全 文 ：顽拗性竹柏种子的贮藏特性∗
计明月１ꎬ２ꎬ 张　 楠１ꎬ２ꎬ 闫　 启１ꎬ２ꎬ 文　 彬１∗∗
(１ 中国科学院西双版纳热带植物园热带森林生态重点实验室ꎬ 云南 勐腊　 ６６６３０３ꎻ
２ 中国科学院大学ꎬ 北京　 １０００４９)
摘要: 文章对竹柏 (Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ) 种子的脱水耐性和贮藏特性进行了研究ꎬ 结果表明: 竹柏种子成熟
时初始含水量约为 (３５ ± ０􀆰 ７)％ꎬ 种子对脱水敏感ꎬ 其最低安全含水量约为 (１６􀆰 ８６ ± ０􀆰 ７３)％ꎬ 具有顽拗
性种子的典型特征ꎻ 湿藏和半干藏都可以作为短期保存竹柏种子的方法ꎬ 且以 ４ ℃保存优于 １５ ℃保存ꎬ
但不管种子含水量如何ꎬ 零下低温保存对竹柏种子都是致命的ꎻ 半干藏法保存实验中ꎬ 未进行脱水处理的
种子 (对照) 在 ４ ℃贮藏 ６个月ꎬ 种子萌发率没有发生明显下降ꎬ 但贮藏期延长到 ９个月时ꎬ 临界含水量
的种子萌发力保存最高ꎻ 不管贮藏介质的含水量高低ꎬ 也无论贮藏在 ４ ℃还是 １５ ℃ꎬ 湿藏种子在 ９ 个月
的贮藏期内萌发率均没有明显的降低ꎬ 但当贮藏到 １２个月时ꎬ １５ ℃湿藏种子的萌发率显著高于 ４ ℃贮藏
的种子ꎬ 但 １５ ℃湿藏的种子在贮藏到 ３个月时即发现种子在贮藏期间萌发ꎬ 且随着贮藏介质含水量的升
高和贮藏期的延长ꎬ 萌发的种子增多ꎻ 竹柏的离体胚经过 ２ ｈ 硅胶快速脱水至含水量 ７％后再冷冻即可获
得 ９０％以上的融后存活率ꎬ 且超低温保存 １年的离体胚解冻后ꎬ 与只保存 １周的存活率没有明显差异ꎬ 表
明超低温长期保存竹柏种子是可行的ꎮ 本研究可以为进一步探究顽拗性种子的短期贮藏和长期保存提供理
论基础和基础资料ꎮ
关键词: 顽拗性种子ꎻ 竹柏ꎻ 脱水耐性ꎻ 湿藏ꎻ 半干藏ꎻ 超低温保存
中图分类号: Ｑ ９４５　 　 　 　 　 　 　 文献标志码: Ａ　 　 　 　 　 　 　 文章编号: ２０９５－０８４５(２０１５)０１－０６３－０８
Ｓｔｏｒａｇｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｒｅｃａｌｃｉｔｒａｎｔ
Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ Ｓｅｅｄｓ∗
ＪＩ Ｍｉｎｇ￣ｙｕｅ１ꎬ２ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｎａｎ１ꎬ２ꎬ ＹＡＮ Ｑｉ１ꎬ２ꎬ ＷＥＮ Ｂｉｎ１∗∗
(１ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｆｏｒｅｓｔ Ｅｃｏｌｏｇｙꎬ Ｘｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ
Ｍｅｎｇｌａꎬ Ｙｕｎｎａｎ ６６６３０３ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４９ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｓｔｕｄｉｅｄ ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｏｐｔｉｍａｌ ｓｔｏｒａｇｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ ｓｅｅｄｓ ａｎｄ ａ￣
ｃｈｉｅｖｅｄ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ: Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ ｓｅｅｄｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｒｅｃａｌｃｉｔｒａｎｔꎬ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｎｉｔｉａｌ ｍｏｉｓ￣
ｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ (３５ ± ０􀆰 ７)％ ａｎｄ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ (１６􀆰 ８６ ± ０􀆰 ７３)％ꎻ ｂｏｔｈ ｍｏｉｓｔ ｓｔｏｒａｇｅ ａｎｄ ｐａｒｔｉａｌｌｙ￣
ｄｒｉｅｄ ｓｔｏｒａｇｅ ｃａｎ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｓｈｏｒｔ￣ｔｅｒｍ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ ｓｅｅｄｓ ｉｎ ｐｒａｃｔｉｃｅꎬ ａｎｄ ｓｔｏｒａｇｅ ａｔ ４ ℃ ｐｒｏ￣
ｄｕｃｅｄ ｂｅｔｔｅｒ ｒｅｓｕｌｔｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ａｔ １５ ℃ꎬ ｂｕｔ ｓｔｏｒａｇｅ ａｔ ｓｕｂ￣ｚｅｒｏ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ｌｅｔｈａｌ ｎｏ ｍａｔｔｅｒ ｗｈａｔ ｓｅｅｄ ｍｏｉｓｔｕｒｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓꎻ Ｉｎ ｔｈｅ ｐａｒｔｉａｌｌｙ￣ｄｒｉｅｄ ｓｅｅｄ ｓｔｏｒａｇｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔꎬ ｔｈｅ ｕｎ￣ｄｒｉｅｄ ｓｅｅｄｓ (ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ) ｈａｄ ｎｏ ｏｂｖｉｏｕｓ ｖｉａｂｉｌｉ￣
ｔｙ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｄｕｒｉｎｇ ６￣ｍｏｎｔｈｓ’ ｓｔｏｒａｇｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ａｔ ４ ℃ ｂｕｔ ｓｅｅｄｓ ａｔ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｈａｄ ｈｉｇｈｅｒ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｈａｎ
ｔｈｏｓｅ ａｔ ｏｔｈｅｒ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ａｆｔｅｒ ９￣ｍｏｎｔｈｓ ｓｔｏｒａｇｅꎻ ｎｏ ｍａｔｔｅｒ ｗｈａｔ ｍｅｄｉａ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｕｓｅｄꎬ ａｎｄ ｗｈｅｔｈ￣
ｅｒ ｓｔｏｒｅｄ ａｔ ４ ℃ ｏｒ １５ ℃ꎬ ９￣ｍｏｎｔｈｓ’ ｍｏｉｓｔ ｓｔｏｒａｇｅ ｄｉｄ ｎｏｔ ｒｅｄｕｃｅ Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｗｈｉｌｅ ｓｅｅｄｓ ｓｔｏｒｅｄ
ａｔ １５ ℃ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ａｔ ４ ℃ ｗｈｅｎ ｓｔｏｒａｇｅ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｔｏ １２ ｍｏｎｔｈｓꎬ ｂｕｔ ｓｏｍｅ ｏｆ ｔｈｅｓｅ
植 物 分 类 与 资 源 学 报　 ２０１５ꎬ ３７ (１): ６３~７０
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ＤＯＩ: １０.７６７７ / ｙｎｚｗｙｊ２０１５１４０２５
∗
∗∗
基金项目: 国家自然科学基金 (３１１７０６２６)
通讯作者: Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｗｅｎｂ＠ｘｔｂｇ􀆰 ｏｒｇ􀆰 ｃｎ
收稿日期: ２０１４－０２－２４ꎬ ２０１４－０４－１０接受发表
作者简介: 计明月 (１９８８－) 女ꎬ 硕士研究生ꎬ 主要从事植物种质资源保存工作ꎮ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｉｓａｂｅｌｌａ０４１０＠１６３􀆰 ｃｏｍ
ｓｅｅｄｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ ｄｕｒｉｎｇ １５ ℃ ｓｔｏｒａｇｅ ａｔ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｍｏｎｔｈꎬ ａｎｄ ｍｏｒｅ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ ｓｅｅｄｓ ｔｈｅｒｅ
ｗｅｒｅ ａｓ ｍｅｄｉａ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｔｏｒａｇｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇꎻ ２ ｈ ｆｌａｓｈ ｄｒｙｉｎｇ ｔｏ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ７％ ｌｅｔ ｍｏｒｅ
ｔｈａｎ ９０％ ｅｘｃｉｓｅｄ ｅｍｂｒｙｏｓ ｓｕｒｖｉｖｅ ｆｒｅｅｚｉｎｇ￣ｔｈａｗ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｏｎｅ￣ｙｅａｒ’ｓ ｃｒｙｏ￣ｓｔｏｒａｇｅ ｍａｄｅ ｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅｉｒ
ｐｏｓｔ ｔｈａｗ ｓｕｒｖｉｖａｌꎬ ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｉｔ ｉｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｔｏ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅ Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ. Ｔｈｅｓｅ ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｃａｎ ｂｅ ｒｅｆｅｒｒｅｄ ｔｏ
ｓｈｏｒｔ￣ ａｎｄ ｌｏｎｇ￣ｔｅｒｍ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃａｌｃｉｔｒａｎｔ ｓｅｅｄｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｒｅｃａｌｃｉｔｒａｎｔ ｓｅｅｄｓꎻ Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉꎻ Ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅꎻ Ｍｏｉｓｔ ｓｔｏｒａｇｅꎻ Ｐａｒｔｉａｌｌｙ￣ｄｒｉｅｄ ｓｔｏｒａｇｅꎻ
Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎꎻ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ
　 竹柏 (Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ) 是罗汉松科 (Ｐｏｄｏ￣
ｃａｒｐａｃｅａｅ) 罗汉松属 (Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ) 多年生常绿乔
木ꎬ 为古老的裸子植物ꎬ 起源于距今约 １亿 ５ ５００
万年前的中生代白垩纪ꎬ 被人们称为 “活化
石”ꎮ 竹柏因叶脉平行似竹叶而得名ꎬ 叶形奇异ꎬ
终年苍翠ꎬ 高可达 ２０ ｍꎬ 树干修直ꎬ 形态优美ꎬ
叶茂荫浓ꎬ 抗病虫害能力强ꎮ 竹柏原产于中国、
日本等地ꎬ 喜温暖环境ꎬ 不耐湿亦不耐旱ꎬ 稍耐
寒ꎬ 是优美的常绿观赏树木ꎬ 常作为景观树和行
道树ꎬ 既可以在公园、 庭园、 住宅小区、 街道等
地段内成片种植ꎬ 也可以与其它常绿落叶树种混
合栽种ꎬ 广泛种植于热带、 亚热带地区ꎮ
根据林业生产的经验ꎬ 竹柏种子不耐贮藏ꎬ
需要随采随播 (曹人智ꎬ ２００１)ꎬ 推测竹柏种子
可能属于顽拗性种子 (Ｆａｒｒａｎｔ 等ꎬ １９８５ꎻ Ｌｉｎ 和
Ｈｕａｎｇꎬ １９９４)ꎮ 顽拗性种子的概念最早由 Ｒｏ￣
ｂｅｒｔｓ (１９７３) 提出ꎬ 是指一类贮藏寿命不随温度
与含水量降低而按种子生命力方程 ( Ｒｏｂｅｒｔｓꎬ
１９７２) 延长的种子ꎬ 具有对低温和脱水敏感、 不
耐贮藏的特点ꎬ 常规种子库的脱水处理和低温、
干燥、 密封保存不仅不能延长这类种子的寿命ꎬ
反而会加速种子的死亡 (文彬ꎬ ２００８)ꎮ 尽管如
此ꎬ 我们对竹柏种子的贮藏特性仍缺乏了解ꎬ 比
如ꎬ 竹柏种子的脱水耐性如何? 最低安全含水量
是多少? 能否耐受低温? 林业生产上需要中短期
贮藏种子ꎬ 常规方法贮藏的适宜条件是什么? 能
贮藏多久? 通常ꎬ 对于生产顽拗性种子的植物ꎬ
超低温保存是种质资源长期离体贮藏的唯一途
径ꎮ 竹柏种子能否超低温保存? 如何进行超低温
保存? 这些问题都亟待解决ꎮ
因此ꎬ 我们开展竹柏种子贮藏特性的研究ꎬ
有助于我们了解竹柏种子的脱水耐性和低温耐
性ꎬ 确定其贮藏行为特征ꎬ 制定切实有效的中短
期保存方法ꎬ 并探讨超低温保存方案ꎬ 这对于林
业生产上因季节或运输的需要而进行中短期保存
种子ꎬ 提高育苗的出苗率ꎬ 以及长期保存种质资
源ꎬ 具有重要意义ꎮ
１　 材料和方法
１􀆰 １　 实验材料
实验所用的种子均于种子成熟季节采自云南省西双
版纳傣族自治州勐腊县勐仑镇中国科学院西双版纳热带
植物园内人工栽培的植株ꎬ 采集时间为 ２０１２ 年 １２ 月ꎮ
种子采收后立即将肉质外种皮去除ꎬ 装进聚乙烯袋并保
存于 １５ ℃待用ꎮ 从种子采收到用于布置实验ꎬ 种子保存
时间不超过一周ꎮ
１􀆰 ２　 实验方法
１􀆰 ２􀆰 １　 种子的脱水耐性实验　 将去除了肉质外种皮的种
子分为 ９份ꎬ 每份 １０８ 粒ꎬ 然后按一层种子一层活性硅
胶的方法将种子放入封闭容器中ꎬ 快速脱水 ０ ｈ、 ６ ｈ、
１２ ｈ、 １８ ｈ、 ２４ ｈ、 ３６ ｈ、 ４８ ｈ、 ６０ ｈ、 ７２ ｈꎬ 获得 ９ 个含
水量梯度的种子ꎬ 每份随即取 ８ 粒种子测定含水量ꎬ 其
余种子播种到 １％琼脂中进行活力评价ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ２　 种子半干藏实验　 按 Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ等 (１９９５) 的方法
设计实验ꎬ 研究含水量、 贮藏温度和贮藏期 ３ 个因素对
半干藏种子活力的影响ꎮ 先把种子用活性硅胶快速脱水
０ ｈ、 ６ ｈ、 １２ ｈ、 １８ ｈ、 ２４ ｈ、 ３６ ｈꎬ 获得 ６个含水量梯度
的种子ꎬ 测定脱水处理后的含水量及活力ꎬ 然后将余下
的种子按 １１０粒为一份ꎬ 用铝箔袋封装好ꎬ 置于 １５ ℃、
４ ℃、 －２０ ℃和－７０ ℃贮藏ꎬ 并分别在贮藏满 １ 周、 １ 个
月、 ３个月、 ６个月、 ９ 个月和 １２ 个月之时ꎬ 从每个贮
藏温度下取出不同含水量的种子各一袋ꎬ 待种子恢复到
室温之后播种到 １％琼脂上进行活力评价ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ３　 种子湿藏实验　 参考Ｗｅｎ (２００９) 的方法ꎬ 将 ５０ ｇ
已经烘干并冷却的珍珠岩放入容积为 ５００ ｍＬ 的塑料瓶
中ꎬ 再分别加 ３０ ｍＬ、 ４５ ｍＬ、 ６０ ｍＬ、 ７５ ｍＬ、 ９０ ｍＬ 蒸
馏水ꎬ 配成含水量为 ６０％、 ９０％、 １２０％、 １５０％、 １８０％
的珍珠岩ꎮ 然后每瓶中放入 １０８粒竹柏种子ꎬ 振荡摇匀ꎬ
加盖但不拧紧ꎬ 分别贮藏于 １５ ℃和 ４ ℃的条件下ꎬ 待贮
藏 １周、 １ 个月、 ３ 个月、 ６ 个月、 ９ 个月和 １２ 个月之
后ꎬ 从每个贮藏温度取出不同含水量的种子各一瓶ꎬ 其
中 ８粒种子用于检测含水量变化ꎬ １００粒种子播种到 １％
琼脂做活力检测ꎮ
４６　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷
１􀆰 ２􀆰 ４　 离体胚的脱水和超低温保存
离体胚的准备　 新采收的种子先去掉外种皮ꎬ 用自
来水冲洗干净ꎬ 然后在超净工作台上用 ７５％的酒精灭菌
３ ｍｉｎꎬ 无菌的去离子水清洗 ２ 次ꎬ 每次 ５ ｍｉｎꎮ 再用
０􀆰 １％的次氯酸钠灭菌 ３０ ｍｉｎꎬ 无菌的去离子水漂洗 ５
次ꎬ 每次 ５ ｍｉｎꎮ 小心切开种子ꎬ 分开胚乳获取完整胚ꎬ
将胚存放在无菌培养皿中的湿滤纸上待用ꎮ
离体胚的脱水和超低温保存 　 离体胚的脱水参照
Ｗｅｎ (２００９) 的方法ꎬ 在超净工作台内将胚摆放在用铝
箔片做成的直径 ２ ｃｍ的小碟中ꎬ 然后将小碟放到盛满活
性硅胶的密闭容器中ꎬ 在室温条件 (２５ ~ ２８ ℃) 下脱水
不同的时间ꎮ
第一个超低温保存实验是研究含水量对超低温保存
结果的影响ꎮ 将离体胚脱水 ０ ~ １２ ｈꎬ 得到 １０ 个含水量
梯度ꎬ 每个梯度 ８０ 粒胚ꎬ 其中 ４０ 粒用于超低温保存ꎬ
４０粒作为对照ꎮ 用于超低温保存的胚ꎬ 每 １０ 粒装入一
冷冻管ꎬ 快速投入到液氮中ꎬ １ 周后取出并迅速投入到
４０ ℃的温水中快速解冻 ６０ ｓꎬ 然后接种到培养基上ꎮ 用
于对照的胚在经过脱水处理后直接进行胚培养ꎮ
第二个超低温保存实验是研究长期液氮贮藏对离体
胚活力的影响ꎮ 用上述方法把离体胚处理到 ３ 个含水量
梯度 (脱水时间为 ２、 ４、 ７ ｈ)ꎬ 装进冷冻管ꎬ 投入液氮
中保存ꎬ 分别于超低温贮藏 １、 ３、 ６、 ９、 １２个月后取出
不同含水量的胚各 ４０粒进行活力评价ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ５　 含水量测定　 使用 ８个重复ꎬ 每个重复含单粒种
子或 １０粒胚ꎬ 分别测定种子或胚的含水量ꎮ 按国际种子
检验协会 (ＩＳＴＡꎬ １９８５) 推荐的测量油料种子含水量的
方法ꎬ 把样品置于鼓风烘箱中在 １０３ ± ２ ℃烘干 １７ ± １ ｈꎬ
以样品烘干前后的重量变化计算含水量 (％)ꎮ
含水量(％)＝ (鲜重－干重) /鲜重×１００％ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ６　 种子活力评价 　 每 ２０ 粒种子播种到装有 １％琼
脂的 １２ ｃｍ 的培养皿中为 １ 个重复ꎬ 每处理 ５ 个重复ꎮ
种子置于恒温萌发箱中ꎬ 在 ２５ ± １ ℃ꎬ 每日 １４ ｈ 光照ꎬ
光强为 ２０ μｍｏｌ􀅰ｍ－２􀅰ｓ－１条件下萌发ꎮ 每周检查一次种
子萌发情况ꎬ 持续 ６ 个月ꎮ 以胚根伸出种皮至少 ５ ｍｍ
记录为萌发ꎬ 以第一片真叶长成记录为成苗ꎮ 不萌发种
子在实验结束时切开种子查看胚是否变软、 腐烂ꎮ
成苗率(％)＝成苗的种子数 /供试种子数×１００％ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ７　 离体胚活力评价 　 采用 Ｃｈｉｎ (１９８８) 改进的 ＭＳ
培养基ꎬ 该培养基包含了 ＭＳ 培养基的基盐ꎬ 每升添加
３０ ｇ蔗糖ꎬ ０􀆰 １ ｍｇ ＮＡＡ和 ０􀆰 １ ｍｇ ＢＡＰꎬ 用 ８ ｇ琼脂固化ꎮ
在 １２１ ℃高压灭菌锅灭菌 １５ ｍｉｎ后分装到直径 ５􀆰 ５ ｃｍ的
一次性塑料培养皿中ꎮ 每培养皿约 １０ ｍＬ 培养基ꎬ 接种
５粒胚ꎬ 置于 ２５ ± １ ℃、 相对湿度约 ５０％的培养房中培
养ꎬ 每周观测一次ꎬ 至少观测 ６ 个月ꎮ 胚有明显生长记
录为存活ꎮ
存活率(％)＝成活的胚数 /供试胚数×１００％ꎮ
１􀆰 ３　 数据的统计分析
根据 ５个重复ꎬ 每个重复含 ２０粒种子的萌发实验结
果计算种子成苗率和存活率的均值和标准差ꎬ 根据 ８ 个
重复ꎬ 每个重复含 ５粒胚的胚培养实验结果计算离体胚
存活率的均值和标准差ꎮ 成苗率和存活率在经过反正弦
转换之后做方差分析ꎬ 并在 ａ ＝ ０􀆰 ０５ 水平上做处理间的
多重比较ꎮ
２　 结果
２􀆰 １　 竹柏种子的脱水耐性
将新采收的竹柏种子用活性硅胶快速脱水 ０ ｈ、
６ ｈ、 １２ ｈ、 １８ ｈ、 ２４ ｈ、 ３６ ｈ、 ４８ ｈ、 ６０ ｈ、 ７２ ｈꎬ
其含水量由 (３５􀆰 ７８ ± ０􀆰 ６７)％下降到 (６􀆰 ２６ ±
０􀆰 ４８)％ꎬ 成苗率由 ( ９８􀆰 ３３ ± １􀆰 ０５)％下降到
(６􀆰 ２５ ± １􀆰 ９５)％ꎬ 存活率由 (９８􀆰 ３３ ± １􀆰 ０５)％下
降到 (１１􀆰 ２５ ± １􀆰 ９５)％ꎮ 明显地ꎬ 在脱水处理 ２４ ｈ
的地方存在一个拐点ꎬ 含水量在 (１６􀆰 ８６ ± ０􀆰 ７３)％
及以上的种子其成苗率和存活率并没有明显变
化ꎬ 而含水量下降到 (１３􀆰 ４２ ± ０􀆰 ６９)％以后ꎬ 成
苗率和存活率显著下降ꎬ 且随着含水量的每一次
降低成苗率和存活率都有明显的下降ꎬ 当含水量
为 (６􀆰 ２６ ± ０􀆰 ４８)％时成苗率仅为 (６􀆰 ２５ ± １􀆰 ９５)％ꎮ
说明竹柏种子对脱水处理敏感ꎬ 其最低安全含水
量在 (１６􀆰 ８６ ± ０􀆰 ７３)％附近 (图 １)ꎮ
２􀆰 ２　 竹柏种子的半干藏
将竹柏种子用硅胶快速脱水 ０、 ６、 １２、 １８、
图 １　 脱水处理对竹柏种子含水量、 成苗率
和存活率的影响
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ ｓｅｅｄｓ ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ａｆｔｅｒ ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
５６１期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 计明月等: 顽拗性竹柏种子的贮藏特性　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
２４和 ３６ ｈ后密封在铝箔袋中分别贮藏在－７０ ℃、
－１８ ℃、 ４ ℃和 １５ ℃条件下ꎮ 在 １２ 个月的贮藏
期内ꎬ 发现种子的含水量、 贮藏温度和贮藏时间
均对种子的生命力有显著的影响 (表 １)ꎬ 且三
者间的独立与交互作用都极显著 (表 ２)ꎮ
零下低温贮藏对竹柏种子来说是致命的ꎬ 在
－１８ ℃或－７０ ℃条件下ꎬ 即使只是贮藏 １ 周ꎬ 也
没有种子能够存活下来 (数据未列出)ꎮ 在 ４ ℃
和 １５ ℃条件下贮藏的竹柏种子ꎬ 萌发率均随贮
藏时间的延长而下降ꎬ 但由于含水量和贮藏温度
不同ꎬ 萌发率下降的速度也不一样ꎮ 在 １５ ℃贮
藏的种子ꎬ 以未脱水的种子 (对照) 萌发率保存
最好ꎬ 含水量越低ꎬ 萌发率下降越快ꎻ 贮藏 ３ 个
月后ꎬ 初始含水量的种子保存有近四成的发芽
率ꎬ 其余处理仅临界含水量的种子有 １５％的萌
发率ꎻ ６个月后ꎬ 贮藏于 １５ ℃的种子无一萌发ꎮ
贮藏在 ４ ℃的竹柏种子ꎬ 萌发率保存明显优于
１５ ℃贮藏的种子ꎬ 但亦以临界含水量以下的种
子萌发率下降最快ꎻ 在不超过 ３ 个月的贮藏期
内ꎬ 除低于临界含水量的种子外ꎬ 其余含水量的
种子萌发率降低不多ꎬ 且含水量越高ꎬ 萌发率变
化越小ꎻ 贮藏到 ６个月时ꎬ 初始含水量的种子萌
发率仍高达 ９８％ꎬ 临界含水量的种子有六成以上
可以萌发成苗ꎻ 贮藏期延长到 ９个月时ꎬ 临界含
水量的种子萌发率最高ꎬ 仍有一半以上的种子萌
发ꎻ 到 １２个月时ꎬ ４ ℃贮藏的种子亦基本全部
死亡ꎮ
因此ꎬ 竹柏种子可以在零上低温以半干藏
的方式贮藏ꎬ 且 ４ ℃贮藏明显优于 １５ ℃贮藏ꎬ
在 ４ ℃条件下ꎬ 贮藏 ６个月的种子以初始含水量
的种子萌发率最高ꎬ 而贮藏 ９个月的种子以临界
含水量的种子萌发率最高ꎮ
２􀆰 ３　 竹柏种子的湿藏
本实验研究了在 １２ 个月的贮藏期内ꎬ １５ ℃
和 ４ ℃两个贮藏温度及珍珠岩贮藏介质的含水量
对种子活力的影响ꎮ 方差分析表明ꎬ 在 ９个月的
贮藏期内ꎬ 贮藏温度和贮藏介质的含水量对竹柏
种子的活力没有显著影响 (贮藏时间: Ｆ ＝ ３􀆰 ４２１ꎬ
Ｐ ＝ ０􀆰 ０６６ꎻ 贮藏介质含水量: Ｆ ＝ ０􀆰 ５５８ꎬ Ｐ ＝
０􀆰 ６９３)ꎻ 不论珍珠岩含水量的高低ꎬ 也不管是
在 １５ ℃还是在 ４ ℃贮藏ꎬ 只要贮藏期不超过 ９
个月ꎬ 种子的成苗率均在 ９０％以上ꎮ 但贮藏到
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６６　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷
表 ２　 半干藏过程中贮藏时间、 贮藏温度和含水量对种子生命力影响的方差分析
Ｔａｂｌｅ ２　 ＡＮＯＶＡ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅꎬ ｓｔｏｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｎ
ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｐａｒｔｉｃａｌｌｙ￣ｄｒｉｅｄ ｓｔｏｒａｇｅ (Ｐ<０􀆰 ０５)
Ｓｏｕｒｃｅ∗ ＳＳ ｄｆ ＭＳ Ｆ Ｓｉｇ.
Ｔｉ ３４８ ８４９􀆰 ９３２ ６ ５８ １４１􀆰 ６５５ ７３９􀆰 ０５１ ０􀆰 ０００
Ｔｅ ４４ ３７７􀆰 １４２ １ ４４ ３７７􀆰 １４２ ５６４􀆰 ０８７ ０􀆰 ０００
ＭＣ ３０ ０３１􀆰 ８８９ ５ ６ ００６􀆰 ３７８ ７６􀆰 ３４８ ０􀆰 ０００
Ｔｉ∗Ｔｅ ６２ ０４５􀆰 ８３３ ６ １０ ３４０􀆰 ９７２ １３１􀆰 ４４６ ０􀆰 ０００
Ｔｉ∗ＭＣ １２ ９３０􀆰 ３５４ ３０ ４３１􀆰 ０１２ ５􀆰 ４７９ ０􀆰 ０００
Ｔｅ∗ＭＣ ６ ８５５􀆰 ９３８ ５ １ ３７１􀆰 １８８ １７􀆰 ４２９ ０􀆰 ０００
Ｔｉ∗Ｔｅ∗ＭＣ １３ ２２２􀆰 ８１５ ３０ ４４０􀆰 ７６０ ５􀆰 ６０３ ０􀆰 ０００
∗ Ｔｉ: Ｓｔｏｒａｇｅ Ｔｉｍｅꎻ Ｔｅ: Ｓｔｏｒａｇｅ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ: ＭＣ: Ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｃｏｎｔｅｎｔ
１２个月时ꎬ ４ ℃贮藏种子的萌发率明显低于 １５ ℃
贮藏的种子 (贮藏时间: Ｆ ＝ ９􀆰 ６４８ꎬ Ｐ<０􀆰 ００１ꎻ
贮藏温度: Ｆ＝ ２０􀆰 ３４８ꎬ Ｐ<０􀆰 ００１) (表 ３)ꎮ
虽然ꎬ 竹柏种子在 １５ ℃条件下贮藏活力较
高ꎬ 但贮藏 ３个月后取出时ꎬ 发现部分种子已经
开始萌发ꎬ 萌发率从 ５％至 ２５％ꎬ 珍珠岩含水量
越高ꎬ 贮藏时间越长ꎬ 萌发的种子就越多ꎬ 贮藏
到 １２个月时ꎬ 在含水量 １８０％珍珠岩中贮藏的种
子 ８５％已经成苗 (表 ４)ꎮ 而 ４ ℃贮藏条件下ꎬ
无论珍珠岩含水量的高低ꎬ 贮藏 １２ 个月仍然没
有发现有种子在贮藏期间萌发ꎮ
所以ꎬ 若贮藏期不超过 ９个月ꎬ 湿藏竹柏种
子的萌发率不会发生明显的改变ꎬ 且在 ４ ℃贮藏
可以避免发生贮藏期间种子萌发的情况ꎻ 若在
１５ ℃贮藏ꎬ 降低珍珠岩的含水量也可以减少贮
藏期间种子萌发情况的发生ꎮ
２􀆰 ４　 离体胚的脱水和超低温保存
第一个实验是研究胚的含水量与胚存活的关
系ꎮ 根据实验结果判断ꎬ 离体胚对脱水处理表现
出很高的耐性ꎬ 即便是在活性硅胶中处理 １２ ｈ
脱水到 (３􀆰 ０４ ± ０􀆰 ２０)％ꎬ 胚的存活率也没有发
生明显的变化 (图 ２)ꎮ 因此ꎬ 竹柏种子的离体
胚具有比整粒种子高得多的脱水耐性ꎮ
竹柏胚的初始含水量高达 ５６％ꎬ 直接投入
液氮中基本都被冻死ꎬ 即使少数幸存也只是部分
细胞存活ꎮ 冷冻前进行脱水处理就可以很好的解
决冷冻伤害这一问题ꎮ 用硅胶脱水 １ ｈ 再投入液
氮ꎬ 即可以让 ８０％的胚存活ꎬ 尽管无一成苗ꎬ
但都长出了明显的愈伤组织ꎻ 冷冻前脱水 ２ ｈ 到
含水量 ７％ꎬ 胚的存活率可以提高到 ９０％ꎮ 离体
胚的快速脱水是超低温保存成功的关键ꎬ 胚的含
水量从 １０％到 ５％ꎬ 每次降低都可以进一步提高
解冻后离体胚的存活率ꎬ 脱水 ３ ｈ 是最佳的处理
时间ꎬ 冻融处理后胚的存活率达到 １００％ꎮ 脱水
时间超过 ３ ｈꎬ 解冻后胚的存活率又有所下降ꎬ
但仍高于 ９０％ (图 ２)ꎮ
表 ３　 湿藏过程中竹柏种子的生命力变化
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｕｎｄｅｒ ｍｏｉｓｔ ｓｔｏｒａｇｅ
贮藏温度
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
/ ℃
珍珠岩
含水量
Ｍｅｄｉｕｍ ＭＣ/ ％
种子成苗率 Ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ / ％
０􀆰 ２５ ｍｏｎｔｈ １ ｍｏｎｔｈ ３ ｍｏｎｔｈ ６ ｍｏｎｔｈ ９ ｍｏｎｔｈ １２ ｍｏｎｔｈ
６０ ９７􀆰 ００ ± １􀆰 ２２ ９８􀆰 ００ ± １􀆰 ２２ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ ８１􀆰 ４３ ± ８􀆰 ４０ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ ９８ ± ２􀆰 ００
９０ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ ９３􀆰 ００ ± ３􀆰 ７４ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ ９４􀆰 ００ ± ２􀆰 ９２ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ ７６ ± １０􀆰 ３０
１５ １２０ ９９􀆰 ０５ ± ０􀆰 ９５ １００􀆰 ００ ９５􀆰 ００ ± ３􀆰 ８７ ９２􀆰 ００ ± ４􀆰 ９０ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ １００􀆰 ００
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４ １２０ ９２􀆰 ２７ ± ２􀆰 ８５ ９８􀆰 ００ ± １􀆰 ２２ ９３􀆰 ５２ ± ２􀆰 ８９ ９６􀆰 ００ ± ２􀆰 ９２ ９１􀆰 ００ ± ４􀆰 ８５ ５９ ± １２􀆰 ７９
１５０ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ ９５􀆰 ８９ ± １􀆰 ８９ ９６􀆰 ００ ± １􀆰 ８７ ９７􀆰 ００ ± ３􀆰 ００ ６５ ± １３􀆰 ６０
１８０ ９３􀆰 ００ ± ３􀆰 ３９ ９８􀆰 ００ ± １􀆰 ２２ ９９􀆰 ００ ± １􀆰 ００ ９３􀆰 ００ ± １􀆰 ２２ ９１􀆰 ００ ± ５􀆰 ５７ ７６ ± ７􀆰 ８１
７６１期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 计明月等: 顽拗性竹柏种子的贮藏特性　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
表 ４　 １５ ℃下湿藏过程中竹柏种子的萌发
Ｔａｂｌｅ ４　 Ｅａｒｌｙ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ ｓｅｅｄｓ ｕｎｄｅｒ ｍｏｉｓｔ ｓｔｏｒａｇｅ ａｔ １５ ℃
珍珠岩含水量
Ｍｅｄｉｕｍ ＭＣ / ％
种子成苗率 Ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ / ％
０􀆰 ２５ ｍｏｎｔｈ １ ｍｏｎｔｈ ３ ｍｏｎｔｈ ６ ｍｏｎｔｈ ９ ｍｏｎｔｈ １２ ｍｏｎｔｈ
６０ ０ ０ ５ ４ １７ １９
９０ ０ ０ １９ ２５ ４３ ４６
１２０ ０ ０ １１ ４１ ５０ ６１
１５０ ０ ０ ２４ ６１ ４６ ８１
１８０ ０ ０ ２５ ７４ ６３ ８５
图 ２　 脱水及超低温处理对竹柏胚存活率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｒｙｏ￣ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｏｆ ｅｘｃｉｓｅｄ Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｎａｇｉ ｅｍｂｒｙｏｓ
第二个实验是研究长期液氮保存对竹柏离体
胚活力的影响ꎮ 取含水量在 ７％到 ４％之间 ３ 个
梯度 (分别对应脱水 ２ ｈ、 ４ ｈ和 ７ ｈ) 的胚ꎬ 投入
液氮中贮藏不同的时间ꎬ 调查解冻后胚的存活
率变化ꎮ 结果表明: 解冻后 ９０％的胚都长出了
愈伤组织ꎬ 在液氮中保存 １年的胚与只保存 １ 周
的相比ꎬ 存活率并没有发生显著的改变 (数据未
列出)ꎻ 说明竹柏离体胚的超低温保存不受贮藏
期的影响ꎬ 在液氮中长期保存竹柏种质资源是可
行的ꎮ
３　 讨论
竹柏种子对脱水和低温处理都很敏感ꎬ 不能
按常规方法在种子库中长期保存ꎬ 即先在 １５ ℃
和 １５％相对湿度脱水到平衡含水量ꎬ 然后贮藏
在－１８ ℃及以下温度ꎻ 半干藏的种子活力保存不
超过一年ꎬ 湿藏在 １５ ℃的种子 ３ 个月即开始在
贮藏过程中萌发ꎬ 湿藏在 ４ ℃的种子一年后观察
到了明显的活力下降ꎮ 落果时含水量高、 对低温
和脱水敏感、 不耐贮藏等这些都是顽拗性种子的
典型特点 (Ｒｏｂｅｒｔｓꎬ １９７３)ꎬ 据此可以判定本研
究中所用的竹柏种子为顽拗性种子ꎮ
顽拗性种子的贮藏目前仍然是亟待解决的重
大科学问题ꎮ 生产实践中因为种子成熟期与播种
期不一致或者因为种源地与种子播种地相距遥远
需要长途运输时ꎬ 均需要中短期贮藏种子ꎮ 竹柏
种子在秋天成熟并落果ꎬ 虽然部分种子可以在树
上宿存至次年二月ꎬ 但宿存的种子绝大部分已经
不能萌发 (Ｗａｎｇ等ꎬ ２００４)ꎮ 因此ꎬ 一般需要在
种子成熟后的十月至十二月份采集种子ꎬ 但是播
种却在第二年春天的三四月份ꎬ 生产上如何贮藏
竹柏种子就显得很重要ꎮ
林业生产上常用半干藏的方法贮藏顽拗性种
子ꎬ 并有一些成功的实例ꎬ 如橡胶种子用半干藏
法贮藏 １３个月后仍有约 ２０％的萌发率 (Ｎｏｏｒ 和
Ｃｈｉｎꎬ １９８９)ꎬ 咖啡 (Ｓｅｌｍａｒ 等ꎬ ２００８)ꎬ 南洋杉
(Ｔｏｍｐｓｅｔｔꎬ １９８４) 和龙脑香 (Ｔｏｍｐｓｅｔｔꎬ １９８７) 用
此法贮藏也延长了寿命ꎮ 该方法的关键点是确定
最适宜的种子含水量和贮藏温度ꎮ 本研究中的竹
柏种子ꎬ 其最低安全含水量在 １６􀆰 ８６％左右ꎮ 除
了在－１８ ℃和－７０ ℃下贮藏的种子完全丧失生命
力而失去贮藏价值外ꎬ 在 １５ ℃和 ４ ℃这两个温
度下贮藏的种子均可以中短期保持生命力ꎬ 其活
力都随贮藏时间的增长而降低ꎮ 未经脱水处理的
种子在 ４ ℃贮藏半年ꎬ 成苗率仍高达 ９８％ꎬ 脱水
到 １８％的种子ꎬ ４ ℃贮藏 ９ 个月后ꎬ 成苗率仍然
高达 ５６％ꎮ 然而当贮藏温度为 １５ ℃时ꎬ 即使只
是贮藏 ３ 个月ꎬ 竹柏种子的成苗率已经非常低ꎬ
贮藏 ６个月的种子已全部死亡ꎮ 我们的实验表明ꎬ
半干藏可以作为顽拗性竹柏种子短期贮藏的一种
方法ꎬ ４℃低温保存可以延长贮藏期ꎬ 且根据竹柏
８６　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷
种子的脱水耐性对种子进行适度的脱水处理ꎬ 有
助于降低种子的代谢强度ꎬ 延长其贮藏寿命ꎮ
生产上另一种常用的中短期贮藏顽拗性种子
的方法是湿藏ꎮ 通常的做法是把种子跟珍珠岩、
蛭石、 锯末、 椰糠、 木炭或湿沙等持水介质混合
在一起ꎬ 保持种子含水量相对稳定ꎬ 避免贮藏期
间的脱水伤害ꎮ 同样需要把种子贮藏在尽可能低
但又不至于导致寒害发生的温度下ꎬ 使种子的劣
变减缓到最小ꎮ 可以参考 Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ等 (１９９５) 贮
藏南洋杉种子的方法ꎬ 通过计算种子萌发速率的
基础温度确定种子湿藏的适宜温度ꎮ 据报道ꎬ 早
在 １９４３年 Ｍａｒｒｅｒｏ等就证明用控制温度和湿度的
办法ꎬ 可延长多种热带植物种子的寿命ꎮ 而后ꎬ
龙脑香 (宋学之ꎬ １９８２)ꎬ 海南坡垒 ( Ｓｏｎｇ 等ꎬ
１９８４) 等植物的种子也用湿藏的方法延长了种子
的贮藏期ꎮ 我们将竹柏种子与不同含水量的珍珠
岩混合后ꎬ 贮藏在 １５ ℃和 ４ ℃两个温度ꎮ 结果
表明ꎬ 在 １５ ℃情况下ꎬ 因种子生命活动旺盛ꎬ
容易在贮藏期间发芽而失去保存价值ꎮ 将贮藏 ３
个月的种子取出ꎬ 发现已经有竹柏种子开始大量
萌发ꎬ 之后相当于幼苗贮藏ꎮ 但是ꎬ 我们注意
到ꎬ 降低贮藏介质的含水量ꎬ 可以有效减少贮藏
过程中种子的萌发ꎮ 而在 ４ ℃情况下ꎬ 即便贮藏
１２个月ꎬ 也没有发现种子在贮藏过程中萌发ꎮ
因此ꎬ 用湿藏的方法保存竹柏种子ꎬ 必须调节介
质的含水量ꎬ 并且控制贮藏温度ꎮ
半干藏虽然可以适当延长竹柏种子的寿命ꎬ
但是其保存时间仍然很短ꎮ 湿藏虽然取得了比半
干藏好的效果ꎬ 但是ꎬ 此方法增加了保存材料的
重量和体积ꎬ 并可能导致种子在贮藏期间萌发ꎮ
竹柏种子的湿藏和半干藏均以 ４ ℃贮藏优于 １５ ℃
贮藏ꎬ 这可能跟该物种原产于亚热带地区、 种子
具有一定的低温耐性有关ꎻ 热带起源的顽拗性种
子ꎬ 如坡垒ꎬ 其安全含水量在 ３３％ ~ ３８％ꎬ 贮藏
温度在 １５ ~ ２０ ℃时合适ꎬ 当含水量下降到 ２０％
时全部死亡 (陈青度等ꎬ １９８２)ꎻ 红椎种实在安
全含水量 ３２％~３７％ꎬ 温度在 １５~２０ ℃时贮藏合
适ꎬ 过高或过低的含水量或温度都不利其贮藏
(宋学之等ꎬ １９９２)ꎮ
因此ꎬ 半干藏和湿藏两种方法ꎬ 都只能作为
顽拗性竹柏种子的中短期贮藏手段ꎬ 而超低温
保存成为长期贮藏竹柏种质资源的唯一选择
(Ｅｎｇｅｌｍａｎｎꎬ ２０００ꎬ ２００４ꎻ Ｂｅｒｊａｋ 和 Ｐａｍｍｅｎｔｅｒꎬ
２００１ꎬ ２００４ꎬ ２０１４ꎻ Ｐａｍｍｅｎｔｅｒ 和 Ｂｅｒｊａｋꎬ ２０１４)ꎮ
有几种温带顽拗性种子和亚正常性种子ꎬ 在超
低温保存 １０ 年后仍保持 ８０％以上的存活率
(Ｐｅｎｃｅꎬ ２００４)ꎮ 本研究发现ꎬ 竹柏离体胚的脱
水耐性明显高于整粒种子ꎬ 且在脱水到含水量低
于 １５％后就可以耐受超低温处理ꎬ 超低温保存 １
年后其活力没有发生明显的变化ꎮ 虽然在本实验
中可能是因为培养基或培养条件不理想ꎬ 我们没
有能够把竹柏离体胚ꎬ 包括液氮冻存和未经过冻
融处理的离体胚培养成苗ꎬ 但我们的研究证实超
低温长期保存顽拗性竹柏种子是有希望的ꎬ 这就
为顽拗性竹柏种子的长期保存指明了方向ꎮ
４　 小结
竹柏种子的最低安全含水量为 ( １６􀆰 ８６ ±
０􀆰 ７３)％ꎬ 贮藏过程中保持竹柏种子含水量不低
于最低安全含水量ꎬ 湿藏和半干藏均可以达到中
短期保存种子的目的ꎬ 湿藏的种子可以保持较高
的生命力但易于在贮藏期间萌发ꎬ 而半干藏的种
子避免了贮藏期间萌发但种子活力降低迅速ꎬ 这
两种方法均以 ４ ℃贮藏效果优于 １５ ℃ꎮ
离体胚脱水到 ７％及以下就可以耐受超低温
冻融处理ꎬ 而且离体胚在液氮中保存一年后存活
率没有发生变化ꎮ 超低温保存是长期保存竹柏
种质资源的唯一方法ꎬ 下一步需要优化竹柏离体
胚培养的条件ꎬ 实现超低温保存后离体胚的恢
复成苗ꎮ
〔参　 考　 文　 献〕
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