全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 15 期 2014 年 8 月

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藏药坐珠达西中 8 种成分 HPLC 定量测定
任桂友 1，刘海萍 2，王战国 3，曾 锐 1
1. 西南民族大学民族医药研究院，四川 成都 610041
2. 四川省自然资源科学研究院，四川 成都 610041
3. 四川大学生命科学学院，四川 成都 610041
摘 要：目的 建立藏药坐珠达西中 8 种成分的 HPLC 定量测定方法，提高藏药坐珠达西 HPLC 检测标准。方法 采用 HPLC
法，Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱，体积流量 1 mL/min，检
测波长：没食子酸、苯甲酸、山柰酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯检测波长为 225 nm，绿原酸检测波长为 352 nm，西红
花苷 I 和西红花苷 II 检测波长为 455 nm。结果 该方法分离度良好，标准曲线在线性范围内相关性良好，平均回收率为
97.13%～101.42%。对 5 批 10 份坐珠达西测定和主成分分析（PCA），结果显示不同厂家的产品各聚一类，表明不同厂家产
品质量差异较大；偏最小二乘法（PLS）的打分图分析表明，8 种指标成分中没食子酸、苯甲酸、山柰酚、去氢木香烃内酯
和西红花苷 II 对坐珠达西的质量贡献尤为明显。结论 该方法稳定可靠、结果准确，具有较好的稳定性和重复性，可用于
坐珠达西的 HPLC 定量检测和质量控制。
关键词：坐珠达西；HPLC；聚类分析；没食子酸；绿原酸；苯甲酸；山柰酚；木香烃内酯；西红花苷
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)15 - 2189 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.15.013
Quantitative determination of eight active constituents in Tibetan medicine
Zuozhudaxi by HPLC
REN Gui-you1, LIU Hai-ping2, WANG Zhan-guo3, ZENG Rui1
1. Ethnic Medicine Instiute of Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, China
2. Sichuan Academy of Natural Resources Sciences, Chengdu 610041, China
3. School of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610041, China
Abstract: Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determination of eight components in Tibetan medicine
Zuozhudaxi, and improve the standard of HPLC test. Methods The HPLC analysis was performed on a Kromasil C18 column (250
mm × 4.6 mm, 5 μm). The column temperatrue was set at 30 . A mixture of methyl alcohol℃ -0.05% phosphoric acid aqueous solution
was used as the mobile phase, gradient eluted with the flow rate at 1 mL/min, and detected by different UV wave lengths, i.e. 225 nm
for gallic acid, benzoic acid, kaempferol, costunolide, and dehydroepiandrosterone costunolide, 352 nm for chlorogenic acid, and 445
nm for crocin I and crocin II. Results The eight components were well separated with ideal linear correlations. The average recoveries
were in the range of 97.13%—101.42%. The contents of the eight components between two manufactures were different. PLS-DA
loading plot of the samples showed that gallic acid, benzoic acid, kaempferol, dehydroepiandrosterone costunolide, and crocin II were
the main components which made contributions to the quality of Zuozhudaxi. Conclusion The method is reliable, stable, accurate,
and reproducible for the quantitative determination and quality control of Zuozhudaxi.
Key words: Zuozhudaxi; HPLC; clustering analysis; gallic acid; chlorogenic acid; benzoic acid; kaempferol; costunolide; crocin

藏药坐珠达西为丸剂剂型，由佐塔、红花、木
香、诃子、余甘子、石榴子、安息香、唐古特乌头、
马钱子等 35 味药物组成，功效为疏肝、健胃、清热、
愈溃疡、消肿，用于“木布”病迁延不愈、胃脘嘈

收稿日期：2014-03-11
基金项目：国家“十二五”科技支撑计划（2012BAI27B07）
作者简介：任桂友，硕士研究生，从事药物制剂及民族药的研究。Tel: 13540108836 E-mail: rgy506189795@126.com
*通信作者 曾 锐，副教授，硕士研究生导师，从事药物制剂及民族药的研究。Tel: 13981910281 E-mail: Mackzeng@gmail.com
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杂、消化不良、浮肿、水肿等[1]，为藏药治疗慢性
胃炎的常用药物。原制剂标准进行了 2 项理化反应
鉴别和船形乌头薄层鉴别及丸剂的相关检查。马肖
等[2]在此基础上又对熊胆、牛黄、木香、丁香进行
了薄层鉴别，对马钱子中的马钱子碱进行了液相定
性鉴别，对西红花中的西红花苷 I 进行了高效液相
色谱定量测定。但是该药物组成药味较多，仅依靠
少数指标的定量测定难以控制其内在质量。
该药物中诃子在藏药中被视为“药中之王”，具
有很好的解毒功效，邪气聚于脏腑的内源性毒性和
食物、药物中毒等外源性毒性都能驱解[3]；余甘子
系藏族常用药，能清热凉血、消食健胃，用于血热
血瘀、消化不良、腹胀等症[4]；石榴子能温中健脾，
治疗厌食、胃寒、脘胀等症[5]；此 3 种药物中均含
有没食子酸，可用没食子酸作为三者的综合定量标
准。木香中医常用以治疗胃部胀满、呕吐、腹痛和
腹泻等消化不良症状，具有芳香健胃、行气止痛的
功效，是常用理气药，主要成分为木香烃内酯和去
氢木香烃内酯[6]；红花藏医常用来治疗肝病、血病
和进行培元健身，其主要成分有西红花苷 I、西红
花苷 II[7]；安息香具有开窍醒神、行气活血、镇惊
息风等功效，其主要成分有苯甲酸[8]。在组成坐珠
达西的药味中，还含有绿原酸和山柰酚。本研究针
对上述 8 种指标性成分建立的多波长 HPLC 定量测
定方法，并测定了 2 个厂家，共 5 个批次（四川阿
坝州藏医院：批号 20130926、20130823、20130703、
20120618；金诃藏药：批号 20120612）的样品，为
更好地控制该药生产规范提供参考依据。
1 仪器与材料
Waters 2695/2996 型高效液相色谱仪，2996PDA
检测器，Empower 化学工作站；KQ5200E 型超声波
清洗器，昆山超声仪器有限公司；Metiler AE240S
型电子天平，梅特勒-托利上海有限公司。
对照品没食子酸（批号 111109，质量分数≥
98.0%），苯甲酸（批号 120807，质量分数≥98.0%），
木香烃内酯（批号 120322，质量分数≥98.0%），去
氢木香烃内酯（批号 120321，质量分数≥98.0%），
西红花苷 I（批号 120714，质量分数≥98.0%），西
红花苷 II（批号 110925，质量分数≥98.0%），四川
省维克奇生物科技有限公司；对照品绿原酸（批号
121125，质量分数≥98.0%），山柰酚（批号 120718，
质量分数≥98.0%），成都普菲德生物技术有限公
司。坐珠达西（丸剂）供试品，批号 20130926、
20130823、20130703、20120618，四川阿坝州藏医
院藏医药研究所制；批号 20120612，金诃藏药股份
有限公司。流动相甲醇为色谱纯（Oceanpak 公司），
提取用甲醇为分析纯（质量分数≥99.5%，成都市
科龙化工试剂厂），磷酸为分析纯（质量分数≥
85.0%，成都市科龙化工试剂厂），水为纯净水。
2 方法和结果
2.1 色谱条件
Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；
流动相甲醇（A）-0.05%磷酸溶液（B），梯度洗脱：
0～8 min，13%～20% A；8～20 min，20%～38% A；
20～30 min，38%～50% A；30～45 min，50%～70%
A；45～65 min，70%～80% A；体积流量为 1
mL/min；柱温 30 ℃；进样量 10 μL；没食子酸、
苯甲酸、山柰酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯检
测波长为 225 nm，绿原酸检测波长为 352 nm，西
红花苷 I 和西红花苷 II 检测波长为 455 nm。按照上
述色谱条件进行测定，各组分间分离度良好，对照
品及样品的色谱图见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
取没食子酸、绿原酸、苯甲酸、山柰酚、木香
烃内酯、去氢木香烃内酯适量，精密称定，加甲醇
分别制成含 1.012、1.102、1.016、1.080、1.004、1.098
mg/mL 的溶液；再取西红花苷 I、西红花苷 II 适量，
精密称定，加稀乙醇分别制成含 1.070、1.064 mg/mL
的溶液，即得各对照品溶液。分别精密吸取上述对
照品溶液各 2.7、1.3、0.9、1.7、3.5、3.0、0.5、0.2
mL 于 25 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得混
合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取坐珠达西粉末 1.0 g，精密称定，置具塞锥形
瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密封，称定质量，超
声提取 30 min。冷却至室温后称定质量，用甲醇补
足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2.4 线性关系的考察
将“2.2”项下混合对照品溶液依次稀释 1、2、
4、8、16 倍，分别精密吸取不同倍数和原混合对照
品溶液 10 μL 进样，以进样质量浓度为横坐标（X），
峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得到线性回
归方程及相关系数，见表 1。
2.5 精密度试验
精密吸取“2.2”项下稀释 1 倍的混合对照品溶
液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样 6 次，每次
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A1～A3-对照品 B1～B3-样品 1-没食子酸 2-绿原酸 3-苯甲酸 4-山柰酚 5-木香烃内酯 6-去氢木香烃内酯
7-西红花苷 I 8-西红花苷 II，图 4 同
A1—A3-reference substances B1—B3-sample 1-gallic acid 2-chlorogenic acid 3-benzoic acid 4-kaempferol
5-costunolide 6-dehydroepiandrosterone costunolide 7-crocin I 8-crocin II, Fig. 4 is same
图 1 对照品和样品 HPLC 图
Fig. 1 HPLC of reference substances and samples

表 1 对照品的线性关系和范围
Table 1 Linearities and ranges of reference substances
化合物 回归方程 r 线性范围 / μg
没食子酸 Y＝5.8×107 X＋2×105 0.999 6 34.156～1 093
绿原酸 Y＝1.4×107 X＋60 625 0.999 8 17.906～573
苯甲酸 Y＝6.8×107 X＋72 302 0.999 6 11.438～366
山柰酚 Y＝4.0×107 X＋74 794 0.999 7 22.938～734
木香烃内酯 Y＝1.8×106 X＋19 255 0.999 8 50.188～1 606
去氢木香烃
内酯
Y＝1.4×107 X＋54 205 0.999 8 41.094～1 315
西红花苷 I Y＝7.3×107 X＋64 046 0.999 9 6.688～214
西红花苷 II Y＝8.0×107 X＋37 398 0.999 8 2.656～85

10 μL，记录峰面积，计算峰面积的 RSD。结果显
示没食子酸、绿原酸、苯甲酸、山柰酚、木香烃内
酯、去氢木香烃内酯、西红花苷 I 和西红花苷 II
峰面积的 RSD 分别为 0.89%、0.49%、0.87%、
0.93%、0.42%、0.44%、0.72%、0.58%，表明仪器
精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一份坐珠达西样品（批号 20130703）粉末 6
份，按“2.3”项下确定的方法平行制备供试品溶液，
按“2.1”项下色谱条件进行分析。结果显示没食子酸、
绿原酸、苯甲酸、山柰酚、木香烃内酯、去氢木香烃
内酯、西红花苷 I 和西红花苷 II 质量分数的 RSD 分
别为 0.73%、1.99%、2.23%、1.12%、1.68%、2.19%、
2.11%、2.07%，表明该方法重复性良好。
2.7 稳定性试验
取一份坐珠达西样品（批号 20130703）粉末，
按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于 0、2、
4、6、8、10、12、24 h 时进样 10 μL，按“2.1”项
下色谱条件进行分析，计算各成分峰面积的 RSD。
结果显示供试品溶液中没食子酸、绿原酸、苯甲酸、
山柰酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯、西红花苷
I和西红花苷 II峰面积的RSD分别为1.85%、2.02%、
2.65%、3.32%、3.76%、1.38%、3.49%、2.25%，表
明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.8 加样回收率试验
称取已测定的坐珠达西样品（批号 20130703）
粉末 6 份，每份约 1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶
中，加入各对照品溶液（使得对照品量相当于样品
中相应成分量的 50%～120%）适量，按“2.3”项
下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进
行测定，计算各对照品的回收率和 RSD，结果没食
子酸、绿原酸、苯甲酸、山柰酚、木香烃内酯、去
氢木香烃内酯、西红花苷 I 和西红花苷 II 的平均加
样回收率为 100.17%、97.99%、101.42%、100.54%、
99.13%、99.82%、98.11%，97.13%，RSD 为 2.1%、
2.9%、5.2%、4.2%、3.3%、5.3%、2.0%、3.4%。
2.9 样品测定
取各批次的坐珠达西样品粉末，按“2.3”项下
的方法制备供试品溶液，每个样品平行 2 份，并按
“2.1”项下的色谱条件进行测定，每份测定 2 次，
计算各样品中没食子酸、绿原酸、苯甲酸、山柰酚、
1
2 3
4 6
5
A1 (225 nm) A2 (455 nm)
A3 (352 nm) B1 (225 nm)
B2 (455 nm) B3 (352 nm)
8
7
2
1
2
3
4 5
6
7
8 2
0 10 20 30 40 50 60 70 0 10 20 30 40 50 60 70
t / min
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木香烃内酯、去氢木香烃内酯、西红花苷 I 和西红
花苷 II 的量，结果见表 2。
2.10 不同厂家不同批次间坐珠达西 8 个成分质量
分数的主成分分析（PCA）
参考文献方法[9]，以上述测定的 8 个成分质量
分数为数据库。以 SIMPCA-12.0 软件进行 PCA 和
偏最小二乘法（PLS）分析。坐珠达西样品 HPLC
的 PCA 打分图见图 2，聚类分析（HCA）对 PCA
进行聚类分析柱状图见图 3，荷载图见图 4。结果显
示：图 2 和图 3 中坐珠达西样品清晰地聚为 2 大类，
阿坝州藏医院产样品聚为 1 类，金诃藏药产样品聚
为 1 类；同时四川产样品不同批次间又分 2 组。图
4 表明本实验中用于定量测定的 8 个指标峰对坐珠
达西内在质量贡献较大。
3 讨论
本研究建立了同时测定藏药坐珠达西中 8 种成
分的 HPLC 方法，并测定了 2 个厂家 5 批 10 个样
品中的 8 种成分。该方法简单准确，具有较好的重

表 2 5 批样品中 8 种成分的测定 (n＝4)
Table 2 Contents of eight constituents in five batches of samples (n＝4)
质量分数 / (mg·g−1) 批号 进样序号 厂家
没食子酸 绿原酸 苯甲酸 山柰酚 木香烃内酯 去氢木香烃内酯 西红花苷 I 西红花苷 II
20130926 1～4 阿坝州藏医院 0.672 0 0.181 7 0.157 7 0.729 0 2.156 9 1.621 5 0.045 8 0.030 2
20130823 5～8 阿坝州藏医院 0.763 4 0.227 0 0.151 3 0.689 4 2.527 2 1.533 2 0.052 4 0.023 8
20130703 9～12 阿坝州藏医院 0.742 1 0.170 9 0.146 1 0.629 5 1.717 8 1.525 2 0.045 1 0.026 0
20120618 13～16 阿坝州藏医院 1.129 5 0.165 1 0.095 0 0.399 2 0.177 0 0.801 3 0.022 4 0.010 4
20120612 17～20 金诃藏药 1.192 3 0.118 4 0.682 7 0.535 3 1.403 4 1.888 0 0.366 6 0.159 6




图 2 样品的 PCA 图
Fig. 2 PCA plot of samples


图 3 坐珠达西样品 PCA 打分图的 HCA 分析图
Fig. 3 HCA analysis by PCA scores of Zuozhudaxi samples



图 4 坐珠达西样品的 PCA 荷载图
Fig. 4 PCA plot of Zuozhudaxi smaples
复性和稳定性。
3.1 检测波长的确定
采用 PDA 二极管阵列检测器，分别对 8 种成
分在 190～700 nm 进行全波长扫描。结果显示没食
子酸、绿原酸、苯甲酸、山柰酚、木香烃内酯、去
氢木香烃内酯、西红花苷 I 和西红花苷 II 分别在
210、352、230、204、225、225、455、455 nm 处
有最大吸收。为了兼顾 8 种成分的最大吸收波长，
同时降低工作量，经多次实验验证最终确定没食子
酸、苯甲酸、山柰酚、木香烃内酯和去氢木香烃内
酯 5 个样品的检测波长为 225 nm，绿原酸的检测波
长为 352 nm，西红花苷 I 和西红花苷 II 的检测波长
为 455 nm。
3.2 供试品提取方法的考察
本研究分别考察了甲醇超声提取，甲醇回流，
甲醇回流后酸解 3 种提取方法对坐珠达西样品中 8
种成分提取效果的影响，结果以甲醇超声提取的效
果最好，加热回流和加酸对样品中的 8 种成分都有
一定的破坏作用，最终确定采用甲醇 25 mL 超声提
取 30 min 作为供试品溶液的制备方法。
3.3 流动相的确定
分别考察了乙腈 -0.05%磷酸水溶液和甲醇 -
0.05%磷酸水溶液 2 种流动相，结果显示乙腈-0.05%
磷酸水溶液作为流动相时杂峰很多且多拖尾现象，
−1 200 −600 0 600 1 200
t[1]
800

400

0

−400

−800
t[2
]
80

60

40

20

0
距
离

17 18 19 20 9 11 10 12 5 6 16 13 14 15 1 7 8 4 2 3
9～12
17～2013～16
1～8
0.4
0.2
0
−0.2
−0.4
w
c[
2]

−0.4 −0.2 0 0.2 0.4
wc[1]
6
2 7
8
5 4
3
1
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严重影响 8 种成分的检测，甲醇-0.05%磷酸水溶液
作为流动相上述现象较为缓和，最终选择甲醇-
0.05%磷酸水溶液进行优化作为洗脱流动相。
3.4 聚类分析
本研究以所测 8 个成分为数据库进行了聚类分
析，结果显示青海产样品和四川产样品各聚为一类，
同时四川产样品又分为 2 组，表明四川和青海 2 个
厂家内在质量差异较大；同一厂家不同生产年生产
的坐珠达西内在质量差异也较大。由于坐珠达西生
产工艺较为一致，因此说明不同地区的厂家和批次
生产过程中，原药材料的质量控制和生产工艺的控
制存在较大的波动，这可能是由于不同地区的藏药
厂在生产过程中，使用了同物异名、或不同采收季
和生产年限的原药材所致，需要进一步完善原药材
和成品的质量标准。
同时经打分图分析可知，本实验中用于测定的
8 个指标峰对坐珠达西内在质量贡献较大，而其中
以峰 1（没食子酸）、峰 3（苯甲酸）、峰 4（山柰酚）、
峰 6（去氢木香烃内酯）和峰 8（西红花苷 II）对坐
珠达西的质量贡献尤为明显。上述分析表明 8 个指
标成分的定量测定有助控制坐珠达西的内在质量。
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