全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 4 期 2016 年 2 月

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一测多评法测定菊苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 的量
朱春胜，林志健，牛红娟，王雪洁，王红坡，孙小霞，王 雨，周 月，聂安政，肖明良，张 冰*
北京中医药大学中药学院，北京 100029
摘 要：目的 建立菊苣 Cichorium intybus 中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 的一测多评方法。方法 以秦
皮乙素为内参物，分别建立绿原酸、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 的相对校正因子，并用该校正因子进行绿原酸、异绿原酸 B
和异绿原酸 A 量的计算（计算法），实现一测多评；同时采用外标法测定菊苣中 4 种成分的量（实测法），并比较计算值与
实测值间的差异性，验证所建立方法的准确性、适用性和重复性。结果 8 批菊苣中绿原酸、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 量
的计算值与实测值无显著差异。实验建立的菊苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 的一测多评法准确性、可
行性、重复性好。结论 一测多评法测定菊苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 的质量评价模式得到了验证，
可用于菊苣药材的质量控制。
关键词：一测多评；菊苣；绿原酸；秦皮乙素；异绿原酸 B；异绿原酸 A
中图分类号：R286.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)04 - 0666 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.04.023
Simultaneous determination of chlorogenic acid, aesculetin, isochlorogenic acid B,
and isochlorogenic acid A in Cichorii Herba by QAMS
ZHU Chun-sheng, LIN Zhi-jian, NIU Hong-juan, WANG Xue-jie, WANG Hong-po, SUN Xiao-xia, WANG Yu,
ZHOU Yue, NIE An-zheng, XIAO Ming-liang, ZHANG Bing
School of Chinese Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China
Abstract: Objective To establish the quantitative analysis of multi-components by single marker (QAMS) method to determine the
content of chlorogenic acid, aesculetin, isochlorogenic acid B, and isochlorogenic acid A in Cichorii Herba (chicory). Methods
Selecting aesculetin as the internal reference substance, the relative correction factors (RCF) of chlorogenic acid, isochlorogenic acid B
and isochlorogenic acid A were established respectively, and then the contents of the three constituents were calculated by RCF, to
achieve the quality of chicory through QAMS. At the same time, the external standard method was used to determine the content of
four constituents in chicory and compare the difference between calculated values and measured values, so as to verify the construction
method for accuracy, applicability, and repeatability. Results No significant difference was observed in chlorogenic acid,
isochlorogenic acid B, and isochlorogenic acid A from eight batches of chicory in the quantitative results by these two methods. The
validated QAMS method had good precision, reproducibility, and reliability. Conclusion The established QAMS method is suitable
and feasible for the quality control of chicory.
Key words: quantitative analysis of multi-components by single marker; Cichorii Herba; chlorogenic acid; aesculetin; isochlorogenic
acid B; isochlorogenic acid A

菊苣 Cichorii Herba 为菊科（Compositae）植物
毛菊苣 Cichorium glandulosum Boiss. et Huet. 或菊
苣 C. intybus L. 的干燥地上部分或根，具有清肝利
胆、健胃消食、利尿消肿的作用[1]。菊苣中主要含
有酚酸、香豆素、倍半萜、三萜、多糖、生物碱类
等成分[2-3]。研究发现菊苣中香豆素类中的秦皮甲
素、秦皮乙素具有保肝作用[4-5]；酚酸类中的绿原酸
具有抗菌、抗病毒、抗诱变、抗过敏作用[6]；异绿

收稿日期：2015-07-03
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81403152）；教育部高等学校博士学科点专项科研基金（20130013120001，20120013130002）；北京
中医药大学青年教师专项自主课题（2013-QNJSZX008）；北京中医药大学科研创新团队（2011-CXTD-014）；北京中医药大学自主
课题项目（2015-JYB-XS074）
作者简介：朱春胜（1987—），男，硕士研究生，研究方向为中药防治代谢性疾病的研究。Tel: 15910387220 E-mail: zhuchunsheng6@163.com
*通信作者 张 冰，医学博士，教授，博士生导师，研究方向为中药防治代谢性疾病的基础与临床研究，中药药性理论实质研究，中药不良
反应与警戒理论研究。Tel: (010)64286335 E-mail: zhangbing6@263.net
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原酸 B 和异绿原酸 A 具有潜在的降尿酸作用[7]。目
前《中国药典》2010 年版中对菊苣相应成分测定中
还未制定标准，而上述成分在菊苣荷药材中的量较
高且活性较好，具有代表性，有必要将其纳入菊苣
药材质量控制和评价体系。
中药的多成分、多功效的作用特点，决定着
单一成分难以表达中药的内在质量，因此，应选
择多成分、多指标的测定，对与功效相关的化学
成分进行全面综合的评价。但多指标质量控制面
临着对照品短缺及相应的检测成本费用高等问
题，为解决这一问题，中医药领域提出了一种新
的评价中药内在质量模式，即一测多评法
（ quantitative analysis of multi-components by
single marker，QAMS）。QAMS 以样品中某一成
分为内参物，建立该成分与其他成分间的相对校
正因子，通过相对校正因子计算其他成分量[7]。
该方法具有快速、简便并能同时实现多成分同步
测定等优点[8-10]，已被《中国药典》2010 年版收
录[1]。因此本实验采用 QAMS 技术，以秦皮乙素
为内参物，计算绿原酸、异绿原酸 B 和异绿原酸
A 的相对校正因子，建立菊苣药材的 QAMS 方法，
为菊苣质量控制提供新的评价模式。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Shimadzu LC-2010AHT 高效液相色谱系统（日
本岛津公司），Agilent 1100 series 液相色谱仪系统
（美国 Agilent 公司），Waters 1525 型高效液相色谱
仪（美国 Waters 公司）；色谱柱：Agilent Zorbax
SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），Agilent Eclipse
XOB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），日本资生堂
CAPCELL PAK-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；
Sartorious BT 125D 1/10 万分析天平（北京赛多利斯
仪器有限公司）；KQ-500DE 型数控超声仪（昆山市
超声仪器有限公司）；DFT-100 中药粉碎机（温岭市
大德中药机械有限公司）。
1.2 材料
绿原酸（批号MFCD00003862，质量分数≥95%）
购自 Sigma 公司；异绿原酸 A、异绿原酸 B、秦皮乙
素（质量分数均≥99.0%）购于成都普瑞科技有限公司。
菊苣药材采收或购自新疆、辽宁、山东等地。
经北京中医药大学中药学院中药鉴定教研室闫永红
教授鉴定为菊科植物菊苣 Cichorium intybus L. 的
干燥地上部分。甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，
其余试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 HPLC 色谱条件
Agilent Zorbax SB-C18，检测波长 254 nm，柱
温 30℃，体积流量 1 mL/min，进样量 10 μL。流动
相为 0.1%甲酸水（A）-甲醇（B），梯度洗脱：0～
2 min，23% B；2～15 min，23%～33% B；15～20
min，33%～40% B；20～27 min，40%～42% B；
27～40 min，42%～60% B。在上述色谱条件下，各
组分分离度良好，色谱图见图 1。


1-绿原酸 2-秦皮乙素 3-异绿原酸 B 4-异绿原酸 A
1-chlorogenic acid 2-aesculetin 3-isochlorogenic acid B
4-isochlorogenic acid A
图 1 混合对照品 (A) 和菊苣样品 (B) 的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A) and chicory sample (B)
2.2 方法学考察
2.2.1 混合对照品溶液的制备 分别取绿原酸、秦
皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 对照品适量，精
密称定，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解，定容至
刻度，配制成质量浓度为绿原酸 25.5 ng/μL、秦皮
乙素 32.3 ng/μL、异绿原酸 B 26.8 ng/μL、异绿原酸
A 26.8 ng/μL 的混合对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称定菊苣药材粉末
（过 40 目筛）1 g，置 25 mL 量瓶中，加入 100%甲
醇 25 mL，密塞，超声提取 30 min，100%甲醇补足
减失的质量，取上清液过 0.45 μm 滤膜，即得。
2.2.3 线性关系考察 取混合对照品溶液，精密吸
取上述混合对照品溶液 1、2、5、10、15、20 μL 分
别进样，以进样量对峰面积积分值进行回归处理，
得到绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A
的标准曲线，结果见表 1。
2.2.4 菊苣中待测成分相对校正因子的计算 在
“2.1”项确定的 HPLC 色谱分析条件下，精密吸取
“2.2.1”项混合对照品溶液 10 μL，测定各成分的峰
面积。以秦皮乙素为内参物，根据相对校正因子计
算公式，分别计算绿原酸、异绿原酸 B、异绿原酸
A 的相对校正因子，结果见表 2。
0 8.70 17.40 26.09 34.79
t/min
1
2 3 4
1 2
3 4
A
B
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表 1 绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 的标准曲线
Table 1 Standard curves of chlorogenic acid, aesculetin, isochlorogenic acid B, and isochlorogenic acid A in chicory
化合物 标准曲线 R2 线性范围/μg
绿原酸 Y＝1 076 497 X－1 017.76 0.999 7 0.025 5～0.510 0
秦皮乙素 Y＝1 442 089 X－2 147.73 0.999 8 0.032 3～0.645 0
异绿原酸 B Y＝1 654 120 X－2 359.08 0.999 8 0.026 8～0.535 0
异绿原酸 A Y＝1 896 033 X－4 229.39 0.999 9 0.026 8～0.535 0

表 2 绿原酸、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 的相对校正因子
Table 2 RCF of chlorogenic acid, isochlorogenic acid B, and
isochlorogenic acid A
相对校正因子 编号
绿原酸/秦皮乙素 异绿原酸B/秦皮乙素 异绿原酸A/秦皮乙素
1 1.327 2 0.869 6 0.763 8
2 1.335 9 0.873 2 0.766 7
3 1.334 6 0.874 2 0.768 3
4 1.335 3 0.871 3 0.764 1
5 1.336 3 0.872 0 0.766 1
平均值 1.333 9 0.872 1 0.765 8
RSD/% 0.25 0.18 0.22

2.2.5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10
μL 分别于配制后的 0、2、8、12、24、36 h 记录峰
面积，绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B、异绿原酸
A 的 RSD 分别为 1.25%、1.34%、1.43%和 1.32%。
表明处理后的供试品溶液在 36 h 内稳定。
2.2.6 重复性试验 精密称取同一菊苣药材粉末 1
g，共 6 份，制备供试品溶液，依法测定，计算绿原
酸、秦皮乙素、异绿原酸 B、异绿原酸 A 质量分数
的 RSD 分别为 0.27%、4.24%、2.53%、3.10%，表
明该方法的重复性良好。
2.2.7 精密度试验 精密吸取上述混合对照品溶
液 10 μL，在上述色谱条件下，重复进样 7 次，测
得峰面积，计算峰面积的 RSD，绿原酸、秦皮乙素、
异绿原酸 B、异绿原酸 A 的 RSD 分别为 0.74%、
0.96%、0.51%、0.33%，均小于 2.0%。
2.2.8 加样回收率试验 取同一批已测定的菊苣
药材粉末约 0.5 g，6 份，精密称定，分别精密加
入一定量的绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B、异
绿原酸 A 混合对照品溶液，按“2.2.2”项下方法
制备供试品溶液，精密吸取上述供试品溶液 10
μL。依法测定，计算回收率，绿原酸、秦皮乙素、
异绿原酸 B、异绿原酸 A 的平均加样回收率分别
为 102.04%、96.77%、96.78%、95.94%，RSD 分
别为 0.88%、0.51%、1.42%、1.49%，表明该方法
的准确度良好。
2.3 校正因子重现性考察
2.3.1 色谱柱考察 在“2.1”项确定的 HPLC 色谱
分析条件下，精密吸取“2.2.1”项混合对照品溶液
10 μL，采用 Shimadzu 高效液相色谱仪，分别考察
3 种不同品牌的色谱柱对菊苣酸相对校正因子的影
响，结果见表 3，表明不同色谱柱所得到的相对校
正因子基本一致。
表 3 不同色谱柱对相对校正因子的影响
Table 3 Effect of different columns on RCF
相对校正因子
色谱柱
绿原酸/秦皮乙素 异绿原酸B/秦皮乙素 异绿原酸A/秦皮乙素
ZORBAX SB-C18 1.327 2 0.869 6 0.763 8
Eclipse XOB-C18 1.331 2 0.877 2 0.731 1
CAPCELL 1.371 4 0.898 5 0.750 6
平均值 1.343 3 0.881 8 0.748 5
RSD/% 1.82 1.70 2.20

2.3.2 高效液相色谱考察 在“2.1”项确定的
HPLC 色谱分析条件下，精密吸取“2.2.1”项混合
对照品溶液 10 μL，考察 Shimadzu、Waters 1525
和 Agilent 1100 3 种高效液相色谱仪对相对校正因
子的影响，结果见表 4。表明在不同的液相色谱系
统下所得到的相对校正因子基本一致。
表 4 不同高效液相色谱的相对校正因子
Table 4 RCF for different HPLC instruments
相对校正因子
仪器
绿原酸/秦皮乙素 异绿原酸B/秦皮乙素 异绿原酸A/秦皮乙素
Shimadzu 1.332 1 0.875 4 0.767 2
Waters1525 1.309 2 0.900 4 0.781 4
Agilent 1100 1.263 0 0.825 0 0.714 0
平均值 1.301 4 0.866 9 0.754 2
RSD/% 4.65 4.43 4.71
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2.3.3 色谱峰专属性考察 在“2.1”项下确定
的 HPLC 色谱分析条件下，精密吸取“2.2.1”项
混合对照品溶液 10 μL，测定内参物秦皮乙素的
相对保留时间，根据相对保留时间即可正确判
断出目标峰绿原酸、异绿原酸 B 和异绿原酸 A
的准确峰位置，结果见表 5。由表 5 可知，RSD≤5%，
表明利用相对保留时间进行色谱峰的定位是可
行的。
2.4 QAMS 法与外标法测定结果比较
分别取各产地药材制备供试品溶液。分别精密
吸取混合对照品溶液、供试品溶液各 10 μL 注入高
效液相色谱仪，测定。分别采用外标法和 QAMS 法
计算菊苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿
原酸 A 的量，结果见表 6。采用 QAMS 法及外标法
所测得的菊苣药材中绿原酸、异绿原酸 B 和异绿原
酸 A 的量基本一致，表明 QAMS 在菊苣的多指标
表 5 不同仪器和色谱柱测得的相对保留时间
Table 5 Relative retention values measured by different instruments and columns
相对保留时间 仪器型号 色谱柱型号
绿原酸/秦皮乙素 异绿原酸 B/秦皮乙素 异绿原酸 A/秦皮乙素
Shimadzu ZORBAX SB-C18 0.772 9 2.123 1 2.179 5
Shimadzu Eclipse XOB-C18 0.724 0 2.119 7 2.166 5
Shimadzu CAPCELL PAK-C18 0.812 0 2.095 6 2.147 0
Waters 1525 ZORBAX SB-C18 0.784 3 2.042 4 2.097 9
Agilent 1100 ZORBAX SB-C18 0.788 1 1.989 9 2.046 8
平均值 0.776 3 2.074 1 2.127 5
RSD/% 4.19 2.75 2.57
表 6 菊苣药材中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A 的测定
Table 6 Contents of chlorogenic acid, isochlorogenic acid B, and isochlorogenic acid A in chicory
绿原酸/% 异绿原酸 B/% 异绿原酸 A/% 批号 秦皮乙素/%
QAMS 外标法 QAMS 外标法 QAMS 外标法
辽宁大连 0.323 8 0.336 6 0.336 5 0.229 5 0.229 2 0.068 8 0.070 0
辽宁灯塔 0.297 6 0.432 5 0.432 1 0.234 1 0.233 7 0.051 5 0.053 0
新疆墨玉 0.262 6 0.213 1 0.213 3 0.126 5 0.126 9 0.108 1 0.108 8
内蒙古 0.226 3 0.354 6 0.354 3 0.074 9 0.075 7 0.010 2 0.012 3
河北平山 0.232 0 0.240 7 0.240 9 0.085 2 0.085 9 0.019 1 0.021 1
山东寿光 0.215 5 0.127 0 0.127 5 0.059 4 0.060 4 0.028 2 0.030 0
新疆昌吉 0.511 4 0.973 1 0.970 8 0.317 7 0.316 6 0.074 2 0.075 3
江西南昌 0.064 0 0.487 0 0.486 4 0.046 9 0.048 0 0.139 3 0.139 6

成分质量评价中应用是可行的。
3 讨论
绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B 和异绿原酸 A
在菊苣药材中相对量较大，且生物活性较高，因此
将它们选为能够反映菊苣内部质量评价的指标。其
中秦皮乙素化学性质稳定且廉价易得，在菊苣和毛
菊苣中量较高，且对照品分离工艺比较成熟，故选
其为内参物，以降低检测成本。
本实验对流动相做了初步对比，采用甲醇-甲酸
和甲醇-乙酸作为流动相系统进行分析，发现甲醇-
甲酸流动相，分离效果明显改善，且峰形较好。对
于检测波长的选择，本实验对 200～400 nm 进行全
波长扫描，结合 4 种对照品的峰形及菊苣药材的整
体峰形，发现 254 nm 条件下的 4 种对照品的色谱
峰型较好，菊苣药材的整体色谱峰数目较多，峰型
较好且分离度好，故本研究选择 254 nm 作为测定
波长。此外，本实验还考察了不同色谱柱、不同色
谱仪下对相对校正因子及相对保留时间的影响，并
以 RSD 值作为指标，实验结果表明，在上述条件下
相对校正因子及相对保留时间重现性良好。
本实验采用 HPLC 外标法测定了菊苣药材中秦
皮乙素的量，同时测定并计算了绿原酸、异绿原酸
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B、异绿原酸 A 的相对校正因子，用相对校正因子
计算得到了绿原酸、异绿原酸 B、异绿原酸 A 的量，
实现了 QAMS。同时，采用外标法测定了菊苣药材
中绿原酸、异绿原酸 B、异绿原酸 A 的量，比较了
其与相对校正因子计算值之间的差异，结果表明，
二者之间无显著差异。
综上所述，本实验所建立的 QAMS 法在测定菊
苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸 B、异绿原酸 A
的量时具有较高的重现性、稳定性及可信度，丰富
了菊苣药材的质量评价方法，并为 QAMS 技术在中
药质量控制中的推广和应用提供了更充分的参考和
依据。
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