠarsgenome1cornell1eduΠcgi2binΠriceΠss2
rtool1pl)软件 ,搜索含有 SSRs 的 EST序列。利用 Re2
peatMasker Program (Mit , 1999 ; http :ΠΠftp1genome1washin2
gton1eduΠcgi2binΠRepeatMasker)去除其他重复序列和载
体序列 ;用 StackPACK (Miller et al1 ,1999 ; http :ΠΠwww21egenetics1com) 对 SSR2ESTs 进行分类并去除重复的
SSR2ESTs。
11213 SSR 引物设计 利用 DNAstar 软件包中的
Editseq 和 Primerselect 软件设计 SSR引物。引物设计选
定的条件如下 :引物长度范围为 19~21 bp ;引物退火温
度在 50~65 ℃之间 ,上下引物之间退火温度相差不超
过 5 ℃;扩增片段长度在 150~350 bp 之间 ,最长不超过
500 bp。
11214 SSR 扩增反应 反应液 25μL ,其中含 10 ×
PCR 缓冲液 215μL ,25 mmolΠL MgCl2 210μL ,25 mmolΠL
dNTP 012μL ,2μmolΠL SSR 引物 312μL , Taq 聚合酶 1
U ,模板DNA 30~50 ng ,加水补充至 25μL ,扩增反应在
PTC2225 PCR扩增仪上进行。扩增反应程序 :94 ℃预变
性 4 min ,94 ℃1 min ,适宜 Tm为 1 min , 72 ℃1 min ,循环
31~35 次 ,72 ℃延伸 5 min ,反应终止在 4 ℃。
11215 凝胶电泳及银染 SSR 扩增反应液在 6 %的
聚丙烯酰胺凝胶上电泳 ,100 W ,1 h ,银染方法参照
Sourdille[1] 。
2 结果与分析
211 SSR2ESTs 检索分析
截至 2001 年 5 月 4 日 ,国际麦类 EST 协作网
(ITEC)上共公布 EST序列 60 022 条。本研究从10 380
条中 ,利用 SSRIT 软件 ,共检索出 444 条含有 SSR 的
EST序列 ,即 SSR2ESTs 占所有 EST总数的 411 %。检索
时所设定的条件为重复序列不少于 18~20 核苷酸 ,即
二核苷酸重复至少 10 次 ,三核苷酸至少重复 6 次以上 ,
四核苷酸重复 5 次 ,五核苷酸至少重复 4 次 ,六核苷酸
至少重复 3 次以上。之所以选用这个标准是因为 Cho
等[2]的研究发现 ,在水稻中小于 18 核苷酸 SSR 的多态
性显著降低。在所检出的含有 SSR 的 EST序列中 ,含
二核苷酸重复单元的有 34 条 ,占所检出总数的 717 %;
含三核苷酸重复单元的有 347 条 ,占所检出总数的
7810 %(见表 1) 。
在 34 条含有二核苷酸重复单元的 SSR2ESTs 中 ,含
AGΠTC重复单元的数量最多 ,有 18 条 ,占 5310 % ,而没
有一条含 GCΠCG重复单元。本研究中共检索到 347 条
含三核苷酸重复单元的 SSR2ESTs ,其中 AACΠTTG重复
单元出现频率最高 ,为 95 条 ,占 2716 %;其次为含
GGCΠCCG重复单元的 SSR2ESTs ,为 91 条 ,占总数的
2610 %。这两类重复类型占了三核苷酸重复类型总量
的半数以上 ,而其他重复类型则相对较少(表 2) 。
表 1 SSR2ESTs 序列中不同重复核苷酸数的数量及百分比
Table 1 Number and frequency of repeat types in SSR2ESTs
重复核苷酸数
Number of repeats
SSR2ESTs 数量(条)
Number of
SSR2ESTs 占所有 SSR2ESTs 的百分比% of SSR2ESTswith SSRs
二核苷酸Dinucleotide 34 717
三核苷酸 Trinucleotide 347 7810
四核苷酸 Tetranucleotide 14 312
五核苷酸 Pentanucleotide 22 510
六核苷酸 Hexanucleotide 27 611
SSR2ESTs 总数 444
表 2 SSR2ESTs 序列中不同重复类型及其数量和百分比
Table 2 Frequency , number and type of SSRs in SSR2ESTs
重复单元数
Number of repeats
重复单元
SSR motif
EST数量(条)
Number of EST
百分比
Percentage ( %)
二核苷酸
Dinucleotide
ACΠTG 9 2615
AGΠTC 18 5310
ATΠTA 7 2015
GCΠCG 0 0
三核苷酸
Trinucleotide
AACΠTTG 95 2716
GGCΠCCG 91 2610
AGCΠTCG 79 2217
ACGΠTGC 39 1112
ACCΠTGG 23 616
AGGΠTCC 12 315
CTAΠGAT 8 214
212 EST2SSR(cSSR)引物设计及筛选结果
利用 DNAstar 软件包中的 EditSeq 和 PrimerSelect
软件 ,选取 175 条 SSR2ESTs 序列 ,设计 cSSR 引物 135
551 第 2 期 陈军方等 :从小麦 EST序列中开发新的 SSR 引物
对 ,以中国春矮败小麦可育和不育 DNA 为模板进行扩
增、筛选 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示其中 82 对引物在中
国春矮败小麦 DNA 上有清晰的扩增条带 ,占所设计
cSSR引物总数的 6018 % ,但在可育和不育小麦间未发
现表现有差异的 cSSR引物。
对在中国春矮败小麦上有扩增的 82 对 cSSR 引
物 ,用 21 个中国春小麦缺体2四体系进行染色体定位 ,
结果共有 32 对 cSSR 引物被定位到小麦的特定染色体
上(见图 1) 。32 个已定位的 cSSR引物情况及其在小麦
染色体上的分布见表 3。
由表 3 可见 ,已定位的 32 个 cSSR 引物均匀、随机
地分布在除 2D、4B 和 4D外的其他 18条小麦染色体上。
图 1 来源于 BE517115 的 cSSR引物被定位到小麦 5D 染色体上
Fig11 The cSSR primer based on BE517115 was located on chromosome 5D
12N1AT1B ; 22N1BT1A ; 32N1DT1A ; 42N2AT2B ; 52N2BT2A ; 62N2DT2A ; 72N3AT3B ; 82N3BT3D ; 92N3DT3A ; 102N4AT4B ; 112N4BT4A ;
122N4DT4A ; 132N5AT5B ; 142N5BT5A ; 152N5DT5A ; 162N6AT6B ; 172N6BT6A ; 182N6DT6A ; 192N7AT7B ; 202N7BT7A ; 212N7DT7A1
表 3 32 个已定位的 cSSR引物情况及其在小麦染色体上的分布
Table 3 Information of 32 located cSSR primers and its distribution on wheat chromosomes
EST序列
EST sequence
重复单元
Repeat
退火温度
Tm ( ℃)
扩增片断长度
Product size
(bp)
染色体定位
Chrom1
location
引物上链
Forward primer
(5′- 3′)
引物下链
Reverse primer
(5′- 3′)
BE399089 (AAC) 11 50 191 5A ATGCATGGATGTTGTATTG GTTGTTGTTTTTGTTGTTGAT
BE424205 (AAC) 8 50 159 2B CATCTCAGCAAAACCCACAG GAGAAGAGAAGAAGCCAACT
BE399860 (AAC) 8 50 160 1B CGCAGCCGCAACTACCATA AGGATTTGTTGTTCTTGTTG
BE425125 (AAC) 7 55 452 7B TTCACAGCAACAACAAATAC TGGAAGTCATCACCTCAAG
BE606294 (AAC) 14 55 375 1A TTTCTCATCCTTGCCCTCCTT TTGTTGTTGTTGTGCTTGTTG
BE606386 (AC) 11 60 173 6A GCTAATGCCGCTGCCTCGTT CTCACCCGCTCCACCTCGTC
BE515708 (AC) 16 50 191 5D CTACATAATAAACACAAAACA GTGACGGGCGGATAATAAGGT
BE470813 (TA) 11 50 242 3D CATCCGTGGACTGCTCT CAAACGCTGATACAAAATAG
BE399069 (TA) 15 50 208 3B ACACATGCCAACCAGACA GGAAGCCCAACAAAACC
BE497991 ( GA) 14 60 213 7B TGCTCTACACGGGGAACAC TGGAGCCAATGATGATGC
BE473227 (AgC) 6 60 209 6B CAGCCGCAACCATTTTCAT AGCTGCTGACAACACAAT
BE424312 (AgC) 6 60 226 6A ATGCATGGATGTTGTATTG GAGGCTGTGGAAGGAGA
BF293493 (AgC) 7 55 197 6A ATGCATGGATGTTGTATTG GTTGTTGTTGTTGTTTTTGTT
BE637039 (AgC) 6 60 151 7D ,3A TAGCCGATCTCCTCTCCTTCC ATCTTCCCCCGCCCCATCTCC
BE489854 (AgC) 6 60 107 1D AGATCAGCGTCGTTCCTTC CTGGTGCTCCCCGTCTGCT
BE517914 (TCCCCg) 3 50 177 6D CCTGTTCCTACGATACG AGGAGGAGCTTGATGAG
BE586613 (TgTgCg) 3 50 216 6D GCAATGGGCTTCAGTTCA GGTAGGGGCGGGGGAGGTG
BE497844 (CCg) 6 50 140 1B AGAAGCCGCAGGGGAGAG TGCGCAGGTAGGTGGTGA
BE637905 (CCg) 7 55 242 3D CGAGGAGGAGGAGGAGAGG TGGTACTTGACGGGGAACG
BE517115 (CCg) 10 50 204 5D AATTAACCCCGGACAGAGC CAGCGTGGTGGCGGTGAC
BE406339 (CCg) 7 55 117 2A CTCGCTCGCTCCCAAATCT TCCTTGCCATAGTTCACCA
BE517017 (ATAC) 5 55 237 4A TCCCTCCCTCCCTCGTCCTA AACCTTCCATACACCTCCTT
BE404098 (TTTC) 6 50 280 2A AGCAAGGCAACAAGGAGCAACA AAGAAGAGAAGAACACCAGAAA
BF293342 (AACCC) 5 50 225 4A GCTAGCATGCAAGAAAGAG CCAAGCAGCGGAATCAAT
BE398522 (AATCC) 4 50 181 7A AAAGCCACCGGAGATGAA GTGCGCCTGGACGAACTT
BE794904 (AgCTg) 4 50 171 5A ,5B TCCCGAGAAGAAGCGAGAT CCCCAGCAGCAGCACCGTCAC
BE498979 (ATCCC) 4 55 145 6A CCGGCCCCGCATTTGTT CACGGGCCGGAAGAAGC
BE405558 (TCCCC) 4 60 136 7D CCTGTTCCTACGATACG AGGAGGAGCTTGATGAG
BE492979 (AACTgg) 4 55 121 2A ,2B ATTCTGTTTGCCCCCTTCA GTCGCCTAGCTACTCCACT
BE606535 (CCggCg) 3 55 206 7D ATTCGCCGCCCTCTCCT CGAATTGGCCCTTGACG
BE404492 (CCg) 9 55 134 5B ,5D CACCTCCTCCCCTCCTG CCGTCGACGTTGGTGTT
651 作 物 学 报 第 31 卷
3 讨论
311 EST的飞速发展为开发新的 SSR引物提供了
宝贵资源
由于一段短的 EST 序列就可以反映出基因的
性质 ,因此 EST 技术是发现新基因的好方法 ,逐渐
引起了世界各著名实验室的重视 ,并相继开展了不
同物种的 EST 计划。目前公共数据库中的 EST 数
目迅 速 增 加 ( http :ΠΠwww1ncbi1nlm1nih1govΠdbESTΠ
dbEST2summary1html) ,由 1991 年的不足 2 000 条 ,增
加到 2003 年 5 月的 16 626 752 条。在最大的公共数
据库 GenBank 中 ,截至 2003 年 5 月 9 日 ,人的 EST数
为 5 142 390 条 ,占 EST总数的 30 %强。排名第六的
小麦是 EST数目最多的植物 ,为 415 747 条 ,比玉米
(210 748) 、水稻 (201 747)等禾本科作物多一倍。
EST数量的飞速增加为开发利用新的 SSR 引物
提供了宝贵的数据资源。目前全世界已有多家实验
室正致力于从 EST中开发 SSR 和 SNP 引物 ,并取得
了可喜成绩[2~6 ] 。
312 EST中简单重复序列( SSR)的分布特点
SSRs在整个真核生物基因组的不同座位上广
泛分布 ,研究发现 ,SSRs 不仅分布于基因间隔区 ,而
且也广泛分布于基因编码区。对大麦、玉米、燕麦、
和小麦等禾谷类作物 ESTs 中 SSR 的含量、出现频
率、重复类型等的研究表明 ,7 %~10 %的 EST 序列
含有 SSR ,其中 3 %可用于 EST2SSR 引物设计。SSR
在大麦、玉米、小麦、燕麦、黑麦、高粱和水稻中出现
的频率分别为 715kb、715 kb、612 kb、515 kb、515 kb
和 319 kb ,平均 610 kb 出现一个 SSR。其中三核苷
酸重复出现次数最多 (54 %~78 %) ,其次为二核苷
酸重复类型 (17 %~40 %) ,而四核苷酸以上重复类
型较少[7 ] 。
研究发现 ,在二核苷酸重复 SSR2ESTs 中 ,含
AGΠTC 重复单元的最多 ,而含 GCΠCG重复单元的数
量最少[5 ] ,本实验的结果也证明了这一点。出现这
种情况可能的原因之一是二核苷酸重复单元 AGΠTC
在 mRNA 中根据不同的阅读起始位点可以分别读
为 : GAG、AGA、UCU 和 CUC ,从而分别翻译为 Arg、
Glu、Ala 和 Leu 氨基酸 ,而 Ala 和 Leu 氨基酸在蛋白
质中出现的频率分别高达 8 %和 10 %[8 ] 。
Ramesh 等分析了大麦、玉米、高粱以及水稻 4
种禾本科作物 EST序列中 SSR 的分布规律 ,发现含
三核苷酸重复单元的 SSR2ESTs 中 GGCΠCCG重复单
元出现频率最高 ,而在小麦中 ,出现频率最高的是
AACΠTTG重复[5 ] 。本实验中 ,在 347 条含三核苷酸
重复单元的 SSR2ESTs 中 ,AACΠTTG重复单元出现频
率最高 ,为 95 条 ,占所有三核苷酸重复类型总数的
2716 % ;其次含 GGCΠCCG重复单元的为 91 条 ,占总
数的 2610 %。这两类重复类型占了三核苷酸重复
类型总量的半数以上 ,而其他重复类型则相对较少。
313 EST2SSRs 引物的优点及发展前景
Eujayl 等[3 ] 通过对不同来源的 SSR 比较 ,发现
EST2SSR 扩增较好 ,但是其多态性较低 (25 %) ,而来
自基因组的 SSR 的多态性较高 (53 %) 。尽管 EST2
SSR 多态性低 ,但与传统 SSR 引物相比 ,其引物在以
下几方面具有明显优点 :
31311 EST2SSRs 含量丰富 ,可通过电子搜索快速获
得 ,无需建库、测序 ,因此开发成本低、效率高
SSR 的传统获得途径是分离植物基因组。这种方法
需要经过基因文库构建、筛选、大规模测序等阶段 ,
开发成本较大 ,限制了 SSR 标记的大量开发。而
EST2SSR 引物开发则省去了这些步骤 ,可以在庞大
的 EST数据库中利用计算机软件直接搜索含有 SSR
的 EST ,利用 SSR 两端的保守序列设计引物 ,缩短了
开发周期 ,节省了开发成本。
31312 EST2SSRs 作为基因的一部分 ,信息含量高 ,
可直接用于基因作图 作为一种新型的 SSR 标
记 ,EST2SSRs 标记来源于基因本身 ,因此是一种有
功能的分子标记。EST2SSRs 的开发使无功能分子
标记向可揭示基因转录功能的分子标记转化。
Sylvia 等认为小麦 EST2SSRs 为小麦转录遗传图提供
了技术路线 ,便于已知功能基因的定位[9 ] 。
31313 EST2SSRs 在物种间通用性好 ,可用于比较基
因组研究 比较基因组研究主要是利用相同的分
子标记 (主要是 cDNA 标记和基因克隆) 在相关植物
种之间进行遗传或物理作图。比较作图要求图谱上
的标记必须能够找出几个物种的同源位点 ,并且在
种内有一定的多态性。EST2SSRs 引物来源于 SSR
两端相对保守的序列 ,在物种间有较好的通用性 ,这
使得 EST2SSRs 引物在比较作图方面有很大的应用
潜力[4 ,6 ] 。
31314 EST2SSRs 可用于物种的起源进化研究
对某一物种基因组微卫星序列分布和变异的研究 ,
可以阐明该物种起源、进化分支点和人工选择的历
史过程。人类和果蝇的群体与进化研究表明 ,多态
性微卫星标记有助于了解群体分化和选择瓶
751 第 2 期 陈军方等 :从小麦 EST序列中开发新的 SSR 引物
颈[10 ,11 ] 。另一方面 ,突变率低的较稳定的 SSR 标记
(如 EST2SSRs) 可被用于重建较为久远的进化事
件[12 ,13 ] 。
作为一种新型的 SSR 标记 ,与普通 SSR 标记相
比 ,EST2SSR 标记即基因的一部分具有更大的应用
价值。随着小麦中 EST数量的不断增加 ,从 EST序
列中开发 EST2SSRs 标记将会成为 SSR 标记的主要
来源。而这些新开发的 EST2SSRs 标记将会被逐渐
绘制到遗传图谱中 ,势必对小麦的分子标记辅助育
种、基因定位及克隆产生重大影响。
References
[1 ] Sourdille P , Charmet G, Trottet M , Tixier M H , Boeuf C , Nègre S ,
Barloy D , Bernard M1 Linkage between RFLP molecular markers and the
dwarfing genes Rht2B1 and Rht2D1 in wheat1 Hereditas ,1998 ,128 :41 -
46
[2 ] Cho Y G, Ishii T , Temnykh S , Chen X , Lipovich L , Park W D , Ayres
N , Cartinhour S , McCouch S R1 Diversity of microsatellites derived from
genomic libraries and GenBank sequences in rice ( Oryza sativa L1) 1
Theor Appl Genet , 2000 , 100 :713 - 722
[3 ] Eujayl I , Sorrells M E , Baum M , Wolters P , Powell W1 Isolation of
EST2derived microsatellite markers for genotyping the A and B genomes of
wheat1 Theor Appl Genet , 2002 , 104 :399 - 407
[4 ] Holton R A , Christopher J T , McClure L , Harker N , Henry R J1
Identification and mapping of polymorphic SSR markers from expressed gene
sequences of barley and wheat1 Molecular Breeding , 2002 , 9 : 63 - 71
[5 ] Kantety R V , Rota M L , Matthews D E , Sorrells M E1 Data mining for
simple sequence repeats in expressed sequence tags from barley , maize ,
rice , sorghum and wheat1 Plant Mol Bio , 2002 , 48 : 501 - 510
[6 ] Thiel T , Michalek W , Varshney R K, Graner A1 Exploiting EST
databases for the development and characterization of gene2derived SSR2
markers in barley ( Hordeum vulgare L1) 1 Theor Appl Genet , 2003 ,
106 :411 - 422
[7 ] Varshney R K, Thiel T , Stein N , Langridge P , Graner A1 In silico
analysis on frequency and distribution of microsatellites in ESTs of some
cereal species1 Cell Mol Biol Lett , 2002 , 7 : 537 - 546
[8 ] Lewin B1 Genes Ⅴ1 Oxford University Press , New York1 1994
[9 ] Sylvia Stack , Campbell L , Henderson K, Eujayl I , Hanafey M , Powell
W , Wolters P1 Development of EST2derived microsatellite markers for
mapping and germplasm analysis in wheat1 Plant & Animal Genome Ⅷ
Conference , San Diego , CA , 2000 , January 9 - 12
[10 ] Di Rienzo A , Peterson A C , Garza J C , Valdes A M , Slatkin M ,
Freimer N B1 Mutational processes of simple2sequence repeat loci in
human populations1 Proc Natl Acad Sci USA , 1994 , 91 :3 166 - 3 170
[11 ] Slatkin M1 A measure of population subdivision based on microsatellite
allele frequencies1 Genetics , 139 :457 - 462
[12 ] Meyer E , Wiegand P , Rand S P , Kuhlmann D , Brack M , Brinkmann
B1 Microsatellite polymorphisms reveal phylogenetic relationships in
primates1 J Mol Evol , 1995 , 41 :10 - 14
[13 ] Rossetto M , McNally J , Henry R J1 Evaluating the potential of SSR
flanking regions for examining relationships in Vitaceae1 Theor Appl
Genet , 2002 , 104 : 61 - 66
851 作 物 学 报 第 31 卷